黃艷花 崔忠吉 蒙成 歐善生 鐘琪斌

（廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué)，廣西 南寧 530007 ）

紫果西番蓮，學(xué)名雞蛋果（Passiflora edulia Sims），又名百香果，是西番蓮科西番蓮屬的草質(zhì)藤本植物。原產(chǎn)安的列斯群島，廣植于熱帶和亞熱帶地區(qū)。植株壽命約20 年，經(jīng)濟(jì)壽命約8~10 年。花期6 月，果期11 月。果可生食或作蔬菜、飼料。入藥具有興奮、強(qiáng)壯之效。果瓤多汁液，加入重碳酸鈣和糖，可制成芳香可口的飲料，還可用來添加在其他飲料中以提高飲料的品質(zhì)。種子榨油，可供食用和制皂、制油漆等。花大而美麗，沒有香味，可作庭園觀賞植物。紫果西番蓮具有“果汁之王”“搖錢樹”等美稱。［1］因其種植周期短、產(chǎn)生效益快，近年來被選擇作為廣西部分地區(qū)鄉(xiāng)村振興產(chǎn)業(yè)進(jìn)行開發(fā)。隨著種植規(guī)模不斷擴(kuò)大，紫果西番蓮莖基腐病、炭疽病、病毒病和蚜蟲等病蟲危害也日趨嚴(yán)重，加之管理不當(dāng)、技術(shù)欠缺，已嚴(yán)重影響紫果西番蓮 產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展。紫果西番蓮頂枯病病原菌為暹羅炭疽菌 （Colletotrichum siamense）。發(fā)病初期引起西番蓮頂芽壞死，病斑逐漸由頂端向下擴(kuò)展，枝條由頂端向下干枯壞死，嚴(yán)重時(shí)整株枯死。該病害在廣西11 月發(fā)病較重，最高發(fā)病率可達(dá)49.5%，造成大面積死芽枯枝，嚴(yán)重影響產(chǎn)量。［2］紫果西番蓮頂枯病已對紫果西番蓮產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展造成嚴(yán)重威脅，因此迫切需要掌握其病原菌生物學(xué)特性，并篩選出高效防治殺菌劑，為大面積科學(xué)防控提供參考依據(jù)。

暹羅炭疽菌是膠孢炭疽菌（C.gloeosporioides）復(fù)合物的物種之一［3］，其可與其他炭疽菌混合引發(fā)鵝掌柴、荔枝、油茶、南天竹、紫山藥、紅瑞木和灑金珊瑚等多種植物炭疽?。?-10］，也可獨(dú)立引發(fā)多穗柯、棕竹、楊桃、菠蘿蜜、百日草、大葉黃楊、紅肉蘋果等多種植物炭疽?。?，11-16］及多肉植物青星美人黑腐?。?7］。張艷婷［18］研究認(rèn)為，引起草莓莖基腐病的主要病原菌為暹羅炭疽菌；解小鋒等［19］研究明確引起棗炭疽病的病原菌為暹羅炭疽菌；徐丹丹等［20］認(rèn)為，廣東咖啡炭疽病的優(yōu)勢病原菌為果生炭疽菌（C. fructicola）和暹羅炭疽菌。在暹羅炭疽菌生物學(xué)特性研究方面，羅敦文［21］研究發(fā)現(xiàn)，菠蘿蜜蒂腐病菌（C. siamense）菌絲生長適宜環(huán)境條件為：PDA 和查彼培養(yǎng)基，溫度28℃，pH 值7.0，碳源為葡萄糖、阿拉伯糖、麥芽糖和果糖，氮源為酵母浸粉和牛肉浸膏，病原菌菌絲致死溫度為59℃處理10 min；劉在哲等［16］研究認(rèn)為，紅肉蘋果炭疽病菌菌絲生長適宜環(huán)境條件為：PSA和SDA 培養(yǎng)基，溫度25~30℃，pH 值8.0~10.0，持續(xù)光照或黑暗交替；王芳等［17］研究表明，最適青星美人黑腐病菌菌絲生長溫度為30℃，pH 值為5.0，碳源為麥芽糖，氮源為酵母浸膏，光暗交替，最適病原產(chǎn)孢條件溫度為30℃，pH 值為7.0，碳源為麥芽糖，氮源為蛋白胨，連續(xù)黑暗。在藥劑防治研究方面，宋慧云等［11］研究表明，98.4%多菌靈、97%吡唑醚菌酯和98%福美雙可作為防治多穗柯炭疽病的化學(xué)殺菌劑；羅敦文［21］研究認(rèn)為，50%咪鮮胺錳鹽對菠蘿蜜蒂腐病病原菌抑制作用較強(qiáng)；王志華等［22］研究指出，多菌靈可濕性粉劑和苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑對金森女貞炭疽病的抑制作用最強(qiáng)。紫果西番蓮頂枯病是2022 年國內(nèi)首次報(bào)道的新病害［2］，目前針對其生物學(xué)特性及室內(nèi)防治藥劑篩選的研究尚無文獻(xiàn)報(bào)道。本文采用菌絲生長速率法和孢子計(jì)數(shù)法分析不同培養(yǎng)條件對紫果西番蓮頂枯病病原菌菌絲生長和產(chǎn)孢量的影響，以菌絲生長速率法對12 種殺菌劑進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，旨在掌握該病原菌生長條件并篩選出防治高效的化學(xué)殺菌劑，為紫果西番蓮頂枯病防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株：紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌（C.siamense），由廣西農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)大學(xué)植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室分離、鑒定及保藏。

供試殺菌劑：供試藥劑12 種，分別為咪唑類咪鮮胺（450 g/L 水乳劑，上海滬聯(lián)生物藥業(yè)（夏邑）股份有限公司）、甲基硫菌靈（70%可濕性粉劑，江蘇龍燈化學(xué)有限公司）、抑霉唑（20%水乳劑，一凡生物科技集團(tuán)有限公司）；三唑類丙環(huán)唑（25%乳油，招遠(yuǎn)三聯(lián)化工廠有限公司）、苯醚甲環(huán)唑（10%水分散粒劑，先正達(dá)南通作物保護(hù)有限公司）；苯并咪唑衍生物類多菌靈（50%可濕性粉劑，四川潤爾科技有限公司）；有機(jī)硫類殺菌劑乙蒜素（80%油劑，南陽新臥龍生物化工有限公司）；吡咯類殺菌劑腈菌唑（40%懸浮劑，一凡生物科技集團(tuán)有限公司）；取代苯類殺菌劑百菌清（75%可濕性粉劑，山東大成生物化工有限公司）；三唑類與甲氧基丙烯酸酯類復(fù)配的苯甲·吡唑酯（40%懸浮劑，江蘇云農(nóng)化工有限公司）；三唑類與咪唑類復(fù)配的苯甲·咪鮮胺（20%微乳劑，山東中新農(nóng)生物科技有限公司）；甲氧基丙烯酸酯類與三唑類復(fù)配的肟菌·戊唑醇（75%水分散粒劑，山東榮邦化工有限公司）。

供試儀器：供試培養(yǎng)箱為韶關(guān)市泰宏醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn)的珠江牌生化培養(yǎng)箱，型號：LRH-250 A。

1.2 病原菌生物學(xué)特性分析

1.2.1 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢及孢子萌發(fā)對不同pH的適應(yīng)性

參照閃瑤等［23］方法并略加修改，分別配置1.0 mol/L HCl、1.0 mol/L NaOH 和PDA 培養(yǎng)基并滅菌，在無菌條件下用HCl 和NaOH 把PDA 培養(yǎng)基的pH 分別調(diào)為2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0 共11 個(gè)梯度，倒入培養(yǎng)基平板，待冷卻后將直徑6.0 mm 的病原菌菌餅接種于不同pH 值平板中央，每處理4 次重復(fù)，28℃黑暗培養(yǎng)。4 d 后采用十字交叉法測量菌落直徑，10 d 后每皿用10 mL 無菌水配制孢子懸浮液，用血球計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)產(chǎn)孢量［24］（下同）。用上述配置已滅菌好的HCl 和NaOH 在無菌條件下將無菌水的pH 值調(diào)至2.0~12.0，分別用不同pH 值的無菌水加在相同條件下培養(yǎng)10 d的病原菌菌落配制成孢子懸浮液，用不同pH 值的孢子懸浮液涂抹在相應(yīng)pH 值的PDA 培養(yǎng)基平板上，置28℃恒溫培養(yǎng)7 h，顯微鏡下觀察孢子萌發(fā)情況，芽管長度達(dá)分生孢子、寬度計(jì)為萌發(fā)，每處理連續(xù)統(tǒng)計(jì)孢子100 個(gè)以上，4 次重復(fù)，用計(jì)數(shù)器統(tǒng)計(jì)分生孢子在上述不同pH 值條件下的萌發(fā)率。

1.2.2 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢及孢子萌發(fā)對不同溫度的適應(yīng)性

參照梁萍等［24］方法并略加修改，在PDA 平板上培養(yǎng)4 d 的菌落邊緣用直徑為6 mm 的打孔器取菌餅，將菌餅接種于PDA 培養(yǎng)基中央，分別置于不同溫度（4℃、8℃、12℃、16℃、20℃、24℃、28℃、32℃、36℃、40℃）恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每個(gè)溫度4 次重復(fù)。參照1.2.1 方法測量菌落直徑及產(chǎn)孢量；參照方中達(dá)［25］方法采用瓊膠平板表面萌發(fā)法測定孢子萌發(fā)率，用滅菌水將孢子洗刷下來后，調(diào)制成濃度為5.00×106個(gè)/mL 孢子懸浮液，把孢子懸浮液均勻涂抹在水瓊脂培養(yǎng)基平板上［18］，置28℃條件培養(yǎng)7 h，顯微鏡下觀察孢子萌發(fā)情況，芽管長度達(dá)分生孢子寬度計(jì)為萌發(fā)，每處理連續(xù)統(tǒng)計(jì)孢子100 個(gè)以上，用計(jì)數(shù)器統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率，每處理4 次重復(fù)（下同）。

1.2.3 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢對不同光照的適應(yīng)性

參照蒙成等［26］方法并略加修改，將6 mm 病原菌菌餅分別接種于PDA 培養(yǎng)基平板中央，進(jìn)行全暗（0 lx）、12 h 光暗交替（150 lx）、12 h 光暗交替（200 lx）、12 h 光暗交替（300 lx）、連續(xù)光照（300 lx）5 種光照環(huán)境處理。全黑暗處理使用4 層錫箔紙包裹遮光。每處理4 次重復(fù)，置28℃人工氣候箱培養(yǎng)4 d，測量菌落直徑，培養(yǎng)10 d 測定產(chǎn)孢量。

1.2.4 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢對不同碳源的適應(yīng)性

參照閃瑤等［23］方法并略加修改，用等質(zhì)量葡萄糖、山梨醇、麥芽糖、甘露醇、乳糖、可溶性淀粉、D-木糖、甘油8 種碳源分別置換Czapek 培養(yǎng)基（硝酸鈉3.0 g、磷酸氫二鉀1.0 g、硫酸鎂0.5 g、氯化鉀0.5 g、硫酸鐵0.01 g、蔗糖30.0 g、瓊脂20.0 g、水1000.0 mL）中的蔗糖，配制成不同碳源培養(yǎng)基。設(shè)無碳源培養(yǎng)基為對照。將6 mm 病原菌菌餅分別接種于上述培養(yǎng)基平板中央，每處理4 次重復(fù)，置28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 d 測量菌落直徑，觀察記錄菌落形態(tài)特征。10 d 計(jì)算產(chǎn)孢量。

1.2.5 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢對不同氮源的適應(yīng)性

參照閃瑤等［23］方法并略加修改，用等質(zhì)量酵母粉、牛肉浸膏、甘氨酸、蛋白胨、L-精氨酸、L-丙氨酸、尿素、L-賴氨酸8 種氮源分別代替Czapek培養(yǎng)基的硝酸鈉，配制不同氮源培養(yǎng)基。設(shè)無氮源培養(yǎng)基為對照。將6 mm 病原菌菌餅分別接種于上述培養(yǎng)基平板中央，每處理4 次重復(fù)，置28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 d 測量菌落直徑，觀察記錄菌落形態(tài)特征。10 d 計(jì)算產(chǎn)孢量。

1.2.6 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢對不同培養(yǎng)基的適應(yīng)性

參照梁萍等［24］方法并略加修改，制備6 種培養(yǎng)基。馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯200.0 g、葡萄糖20.0 g、瓊脂20.0 g、水1000.0 mL；馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基（PSA）：馬鈴薯200.0 g、蔗糖20.0 g、瓊脂20.0 g、水1000.0 mL。玉米粉培養(yǎng)基（CMA）：玉米粉30 g，瓊脂20 g，水1000 mL。汁液培養(yǎng)基（西番蓮汁液）：健康新鮮西番蓮枝葉200.0 g，水熬煮30 min，瓊脂20.0 g，水1000.0 mL。燕麥培養(yǎng)基（OA）：燕麥片30.0 g、瓊脂20.0 g、水1000.0 mL）；瓊脂培養(yǎng)基（WA）：瓊脂15.0 g，水1000.0 mL。6 種培養(yǎng)基pH 自然。將6 mm 病原菌菌餅分別接種于上述培養(yǎng)基平板中央，每處理4 次重復(fù)，置28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 d 測量菌落直徑，觀察記錄菌落形態(tài)特征。10 d 計(jì)算產(chǎn)孢量。

1.3 防治殺菌劑室內(nèi)毒力測定

參照劉俏等［27］方法并略加修改，采用菌絲生長速率法測定殺菌劑對病原菌抑制效果。經(jīng)3 次預(yù)試驗(yàn)，確定各殺菌劑的梯度濃度。在無菌操作條件下，將12 種殺菌劑按照倍數(shù)法稀釋成不同濃度母液；再從每個(gè)倍數(shù)的母液中吸取1.0 mL 藥液加入至99.0 mL 的55℃、無菌PDA 培養(yǎng)基中制作成含藥培養(yǎng)基。殺菌劑終濃度見表1。以不加殺菌劑的PDA培養(yǎng)基作為對照。充分搖勻后倒入直徑9 cm 培養(yǎng)皿中，每皿15.0 mL。待皿內(nèi)培養(yǎng)基凝固后，在其中央接種直徑6 mm 的供試病原菌菌餅。每處理4 次重復(fù)。28℃培養(yǎng)箱暗培養(yǎng)4 d 后采用十字交叉法測量菌落直徑，計(jì)算各殺菌劑對菌絲體生長的相對抑制率。

表1 供試殺菌劑及其處理濃度

菌落直徑＝測定菌落直徑-菌餅直徑

相對抑制率（%）＝（對照菌落直徑-處理菌落直徑）/對照菌落直徑×100%

采用Excel 2010、DPS 7.0 和SPASS 16.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。將殺菌劑質(zhì)量濃度（μg/mL）轉(zhuǎn)換成以10為底的對數(shù)值（x），菌絲生長相對抑制率換算成幾率值（y），以濃度對數(shù)值為橫坐標(biāo)，以相對抑制率幾率值為縱坐標(biāo)，作毒力回歸直線，計(jì)算毒力回歸方程（y＝ax ＋b）和相關(guān)系數(shù)（r）， 根據(jù)回歸方程計(jì)算出抑制中濃度EC50值。毒力回歸方程能有效反應(yīng)該藥劑質(zhì)量濃度與抑菌效果的關(guān)系，EC50即抑制或殺死50%的目標(biāo)菌所需要的殺菌劑濃度，是衡量殺菌劑毒力的最可靠標(biāo)準(zhǔn)，用EC50值可以對不同種類的殺菌劑毒力大小進(jìn)行互相比較。［28］

2 結(jié)果與分析

2.1 紫果西番蓮頂枯病病原菌生物學(xué)特性

2.1.1 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢及孢子萌發(fā)對不同pH值的適應(yīng)性

紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌菌絲在值為2.0 時(shí)不生長；pH 值為3.0~12 時(shí)均能生長；在pH 值為5.0~9.0 時(shí)生長較快，菌落直徑達(dá)77.38~83.50 mm。各處理間差異不顯著（P＞0.05，下同），但均極顯著高于其他pH 值條件下的菌落直徑（P＜0.01，下同），其中pH 值為6.0 時(shí)菌落直徑最大，為83.50 mm，且顯著高于pH 值為5.0、7.0和8.0 的菌落直徑（P＜0.05，下同），但與pH 值為9.0 時(shí)的菌落直徑差異不顯著。pH 值為9.0 時(shí)的菌落直徑與pH 值為5.0、7.0 和8.0 的菌落直徑也無顯著差異。在pH 值為4.0 時(shí)菌絲生長較快，其菌落直徑為67.00 mm，極顯著高于pH 值為11.0、12.0和3.0 時(shí)的菌落直徑。可見，紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌菌絲在pH 值為3.0~12.0 均能生長，以pH 值為5.0~9.0 為菌絲生長的較佳范圍（圖1）。

圖1 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢及孢子萌發(fā)對不同pH 的適應(yīng)性

病原菌在pH 值為2.0 時(shí)不能產(chǎn)孢；在pH 值為7.0 和8.0 時(shí)產(chǎn)孢量較多，產(chǎn)孢量分別為53.72×104個(gè)/mL 和54.32×104個(gè)/mL，二者間差異不顯著，但均顯著高于其他pH 值條件下的產(chǎn)孢量；在pH 值為9.0 時(shí)產(chǎn)孢量也較多，且顯著高于除pH 值為7.0和8.0 外其他pH 值條件下的產(chǎn)孢量。說明紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌在pH 值為3.0~12.0均能產(chǎn)孢，而pH 值7.0 和8.0 為較佳產(chǎn)孢量范圍（圖1）。

病原菌孢子在pH 值為2.0 時(shí)萌發(fā)受到嚴(yán)重抑制，孢子萌發(fā)率為0.07%。在pH 值為5.0~10.0 時(shí)孢子萌發(fā)率較高，為90.20%~93.13%，處理間差異不顯著，但均顯著高于其他pH 值條件下的孢子萌發(fā)率。在pH 值為11.0 時(shí)孢子萌發(fā)率也較高，且顯著高于pH 值為12.0、4.0、3.0 和2.0 條件下的孢子萌發(fā)率。說明紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌孢子在pH 值為2.0~12.0 時(shí)均能萌發(fā)，而pH 值為5.0~10.0 為較佳孢子萌發(fā)范圍（圖1）。

2.1.2 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢及孢子萌發(fā)對不同溫度的適應(yīng)性

暹羅炭疽菌菌絲在溫度為4℃、40℃時(shí)不生長，8℃時(shí)生長嚴(yán)重受阻，12~36℃時(shí)均能生長，8~28℃時(shí)生長速度與溫度度數(shù)成正比，28~36℃時(shí)生長速度與溫度度數(shù)成反比。28℃時(shí)生長較快，菌落直徑為88.00 mm，極顯著高于其他溫度條件下的菌落直徑；24℃時(shí)菌落直徑為82.00 mm，極顯著高于除28℃外其他溫度條件下的菌落直徑?？梢?，紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌菌絲在溫度為12~36℃均能生長，以溫度28℃為菌絲生長較佳溫度（圖2）。

圖2 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢及孢子萌發(fā)對不同溫度的適應(yīng)性

病原菌在溫度為8℃、40℃時(shí)不產(chǎn)孢，12~36℃時(shí)均能產(chǎn)孢，28℃時(shí)病原菌產(chǎn)孢量較多，產(chǎn)孢量為53.72×104個(gè)/mL，極顯著高于其他溫度條件下的產(chǎn)孢量；32℃、24℃、36℃時(shí)產(chǎn)孢量分別為24.84×104個(gè)/mL、20.40 ×104個(gè)/mL、13.75×104個(gè)/mL；32℃與24℃時(shí)的產(chǎn)胞量差異不顯著，與36℃時(shí)產(chǎn)孢量有顯著性差異；24℃與36℃時(shí)產(chǎn)孢量無顯著性差異，三者均顯著高于除28℃外其他溫度條件下的產(chǎn)孢量?？梢?，紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌在溫度為12~36℃時(shí)均能產(chǎn)孢，較佳產(chǎn)孢溫度為28℃（圖2）。

病原菌孢子在溫度為8℃時(shí)不能萌發(fā)；12~40℃時(shí)均能萌發(fā)；20~36℃時(shí)病原菌孢子萌發(fā)率較高，萌發(fā)率為91.52%~97.08%，極顯著高于其他溫度條件下的萌發(fā)率；16℃時(shí)病原菌孢子萌發(fā)率為73.44%，極顯著高于溫度為12℃和40℃時(shí)的孢子萌發(fā)率。說明紫果西番蓮頂枯病病原菌暹羅炭疽菌孢子在溫度為12~40℃時(shí)均能萌發(fā)，20~36℃為較佳孢子萌發(fā)范圍（圖2）。

2.1.3 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢對不同光照的適應(yīng)性

從表2 看出，暹羅炭疽菌菌絲生長對光照要求不嚴(yán)格。5 種光照處理均能生長，完全黑暗對菌絲生長有利，光照對菌絲生長有一定抑制作用。其中，菌絲在連續(xù)黑暗條件下生長較快，菌落直徑為84.50 mm，顯著高于其他光照條件下的菌落直徑。12 h 亮12 h 暗（150 lx ）、12 h 亮12 h 暗（200 lx ）、12 h 亮12 h 暗（300 lx ）及連續(xù)光照（300 lx ）條件下菌落直徑?jīng)]有顯著差異（表2）。

表2 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢對不同光照的適應(yīng)性

病原菌在5 種光照處理?xiàng)l件下均能產(chǎn)孢，完全黑暗對病原菌產(chǎn)孢有利，光照對病原菌產(chǎn)孢有一定抑制作用。其中，病原菌在連續(xù)黑暗條件下產(chǎn)孢量較大，產(chǎn)孢量為37.66×104個(gè)/mL，極顯著高于其他光照條件下的產(chǎn)孢量。12 h 亮12 h 暗（150 lx）、12 h 亮12 h 暗（200 lx ）、12 h 亮12 h 暗（300 lx ）及連續(xù)光照（300 lx ）條件下，病原菌產(chǎn)孢量沒有顯著差異（表2）。

綜上所述，最適合暹羅炭疽菌菌絲生長及產(chǎn)孢的光照條件為連續(xù)黑暗。

2.1.4 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢對不同碳源的適應(yīng)性

暹羅炭疽菌在供試的9 種碳源上均能生長，但菌絲生長速度在不同碳源間存在差異。其中，以葡萄糖為碳源時(shí)菌絲生長最快，菌絲生長密厚，菌落直徑達(dá)78.67 mm，顯著高于其他碳源的菌落直徑。菌絲生長較快的碳源依次為山梨醇、麥芽糖、甘露醇，其菌絲較稀疏，菌落直徑在69.50~70.83 mm，相互間無顯著差異。以D-木糖和甘油為碳源時(shí)菌絲生長較慢，菌落直徑均低于61.00 mm，相互間無顯著差異，但均與以山梨醇、麥芽糖、甘露醇為碳源的菌落直徑存在顯著或極顯著差異。說明葡萄糖是最適宜暹羅炭疽菌菌絲生長的碳源（表3）。

表3 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢對不同碳源的適應(yīng)性

暹羅炭疽菌產(chǎn)孢量最多碳源依次為乳糖、D-木糖、山梨醇，產(chǎn)孢量分別為46.45×104個(gè)/mL、37.36×104個(gè)/mL、29.89×104個(gè)/mL。乳糖與D-木糖產(chǎn)孢量沒有顯著差異，與山梨醇產(chǎn)孢量有顯著差異。D-木糖與山梨醇產(chǎn)孢量沒有顯著差異，三者均極顯著高于其他碳源條件下的產(chǎn)孢量。產(chǎn)孢量較多的碳源依次為淀粉、甘露醇，產(chǎn)孢量分別為19.19×104個(gè)/mL、13.53×104個(gè)/mL，相互間無顯著差異。以麥芽糖為碳源時(shí)產(chǎn)孢量最少，與淀粉、甘露醇為碳源產(chǎn)孢量差異顯著。說明乳糖、D-木糖、山梨醇是最適合暹羅炭疽菌產(chǎn)孢的碳源（表3）。

2.1.5 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢對不同氮源的適應(yīng)性

暹羅炭疽菌在供試的9 種氮源上均能生長，但菌絲生長速度在不同氮源間存在差異。其中，以酵母粉、牛肉浸膏為氮源時(shí)菌絲生長最快，菌落直徑達(dá)89.13 mm 和87.75 mm，酵母粉菌絲密厚，牛肉浸膏菌絲稀松，兩者間沒有顯著差異，但均顯著高于其他氮源的菌落直徑。菌絲生長較快的氮源依次為甘氨酸、蛋白胨，甘氨酸菌絲密厚，蛋白胨菌絲稀松，菌落直徑分別為73.88 mm 和72.00 mm， 相互間無顯著差異。以L-丙氨酸、尿素、L-賴 氨酸為氮源時(shí)菌絲生長較慢，菌落直徑均低于65.50 mm，相互間無顯著差異，但均與以甘氨酸、 蛋白胨為氮源的菌落直徑存在顯著或極顯著差異。 說明酵母粉、牛肉浸膏是最適宜暹羅炭疽菌菌絲生 長的氮源（表4）。暹羅炭疽菌在供試的9 種氮源上除尿素外均能產(chǎn)孢，尿素可抑制孢子產(chǎn)生。產(chǎn)孢量最多的氮源為牛肉浸膏，產(chǎn)孢量為252.03×104個(gè)/mL，極顯著高于其他氮源條件下的產(chǎn)孢量。產(chǎn)孢量較多的氮源為蛋白胨、酵母粉，產(chǎn)孢量分別為55.94×104個(gè)/mL、47.66×104個(gè)/mL，相互間無顯著差異，但極顯著高于除牛肉浸膏為氮源外的其他氮源條件下的產(chǎn)孢量。以甘氨酸、L-精氨酸、L-丙氨酸為氮源時(shí)產(chǎn)孢量最少，相互間產(chǎn)孢量沒有顯著性差異。說明牛肉浸膏是最適合暹羅炭疽菌產(chǎn)孢的氮源（表4）。

表4 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢對不同氮源的適應(yīng)性

2.1.6 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢對不同培養(yǎng)基的適應(yīng)性

暹羅炭疽菌在6 種培養(yǎng)基中均能生長。其中，PDA 培養(yǎng)基菌絲生長最快，菌落直徑達(dá)75.38 mm，極顯著高于其他培養(yǎng)基的菌落直徑。其次為PSA 培養(yǎng)基，其菌落直徑極顯著高于除PDA 培養(yǎng)基外的其他培養(yǎng)基。WA 培養(yǎng)基菌絲生長最慢，其菌落直徑均極顯著小于其他培養(yǎng)基。說明PDA 培養(yǎng)基是最適宜暹羅炭疽菌菌絲生長的培養(yǎng)基（表5）。

表5 病原菌菌絲生長、產(chǎn)孢對不同培養(yǎng)基的適應(yīng)性

暹羅炭疽菌在PDA、PSA 培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最多，分別為46.25×104個(gè)/mL、44.02×104個(gè)/mL，兩者間沒有顯著差異，但均顯著高于其他培養(yǎng)基的產(chǎn)孢量。CMA、OA、百香果汁液、WA 培養(yǎng)基產(chǎn)孢量較少，均低于8.00×104個(gè)/mL，處理間沒有顯著差異。說明PDA、PSA 培養(yǎng)基是最適宜暹羅炭疽產(chǎn)孢的培養(yǎng)基（表5）。

2.2 室內(nèi)殺菌劑毒力測定結(jié)果

以同種殺菌劑不同濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，同種殺菌劑不同濃度平均相對抑制率（%）的機(jī)率值為縱坐標(biāo)建立毒力回歸直線，算出毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)（r）和半效應(yīng)濃度（EC50），計(jì)算結(jié)果詳見表6。

表6 12 種殺菌劑對紫果西番蓮頂枯病病原菌的室內(nèi)毒力測定結(jié)果

從表6 可知，12 種供試藥劑的質(zhì)量濃度與相對抑菌率的相關(guān)系數(shù)都在 0.88 以上，說明兩者間呈正相關(guān)。EC50值可用來比較殺菌劑對供試菌株的毒力，EC50值越小表明藥劑的毒力越強(qiáng)。12 種供試殺菌劑對頂枯病病原菌生物活性有差異，其中50%多菌靈毒力最強(qiáng)，EC50為0.4188 μg/mL；其次為70%甲基硫菌靈、20%苯甲·咪鮮胺、450 g/L 咪鮮胺、40%苯甲·吡唑酯，其EC50分別為0.9141 μg/ mL、1.9543 μg/mL、2.3067 μg/mL、3.6475 μg/mL；說明這幾種殺菌劑均為紫果西番蓮頂枯病田間防治參考用藥。毒力中等的殺菌劑有20%抑霉唑、25%丙環(huán)唑、75%肟菌·戊唑醇、10%苯醚甲環(huán)唑，其EC50分別14.5546 μg/mL、15.1356 μg/mL、30.1439 μg/mL、38.8150 μg/mL。毒力較差的殺菌劑為80%乙蒜素、40%腈菌唑，其EC50為68.0769、95.3235 μg/mL；75%百菌清的毒力最差，其EC50為1313.1066 μg/ mL。

3 討論與結(jié)論

本研究結(jié)果表明，不同培養(yǎng)條件對菌絲生長和產(chǎn)孢量、萌發(fā)率均有顯著影響，且菌落顏色、厚度以及菌絲的生長狀況明顯不同。病原菌在pH 值為3.0~12.0 均能生長，最適生長pH 值為5.0~9.0。在pH 值為3.0~12.0 均能產(chǎn)孢，最適產(chǎn)孢量pH 值為7.0~8.0。菌絲在8~36℃均能生長，最佳生長溫度為28℃。在12~36℃均能產(chǎn)孢，最佳產(chǎn)孢溫度為28℃。孢子在pH 值為2.0~12.0 均能萌發(fā)，最佳萌發(fā)pH 值為5.0~10.0。孢子在12~40℃均能萌發(fā)，最佳萌發(fā)溫度為20~36℃。其中，適宜菌絲生長的pH和溫度與羅敦文［21］研究菠蘿蜜蒂腐病病菌和劉在哲等［20］研究紅肉蘋果炭疽病病原暹羅炭疽菌適宜的pH 和溫度基本一致。本研究中，在5 種光照條件下該病原菌均能生長并產(chǎn)孢，其中完全黑暗對菌絲生長和產(chǎn)孢最有利，與劉在哲等［16］研究認(rèn)為紅肉蘋果炭疽病病原暹羅炭疽菌菌絲生長適宜光照條件為持續(xù)光照或光暗交替、王芳等［17］研究認(rèn)為青星美人黑腐病病原菌最適菌絲生長光暗交替的觀點(diǎn)有差異，而完全黑暗對菌絲生長和產(chǎn)孢最有利的研究結(jié)果與王芳等［17］的研究結(jié)果一致。該病原菌菌絲生長最適碳源為葡萄糖，產(chǎn)孢量最多碳源依次為乳糖、D-木糖和山梨醇。菌絲生長最適氮源為酵母粉和牛肉浸膏，產(chǎn)孢量最多氮源為牛肉浸膏，與羅敦文［21］對菠蘿蜜蒂腐病菌菌絲生長的研究結(jié)果基本一致，但與王芳等［17］篩選獲得青星美人黑腐病病原菌菌絲生長和產(chǎn)孢的最適碳源不同。該病原菌菌絲生長最適培養(yǎng)基為PDA，最適產(chǎn)孢培養(yǎng)基為PDA 和PSA，與羅敦文［21］對菠蘿蜜蒂腐病菌菌絲生長的研究結(jié)果一致，與劉在哲等［16］對紅肉蘋果炭疽病病原暹羅炭疽菌菌絲的研究結(jié)果存在差異。本研究中紫果西番蓮頂枯病病原菌在光照條件、碳氮源、培養(yǎng)基方面與前人研究結(jié)果存在的差異，可能與病原菌寄主、供試材料及試驗(yàn)環(huán)境等不同有關(guān)。

殺菌劑的毒力作用包括殺菌作用 （fungicidal action） 和抑/靜菌作用 （fungistatic action），殺菌劑抑制病原菌生長發(fā)育的毒力測定可以在室內(nèi)離體下進(jìn)行，常用于抑制病原菌生長發(fā)育的化合物活性篩選，殺菌劑離體毒力測定方法，即用藥劑直接處理病原菌或病原菌在含藥基質(zhì)上培養(yǎng)，測定藥劑對病原菌生長發(fā)育的影響，在室內(nèi)的離體毒力測定，能夠在較小的空間內(nèi)測定和比較多種藥劑的毒力，測定條件容易控制，結(jié)果能夠反映化合物本身的絕對毒力大小， 重復(fù)性好和可比性強(qiáng)，所以常常被指定為大多數(shù)殺菌劑的毒力測定方法［29］。在暹羅炭疽菌殺菌劑防治研究中，宋慧云等［3］對多菌靈、嘧菌酯、溴菌腈、苯醚甲環(huán)唑、吡唑醚菌酯、氨基寡糖素、嘧霉胺、福美雙等8 種農(nóng)藥防效進(jìn)行評價(jià)，認(rèn)為多菌靈、吡唑醚菌酯和福美雙可作為防治多穗柯炭疽病的化學(xué)殺菌劑。徐丹丹等［20］對苯醚甲環(huán)唑、咪鮮胺、吡唑醚菌酯、甲基硫菌靈等4 種農(nóng)藥防效進(jìn)行評價(jià)，認(rèn)為咪鮮胺、甲基硫菌靈可作為防治咖啡炭疽病首選殺菌劑。王志華等［22］對多菌靈、苯醚甲環(huán)唑、三唑酮、醚菌酯等4 種農(nóng)藥防效進(jìn)行評價(jià)，認(rèn)為多菌靈可濕性粉劑對金森女貞炭疽病抑制作用最強(qiáng)。本研究發(fā)現(xiàn)，苯并咪唑衍生物類殺菌劑（50%多菌靈）對紫果西番蓮頂枯病病原菌毒力強(qiáng)度最強(qiáng)；咪唑類殺菌劑（70%甲基硫菌靈、450 g/L 咪鮮胺、20%抑霉唑）對病原菌毒力強(qiáng)度較強(qiáng)，與前人研究的結(jié)果相似；三唑類殺菌劑（25%丙環(huán)唑、10%苯醚甲環(huán)唑）對病原菌毒力強(qiáng)度中等；有機(jī)硫類殺菌劑（80%乙蒜素）、吡咯類殺菌劑（40%腈菌唑）對病原菌毒力強(qiáng)度較差；取代苯類殺菌劑（75%百菌清）對病原菌的毒力強(qiáng)度最差。本研究還發(fā)現(xiàn)，復(fù)配殺菌劑的毒力強(qiáng)度強(qiáng)于單劑殺菌劑，其20%苯甲·咪鮮胺微乳劑（含苯醚甲環(huán)唑5%和咪鮮胺唑15%）的EC50為1.9543 μg/mL，均低于單劑的10%苯醚甲環(huán)唑或450 g/L 咪鮮胺的EC5（02.3067、38.8150 μg/mL）；40%苯甲·吡唑酯（苯醚甲環(huán)唑15%，吡唑醚菌酯25%）的EC50為3.6475 μg/mL 明顯低于單劑的10%苯醚甲環(huán)唑（38.8150 μg/mL）。

本研究對紫果西番蓮頂枯病病原菌的生物學(xué)特性進(jìn)行分析，并用12 種殺菌劑對其進(jìn)行室內(nèi)毒力測定，結(jié)果可為紫果西番蓮頂枯病防治提供技術(shù)參考。由于殺菌劑毒力測定試驗(yàn)是在室內(nèi)進(jìn)行，田間防治效果還與病原菌孢子［11］、寄主植物生長環(huán)境［13］、殺菌劑特性［30］、施藥時(shí)期、氣候、藥械及其他不可預(yù)見因素等有關(guān)［31］。因此，田間防治效果還需進(jìn)一步驗(yàn)證。