魯 林 方 虹

1.武漢市中醫(yī)醫(yī)院骨科，湖北武漢 430000；2.湖北省中醫(yī)院 湖北中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院 湖北省中醫(yī)藥研究院婦科，湖北武漢 430000

骨質(zhì)疏松是以骨量減少和骨組織微結(jié)構(gòu)異常改變?yōu)樘卣?，骨脆性增加、易骨折的一種全身代謝性骨病。女性在絕經(jīng)后體內(nèi)雌激素水平的下降導(dǎo)致骨形成——骨吸收偶聯(lián)失衡，骨密度（bone mineral density，BMD）降低，進(jìn)而發(fā)生絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松（postmenopausal osteoporosis，PMOP）[1]。據(jù)報道，＞50 歲女性中PMOP 的發(fā)病率超過30%[2]，儼然成為全球性的公共衛(wèi)生問題。研究表明，氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)在PMOP 的發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色，雌激素對PMOP 的作用可能與其抗氧化、抗炎作用有關(guān)[3]。氧化應(yīng)激可通過促進(jìn)破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨吸收、抑制成骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨形成，誘發(fā)PMOP[4]。Notch1 信號通路可通過與其配體Jagged1 結(jié)合激活，從而發(fā)揮維持機(jī)體成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的平衡和穩(wěn)態(tài)作用[5]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，在PMOP 患者體內(nèi)過氧化物還原酶蛋白家族（peroxiredoxin 1～6，Prdx1～6）普遍表達(dá)降低[6]，推測其是通過降低機(jī)體的抗氧化能力，增強(qiáng)氧化應(yīng)激，進(jìn)而誘發(fā)PMOP。強(qiáng)骨膠囊是目前防治骨質(zhì)疏松癥的中藥二類新藥，其主要成分為骨碎補(bǔ)總黃酮。骨碎補(bǔ)總黃酮是水龍骨科植物槲蕨根莖中的主要活性成分，能夠有效調(diào)節(jié)骨代謝、增加骨量，從而發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松癥的作用[7]。然而，目前強(qiáng)骨膠囊治療PMOP 的分子生物學(xué)機(jī)制尚不明確，因此本研究通過構(gòu)建PMOP 大鼠模型，基于Notch1-Hes1-Prdx 蛋白家族通路探究強(qiáng)骨膠囊治療PMOP的炎癥及氧化應(yīng)激機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 60 只5 月齡的野生型、清潔級雌性SD 大鼠，體重（300±20）g，購自武漢大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心[許可證號：SCXK（鄂）2019-0004]，實(shí)驗(yàn)期間喂養(yǎng)于湖北中醫(yī)藥大學(xué)清潔級實(shí)驗(yàn)動物房[SYXK（鄂）2019-0016]，室內(nèi)自然采光，溫度為21～24℃，相對濕度為60%～80%，自由攝取飼料、飲水。本研究經(jīng)武漢市中醫(yī)醫(yī)院倫理委員會審批通過（武中醫(yī)倫KY2020-015）。

1.1.2 藥物與試劑 強(qiáng)骨膠囊（北京岐黃制藥有限公司，批號：12001881716）；雌二醇（湖北信康醫(yī)藥化工有限公司，批號：2016-09-06）；HE 試劑盒（上海撫生實(shí)業(yè)有限公司，貨號：A100005）；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（美國TSZ 公司，貨號：20190105、20190522、20190417、20190226、20190121、20200210、20200119、20191004、20190828、20200425、20190502、20180714、20191106、20200108、20181003、20191218、20200212、20191207）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（德國Qiagen 公司，貨號：169025387）；熒光定量PCR 試劑盒（上海澤葉生物科技有限公司，貨號：RT0411-02）；蛋白提取試劑盒（上海鈺博生物科技有限公司，貨號：bc0345）。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)器材Horizon-A/W/Wi/Ci 型雙能X 線（美國Hologic 公司）；Vert.A1 型光學(xué)顯微鏡（德國ZEISS 公司）；S1000TM96 Well 型PCR 儀（美國BIO-RAD 公司）；EPS-300 型電泳儀（韓國Lab Companion 公司）；DLAB GelSMART 凝膠成像儀[大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器（北京）股份公司]。

1.2 研究方法

1.2.1 建模、分組與干預(yù)60 只SD 大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組，模型對照組，陽性對照組及強(qiáng)骨膠囊低、中、高劑量組，每組10 只。除假手術(shù)組外，其余大鼠通過腹腔注射3.0 mg/kg 戊巴比妥鈉麻醉后，無菌條件下從背部雙側(cè)分別切口摘除雙側(cè)卵巢，縫合切口[8]；假手術(shù)組僅切除雙側(cè)卵巢周邊脂肪組織。術(shù)后8 周采用雙能X 線對腰椎和股骨進(jìn)行掃描并計(jì)算雙能X 線測定大鼠股骨BMD 值以確認(rèn)PMOP 是否造模成功[9]。陽性對照組皮下注射200 μg/kg 雌二醇，2次/周；按照大鼠的等效劑量為人日劑量的7 倍計(jì)算，強(qiáng)骨膠囊低劑量組為等效劑量的1/2，強(qiáng)骨膠囊中劑量組為等效劑量，強(qiáng)骨膠囊高劑量組為等效劑量的2 倍。強(qiáng)骨膠囊低、中、高劑量組分別予以100、200、300 mg/（kg·d）強(qiáng)骨膠囊灌胃；假手術(shù)組及模型對照組灌胃等量生理鹽水，連續(xù)治療12 周。

1.2.2 樣本采集①血清及外周血單個核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）采集：給藥結(jié)束后禁食12 h，經(jīng)腹腔采血，分離血清，于-80℃冰箱保存待用；向下層剩余的血細(xì)胞中加入外周血淋巴細(xì)胞分離液分離并收集PBMC，于-80℃冰箱保存待用。②雙側(cè)股骨采集：斷頭法處死大鼠后分離出雙側(cè)的股骨組織，左側(cè)固定于10%甲醛，右側(cè)凍存于液氮中待用。

1.2.3 雙能X 線測定大鼠股骨BMD 取各組大鼠股骨組織，采用Hologic 雙能X 線骨密度儀檢測大鼠股骨的BMD。

1.2.4 HE 染色觀察大鼠骨組織病理學(xué)變化 取各組大鼠固定于10%甲醛中的股骨組織，流水沖洗2 h 脫鈣，脫水、透明后石蠟包埋，組織切片，HE 染色，中性樹脂封片，光學(xué)顯微鏡下觀察其病理學(xué)變化。

1.2.5 ELISA 法檢測各組大鼠血漿炎癥標(biāo)志物、氧化應(yīng)激標(biāo)志物水平及Jagged1、Notch1、Hes1、Prdx1～6 蛋白表達(dá)水平 取各組大鼠血清，按照ELISA 試劑盒說明分別檢測各大鼠血漿炎癥標(biāo)志物[白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-1β、IL-6、IL-8、IL-17、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）]、氧化應(yīng)激標(biāo)志物[單胺氧化酶A（monoamine oxidase-A，MAOA）、總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）、高級氧化蛋白產(chǎn)物（advanced oxidation pro-tein products，AOPP）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）]水平及Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 的蛋白表達(dá)水平

1.2.6 RT-qPCR 測定PBMC 及骨組織中的Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 mRNA 表達(dá)水平 取各組大鼠PBMC 提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，通過熒光定量PCR 試劑盒進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。以Primer Premier 5.0 軟件設(shè)計(jì)引物序列，見表1。反應(yīng)體系：10 μl 2×SYBR Mix，cDNA 模板1 μl，正、反向引物各1 μl，無酶雙蒸水7 μl。反應(yīng)程序：預(yù)變性95℃30 s，變性95℃5 s，退火55℃10 s，延伸72℃15 s，40 個循環(huán)。以GAPDH 為內(nèi)參，2-ΔΔCt法計(jì)算各基因的相對表達(dá)量。另取各組大鼠凍存的股骨組織，加液氮研磨至粉末狀，RT-qPCR 檢測Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6的表達(dá)水平，步驟同上。

表1 引物序列

1.2.7 Western blot 檢測骨組織中的Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 蛋白表達(dá)水平 取各組大鼠股骨組織，提取總蛋白。按40 μg/ 孔加樣至SDS-PAGE 凝膠中進(jìn)行電泳，轉(zhuǎn)膜至PVDF 膜上。5%脫脂牛奶封閉1 h，加入一抗4℃孵育過夜，次日加入二抗室溫孵育2 h，曝光顯影，DLAB GelSMART 凝膠成像儀成像，Image J 軟件分析各目的蛋白相對表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)；兩組間比較采用獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠股骨BMD 值比較

與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠股骨BMD 值降低（P＜0.05）；與模型對照組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠股骨BMD 值升高（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠股骨BMD值升高（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊高劑量組大鼠股骨BMD 值升高（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠股骨BMD 值比較（g/cm2，）

表2 各組大鼠股骨BMD 值比較（g/cm2，）

注 與假手術(shù)組比較，aP＜0.05；與模型對照組比較，bP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，cP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，dP＜0.05。BMD：骨密度。

2.2 各組大鼠股骨組織病理學(xué)改變

假手術(shù)組大鼠股骨組織形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰完整，骨小梁飽滿豐富、相互交織形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；模型對照組大鼠骨小梁數(shù)量減少，排列松散，間距增大，并出現(xiàn)斷裂，呈典型骨質(zhì)疏松病理學(xué)改變；與模型對照組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠可見骨小梁數(shù)量明顯增多，間距變小，形態(tài)相對完整。見圖1。

圖1 各組大鼠股骨組織病理學(xué)改變（HE 染色）

2.3 各組大鼠血漿炎癥標(biāo)志物水平比較

與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠血漿IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α 水平升高（P＜0.05）；與模型對照組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠血漿IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α 水平降低（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠血漿IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α 水平降低（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊高劑量組大鼠血漿IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、TNF-α 水平降低（P＜0.05）。見表3。

表3 各組大鼠血漿炎癥標(biāo)志物水平比較（pg/ml，）

表3 各組大鼠血漿炎癥標(biāo)志物水平比較（pg/ml，）

注 與假手術(shù)組比較，aP＜0.05；與模型對照組比較，bP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，cP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，dP＜0.05。IL：白細(xì)胞介素；TNF-α：腫瘤壞死因子-α。

2.4 各組大鼠血漿氧化應(yīng)激標(biāo)志物水平比較

與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠血漿MAOA、AOPP 水平升高，T-AOC、SOD 水平降低（P＜0.05）；與模型對照組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠血漿MAOA、AOPP 水平降低，T-AOC、SOD 水平升高（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠血漿MAOA、AOPP 水平降低，T-AOC、SOD 水平升高（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊高劑量組大鼠血漿MAOA、AOPP 水平降低，T-AOC、SOD水平升高（P＜0.05）。見表4。

表4 各組大鼠血漿氧化應(yīng)激標(biāo)志物水平比較（）

表4 各組大鼠血漿氧化應(yīng)激標(biāo)志物水平比較（）

注 與假手術(shù)組比較，aP＜0.05；與模型對照組比較，bP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，cP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，dP＜0.05。MAOA：單胺氧化酶A；T-AOC：總抗氧化能力；AOPP：高級氧化蛋白產(chǎn)物；SOD：超氧化物歧化酶。

2.5 各組大鼠血漿Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6蛋白表達(dá)水平比較

與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠血漿Jagged1、Notch1、Hes1 蛋白表達(dá)水平升高，Prdx1、Prdx6 蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05）；與模型對照組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠血漿Jagged1、Notch1、Hes1 蛋白表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠血漿Jagged1、Notch1、Hes1 蛋白表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊高劑量組大鼠血漿Jagged1、Notch1、Hes1 蛋白表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）。各組大鼠血漿Prdx2～5 蛋白表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表5。

表5 各組大鼠血漿Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 蛋白表達(dá)水平比較（ng/L，）

表5 各組大鼠血漿Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 蛋白表達(dá)水平比較（ng/L，）

注 與假手術(shù)組比較，aP＜0.05；與模型對照組比較，bP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，cP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，dP＜0.05。

2.6 各組大鼠PBMC 中Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 mRNA 表達(dá)水平比較

與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠PBMC 中Jagged1、Notch1、Hes1 mRNA 表達(dá)水平升高，Prdx1、Prdx6 mRNA 表達(dá)水平降低（P＜0.05）；與模型對照組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠PBMC 中Jagged1、Notch1、Hes1 mRNA 表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 mRNA表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠PBMC 中Jagged1、Notch1、Hes1 mRNA 表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 mRNA 表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊高劑量組大鼠PBMC 中Jagged1、Notch1、Hes1mRNA 表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 mRNA 表達(dá)水平升高（P＜0.05）。各組大鼠PBMC 中Prdx2～5 mRNA 表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表6。

表6 各組大鼠PBMC 中Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 mRNA 表達(dá)水平比較（）

表6 各組大鼠PBMC 中Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 mRNA 表達(dá)水平比較（）

注 與假手術(shù)組比較，aP＜0.05；與模型對照組比較，bP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，cP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，dP＜0.05。PBMC：外周血單個核細(xì)胞。

2.7 各組大鼠骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 mRNA 表達(dá)水平比較

與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 mRNA 表達(dá)水平升高，Prdx1、Prdx6 mRNA 表達(dá)水平降低（P＜0.05）；與模型對照組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 mRNA 表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 mRNA 表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 mRNA 表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 mRNA 表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊高劑量組大鼠骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 mRNA 表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 mRNA 表達(dá)水平升高（P＜0.05）。各組大鼠骨組織中Prdx2～5 mRNA表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表7。

表7 各組大鼠骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 mRNA 表達(dá)水平比較（）

表7 各組大鼠骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 mRNA 表達(dá)水平比較（）

注 與假手術(shù)組比較，aP＜0.05；與模型對照組比較，bP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，cP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，dP＜0.05。

2.8 各組大鼠骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 蛋白表達(dá)水平比較

與假手術(shù)組比較，模型對照組大鼠骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 蛋白表達(dá)水平升高，Prdx1、Prdx6蛋白表達(dá)水平降低（P＜0.05）；與模型對照組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 蛋白表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊中、高劑量組大鼠骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 蛋白表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，強(qiáng)骨膠囊高劑量組大鼠骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 蛋白表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 蛋白表達(dá)水平升高（P＜0.05）。各組大鼠骨組織中Prdx2～5蛋白表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見圖2、表8。

圖2 各組大鼠骨組織Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 蛋白表達(dá)

表8 各組大鼠骨組織Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 蛋白表達(dá)水平比較（）

表8 各組大鼠骨組織Jagged1、Notch1、Hes1 及Prdx1～6 蛋白表達(dá)水平比較（）

注 與假手術(shù)組比較，aP＜0.05；與模型對照組比較，bP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊低劑量組比較，cP＜0.05；與強(qiáng)骨膠囊中劑量組比較，dP＜0.05。

3 討論

PMOP 是一種絕經(jīng)后中老年女性中的常見疾病，目前臨床上PMOP 的治療主要以雙膦酸鹽、激素類似物等藥物為主，但尚無根治PMOP 的方法[10]。強(qiáng)骨膠囊能夠有效地調(diào)節(jié)骨代謝并改善骨組織結(jié)構(gòu)，從而發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松癥的作用[11]，然而其治療PMOP 的分子生物學(xué)機(jī)制尚不清楚，鑒于此本研究選用強(qiáng)骨膠囊探究其治療PMOP 的作用機(jī)制。

骨質(zhì)疏松的發(fā)生與氧化應(yīng)激關(guān)系密切[12]，雌激素有顯著抗氧化作用，由于絕經(jīng)后女性體內(nèi)雌激素水平下降，機(jī)體長期處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，導(dǎo)致大量的活性氧生成并累積在體內(nèi)，從而損傷骨質(zhì)并引起基質(zhì)重塑，最終誘發(fā)PMOP，因此改善機(jī)體氧化應(yīng)激是治療PMOP 的關(guān)鍵所在[13-14]。MAOA 是一類催化單胺類物質(zhì)氧化脫氨反應(yīng)的酶，其水平的高低反映了機(jī)體的氧化應(yīng)激水平[15]；AOPP 具有高蛋白氧化敏感性，是蛋白質(zhì)氧化的特異性標(biāo)志之一[16-17]；T-AOC 是反映機(jī)體抗氧化能力總和的重要指標(biāo)；SOD 是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶，機(jī)體清除活性氧的重要因子[18]。研究顯示[19-20]，絕經(jīng)后雌激素水平的降低可通過介導(dǎo)TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17 等一系列炎癥細(xì)胞因子的分泌，促進(jìn)破骨細(xì)胞增殖和分化，打破骨形成與骨吸收的平衡，導(dǎo)致PMOP。甘東浩等[21]研究指出，骨碎補(bǔ)可通過改善氧化應(yīng)激調(diào)控骨質(zhì)疏松患者成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞增殖分化從而發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松的作用。本研究結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，PMOP 大鼠BMD 值降低、骨小梁數(shù)量減少，血漿中炎癥標(biāo)志物水平升高，氧化應(yīng)激標(biāo)志物MAOA、AOPP 水平升高，T-AOC 和SOD 水平降低。經(jīng)強(qiáng)骨膠囊治療后，大鼠BMD值升高、骨小梁數(shù)量增多，血漿中炎癥標(biāo)志物水平降低，氧化應(yīng)激標(biāo)志物MAOA、AOPP 水平降低，T-AOC 和SOD 水平升高，其中低劑量強(qiáng)骨膠囊對上述指標(biāo)無明顯改善，中、高劑量強(qiáng)骨膠囊效果明顯。提示一定劑量的強(qiáng)骨膠囊能改善PMOP 大鼠BMD 值和骨組織病理學(xué)改變，抑制機(jī)體氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)。

Notch 信號通路通過調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和凋亡等多種生物學(xué)過程參與疾病的發(fā)生發(fā)展[22]。近年來發(fā)現(xiàn)[23]，Notch1 為Notch 通路最重要的受體之一，Notch1可通過其與上游配體Jagged1 特異性結(jié)合激活Notch信號通路及其下游靶基因Hes1，進(jìn)而啟動一系列級聯(lián)式信號反應(yīng)，促進(jìn)破骨細(xì)胞的成熟和分化，抑制成骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨形成和骨礦物質(zhì)沉積[24]。Prdxs 蛋白家族是一組抗氧化蛋白，在機(jī)體內(nèi)發(fā)揮清除自由基、保護(hù)機(jī)體免受氧化應(yīng)激損傷的作用[25]。黃翔宇等[26]研究顯示，強(qiáng)骨膠囊的主要成分骨碎補(bǔ)總黃酮可通過抑制Notch 信號通路改善骨質(zhì)疏松的臨床癥狀。本研究結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，PMOP 大鼠血漿、PBMC及骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 mRNA 表達(dá)水平升高，Prdx1、Prdx6 mRNA表達(dá)水平降低，Prdx2～5 mRNA無明顯變化，經(jīng)強(qiáng)骨膠囊治療后，大鼠血漿、PBMC 及骨組織中Jagged1、Notch1、Hes1 mRNA表達(dá)水平降低，Prdx1、Prdx6 mRNA 表達(dá)水平升高，其中低劑量強(qiáng)骨膠囊對上述指標(biāo)無明顯改善，中、高劑量強(qiáng)骨膠囊效果明顯。推測強(qiáng)骨膠囊可能是通過抑制Notch1-Hes1-Prdx 信號通路下調(diào)Jagged1、Notch1、Hes1 表達(dá)，上調(diào)Prdx1、Prdx6 表達(dá)，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化應(yīng)激能力并改善炎癥反應(yīng)發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松作用，Prdx2～5 在該過程中可能不發(fā)揮作用。

綜上所述，強(qiáng)骨膠囊可能是通過抑制Notch1-Hes1-Prdx 信號通路下調(diào)Jagged1、Notch1、Hes1 表達(dá)，上調(diào)Prdx1、Prdx6 表達(dá)，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化應(yīng)激能力并改善炎癥反應(yīng)發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松作用。本研究通過動物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)初步闡釋了強(qiáng)骨膠囊對PMOP 的治療作用及機(jī)制，為強(qiáng)骨膠囊用于PMOP 的臨床治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。