姚松銀 高瓊 吳媛妮 尹曉晨 肖麗佳 尹進(jìn)

湖南省疾病預(yù)防控制中心，長(zhǎng)沙 410005

使用消毒劑殺滅致病微生物是有效阻斷傳染性疾病傳播的重要手段。手衛(wèi)生和重點(diǎn)環(huán)境物體表面消毒作為標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防的關(guān)鍵措施之一，對(duì)預(yù)防和控制醫(yī)院感染，保障患者和醫(yī)務(wù)人員的安全發(fā)揮了重要作用［1-5］。安全有效的消毒劑可以殺滅手上的病原微生物，有效切斷傳播途徑，是傳染病防控的重要手段。目前，市面上消毒劑種類(lèi)繁多，最常用的含氯、含碘、醇類(lèi)和季銨鹽等消毒劑［6］。但這幾類(lèi)消毒劑或多或少存在對(duì)環(huán)境污染、藥物殘留、對(duì)人的皮膚和黏膜有刺激等缺點(diǎn)［7-10］。因此，有必要研究新型復(fù)合對(duì)皮膚無(wú)刺激的消毒劑。本研究中某氫氧離子消毒液為一種復(fù)合型消毒劑，其主要成分為碳酸鉀，通過(guò)懸液定量殺滅試驗(yàn)、理化試驗(yàn)及毒理學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)證其消毒有效性以及安全性，為其在實(shí)際中應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)［11］。

材料和方法

1.試驗(yàn)材料

試驗(yàn)采用碳酸鉀為主要成分的消毒劑，pH值12.6，為透明無(wú)色液體。試驗(yàn)采用菌種/病毒信息見(jiàn)表1。中和劑采用PBS（添加0.5%硫代硫酸鈉和0.5%吐溫-80）。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為普通級(jí)健康白色家兔，生產(chǎn)許可證為SCXK（湘）2019-0015，購(gòu)自長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司。

2.方法

2.1.菌懸液準(zhǔn)備 將白色念珠菌接種沙堡瓊脂培養(yǎng)基斜面，其他典型菌落接種于TSA培養(yǎng)基斜面，37 ℃培養(yǎng)24 h。采取胰蛋白胨生理鹽水稀釋液清洗菌苔，形成菌懸液。病毒懸液制備參照2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》［12］的規(guī)定方法，將各試驗(yàn)病毒接種于細(xì)胞單層，經(jīng)培養(yǎng)至3/4出現(xiàn)病變時(shí)，收獲病毒，制備成滴度為109TCID50/ml的病毒懸液，置于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.懸液定量殺菌試驗(yàn)［12］（1）對(duì)消毒液與菌懸液進(jìn)行20 ℃恒溫處理；（2）將4.0 ml消毒液（陽(yáng)性對(duì)照為T(mén)PS）加入1 ml菌懸液中，混勻并計(jì)時(shí)；（3）一定時(shí)間后，取0.5 ml混合液加入4.5 ml中和劑，混勻后靜置10 min；（4）中和后取1.0 ml進(jìn)行活菌統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次。

2.3.脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)［11-12］（1）病毒懸液和消毒液原液培養(yǎng)箱恒溫5 min；（2）首先取0.1 ml有機(jī)干擾物加入0.1 ml病毒懸液，靜置5 min后，加入0.8 ml氫氧離子水，分別作用0.5、1.0、1.5 min；（3）取上述混合液0.1 ml加入0.9 ml中和劑，20 ℃，10 min；（4）用細(xì)胞培養(yǎng)液做倍比稀釋?zhuān)♂対舛葹?0-9～10-2。接種細(xì)胞，置于5% CO2培養(yǎng)箱37 ℃培養(yǎng)。每天觀察并記錄細(xì)胞病變狀態(tài)，開(kāi)展病毒滴度（TCID50）測(cè)試，獲得平均滅活對(duì)數(shù)值。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次。

2.4.物體表面現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)［12］使用消毒劑濃度及處理方法：用5.0 cm×5.0 cm滅菌規(guī)格板取樣，消毒之前把無(wú)菌棉拭子浸濕于10 ml稀釋液中，在規(guī)格版區(qū)域涂抹取樣，橫向與豎向分別往返8次。取樣后，按照無(wú)菌操作要求把棉拭子采樣段剪斷放入原稀釋液試管內(nèi)，并振搗80次，然后適當(dāng)進(jìn)行稀釋?zhuān)怪蔀殛?yáng)性對(duì)照組樣本。同時(shí)取某氫氧離子消毒液原液對(duì)木質(zhì)桌面進(jìn)行擦拭消毒，作用1.0 min后，用采樣液代替稀釋液采樣，作為試驗(yàn)組樣本。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次。

2.5.衛(wèi)生手消毒現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)［12］使用消毒劑濃度及處理方法：用某氫氧離子消毒液原液對(duì)左手進(jìn)行消毒，作用1.0 min后用無(wú)菌棉拭在含10 ml中和劑中潤(rùn)濕后，將左手五指由指尖至指根反復(fù)涂擦2遍，注意每涂擦1遍轉(zhuǎn)動(dòng)無(wú)菌棉拭1次，作為試驗(yàn)組樣本；同時(shí)將稀釋液代替中和劑，方法同上采樣，所采樣本為對(duì)照組。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次。

2.6.穩(wěn)定性試驗(yàn)［12］按加速法進(jìn)行（54 ℃溫箱14 d）：試驗(yàn)在20 ℃恒溫控制器中進(jìn)行。先將某氫氧離子消毒液原液4.0 ml加入滅菌試管內(nèi)，再滴入菌懸液1.0 ml，混合至預(yù)定時(shí)間，將菌、消毒混懸液取0.5 ml并入4.5 ml中和劑中和10 min，取樣用沙堡氏培養(yǎng)基傾皿檢驗(yàn)殘留活菌數(shù)。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽(yáng)性、陰性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次。

2.7.毒理學(xué)試驗(yàn) 依據(jù)《消毒劑安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法衛(wèi)生要求》（2020年版）［13］的消毒產(chǎn)品毒理學(xué)試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范要求進(jìn)行了1次破損皮膚刺激試驗(yàn)、多次皮膚刺激試驗(yàn)及陰道黏膜刺激試驗(yàn)，觀察結(jié)果后，進(jìn)行刺激反應(yīng)評(píng)分和刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。

結(jié)果

1.懸液定量殺菌結(jié)果（表2）

表2 某氫氧離子消毒液定量殺菌結(jié)果

該消毒液作用1.0 min后，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌殺滅對(duì)數(shù)值＞5.00，白色念珠菌＞4.00。

2.病毒滅活試驗(yàn)結(jié)果（表3）

表3 某氫氧離子消毒液對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒的滅活結(jié)果

結(jié)果表明，該氫氧離子消毒液原液作用0.5 min，懸液內(nèi)脊髓灰質(zhì)炎病毒的平均滅活對(duì)數(shù)值＞5.00，具有顯著滅活效果。

3.物體表面消毒效果試驗(yàn)結(jié)果（表4）

表4 某氫氧離子消毒液的物體表面消毒現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)物體表面進(jìn)行消毒1.0 min，木質(zhì)表面上的自然菌殺滅對(duì)數(shù)值均＞1.00。

4.衛(wèi)生手消毒現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)（表5）

表5 某氫氧離子消毒液的衛(wèi)生手消毒現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)

通過(guò)開(kāi)展30人次衛(wèi)生手消毒試驗(yàn)，使用氫氧離子消毒液原液處理1.0 min后，手中自然菌的最低殺滅對(duì)數(shù)值為1.10。

5.穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（表6）

表6 某氫氧離子消毒液穩(wěn)定性結(jié)果

某氫氧離子消毒液原液置54 ℃溫箱14 d后，作用1.0 min，對(duì)白色念珠菌的殺滅效果穩(wěn)定，前后無(wú)顯著差異，該產(chǎn)品的有效期為1年。

6.毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果

1次破損皮膚刺激試驗(yàn)得分及多次皮膚刺激試驗(yàn)反應(yīng)得分均為0分，屬無(wú)刺激性（表7、8）。通過(guò)白色家兔陰道黏膜刺激試驗(yàn)，得到刺激指數(shù)為0.34。因此，該消毒液可視為無(wú)刺激性（表9）。

表7 某氫氧離子液對(duì)白色家兔1次破損皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分（分）

表9 某氫氧離子液對(duì)白色家兔陰道黏膜刺激反應(yīng)評(píng)分（分）

討論

全球新型冠狀病毒疫情仍存在低水平流行，且秋冬季易合并流感病毒等感染，形成對(duì)健康更大的威脅［14］。醫(yī)療衛(wèi)生和日常生活中常用的消毒劑主要有醇類(lèi)消毒劑、含氯消毒劑、二氧化氯消毒劑、過(guò)氧化物消毒劑、季銨鹽類(lèi)消毒劑等。另外，紫外線、臭氧、高溫和蒸汽等消毒方法也有所應(yīng)用［15］。絕大多數(shù)消毒產(chǎn)品在使用過(guò)程中或因?yàn)闅埩舻葘?duì)人體的呼吸道黏膜、皮膚、眼睛均有不同程度的刺激［16］。某些消毒劑如含氯消毒液的過(guò)度使用，也可能在環(huán)境中蓄積，生成次生污染物而對(duì)環(huán)境產(chǎn)生污染［17］。開(kāi)發(fā)對(duì)環(huán)境及人體影響較小，污染性相對(duì)較低的新型高效消毒劑也成為消毒行業(yè)的一大研發(fā)方向和熱點(diǎn)。

近年來(lái)，利用氫氧根離子為主要作用成分的新型消毒劑、器械裝置廣受人們關(guān)注，產(chǎn)生了不少消毒產(chǎn)品的發(fā)明專(zhuān)利［18-21］，主要涉及空氣、飲用水、污水、果蔬等方面的清潔和消毒，不僅殺菌、消毒效果強(qiáng)，還具有綠色環(huán)保、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn)。本次研究對(duì)象為氫氧離子消毒液，其主要成分為碳酸鉀，在醫(yī)藥、食品、化工和輕工等行業(yè)作為根本原料之一使用［22］，在消毒劑生產(chǎn)中，碳酸鉀可作為一種催化劑，加速產(chǎn)生和釋放氫氧根離子，從而在短時(shí)間內(nèi)發(fā)揮消毒、滅菌效果［21］。消毒學(xué)試驗(yàn)表明，在本實(shí)驗(yàn)室條件下，該消毒液對(duì)生活中常見(jiàn)的病原微生物如大腸桿菌、銅綠假單胞菌、金色葡萄球菌、脊髓灰質(zhì)炎病毒以及白色念珠菌以及自然菌均具有較好的殺滅或滅活作用，并且具有良好的穩(wěn)定性。該氫氧離子消毒液原液置54 ℃溫箱14 d后，作用1.0 min，對(duì)白色念珠菌的殺滅效果穩(wěn)定，前后基本一致。在開(kāi)發(fā)一種新型消毒液時(shí)，不僅要驗(yàn)證其消毒效果，更要了解它是否安全無(wú)刺激作用。毒理學(xué)試驗(yàn)證明，該消毒劑對(duì)陰道黏膜和破損皮膚及多次皮膚刺激屬無(wú)刺激性。

綜上所述，本研究的某氫氧離子消毒液對(duì)細(xì)菌、真菌和脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型（PV-Ⅰ）疫苗株有高效滅活作用；同時(shí)該產(chǎn)品儲(chǔ)存性能穩(wěn)定，無(wú)毒、無(wú)刺激性，可以安全、有效直接應(yīng)用于人體皮膚及物體表面的消毒。