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        一種氫氧離子消毒液消毒相關(guān)性能研究

        2023-09-20 07:30:40姚松銀高瓊吳媛妮尹曉晨肖麗佳尹進(jìn)
        關(guān)鍵詞:中和劑氫氧原液

        姚松銀 高瓊 吳媛妮 尹曉晨 肖麗佳 尹進(jìn)

        湖南省疾病預(yù)防控制中心,長沙 410005

        使用消毒劑殺滅致病微生物是有效阻斷傳染性疾病傳播的重要手段。手衛(wèi)生和重點(diǎn)環(huán)境物體表面消毒作為標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防的關(guān)鍵措施之一,對(duì)預(yù)防和控制醫(yī)院感染,保障患者和醫(yī)務(wù)人員的安全發(fā)揮了重要作用[1-5]。安全有效的消毒劑可以殺滅手上的病原微生物,有效切斷傳播途徑,是傳染病防控的重要手段。目前,市面上消毒劑種類繁多,最常用的含氯、含碘、醇類和季銨鹽等消毒劑[6]。但這幾類消毒劑或多或少存在對(duì)環(huán)境污染、藥物殘留、對(duì)人的皮膚和黏膜有刺激等缺點(diǎn)[7-10]。因此,有必要研究新型復(fù)合對(duì)皮膚無刺激的消毒劑。本研究中某氫氧離子消毒液為一種復(fù)合型消毒劑,其主要成分為碳酸鉀,通過懸液定量殺滅試驗(yàn)、理化試驗(yàn)及毒理學(xué)試驗(yàn)驗(yàn)證其消毒有效性以及安全性,為其在實(shí)際中應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)[11]。

        材料和方法

        1.試驗(yàn)材料

        試驗(yàn)采用碳酸鉀為主要成分的消毒劑,pH值12.6,為透明無色液體。試驗(yàn)采用菌種/病毒信息見表1。中和劑采用PBS(添加0.5%硫代硫酸鈉和0.5%吐溫-80)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為普通級(jí)健康白色家兔,生產(chǎn)許可證為SCXK(湘)2019-0015,購自長沙市天勤生物技術(shù)有限公司。

        2.方法

        2.1.菌懸液準(zhǔn)備 將白色念珠菌接種沙堡瓊脂培養(yǎng)基斜面,其他典型菌落接種于TSA培養(yǎng)基斜面,37 ℃培養(yǎng)24 h。采取胰蛋白胨生理鹽水稀釋液清洗菌苔,形成菌懸液。病毒懸液制備參照2002年版《消毒技術(shù)規(guī)范》[12]的規(guī)定方法,將各試驗(yàn)病毒接種于細(xì)胞單層,經(jīng)培養(yǎng)至3/4出現(xiàn)病變時(shí),收獲病毒,制備成滴度為109TCID50/ml的病毒懸液,置于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

        2.2.懸液定量殺菌試驗(yàn)[12](1)對(duì)消毒液與菌懸液進(jìn)行20 ℃恒溫處理;(2)將4.0 ml消毒液(陽性對(duì)照為TPS)加入1 ml菌懸液中,混勻并計(jì)時(shí);(3)一定時(shí)間后,取0.5 ml混合液加入4.5 ml中和劑,混勻后靜置10 min;(4)中和后取1.0 ml進(jìn)行活菌統(tǒng)計(jì)培養(yǎng)。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽性、陰性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次。

        2.3.脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活試驗(yàn)[11-12](1)病毒懸液和消毒液原液培養(yǎng)箱恒溫5 min;(2)首先取0.1 ml有機(jī)干擾物加入0.1 ml病毒懸液,靜置5 min后,加入0.8 ml氫氧離子水,分別作用0.5、1.0、1.5 min;(3)取上述混合液0.1 ml加入0.9 ml中和劑,20 ℃,10 min;(4)用細(xì)胞培養(yǎng)液做倍比稀釋,稀釋濃度為10-9~10-2。接種細(xì)胞,置于5% CO2培養(yǎng)箱37 ℃培養(yǎng)。每天觀察并記錄細(xì)胞病變狀態(tài),開展病毒滴度(TCID50)測(cè)試,獲得平均滅活對(duì)數(shù)值。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽性、陰性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次。

        2.4.物體表面現(xiàn)場(chǎng)消毒試驗(yàn)[12]使用消毒劑濃度及處理方法:用5.0 cm×5.0 cm滅菌規(guī)格板取樣,消毒之前把無菌棉拭子浸濕于10 ml稀釋液中,在規(guī)格版區(qū)域涂抹取樣,橫向與豎向分別往返8次。取樣后,按照無菌操作要求把棉拭子采樣段剪斷放入原稀釋液試管內(nèi),并振搗80次,然后適當(dāng)進(jìn)行稀釋,使之成為陽性對(duì)照組樣本。同時(shí)取某氫氧離子消毒液原液對(duì)木質(zhì)桌面進(jìn)行擦拭消毒,作用1.0 min后,用采樣液代替稀釋液采樣,作為試驗(yàn)組樣本。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽性、陰性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次。

        2.5.衛(wèi)生手消毒現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)[12]使用消毒劑濃度及處理方法:用某氫氧離子消毒液原液對(duì)左手進(jìn)行消毒,作用1.0 min后用無菌棉拭在含10 ml中和劑中潤濕后,將左手五指由指尖至指根反復(fù)涂擦2遍,注意每涂擦1遍轉(zhuǎn)動(dòng)無菌棉拭1次,作為試驗(yàn)組樣本;同時(shí)將稀釋液代替中和劑,方法同上采樣,所采樣本為對(duì)照組。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽性、陰性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次。

        2.6.穩(wěn)定性試驗(yàn)[12]按加速法進(jìn)行(54 ℃溫箱14 d):試驗(yàn)在20 ℃恒溫控制器中進(jìn)行。先將某氫氧離子消毒液原液4.0 ml加入滅菌試管內(nèi),再滴入菌懸液1.0 ml,混合至預(yù)定時(shí)間,將菌、消毒混懸液取0.5 ml并入4.5 ml中和劑中和10 min,取樣用沙堡氏培養(yǎng)基傾皿檢驗(yàn)殘留活菌數(shù)。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)陽性、陰性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次。

        2.7.毒理學(xué)試驗(yàn) 依據(jù)《消毒劑安全性毒理學(xué)評(píng)價(jià)程序和方法衛(wèi)生要求》(2020年版)[13]的消毒產(chǎn)品毒理學(xué)試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范要求進(jìn)行了1次破損皮膚刺激試驗(yàn)、多次皮膚刺激試驗(yàn)及陰道黏膜刺激試驗(yàn),觀察結(jié)果后,進(jìn)行刺激反應(yīng)評(píng)分和刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)。

        結(jié)果

        1.懸液定量殺菌結(jié)果(表2)

        表2 某氫氧離子消毒液定量殺菌結(jié)果

        該消毒液作用1.0 min后,大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌殺滅對(duì)數(shù)值>5.00,白色念珠菌>4.00。

        2.病毒滅活試驗(yàn)結(jié)果(表3)

        表3 某氫氧離子消毒液對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒的滅活結(jié)果

        結(jié)果表明,該氫氧離子消毒液原液作用0.5 min,懸液內(nèi)脊髓灰質(zhì)炎病毒的平均滅活對(duì)數(shù)值>5.00,具有顯著滅活效果。

        3.物體表面消毒效果試驗(yàn)結(jié)果(表4)

        表4 某氫氧離子消毒液的物體表面消毒現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果

        通過物體表面進(jìn)行消毒1.0 min,木質(zhì)表面上的自然菌殺滅對(duì)數(shù)值均>1.00。

        4.衛(wèi)生手消毒現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)(表5)

        表5 某氫氧離子消毒液的衛(wèi)生手消毒現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)

        通過開展30人次衛(wèi)生手消毒試驗(yàn),使用氫氧離子消毒液原液處理1.0 min后,手中自然菌的最低殺滅對(duì)數(shù)值為1.10。

        5.穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果(表6)

        表6 某氫氧離子消毒液穩(wěn)定性結(jié)果

        某氫氧離子消毒液原液置54 ℃溫箱14 d后,作用1.0 min,對(duì)白色念珠菌的殺滅效果穩(wěn)定,前后無顯著差異,該產(chǎn)品的有效期為1年。

        6.毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果

        1次破損皮膚刺激試驗(yàn)得分及多次皮膚刺激試驗(yàn)反應(yīng)得分均為0分,屬無刺激性(表7、8)。通過白色家兔陰道黏膜刺激試驗(yàn),得到刺激指數(shù)為0.34。因此,該消毒液可視為無刺激性(表9)。

        表7 某氫氧離子液對(duì)白色家兔1次破損皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分(分)

        表9 某氫氧離子液對(duì)白色家兔陰道黏膜刺激反應(yīng)評(píng)分(分)

        討論

        全球新型冠狀病毒疫情仍存在低水平流行,且秋冬季易合并流感病毒等感染,形成對(duì)健康更大的威脅[14]。醫(yī)療衛(wèi)生和日常生活中常用的消毒劑主要有醇類消毒劑、含氯消毒劑、二氧化氯消毒劑、過氧化物消毒劑、季銨鹽類消毒劑等。另外,紫外線、臭氧、高溫和蒸汽等消毒方法也有所應(yīng)用[15]。絕大多數(shù)消毒產(chǎn)品在使用過程中或因?yàn)闅埩舻葘?duì)人體的呼吸道黏膜、皮膚、眼睛均有不同程度的刺激[16]。某些消毒劑如含氯消毒液的過度使用,也可能在環(huán)境中蓄積,生成次生污染物而對(duì)環(huán)境產(chǎn)生污染[17]。開發(fā)對(duì)環(huán)境及人體影響較小,污染性相對(duì)較低的新型高效消毒劑也成為消毒行業(yè)的一大研發(fā)方向和熱點(diǎn)。

        近年來,利用氫氧根離子為主要作用成分的新型消毒劑、器械裝置廣受人們關(guān)注,產(chǎn)生了不少消毒產(chǎn)品的發(fā)明專利[18-21],主要涉及空氣、飲用水、污水、果蔬等方面的清潔和消毒,不僅殺菌、消毒效果強(qiáng),還具有綠色環(huán)保、無污染等優(yōu)點(diǎn)。本次研究對(duì)象為氫氧離子消毒液,其主要成分為碳酸鉀,在醫(yī)藥、食品、化工和輕工等行業(yè)作為根本原料之一使用[22],在消毒劑生產(chǎn)中,碳酸鉀可作為一種催化劑,加速產(chǎn)生和釋放氫氧根離子,從而在短時(shí)間內(nèi)發(fā)揮消毒、滅菌效果[21]。消毒學(xué)試驗(yàn)表明,在本實(shí)驗(yàn)室條件下,該消毒液對(duì)生活中常見的病原微生物如大腸桿菌、銅綠假單胞菌、金色葡萄球菌、脊髓灰質(zhì)炎病毒以及白色念珠菌以及自然菌均具有較好的殺滅或滅活作用,并且具有良好的穩(wěn)定性。該氫氧離子消毒液原液置54 ℃溫箱14 d后,作用1.0 min,對(duì)白色念珠菌的殺滅效果穩(wěn)定,前后基本一致。在開發(fā)一種新型消毒液時(shí),不僅要驗(yàn)證其消毒效果,更要了解它是否安全無刺激作用。毒理學(xué)試驗(yàn)證明,該消毒劑對(duì)陰道黏膜和破損皮膚及多次皮膚刺激屬無刺激性。

        綜上所述,本研究的某氫氧離子消毒液對(duì)細(xì)菌、真菌和脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型(PV-Ⅰ)疫苗株有高效滅活作用;同時(shí)該產(chǎn)品儲(chǔ)存性能穩(wěn)定,無毒、無刺激性,可以安全、有效直接應(yīng)用于人體皮膚及物體表面的消毒。

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