■ 陽 剛 黃榮焱 杜蕓廷 王 洋 張 瓊 舒 剛 楊仕群*

（1.宜賓職業(yè)技術(shù)學(xué)院，四川宜賓 644000；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川成都 611130）

大金雞菊（Coreopsis lanceolataL.）為菊科金雞菊屬植物，別名劍葉金雞菊、線葉金雞菊、狹葉金雞菊、劍葉波斯菊，為多年生宿根草本植物。原產(chǎn)于北美，該草耐貧瘠、抗污染、繁殖力強(qiáng)，其全草可入藥，具清熱解毒和降壓等功效[1]。1936年作為園林植物引入我國江西廬山，現(xiàn)逃逸為野生雜草，在江西、安徽、江蘇、浙江及山東等地?cái)U(kuò)散。由于大金雞菊生長迅速資源非常豐富，如能從劍葉金雞菊植株提取次生代謝產(chǎn)物并開發(fā)利用，則可化害為利。

金雞菊屬植物含有揮發(fā)油類、黃酮類、炔類、苯丙素類、萜類、甾類等化學(xué)成分。該屬植物具有調(diào)血脂、降血壓、降血糖、抗氧化、抑制α-葡萄糖苷酶及抗菌等活性[2-3]。曾建軍等[4]對(duì)大金雞菊不同部位總黃酮及總皂苷含量進(jìn)行了測定，并考察了索氏提取法、超聲波提取法及冷浸提取法三種不同方法的提取效果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大金雞菊花中總皂苷的含量最高，為1.03 mg/g（索氏提?。?，顯著高于其他三種部位，其后依次為葉、根和莖，莖中總皂苷含量最低，為0.22 mg/g（索氏提?。?。王健等[5]考察了金雞菊屬植物兩色金雞菊提取物的急性毒性作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩色金雞菊乙醇提取物L(fēng)D50為19.565 g/kg，為本研究選擇大金雞菊提取物劑量提供了一定參考價(jià)值。本研究通過在蛋種雞基礎(chǔ)日糧中添加不同劑量的大金雞菊提取物，旨在探討其對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血清抗氧化功能及繁殖性能的影響。

1 材料與方法

1.1 添加劑、試劑及用品等

大金雞菊提取物（陜西錦泰生物工程有限公司西安高新分公司）、超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒、總抗氧化能力（T-AOC）測定試劑盒、GSH-Px 測定試劑盒、丙二醛（MDA）測定試劑盒、過氧化氫酶（CAT）測定試劑盒。以上試劑盒由南京建成工程生物研究所有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)儀器

YP202N電子天平（上海青海儀器有限公司），JSHD索氏提取器（匯達(dá)實(shí)驗(yàn)耗材），DNM-9602G酶標(biāo)分析儀（北京普朗新技術(shù)有限公司），TG16-WS離心機(jī)（湘儀儀器廠），RE-52A 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠），EA-01蛋品質(zhì)自動(dòng)分析儀（瑞士SONOVA 集團(tuán)），聚泰8448枚大型孵化機(jī)（故城縣故城聚泰孵化設(shè)備廠）。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組

試驗(yàn)選用同一飼養(yǎng)條件下、體重接近的1 200 只50 周齡健康農(nóng)大3 號(hào)蛋種雞，隨機(jī)分成4 組，每組6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50 只。具體分組情況見表1。蛋種雞飼喂的基礎(chǔ)日糧配方及營養(yǎng)水平參照《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 33—2004）配制見表2。

表1 試驗(yàn)動(dòng)物分組

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4 試驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)管理

采用上、中、下三層階梯式籠養(yǎng)，每籠1 只，各組試驗(yàn)雞平均分布在上、中、下層。飼養(yǎng)期間，日糧按種雞要求進(jìn)行飼喂和自由飲水，溫度控制在16～24 ℃，光照為16 h/d，自然通風(fēng)與負(fù)壓通風(fēng)相結(jié)合。定期打掃雞舍衛(wèi)生，并采用常規(guī)免疫程序免疫。

1.5 指標(biāo)測定與方法

1.5.1 生產(chǎn)性能測定

在相同管理?xiàng)l件下，以重復(fù)為單位，記錄每天產(chǎn)蛋總數(shù)、總蛋重、次損蛋數(shù)，每隔1 周測定飼糧消耗量，計(jì)算平均蛋重、產(chǎn)蛋率、平均日采食量、次損蛋率和料蛋比。

1.5.2 蛋品質(zhì)測定

于試驗(yàn)第35 天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)取10 枚蛋進(jìn)行蛋品質(zhì)測定。用游標(biāo)卡尺測量蛋形指數(shù)、蛋殼厚度，用蛋品質(zhì)自動(dòng)分析儀測定蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色、蛋白高度和哈夫單位。

1.5.3 抗氧化功能測定

于試驗(yàn)第35天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取12只蛋種雞，翅靜脈采血5 mL，置于離心管中靜置2 h，使用離心機(jī)3 000 r/min 高速離心10 min，取上清液置于-20 ℃冰箱備用，制備的血清使用試劑盒測定SOD、T-AOC、GSH-Px、MDA 和CAT 的含量（具體操作嚴(yán)格按試劑盒說明書執(zhí)行）。

1.5.4 繁殖性能

飼養(yǎng)試驗(yàn)35 d后，對(duì)蛋種雞的繁殖力和孵化性能進(jìn)行評(píng)估。采集公雞精液對(duì)各組種雞進(jìn)行人工授精。人工授精后5～7 d 收集各組雞蛋，轉(zhuǎn)移到孵化場的孵化機(jī)中進(jìn)行孵化，出雛后評(píng)估受精率、孵化率、健雛率和胚胎死亡率。

1.6 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 27.0 進(jìn)行單因素方差分析和LSD 多重比較。計(jì)算結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 大金雞菊提取物對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能的影響

由表3 可知，與空白組相比，各試驗(yàn)組平均蛋重、平均日采食量和次損蛋率差異不顯著（P＞0.05）。與空白組相比，低濃度組產(chǎn)蛋率及料蛋比無顯著差異（P＞0.05）；中濃度組產(chǎn)蛋率提升了7.08%（P＞0.05），料蛋比顯著下降了7.69%（P＜0.05）；高濃度組產(chǎn)蛋率顯著提升了8.18%（P＜0.05），料蛋比顯著下降了10.38%（P＜0.05）。

表3 大金雞菊提取物對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能的影響

2.2 大金雞菊提取物對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋后期蛋品質(zhì)的影響

由表4 可知，與空白組相比，低、中、高濃度組蛋形指數(shù)及蛋殼厚度差異不顯著（P＞0.05）。低濃度組蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色及哈夫單位較空白組均無顯著差異（P＞0.05）；中濃度組蛋殼強(qiáng)度較空白組顯著提升了12.87%（P＜0.05），蛋黃顏色顯著提升了46.33%（P＜0.05），哈夫單位顯著提升了12.84%（P＜0.05）；高濃度組蛋殼強(qiáng)度較空白組顯著提升了13.35%（P＜0.05），蛋黃顏色顯著提升了47.09%（P＜0.05），哈夫單位提升了13.83%（P＜0.05）。

表4 大金雞菊提取物對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋后期蛋品質(zhì)的影響

2.3 大金雞菊提取物對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋后期抗氧化功能的影響

由表5 可知，與空白組相比，低濃度組SOD、TAOC、GSH-Px、MDA、CAT 含量均無顯著差異（P＞0.05）；中濃度組SOD、T-AOC、GSH-Px、CAT含量分別顯著提高了24.25%、23.11%、13.08%、13.83%（P＜0.05），MDA含量顯著降低了18.41%（P＜0.05）；高濃度組SOD、T-AOC、GSH-Px、CAT 含量分別顯著提高了39.30%、34.78%、15.59%、17.23%（P＜0.05），MDA 含量顯著降低了23.46%（P＜0.05）。

2.4 大金雞菊提取物對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋后期繁殖性能的影響

由表6 可知，與空白組相比，低濃度組受精率、孵化率、健雛率及胚胎死亡率無顯著差異（P＞0.05）。中濃度組受精率、孵化率、健雛率分別顯著提高了6.04%、3.98%、5.94%（P＜0.05），胚胎死亡率顯著降低了44.69%（P＜0.05）。高濃度組受精率、孵化率、健雛率分別顯著提高了7.02%、4.26%、6.84%（P＜0.05），胚胎死亡率顯著降低了51.62%（P＜0.05）。

表6 大金雞菊提取物對(duì)蛋種雞后期繁殖性能的影響（%）

3 討論

3.1 大金雞菊提取物對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能的影響

產(chǎn)蛋性能是蛋雞養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益的重要參考指標(biāo)，其中料蛋比是衡量蛋種雞生產(chǎn)效益的重要指標(biāo)之一，料蛋比降低說明蛋種雞在產(chǎn)蛋相同條件下消耗更少的飼料。料蛋比受飼養(yǎng)管理、品種、疾病、飼料、應(yīng)激等多種因素的影響[6]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在基礎(chǔ)日糧中添加大金雞菊提取物不僅可以降低料蛋比，還可以提升蛋種雞產(chǎn)蛋率。原因可能為大金雞菊提取物中的黃酮、甾類及揮發(fā)油等活性成分可促進(jìn)蛋雞機(jī)體生長[7]，改善蛋種雞抗氧化性能進(jìn)而增加產(chǎn)蛋率[8]。證明大金雞菊提取物可提升蛋種雞的生產(chǎn)性能。

3.2 大金雞菊提取物對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋后期蛋品質(zhì)的影響

蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度是影響蛋品質(zhì)的重要指標(biāo)[9]，而蛋種雞日齡是影響蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度等蛋殼質(zhì)量的重要原因，隨著蛋種雞日齡的增大，蛋殼強(qiáng)度逐漸降低[10]。于曦等[11]指出蛋殼強(qiáng)度的提升與蛋殼厚度之間并無相關(guān)性，而蛋形指數(shù)與蛋殼強(qiáng)度具有一定相關(guān)性，原因?yàn)榈皻?qiáng)度的上升由微觀結(jié)構(gòu)的改變所導(dǎo)致[12]。哈夫單位是反映雞蛋新鮮度的指標(biāo)，值越大表示雞蛋新鮮度越好[12]。雞蛋的蛋黃顏色主要來源于飼料中的各類天然色素，如葉黃素、類胡蘿卜素等，蛋黃沉積色素越多，顏色越鮮艷。因此飼喂天然色素或富含天然色素的添加劑是提升蛋黃顏色的常用方法[13]。大金雞菊富含黃色素的主要成分為大金雞菊查爾酮苷、大金雞菊查爾酮、大金雞菊奧苷、大金雞菊奧異等黃酮類色素，且該色素耐光、耐熱、耐酸堿性強(qiáng)，色澤亮麗，具有抗氧化等功效，是較為理想的天然色素[14]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在基礎(chǔ)日糧中添加大金雞菊提取物可提升蛋種雞的蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色及哈夫單位，證明大金雞菊提取物可以提升蛋種雞蛋品質(zhì)。

3.3 大金雞菊提取物對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋后期抗氧化功能的影響

機(jī)體正常生命活動(dòng)過程中，機(jī)體內(nèi)不斷產(chǎn)生活性氧自由基，并通過抗氧化功能等一系列化學(xué)反應(yīng)清除多余的自由基，讓自由基處于對(duì)機(jī)體有益的水平，但在應(yīng)激條件下，不能及時(shí)清除的自由基會(huì)對(duì)動(dòng)物機(jī)體的組織器官產(chǎn)生損傷[15]。其中SOD、T-AOC、GSH-Px、MDA、CAT 是反映機(jī)體抗氧化功能的重要指標(biāo)[16]。其中，MDA 是生物體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，會(huì)引起生物體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，對(duì)體內(nèi)的正常代謝過程產(chǎn)生損害，血清中MDA 含量可直觀反映機(jī)體氧化應(yīng)激水平[17]。付艷麗等[18]研究了金雞菊乙醇提取物對(duì)2 型糖尿病大鼠腎臟氧化應(yīng)激水平的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)金雞菊乙醇提取物可提高糖尿病大鼠抗氧化能力，氧化應(yīng)激減輕，緩解腎損傷，其機(jī)制可能為通過抑制體內(nèi)異常的氧化應(yīng)激反應(yīng)和改善脂質(zhì)代謝異常發(fā)揮效應(yīng)。本試驗(yàn)研究結(jié)果與前人相似，發(fā)現(xiàn)在基礎(chǔ)日糧中添加大金雞菊提取物可提高蛋種雞血清SOD、T-AOC、CAT 和GSH-Px 活性，降低蛋種雞血清MDA 含量。證明大金菊提取物能夠通過提高蛋種雞體內(nèi)抗氧化酶活性，進(jìn)而提高機(jī)體的抗氧化功能，從而提高蛋種雞的生產(chǎn)性能。

3.4 大金雞菊提取物對(duì)蛋種雞產(chǎn)蛋后期繁殖性能的影響

產(chǎn)蛋后期的蛋雞卵巢在衰老過程中表現(xiàn)為卵泡耗竭和卵母細(xì)胞質(zhì)量下降，進(jìn)而導(dǎo)致卵巢功能持續(xù)下降，繁殖力也不斷下降[19]。在所有導(dǎo)致卵巢衰老的因素中，由于過度排卵產(chǎn)生的活性氧（ROS）積累引起的氧化應(yīng)激是最主要的因素之一，氧化應(yīng)激可引起線粒體損壞、顆粒細(xì)胞凋亡、卵泡衰竭、繁殖性能下降，且隨著年齡增長，機(jī)體抗氧化防御能力降低從而導(dǎo)致ROS 積累[20]，因此提升產(chǎn)蛋后期蛋雞的抗氧化能力變得尤為重要。根據(jù)劉瑋等[21]的研究，日糧中不同水平的皂苷可顯著提高蛋種雞的繁殖力和孵化率，同時(shí)顯著降低胚胎死亡率，其原因來源于皂苷的抗氧化功能。本試驗(yàn)研究結(jié)果與前人相似，發(fā)現(xiàn)大金雞菊提取物也可提高蛋種雞的受精率、孵化率、健雛率，降低胚胎死亡率，這一結(jié)果可能與大金雞菊含有豐富的皂苷有關(guān)[22]。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)500、1 000 mg/kg 大金雞菊提取物都可以增強(qiáng)蛋種雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能，提升蛋種雞蛋品質(zhì)，提高蛋種雞抗氧化性能與繁殖性能，建議在基礎(chǔ)日糧中添加500 mg/kg的為宜。