■ 韓 雪 苗小猛 伍革民 趙小玲 陳 勇 張 帥 舒 剛*

（1.貴州省畜牧獸醫(yī)研究所，貴州貴陽 550001；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，四川成都 611130；3.貴州鳳和祥農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司，貴州從江 557400；4.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，四川成都 611130）

在家禽養(yǎng)殖中，因?yàn)榭股氐牟缓侠硎褂脤?dǎo)致雞群的免疫力下降、有害菌耐藥性增加、腸道菌群失調(diào)，嚴(yán)重影響其生產(chǎn)性能；同時(shí)，藥物殘留還會(huì)對(duì)人類的健康造成嚴(yán)重的威脅。自2020 年以來，我國畜牧業(yè)正式迎來了無抗時(shí)代，從植物中尋找替抗添加劑成為了研究熱點(diǎn)，為養(yǎng)殖業(yè)健康養(yǎng)殖與增產(chǎn)增收提供了新的思路。杜仲（Eucommia ulmoides，EU）性溫，補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，具有鎮(zhèn)靜、抗炎、抗菌、抗病毒、利膽等功能[1]，是我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部許可使用的飼料添加劑之一，其樹皮中含有18 種黃酮類物質(zhì)，5 種有顯著體外肝保護(hù)活性[2]。越來越多的學(xué)者開展以杜仲葉粉或其提取物作為飼料添加劑的相關(guān)研究[3]，在基礎(chǔ)日糧中添加杜仲葉提取物和杜仲葉粉可提高雞只生產(chǎn)性能，改善雞肉品質(zhì)，提高免疫力、產(chǎn)蛋率和雞蛋品質(zhì)[4-7]。杜仲皮可降血壓、抗氧化抗衰老、強(qiáng)筋健骨、補(bǔ)肝腎安胎等[8]，且具有抗氧化作用，在生豬飼養(yǎng)中應(yīng)用又會(huì)通過抗疲勞、抗衰老作用而提高生產(chǎn)效率，同時(shí)還能改善豬肉品質(zhì)[9]。但在基礎(chǔ)日糧中直接添加杜仲藥材廢棄物表皮粉的研究相對(duì)較少。本試驗(yàn)在日糧中添加不同水平杜仲皮粉對(duì)蛋雞進(jìn)行飼喂，考察對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和抗氧化功能的影響，以期為開發(fā)杜仲皮粉作為添加劑在蛋雞生產(chǎn)上進(jìn)行應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

280 日齡大午金鳳蛋雞288 只，由貴州省漣江農(nóng)業(yè)科技有限公司提供。

1.2 添加劑、試劑和用品

杜仲皮粉（粒徑為80 目）由貴州省恒豐豪農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司提供，為杜仲樹皮表面刮掉的廢棄物經(jīng)粉碎而成。

抗氧化試劑盒[總抗氧化能力（T-AOC）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、還原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）]，均購于南京建成生物工程研究所有限公司。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)日糧

選擇288 只體重相近的280 日齡大午金鳳蛋雞，隨機(jī)分為4 組，每組3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)24 只，分別為對(duì)照組、1%杜仲皮粉添加組（1%組）、3%杜仲皮粉添加組（3%組）、5%杜仲皮粉添加組（5%組）。其中對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組按照1%、3%、5%的比例將杜仲皮粉混合入基礎(chǔ)飼糧中制備為混合飼糧進(jìn)行飼喂。本試驗(yàn)分為兩個(gè)階段，分別為7 d 的適應(yīng)性喂養(yǎng)和56 d 的正試期。基礎(chǔ)飼糧為玉米-豆粕型飼糧，日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成與營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.4 飼養(yǎng)管理

各組蛋雞適應(yīng)性喂養(yǎng)階段飼喂蛋雞全價(jià)料，7 d逐漸替換為試驗(yàn)日糧。在正試期內(nèi)，雞只自由采食和飲水，每日飼喂2次（08：00和16：00）確保料槽中料量均勻，10：00 開始人工收蛋。試驗(yàn)期內(nèi)每天觀察試驗(yàn)動(dòng)物臨床表現(xiàn)、采食和飲水情況、統(tǒng)計(jì)產(chǎn)蛋情況 。對(duì)試驗(yàn)中出現(xiàn)不明原因死亡的蛋雞進(jìn)行尸檢，確定死因。試驗(yàn)蛋雞采用四層階梯式籠養(yǎng)，人工補(bǔ)光，光照時(shí)間為16 h/d。

1.5 生產(chǎn)性能指標(biāo)測(cè)定

正試期，每日10:00收集各重復(fù)的雞只所產(chǎn)雞蛋，并記錄產(chǎn)蛋數(shù)、蛋重、采食量，計(jì)算試驗(yàn)1～28、29～56 d以及整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)的產(chǎn)蛋率、平均蛋重、料蛋比；試驗(yàn)第28 天與第56 天，以重復(fù)為單位，每重復(fù)、每次采樣6 枚，測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。其中蛋殼強(qiáng)度采用MA1 型蛋殼強(qiáng)度測(cè)定儀（銘奧儀器設(shè)備有限公司）進(jìn)行測(cè)定，蛋殼厚度、蛋白高度采用MA2 型蛋白高度計(jì)（銘奧儀器設(shè)備有限公司）進(jìn)行測(cè)定，使用電子天平和游標(biāo)卡尺測(cè)定蛋黃比例、蛋殼比例，并計(jì)算哈夫單位。

產(chǎn)蛋率(%)=日產(chǎn)蛋數(shù)/總蛋雞×100

平均蛋重（g）=總蛋重/總蛋數(shù)

料蛋比=總采食量/總蛋重

哈夫單位=100×lg（H-1.7W0.37+7.57）

式中：H——蛋白高度（mm）；

W——蛋重（g）。

1.6 樣品采集

試驗(yàn)第28天與第56天，每組選6只（每個(gè)重復(fù)2只）蛋雞，禁食24 h，稱重，進(jìn)行頸靜脈采血5 mL，室溫靜置1 h，低速離心（3 500 r/min，10 min）分離血清，保存于-20 ℃冰箱中待用。解剖并采集肝臟、回腸、輸卵管、卵巢、輸卵管壺腹部組織，保存于-20 ℃冰箱中用于抗氧化指標(biāo)檢測(cè)。同時(shí)無菌采集回腸內(nèi)容物檢測(cè)大腸桿菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌數(shù)量。

1.7 抗氧化功能指標(biāo)測(cè)定

將采集的肝臟、卵巢、輸卵管壺腹部組織制備為20%組織勻漿，即每個(gè)樣品稱取0.2 g 于1.5 mL EP 管中，加入0.9% NaCl 溶液800 μL，研磨為勻漿狀，靜置5 min 后于12 000 r/min 離心5 min，取上清液于4 ℃低溫保存；取各樣品部分上清液，稀釋為10%組織勻漿，靜置5 min 后于3 500 r/min 離心10 min，4 ℃低溫保存上清液。取預(yù)先保存好的血清以及組織勻漿上清液，按照抗氧化試劑盒說明書檢測(cè)血清與組織中T-AOC、T-SOD、GSH、MDA 含量水平，以及組織中總蛋白含量。

1.8 腸道菌群的測(cè)定

無菌稱取回腸食糜1 g，加入10 mL 滅菌生理鹽水，充分搖勻，進(jìn)行逐級(jí)10倍稀釋，每個(gè)樣本做3個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度作3 個(gè)重復(fù)，大腸桿菌37 ℃有氧培養(yǎng)24 h后計(jì)菌落數(shù)，乳酸桿菌、雙歧桿菌于37 ℃厭氧培養(yǎng)48 h 后進(jìn)行計(jì)菌落數(shù)。每克內(nèi)容物菌落形成單位即lg CFU/g=lg（平均菌落×稀釋倍數(shù)）。

1.9 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2016 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)整理，用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件，首先采用one-way ANOVA 程序?qū)? 個(gè)處理進(jìn)行單因素方差分析，以Duncan’s 法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＞0.05為差異不顯著，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼糧中添加杜仲皮粉對(duì)蛋雞產(chǎn)蛋率與料蛋比的影響

如表2 所示，試驗(yàn)期內(nèi)，與對(duì)照組相比，3 個(gè)試驗(yàn)組產(chǎn)蛋率雖無顯著差異（P＞0.05），但始終高于對(duì)照組，且均呈現(xiàn)增高趨勢(shì)；29～56、1～56 d 試驗(yàn)組料蛋比也有所降低，但不顯著（P＞0.05）。

表2 杜仲皮粉添加對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 飼糧中添加杜仲皮粉對(duì)蛋品質(zhì)的影響

由表3 可知，在試驗(yàn)各階段與整個(gè)時(shí)期內(nèi)，對(duì)照組與試驗(yàn)組雞蛋蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色與哈夫單位并無顯著差異（P＞0.05）；第56天時(shí)，5%組平均蛋重顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），也顯著高于其余試驗(yàn)組（P＜0.05）；1%組蛋殼厚度顯著低于對(duì)照組與其余試驗(yàn)組（P＜0.05）。

表3 杜仲皮粉添加對(duì)蛋雞蛋品質(zhì)的影響

2.3 飼糧中添加杜仲皮粉對(duì)蛋雞肝臟、卵巢、輸卵管壺腹部、血清抗氧化能力的影響

由表4可見，第28天時(shí)，3%、5%組蛋雞血清中MDA含量顯著低于對(duì)照組，且降低程度與添加劑量成反比（P＜0.05）。第56天時(shí)，3%、5%組MDA含量仍顯著低于對(duì)照組與1%組（P＜0.05），其余指標(biāo)無顯著差異（P＞0.05）。

表4 杜仲皮粉添加對(duì)蛋雞血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可見，與對(duì)照組相比，在第28天時(shí)，試驗(yàn)組蛋雞肝臟MDA 含量均有所下降，5%組MDA 含量較對(duì)照組有顯著下降（P＜0.05）；3%組與5%組GSH含量較對(duì)照組顯著降低（P＜0.05）。除此之外，T-AOC、TSOD無顯著變化（P＞0.05）。

表5 杜仲皮粉添加對(duì)蛋雞肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表6可見，與對(duì)照組相比，第28天時(shí)，試驗(yàn)組蛋雞卵巢T-SOD 含量均有所上升，且3%組有顯著上升（P＜0.05），試驗(yàn)組MDA 含量較對(duì)照組均有所上升，且3%、5%組均有顯著上升（P＜0.05），5%組GSH 含量較對(duì)照組有顯著降低（P＜0.05）。其余各指標(biāo)在不同時(shí)期，不同各組之間均無顯著差異（P＞0.05）。

表6 杜仲皮粉添加對(duì)蛋雞卵巢抗氧化指標(biāo)的影響

由表7 可見，第28 天時(shí)，試驗(yàn)組蛋雞輸卵管壺腹部T-AOC 能力均高于對(duì)照組，且1%、5%組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；1%組T-SOD 含量顯著低于對(duì)照組與其余試驗(yàn)組（P＜0.05），5%組與對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）。第56 天時(shí)，3%、5%組T-AOC 能力顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；各試驗(yàn)組MDA 含量均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

表7 杜仲皮粉添加對(duì)蛋雞輸卵管壺腹部抗氧化指標(biāo)的影響

2.4 飼糧中添加杜仲皮粉對(duì)蛋雞回腸腸道菌群的影響

由表8 可見，各試驗(yàn)組蛋雞腸道大腸桿菌數(shù)量均低于對(duì)照組，且差異不顯著（P＞0.05）；各試驗(yàn)組乳酸桿菌數(shù)均低于對(duì)照組，且差異不顯著（P＞0.05）；5%組雙歧桿菌數(shù)顯著高于對(duì)照組與其余試驗(yàn)組（P＜0.05）。

表8 杜仲皮粉添加對(duì)蛋雞腸道菌群的影響（lg CFU/g）

3 討論

3.1 杜仲皮粉對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

有研究表明，蛋雞在產(chǎn)蛋后期產(chǎn)蛋率與雞蛋品質(zhì)都會(huì)出現(xiàn)降低的趨勢(shì)，飼糧中添加杜仲可以增強(qiáng)動(dòng)物免疫力，提高畜禽生產(chǎn)性能，改善畜產(chǎn)品質(zhì)量。李學(xué)民[10]的研究表明飼糧中添加杜仲發(fā)酵產(chǎn)物可以提高蛋雞產(chǎn)蛋率，降低料蛋比，降低軟破蛋率，改善平均蛋重，其中采用40 g/kg 添加量可有效提高生產(chǎn)性能，延長產(chǎn)蛋期。劉青翠等[11]研究表明添加300 g/t 的杜仲葉提取物可以有延緩蛋雞產(chǎn)蛋率下降的趨勢(shì)。這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。本研究結(jié)果顯示，飼糧中添加杜仲皮粉使蛋雞產(chǎn)蛋率提高，可能是由于杜仲皮粉中黃酮類化合物促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，加速成骨細(xì)胞分化和礦化，并且能夠刺激胃腸道，增加消化酶的分泌，促進(jìn)血液循環(huán)，提高機(jī)體消化率和吸收率，提高蛋雞生產(chǎn)性能。

本研究中，第56 天時(shí)杜仲皮粉添加組雞蛋平均蛋重與雞蛋蛋殼強(qiáng)度提高，說明杜仲皮粉可提高平均產(chǎn)蛋重量，改善蛋殼強(qiáng)度。添加組蛋殼強(qiáng)度有上升趨勢(shì)可能是由于杜仲皮中礦物質(zhì)及有機(jī)酸可溶性強(qiáng)，能顯著增加血液中鈣、磷的含量，在蛋殼形成過程中增加蛋殼鈣沉積量，影響蛋殼質(zhì)量有關(guān)[11]。

3.2 杜仲皮粉添加對(duì)蛋雞抗氧化功能的影響

肝臟中的T-AOC、SOD、GSH 等是動(dòng)物抗氧化防御系統(tǒng)中必不可少的抗氧化酶[12]。T-AOC 是反映機(jī)體抗氧化酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)對(duì)外來刺激的代償能力以及機(jī)體自由基代謝狀態(tài)的綜合性指標(biāo)，用于衡量機(jī)體氧化系統(tǒng)功能狀況[13]；T-SOD 能夠清除超氧陰離子自由基，阻斷·OH 的生成途徑[14]，是生物體內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)的重要組成成分；MDA 是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，因此SOD 和MDA 是衡量機(jī)體氧化和抗氧化的重要指標(biāo)。本研究表明，不同比例的杜仲皮粉添加入飼糧中可提高蛋雞輸卵管壺腹部T-AOC，降低蛋雞肝臟、輸卵管壺腹部與血清中的MDA 含量，提高了機(jī)體的抗氧化能力，但是對(duì)56 d雞只肝臟、卵巢、輸卵管壺腹部中GSH 則沒有顯著的作用。向燦輝等[15]研究了杜仲葉提取物的抗氧化活性，并同維生素C 進(jìn)行了比較，結(jié)果表明，杜仲葉提取物具較強(qiáng)的抗氧化能力，抗氧化能力與總黃酮含量密切相關(guān)，在一定濃度范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，對(duì)DPPH·有較強(qiáng)的清除作用。杜仲葉提取物中含有大量的綠原酸等酚（酸）類物質(zhì)及黃酮類化合物，因而具有顯著的清除機(jī)體自由基和抗氧化功效[16]。Yen 等[17]報(bào)道，杜仲葉的水浸提物具有極高的抗氧化活性，能夠體外清除羥自由基和超氧陰離子自由基，且黃酮類物質(zhì)含量越高，其抗氧化能力越強(qiáng)。因此，本研究中試驗(yàn)組蛋雞體內(nèi)抗氧化能力增強(qiáng)可能是由于杜仲皮粉中的黃酮類物質(zhì)淬滅活性氧類，并抑制氧自由基活性，阻止活性氧游離自由基對(duì)正常細(xì)胞的侵害，提高機(jī)體抗氧化能力。

3.3 杜仲皮粉添加對(duì)蛋雞腸道菌群的影響

杜仲提取物具有廣譜抗菌功效，該作用與其所含的高濃度綠原酸有關(guān)[18]。其機(jī)制可能與酚類物質(zhì)通過去極化等多種手段影響病原微生物的細(xì)胞膜通透性，最終殺滅病原菌有關(guān)[19]。乳酸桿菌、雙歧桿菌等益生菌在腸道內(nèi)的增殖可合成大量的B 族維生素，可以產(chǎn)生乳酸、乙酸等有機(jī)酸及細(xì)菌素等抑菌物質(zhì)，有助于動(dòng)物對(duì)抗有害微生物，抵御病原微生物的侵襲，提高動(dòng)物的免疫能力[20]。本研究表明，添加不同比例的杜仲添皮粉可使蛋雞回腸大腸桿菌數(shù)量有降低的趨勢(shì)，同時(shí)添加5%杜仲皮粉使蛋雞回腸雙歧桿菌數(shù)量顯著提高，與何云等[21]研究結(jié)果基本一致。呂武興等[20]研究表明，日糧中添加杜仲提取物能降低盲腸中大腸桿菌的數(shù)量，促進(jìn)盲腸、回腸中乳酸桿菌和雙歧桿菌的增殖。在生產(chǎn)性能方面，添加杜仲皮粉后提高了大午金鳳蛋雞的產(chǎn)蛋率，降低了料蛋比，可能與杜仲皮粉增加了回腸中雙歧桿菌等益生菌數(shù)量，從而改善了腸道消化功能，提高飼料利用率有關(guān)。

4 結(jié)論

飼糧中添加杜仲皮粉能提高大午金鳳蛋雞產(chǎn)蛋率，顯著增加雞蛋平均蛋重，提高生產(chǎn)性能；且能改善蛋雞抗氧化能力，增加回腸雙歧桿菌數(shù)量并減少大腸桿菌數(shù)量，其中飼糧中添加5%杜仲皮粉效果最佳。