吳承宗,魏亞楠,戴昕彤,苗雨穎,黃婷,趙康輝,王磊*,宿紅艷

1(魯東大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院,山東 煙臺,264025)2(魯東大學(xué) 農(nóng)學(xué)院,山東 煙臺,264025)

蓮藕(NelumbonuciferaGaertn)為睡蓮科蓮屬,多年水生草本植物,其地下根狀莖是我國最主要的水生蔬菜[1]。蓮藕富含蛋白質(zhì)、淀粉、纖維素、脂肪、維生素、礦物質(zhì)等多種成分,其中淀粉含量很高,占其鮮重的10%～20%[2]。另外,蓮藕中還含有豐富的槲皮素、蘆丁等黃酮類物質(zhì)以及原花色素、兒茶素、綠原酸、咖啡酸、白藜蘆醇等多酚類物質(zhì)[3-4]。因此,蓮藕具有很強的清除自由基和抗氧化能力,是提取天然抗氧化劑的優(yōu)良原料。

近年來,抗生素等抑菌劑的長期濫用導(dǎo)致多重耐藥性細(xì)菌不斷產(chǎn)生,臨床治療和水產(chǎn)養(yǎng)殖等抑菌領(lǐng)域面臨無藥可用的局面[5]。隨著納米技術(shù)的不斷發(fā)展,具有小尺寸和高比表面積的納米銀(silver nanoparticles,AgNPs)被廣泛用于抑菌領(lǐng)域[6]。AgNPs抗菌譜廣、抑菌效果顯著、生物安全性高,更為重要的是其抑菌機制與傳統(tǒng)抗生素不同,不易產(chǎn)生耐藥性,被譽為新一代的抗菌劑[7-8]。AgNPs的經(jīng)典合成方法為物理學(xué)方法和化學(xué)方法,但這兩種方法存在諸多弊端,如對儀器要求高、能耗大、需要添加有害化學(xué)試劑、產(chǎn)品粒徑較大且分布范圍寬泛等,這勢必會影響AgNPs的批量生產(chǎn)與開發(fā)利用[9-10]。另外,AgNPs易發(fā)生團聚,導(dǎo)致抑菌活性降低,也極大的限制其在抑菌方面的實際應(yīng)用[11]。一項生物合成AgNPs的新技術(shù)是利用植物、藻類、細(xì)菌和真菌等生物中的活性成分作為還原劑將AgNO3前體轉(zhuǎn)化成AgNPs制劑,同時利用生物提取物中的活性分子作為穩(wěn)定劑在AgNPs表面形成保護層,阻止AgNPs的團聚和沉降[6,12]。該方法綠色環(huán)保、原料價格低廉、產(chǎn)品高效穩(wěn)定,符合新技術(shù)向低成本、低能耗、低污染發(fā)展的趨勢[6,13]。在諸多生物材料中,植物材料以其生物量大、便于采集加工、便于中試放大等優(yōu)勢成為生物合成AgNPs技術(shù)中一個重要的研究領(lǐng)域。目前,人們已利用生姜、藍(lán)莓葉、橄欖和迷迭香等多種植物材料介導(dǎo)AgNPs的生物合成[14-15],并取得了良好的效果。但由于不同的植物材料中蘊含的活性物質(zhì)存在較大差別,其制備的AgNPs在形狀、大小及其表面附著的生物分子方面都存在較大差異,導(dǎo)致其在抑菌活性和穩(wěn)定性等方面存在差異[16]。因此,篩選并挖掘新的植物材料用于制備更為理想的AgNPs抑菌劑將成為納米生物技術(shù)重要的研究內(nèi)容。

本文利用蓮藕中富含的多種天然抗氧化成分為還原劑,同時利用提取液中的多糖、氨基酸、蛋白質(zhì)等作為穩(wěn)定劑,生物合成AgNPs抑菌劑。通過探討不同合成條件對制備AgNPs的影響,并對優(yōu)化后的產(chǎn)物進(jìn)行理化表征以及抑菌活性和穩(wěn)定性分析,為提升蓮藕的綜合利用度和附加值提供新的途徑,同時為生物合成AgNPs的推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料和設(shè)備

蓮藕購于山東省煙臺市當(dāng)?shù)爻小?/p>

4種臨床病原菌:金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、大腸桿菌(Escherichiacoli);4種水產(chǎn)病原菌:副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)、鰻弧菌(Vibrioanguillarum)、點狀氣單胞菌(Aeromonaspunctata)、哈維氏弧菌(Vibrioharveyi),均由本實驗室保藏。

1.2 試劑與培養(yǎng)基

NaCl、AgNO3,均為分析純,國藥集團化學(xué)試劑有限公司;酵母提取物、蛋白胨、瓊脂,上海生工生物工程有限公司。

LB固體培養(yǎng)基(g/L):酵母提取物5,蛋白胨10,氯化鈉5,瓊脂粉15,pH值調(diào)至7.4,120 ℃高壓滅菌20 min;以上成分不加瓊脂粉配制成LB液體培養(yǎng)基。用于臨床病原菌的培養(yǎng)。

2216E固體培養(yǎng)基:蛋白胨5 g,酵母膏1 g,磷酸高鐵0.01 g,瓊脂粉15 g,陳海水定容至1 000 mL,用1 mol/L的NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.6～7.8,120 ℃高壓滅菌20 min;以上成分不加瓊脂粉配制2216E液體培養(yǎng)基。用于水產(chǎn)病原菌的培養(yǎng)。

1.3 儀器與設(shè)備

LDZX-50FB型高壓滅菌鍋,上海申安醫(yī)療器械有限公司;SW-CJ-2F型超凈工作臺,蘇州凈化設(shè)備有限公司;HZQ-C型恒溫培養(yǎng)搖床,哈爾濱東明醫(yī)療儀器廠;PYX-DHS型恒溫培養(yǎng)箱,上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠;U-5100型紫外-可見分光光度計,日本日立公司;JEM-1230型透射電子顯微鏡,日本電子株式會社;XRD-7000 型X射線衍射儀,日本島津公司。

1.4 實驗方法

1.4.1 AgNPs的生物合成

蓮藕提取液的制備:取完整的蓮藕塊莖用去離子水洗凈,60 ℃烘干,研磨成粉末。稱取5 g,用50 mL 40%(體積分?jǐn)?shù))乙醇提取,經(jīng)60 ℃加熱回流2 h后,提取液提取物用Whatman No.1濾紙過濾,再經(jīng)10 000 r/min離心10 min后,收集上清液,4 ℃?zhèn)溆谩?/p>

AgNPs的制備為了優(yōu)化合成條件,設(shè)計單因素試驗。初始條件為:將2 mL 10 mmol/L的AgNO3溶液與上述蓮藕提取液1 mL混合,定容至20mL,在磁力攪拌下90 ℃加熱回流1 h,12 000 r/min離心10 min,收集沉淀,用雙蒸水重懸,得到AgNPs溶液,4 ℃避光保存。單因素試驗反應(yīng)條件:其他條件不變的情況下,分別改變AgNO3濃度(0.5、0.75、1.0、1.5、2.0 mmol/L)、提取液用量(0.25、0.5、1、2、3 mL)、合成溫度(50、60、70、80、90 ℃)、合成時間(3、5、7、10、15、20、30 min)。

1.4.2 AgNPs的化學(xué)合成

為了評價蓮藕生物合成AgNPs的效果,利用檸檬酸鈉為還原劑化學(xué)合成AgNPs[17]。AgNO3濃度、合成溫度、合成時間等實驗條件均采用上述生物合成AgNPs的最終優(yōu)化參數(shù),蓮藕提取液用2 mg/mL的檸檬酸鈉代替。

1.4.3 AgNPs表征

紫外-可見吸收光譜分析:采用UV-Vis分光光度計對制備的AgNPs溶液進(jìn)行吸收光譜掃描,掃描范圍為300～800 nm。

透射電鏡(transmission electron microscope,TEM)分析:取5 μL樣品滴加在覆炭銅網(wǎng)上,室溫干燥,于100 kV電壓下觀察制備AgNPs的形態(tài)、粒徑及分散狀況。

X射線衍射(X-ray diffraction,XRD)分析:通過XRD分析儀以Cu、Kα為輻射源,λ=0.154 06 nm,電壓40 kV,電流200 mA,2θ的掃描范圍30°～80°,掃描速度0.02°/s,對樣品干燥粉末進(jìn)行的晶型結(jié)構(gòu)分析。

1.4.4 抑菌性實驗

抑菌圈實驗:采用牛津杯擴散法檢測AgNPs對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌等臨床病原菌以及副溶血弧菌、鰻弧菌、點狀氣單胞菌和哈維氏弧菌等水產(chǎn)病原菌的抑菌活性。采用牛津杯擴散法測定供試樣品的抑菌圈直徑[18],分別向牛津杯中依次加入20 μL生物合成AgNPs(100 μg/mL)、化學(xué)合成AgNPs(100 μg/mL)、檸檬酸鈉(2 mg/mL)、蓮藕提取液和生理鹽水,每組設(shè)置3個平行。將培養(yǎng)平皿置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,測量抑菌圈直徑。

最小抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)和最小殺菌濃度(minimum bactericidal concentration,MBC)的測定:以金黃色葡萄球菌為指示菌,將培養(yǎng)至對數(shù)期的菌液稀釋至1×106CFU/mL,將化學(xué)合成AgNPs和生物化學(xué)合成AgNPs調(diào)整至同一濃度,采用二倍稀釋法測定其MIC和MBC[18],實驗各重復(fù)3次。

抑菌動力學(xué)實驗:以金黃色葡萄球菌作為指示菌,培養(yǎng)至對數(shù)增長期后稀釋至1×106CFU/mL,分別加入10 μg/mL和25 μg/mL的生物合成AgNPs、10 μg/mL的化學(xué)合成AgNPs,并以加入生理鹽水的供試菌組為對照,37 ℃ 150 r/min培養(yǎng),在0～36 h中的各個時間段內(nèi)取樣,采用分光光度計測定OD600值,繪制生長動力學(xué)曲線。

1.4.5 穩(wěn)定性實驗

長期穩(wěn)定性實驗:將生物合成和化學(xué)合成的AgNPs在4 ℃避光條件下放置2個月后觀察其外觀,通過UV-Vis分光光度計檢測AgNPs的吸收光譜,并以金黃色葡萄球菌作為指示菌進(jìn)行抑菌圈實驗,研究其長期穩(wěn)定性。

熱穩(wěn)定性實驗:分別將化學(xué)和生物合成的AgNPs在50、70、90 ℃下熱處理3 h,以金黃色葡萄球菌為供試菌進(jìn)行抑菌圈實驗,觀察熱處理對AgNPs的影響。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

使用Origin軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析,采用單因素方差(ANOVA)對數(shù)據(jù)進(jìn)行顯著性分析(P<0.05)。所有實驗數(shù)據(jù)均測定3次,結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 AgNPs制備參數(shù)優(yōu)化

由圖1-a可知,AgNPs吸收峰隨著AgNO3濃度增加逐漸升高。當(dāng)濃度由0.75 mmol/L變?yōu)? mmol/L時,吸收峰有顯著升高并且峰形變窄,但當(dāng)AgNO3濃度繼續(xù)增加時,吸收峰無明顯提高。典型的AgNPs由于特征性的表面等離子體共振,在波長400～500 nm有強吸收,出現(xiàn)特征吸收峰[19]。因此,根據(jù)UV-vis光譜可以推斷蓮藕生物合成AgNPs的最佳AgNO3濃度為1 mmol/L。

a-AgNO3濃度的影響;b-蓮藕提取液添加量的影響;c-反應(yīng)溫度的影響;d-反應(yīng)時間的影響

研究蓮藕提取液加入量對AgNPs合成的影響,結(jié)果如圖1-b所示,隨著蓮藕提取液加入量的增加,AgNPs的最大吸收峰逐漸增強。當(dāng)提取液加入量為0.25、0.5 mL時,吸收峰較寬,當(dāng)蓮藕提取液加入量為1 mL時,半峰寬減小,說明AgNPs顆粒的粒徑分布變窄[20]。當(dāng)蓮藕提取液加入量為2 mL時,最高吸收峰由436 nm移至458 nm,發(fā)生紅移,吸收峰變寬,這表明隨著AgNPs生成的增加,部分AgNPs發(fā)生團聚,粒徑變大,粒徑大小不均一[21]。當(dāng)提取液加入量增至3 mL后,吸收峰進(jìn)一步紅移,峰形因粒徑不均勻分布變得不對稱。因此,提取液濃度不宜過高,蓮藕提取液加入量以1 mL為宜。

合成溫度對AgNPs合成的影響結(jié)果如圖1-c所示,隨著溫度增加AgNPs的吸收峰逐漸上升,溫度越高,反應(yīng)速率越快。當(dāng)加熱溫度升至70 ℃時,AgNPs吸收峰有顯著提高,且峰形變窄且高,最高吸收峰由442 nm發(fā)生藍(lán)移至434 nm,說明此溫度下合成效率較高,合成的AgNPs顆粒較小、粒徑較為均勻[22]。加熱溫度為80 ℃時,AgNPs峰值無明顯改變,但在90 ℃時吸光度值卻呈現(xiàn)下降的趨勢。這是由于當(dāng)溫度升高的一定程度后,溶液中AgNPs粒子布朗運動聚類加劇,大量AgNPs撞擊產(chǎn)生聚集沉淀,導(dǎo)致溶液中AgNPs的濃度降低[23]。因此,蓮藕生物合成AgNPs的最佳合成溫度確定為70 ℃。

反應(yīng)時間對AgNPs的影響結(jié)果如圖1-d所示,反應(yīng)進(jìn)行5 min時開始出現(xiàn)AgNPs吸收峰,隨著反應(yīng)時間的增加吸收峰逐漸升高,反應(yīng)進(jìn)行30 min時吸收峰值較高且吸收峰較窄,表明合成的AgNPs狀態(tài)較為理想。若繼續(xù)延長加熱時間,納米銀溶液的顏色和吸收峰在短期內(nèi)均不再發(fā)生顯著變化,因此確定30 min為生物合成AgNPs的反應(yīng)時間。

綜上所述,蓮藕提取液生物合成AgNPs的最佳制備條件為1 mmol/L 的AgNO3,1 mL的蓮藕提取液,70 ℃加熱回流30 min。

2.2 AgNPs的表征分析

2.2.1 紫外吸收光譜

對最佳合成條件制備的AgNPs進(jìn)行顏色觀察和紫外-可見吸收光譜表征,AgNPs因濃度和粒徑大小的不同在等離子共振下呈現(xiàn)金黃至棕褐色的特征顏色,并形成特征吸收光譜[24]。由圖2-a可知,蓮藕提取液為無色透明,合成產(chǎn)物為金黃色,可初步判定AgNPs的產(chǎn)生。由圖2-b可知,AgNPs在432 nm左右顯現(xiàn)出顯著的特征吸收峰,而蓮藕提取液無吸收峰,進(jìn)一步驗證了AgNPs的成功制備。

a-照片;b-紫外-可見吸收光譜

2.2.2 TEM分析

AgNPs的粒徑、形貌和分散性可以使用TEM直接有效地觀察。如圖3-a所示,AgNPs多為球形,粒徑均勻,分散狀態(tài)良好,無明顯團聚。AgNPs粒徑范圍在2～21 nm,平均粒徑為8.2 nm,58%的AgNPs粒徑為10 nm左右,粒徑分布較為集中(圖3-b)。研究表明AgNPs的抑菌活性與其粒徑呈反比,粒徑越小,比表面積越大,越有利于更多的AgNPs結(jié)合并穿透細(xì)菌細(xì)胞膜,發(fā)揮抑菌作用[25]。本研究方法制備的AgNPs粒徑較小,適于開發(fā)成抑菌劑。

a-透射電鏡照片;b-粒徑分布圖

2.2.3 XRD分析

通過XRD對生物合成AgNPs的晶型結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征,XRD圖譜如圖4所示。制備的AgNPs在2θ角為38.16°、44.36°、64.56°和76.80°的4個位置產(chǎn)生明顯衍射峰,依次與標(biāo)準(zhǔn)銀晶態(tài)的(111)、(200)、(220)和(311)的晶面相對應(yīng)(參照J(rèn)CPDS卡編號04-0783),表明生物合成的AgNPs具有面心立方晶型結(jié)構(gòu)。此外,產(chǎn)物還在32.32°、46.36°、54.96°、57.68°和74.60 °等位置(*標(biāo)注)有AgCl的衍射峰(參照J(rèn)CPDS卡編號31-1238),是因為蓮藕提取液中存在Cl-與AgNO3發(fā)生反應(yīng)導(dǎo)致的,這在其他關(guān)于AgNPs生物合成的研究中很常見[26]。

圖4 納米銀的XRD圖譜

2.3 抑菌活性實驗

2.3.1 抑菌圈實驗

采用瓊脂擴散法檢測AgNPs對8種典型多重耐藥病原菌的抑菌效果。由圖5可知,作為對照的檸檬酸鈉、蓮藕提取液和生理鹽水對應(yīng)的牛津杯中仍有菌落生長,表明這3種物質(zhì)不具備抑菌活性。生物合成AgNPs和化學(xué)合成AgNPs對8種耐藥菌均產(chǎn)生明顯的抑菌圈,表明AgNPs具有廣譜抑菌活性。結(jié)合表1可知,生物合成和化學(xué)合成的AgNPs產(chǎn)生的抑菌圈因病原體的不同而產(chǎn)生差異,表明病原菌的不同導(dǎo)致對抑菌劑敏感度的差異性。另外,生物合成AgNPs比化學(xué)合成AgNPs產(chǎn)生的抑菌圈直徑更大,表明生物合成的AgNPs具有更強的抑菌活性。研究表明,AgNPs大的比表面積容易附著在細(xì)菌細(xì)胞膜上,并具有超強的滲透性可迅速進(jìn)入菌體中,使細(xì)菌細(xì)胞膜破裂、內(nèi)容物泄露[27-28]。AgNPs還可與氧代謝酶的巰基結(jié)合,使酶失活,阻斷呼吸代謝,并干擾DNA復(fù)制,使細(xì)菌停止分裂增殖[29]。AgNPs獨特而多重的殺菌機制,使其對普通細(xì)菌、耐藥細(xì)菌及真菌均有良好的殺菌作用。

表1 納米銀對8種病原菌的抑菌圈直徑(n=3)

1-生物合成AgNPs;2-化學(xué)合成AgNPs;3-檸檬酸鈉;4-蓮藕提取液;5-生理鹽水

2.3.2 MIC和MBC測定

以金黃色葡萄球菌為供試菌,采用二倍稀釋法測定AgNPs的MIC和MBC。3次重復(fù)實驗結(jié)果均一致,如表2所示,當(dāng)蓮藕生物合成AgNPs質(zhì)量濃度大于11.25 μg/mL時,試管內(nèi)的溶液開始渾濁,則11.25 μg/mL即為該生物合成AgNPs的MIC。澄清試管內(nèi)的菌懸液分別取100 μL涂布于LB固體培養(yǎng)基上,培養(yǎng)24 h后記錄平板內(nèi)菌落的生長情況,最終確定22.5 μg/mL為生物合成AgNPs的MBC?；瘜W(xué)合成法制備的AgNPs的MIC和MBC分別為22.5、45.0 μg/mL。由此可見,與化學(xué)合成AgNPs相比,蓮藕生物合成AgNPs具有較高的抑菌和殺菌活性,這與KORA等[30]利用橄欖生物合成AgNPs的研究結(jié)果一致?；瘜W(xué)合成的AgNPs在粒徑小于40 nm或者濃度較高的情況下容易發(fā)生團聚、沉淀,使AgNPs抑菌活性降低。而生物合成AgNPs由于其表面有生物分子的結(jié)合,保持較好的分散狀態(tài),從而維持較大的比表面積和抑菌活性[6]。

表2 納米銀對金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度和最小殺菌濃度的測定

2.3.3 生長曲線

細(xì)菌的增殖速度可以由細(xì)菌培養(yǎng)液的吸光值反映,以金黃色葡萄球菌為指示菌,研究生物合成AgNPs的不同濃度對金黃色葡萄球菌的抑制作用。從圖6中可看出,對照組為細(xì)菌的正常增殖速度:1.5 h之前為延滯期,1.5 h之后金黃色葡萄球菌進(jìn)入對數(shù)增長期,12 h以后其進(jìn)入穩(wěn)定期。在高于MBC下,25 μg/mL 的生物合成AgNPs對金黃色葡萄球菌的增殖完全抑制,36 h內(nèi)該處理組菌液的OD值基本沒有波動。10 μg/mL的生物合成AgNPs和10 μg/mL的化學(xué)合成AgNPs可以將金黃色葡萄球菌的遲滯期由1.5 h分別延長到9 h和6 h,這說明兩種AgNPs都能對供試菌產(chǎn)生抑制作用,其中生物合成AgNPs可將金黃色葡萄球菌對數(shù)增長期的滯后時間更長,并使分裂速率下降,比化學(xué)合成AgNPs具有更強的抑菌效果,與抑菌圈實驗和MIC實驗的結(jié)果相一致。

圖6 納米銀對金黃色葡萄球菌生長曲線的影響

2.4 穩(wěn)定性分析

2.4.1 長期穩(wěn)定性分析

生物合成的AgNPs溶液在低溫避光環(huán)境下保存60 d后,沒有沉淀,顏色無明顯變化;化學(xué)合成的AgNPs溶液有沉淀生成。進(jìn)一步UV-vis分光光度計表征,結(jié)果如圖7所示,表明生物合成的AgNPs在放置2個月后其吸收峰略有下降,但峰形依舊較窄,表明該AgNPs沒有團聚,粒徑均勻分布,具有良好的穩(wěn)定性。而化學(xué)合成的AgNPs的最大吸收峰發(fā)生了明顯紅移,并且吸光度明顯下降,表明團聚沉淀造成溶液中AgNPs含量的下降。

a-化學(xué)合成的AgNPs;b-生物合成的AgNPs

2.4.2 抑菌活性的耐熱穩(wěn)定性分析

將AgNPs在50、70、90 ℃ 3種不同溫度下分別熱處理3 h,再通過對金黃色葡萄球菌的抑菌圈實驗檢測AgNPs的熱穩(wěn)定性。圖8結(jié)果顯示,經(jīng)過3種不同溫度熱處理后的AgNPs均有較大的抑菌圈,進(jìn)一步說明AgNPs具有較好的熱穩(wěn)定性。其中70 ℃處理后的AgNPs的抑菌圈直徑最大,相關(guān)研究表明,溫度升高會增加分子的熱運動,從而促進(jìn)AgNPs粒子的擴散[27]。

1-50 ℃處理AgNPs;2-70 ℃處理AgNPs;3-90 ℃處理AgNPs;4-常溫蓮藕提取液對照;5-常溫生理鹽水對照

化學(xué)還原法因設(shè)備簡單、成本低廉的優(yōu)勢成為目前制備AgNPs的主要方法,但Ag+因其納米尺寸而具有很高的表面能,當(dāng)AgNPs粒徑小于40 nm或者濃度較高時,粒子間的布朗運動會導(dǎo)致AgNPs易發(fā)生沉降團聚[19]。因此,穩(wěn)定性差成為化學(xué)法制備AgNPs制劑的短板,也成為AgNPs抑菌劑開發(fā)利用的重要障礙。上述穩(wěn)定性實驗表明,利用蓮藕生物合成AgNPs能夠顯著提高AgNPs的穩(wěn)定性,具有良好的開發(fā)前景。

3 結(jié)論

本研究成功利于蓮藕提取物通過一步法生物合成AgNPs抑菌劑,經(jīng)70 ℃加熱回流30 min即可完成反應(yīng),合成迅速高效、綠色環(huán)保,表明利用蓮藕提取物生物合成AgNPs具有可行性。實驗結(jié)果表明制備的AgNPs粒徑較小且均勻、分散性良好。對供試的臨床和水產(chǎn)耐藥病原菌均具有顯著的抑菌活性,且抑菌活性的耐熱穩(wěn)定性良好,并具有較好的長期穩(wěn)定性。因此,利于蓮藕提取物生物合成的AgNPs是一種理想的抑菌產(chǎn)品。AgNPs因抑菌效果顯著、抗菌廣譜、無耐藥性等優(yōu)點,已作為抗生素的替代品成為抑菌領(lǐng)域的研究熱點。本研究將為AgNPs的綠色合成及蓮藕的高效利用提供新的途徑,同時為AgNPs在臨床、水產(chǎn)等抑菌領(lǐng)域的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。