王 宏，康 利，江 茜，劉偉偉，張 巖，傅 予 （天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所，天津 300020）

卒中是一種急性腦血管疾病，是由于腦血管突然破裂或阻塞致血液供應(yīng)不足而引發(fā)的腦組織損傷性疾病?！读~刀》最新報(bào)告指出，全球卒中發(fā)病率逐年增高，現(xiàn)已成為世界第二大死亡原因和第三大殘疾原因[1]。卒中通常分為缺血性和出血性兩大類，其中缺血性腦卒中約占70%，缺血再灌注損傷是其重要的病理機(jī)制之一[2]。

貫葉金絲桃，又名圣·約翰草，為藤黃科植物貫葉金絲桃Hypericum perforatumL.的干燥地上部分，始載于《本草綱目》。該藥被2020年版《中國藥典》（一部）收錄，性寒、味辛，歸肝經(jīng)，具有疏肝解郁、清熱利濕、消腫通乳的功效[3]。貫葉金絲桃作為抗抑郁藥物在歐洲已有數(shù)百年的歷史，以其提取物為主要成分的藥物更是抑郁癥治療的首選[4]。此外有研究表明，貫葉金絲桃對(duì)卒中后抑郁表現(xiàn)出較好的治療效果[5]。近期研究指出，貫葉金絲桃對(duì)缺血性腦損傷有保護(hù)作用[6—7]。缺血性腦損傷的病理機(jī)制較為復(fù)雜，其中促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）介導(dǎo)的Janus 激酶2（Janus kinase 2，JAK2）/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transduction and activator of transcription 3，STAT3）信號(hào)通路已被證實(shí)與保護(hù)腦缺血再灌注損傷的作用有關(guān)[8]?；诖?，本研究擬利用改良線栓法制備大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞再灌注模型，探討貫葉金絲桃對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，并初步分析其潛在分子機(jī)制是否與EPO 介導(dǎo)的JAK2/STAT3 信號(hào)通路有關(guān)，以期為貫葉金絲桃的臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器包括Ci-L 型顯微鏡、Ni-U 型熒光顯微鏡（日本Nikon公司），Infinite M2000型酶標(biāo)儀（瑞士TECAN公司），Mini PROTEAN Tetra型電泳儀（美國Bio-Rad公司），ImageQuant LAS 500型一體化成像儀（美國GE 公司），ABI7500 型反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）儀（美國ABI公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

貫葉金絲桃藥材（產(chǎn)地四川，批號(hào)20190503）購自安徽亳州中藥材批發(fā)市場，經(jīng)天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所王文彤研究員鑒定為藤黃科植物貫葉金絲桃H. perforatumL.的干燥地上部分；尼莫地平片（陽性對(duì)照，批號(hào)2003004，規(guī)格20 mg）購自天津市中央藥業(yè)有限公司；注射用鹽酸替來他明鹽酸唑拉西泮（批號(hào)8ADTA，規(guī)格為替來他明125 mg+唑拉西泮125 mg）購自法國Virbac公司；鹽酸賽拉嗪注射液（批號(hào)20201118，規(guī)格2 mL∶0.2 g）購自吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司。

TTC試劑（批號(hào)L09A10S83253）購自上海源葉生物科技有限公司；蘇木精、伊紅染色液（批號(hào)分別為G1140、G1100）均購自北京索萊寶科技有限公司；TUNEL 細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（熒光素）購自瑞士Roche公司；兔源EPO、促紅細(xì)胞生成素受體（erythropoietin receptor，EPOR）、JAK2、磷酸化STAT3（p-STAT3）、STAT3多克隆抗體和鼠源β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）多克隆抗體（批號(hào)分別為08D01、ZP8069BP69、BST17874165、ZP7411BP11、BOS6738BP3380、AC-15）均購自武漢博士德生物工程有限公司；辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的山羊抗兔IgG二抗（批號(hào)7074S）購自美國CST公司；BCA蛋白定量試劑盒、超敏ECL 化學(xué)發(fā)光試劑盒、HRP 標(biāo)記的山羊抗鼠IgG二抗（批號(hào)分別為OS28、EL2001001、916A035）均購自愛必信（上海）生物科技有限公司；TRIzol 試劑、HiFi-Script cDNA鏈合成試劑盒、UltraSYBR Mixture（批號(hào)分別為01761、33020、30506）均購自江蘇康為世紀(jì)生物科技有限公司；PCR引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，引物序列及產(chǎn)物長度見表1。

表1 PCR引物序列及產(chǎn)物長度

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠75只，體重160～180 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（京）2016-0006。所有動(dòng)物均飼養(yǎng)于天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所動(dòng)物房內(nèi)，自由攝食、飲水。本研究所涉及的動(dòng)物操作均符合天津市醫(yī)藥科學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理的相關(guān)規(guī)定，并經(jīng)過倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)編碼IMPS-EAEP-Z-Z2019017-01）。

2 方法

2.1 貫葉金絲桃提取物浸膏的制備

取貫葉金絲桃藥材5 850 g，粉碎，用70%乙醇冷浸提取7 d×3次，合并提取液，濃縮干燥，即得貫葉金絲桃提取物浸膏（每克浸膏相當(dāng)于生藥14.48 g）。

2.2 大鼠腦缺血再灌注損傷模型的建立

采用改良線栓法制備大鼠大腦左側(cè)中動(dòng)脈閉塞再灌注模型：在麻醉（注射用鹽酸替來他明鹽酸唑拉西泮25 mg/kg+鹽酸賽拉嗪注射液2.5 mg/kg，肌內(nèi)注射，后同）狀態(tài)下，于大鼠頸部正中2 cm切口，鈍性分離左側(cè)頸總、頸內(nèi)和頸外動(dòng)脈，用3-0號(hào)無菌手術(shù)線結(jié)扎頸總和頸外動(dòng)脈，用動(dòng)脈夾夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈遠(yuǎn)心端；于頸內(nèi)動(dòng)脈近心端備線，在頸總動(dòng)脈距離分叉約1 cm處用眼科剪剪一小口，將線栓送入切口，經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈順行至線栓標(biāo)記黑點(diǎn)處，結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈近心端以固定線栓，造成缺血；缺血2 h 后取出線栓，實(shí)現(xiàn)再灌注[9]。其中，部分大鼠（10 只）僅分離血管但不結(jié)扎、不插線栓，將其作為假手術(shù)組。參考Zea-Longa評(píng)分法，評(píng)分1～3分為造模成功[10]。

2.3 大鼠分組與給藥

將造模成功的大鼠按體重分為模型組、陽性對(duì)照組（尼莫地平，0.012 g/kg，以水為溶劑；劑量根據(jù)臨床等效劑量換算而得）和貫葉金絲桃高、低劑量組[5.212、1.303 g/kg，按生藥量計(jì)，以水為溶劑；低劑量按圣·約翰草提取物片（商品名為路優(yōu)泰）的臨床等效劑量換算而得]，同時(shí)設(shè)置假手術(shù)組，每組10只。各藥物組大鼠于術(shù)后第2天開始灌胃相應(yīng)藥液，每天1 次，連續(xù)7 d。假手術(shù)組和模型組大鼠灌胃等體積水。

2.4 大鼠神經(jīng)功能評(píng)分

分別于藥物干預(yù)前（造模后第1天）和末次給藥后按Zea-Longa 評(píng)分法對(duì)各組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，具體標(biāo)準(zhǔn)如下：無神經(jīng)損傷癥狀，記0分；不能伸展對(duì)側(cè)前爪，記1分；行走時(shí)向偏癱側(cè)轉(zhuǎn)圈，記2分；向偏癱側(cè)傾倒，記3分；不能自發(fā)行走且意識(shí)喪失，記4分[10]。

2.5 大鼠腦梗死情況觀察

采用TTC 染色法進(jìn)行觀察。末次給藥1 h 后，隨機(jī)取各組大鼠5只，麻醉后，迅速斷頭取腦，用預(yù)冷生理鹽水沖洗，并于—20 ℃下放置10 min，待腦組織稍硬后，切除嗅球、垂體、低位腦干，由前向后行等分冠狀位切片。將上述腦組織切片置于1%TTC 磷酸鹽緩沖液中，于37 ℃下避光溫育30 min（每隔10 min上下翻動(dòng)1次）；經(jīng)4%多聚甲醛固定后，觀察各組大鼠腦組織的梗死情況（正常腦組織呈玫瑰紅色，梗死組織呈白色）并拍照。采用Image-Pro Plus 6.0軟件分析圖片并計(jì)算腦梗死比例：腦梗死比例＝腦梗死總面積/腦切片總面積×100%。

2.6 大鼠腦皮層和海馬組織病理形態(tài)學(xué)觀察

采用蘇木精-伊紅（HE）染色法進(jìn)行觀察。末次給藥1 h后，取各組剩余大鼠5只，麻醉后，剖取其缺血再灌注側(cè)腦組織（假手術(shù)組大鼠取相同部位腦組織），縱切，將包含皮層和海馬的腦組織固定于4%多聚甲醛中，經(jīng)梯度乙醇脫水、石蠟包埋后切片（厚度為4 μm），行HE 染色后，使用顯微鏡觀察各組大鼠腦皮層和海馬組織的病理改變情況。

2.7 大鼠腦皮層和海馬組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡檢測

采用TUNEL染色法進(jìn)行檢測。取“2.6”項(xiàng)下各組大鼠腦組織切片，于60 ℃下烘烤60 min，經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后，滴加新配制的蛋白酶K 工作液（20 mg/L），于37 ℃下孵育10 min；用磷酸鹽緩沖液清洗3次，滴加TUNEL 檢測液適量，于37 ℃下避光孵育60 min；用磷酸鹽緩沖液清洗3次，以DAPI染液染核，使用熒光顯微鏡觀察各組大鼠腦皮層和海馬組織中神經(jīng)細(xì)胞的凋亡情況（凋亡細(xì)胞被染成紅色），并采用Image Scope軟件計(jì)算其凋亡率：凋亡率＝凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。

2.8 大鼠腦組織中EPO、EPOR、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表達(dá)情況檢測

采用Western blot法進(jìn)行檢測。取“2.6”項(xiàng)下各組大鼠的缺血再灌注側(cè)腦組織（假手術(shù)組大鼠取相同部位腦組織），加入蛋白裂解液后研磨，提取總蛋白并采用BCA法進(jìn)行定量。蛋白變性后進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，并轉(zhuǎn)移到聚二氟乙烯膜上，以5%脫脂奶粉室溫封閉1 h 后，分別加入EPO、EPOR、JAK2、p-STAT3、STAT3、β-actin一抗（稀釋比例均為1∶500），4 ℃孵育過夜；用TBST緩沖液清洗5 min×3次，加入相應(yīng)二抗（稀釋比例均為1∶1 000），室溫孵育2 h；用TBST緩沖液清洗5 min×3 次，以超敏ECL 化學(xué)發(fā)光試劑顯色，并置于一體化成像儀下成像。采用Image J軟件分析條帶灰度值，以目的蛋白與內(nèi)參蛋白（β-actin）條帶的灰度值比值表示目的蛋白的表達(dá)水平，結(jié)果以假手術(shù)組為參照進(jìn)行歸一化處理。

2.9 大鼠腦組織中EPO、EPOR、JAK2、STAT3 mRNA表達(dá)情況檢測

采用RT-PCR 法進(jìn)行檢測。取“2.6”項(xiàng)下各組大鼠的缺血再灌注側(cè)腦組織（假手術(shù)組大鼠取相同部位腦組織），用TRIzol試劑提取總RNA，測定濃度并稀釋至250 mg/L，進(jìn)一步逆轉(zhuǎn)錄得cDNA。以所得cDNA 為模板進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。PCR 反應(yīng)體系（20 μL）包括：2×Ultra-SYBR Mixture 10 μL，上、下游引物各0.8 μL，cDNA 模板1.6 μL，ddH2O 6.8 μL。反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃變性15 s，60 ℃退火1 min，共40 個(gè)循環(huán)。以β-actin 作為內(nèi)參，采用2—ΔΔCt法計(jì)算EPO、EPOR、JAK、STAT3 mRNA的表達(dá)水平，結(jié)果以假手術(shù)組為參照進(jìn)行歸一化處理。

2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad Prism 6.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

3 結(jié)果

3.1 貫葉金絲桃對(duì)模型大鼠神經(jīng)功能評(píng)分的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠在藥物干預(yù)前、末次給藥后的神經(jīng)功能評(píng)分均顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽性對(duì)照組和貫葉金絲桃高劑量組大鼠末次給藥后的神經(jīng)功能評(píng)分均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果見表2。

表2 各組大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分和腦梗死比例比較（±s）

表2 各組大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分和腦梗死比例比較（±s）

a：與假手術(shù)組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.01；c：與模型組比較，P＜0.05。

組別假手術(shù)組模型組陽性對(duì)照組貫葉金絲桃高劑量組貫葉金絲桃低劑量組神經(jīng)功能評(píng)分（n＝10）/分藥物干預(yù)前0 2.50±0.67a 2.60±0.66 2.60±0.66 2.50±0.67末次給藥后0 2.60±0.49a 1.90±0.30b 2.00±0.45c 2.10±0.54腦梗死比例（n＝5）/%0 34.20±3.19a 7.80±1.72b 10.20±1.01b 17.60±2.42b

3.2 貫葉金絲桃對(duì)模型大鼠腦梗死比例的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠的腦梗死區(qū)域明顯增大，腦梗死比例顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽性對(duì)照組和貫葉金絲桃高、低劑量組大鼠的腦梗死區(qū)域有所縮小，腦梗死比例均顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見圖1、表2。

圖1 各組大鼠的腦梗死情況

3.3 貫葉金絲桃對(duì)模型大鼠腦皮層和海馬組織病理形態(tài)的影響

假手術(shù)組大鼠腦皮層組織神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)完整，核仁清晰，細(xì)胞質(zhì)無紅染；海馬組織神經(jīng)細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，排列有序。模型組大鼠缺血再灌注側(cè)腦皮層組織神經(jīng)細(xì)胞大片消失，錐體細(xì)胞明顯減少，結(jié)構(gòu)受損，排列紊亂；海馬組織可見神經(jīng)細(xì)胞變性，核固縮深染，細(xì)胞質(zhì)紅染，排列較紊亂。陽性對(duì)照組和貫葉金絲桃高、低劑量組大鼠缺血再灌注側(cè)腦組織上述部位的病理形態(tài)均較模型組有不同程度的改善。結(jié)果見圖2、圖3。

圖2 各組大鼠腦皮層組織病理形態(tài)變化的顯微圖（HE染色）

圖3 各組大鼠海馬組織病理形態(tài)變化的顯微圖（HE染色）

3.4 貫葉金絲桃對(duì)模型大鼠腦皮層和海馬組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠缺血再灌注側(cè)腦皮層和海馬組織中凋亡的神經(jīng)細(xì)胞（紅染）明顯增多，凋亡率顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，陽性對(duì)照組和貫葉金絲桃高、低劑量組大鼠缺血再灌注側(cè)腦皮層和海馬組織中凋亡的神經(jīng)細(xì)胞均明顯減少，凋亡率均顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見圖4、圖5、表3。

圖4 各組大鼠腦皮層組織中神經(jīng)細(xì)胞凋亡的熒光顯微圖（TUNEL染色）

圖5 各組大鼠海馬組織中神經(jīng)細(xì)胞凋亡的熒光顯微圖（TUNEL染色）

表3 各組大鼠腦皮層和海馬組織中神經(jīng)細(xì)胞的凋亡率比較（±s，n＝5，%）

表3 各組大鼠腦皮層和海馬組織中神經(jīng)細(xì)胞的凋亡率比較（±s，n＝5，%）

a：與假手術(shù)組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.01。

組別假手術(shù)組模型組陽性對(duì)照組貫葉金絲桃高劑量組貫葉金絲桃低劑量組海馬組織0.44±0.53 32.61±1.89a 4.80±1.66b 6.78±1.41b 11.49±2.11b腦皮層組織1.47±1.65 29.84±2.30a 3.00±1.42b 9.37±1.57b 12.03±1.62b

3.5 貫葉金絲桃對(duì)大鼠腦組織中EPO、EPOR、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表達(dá)的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠缺血再灌注側(cè)腦組織中EPO、EPOR 蛋白的表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.01），JAK2、p-STAT3、STAT3 蛋白的表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，各藥物組大鼠缺血再灌注側(cè)腦組織中EPO、EPOR 蛋白的表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.01），JAK2、p-STAT3、STAT3（陽性對(duì)照組除外）蛋白的表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.01）。結(jié)果見圖6、表4。

圖6 各組大鼠腦組織中EPO、EPOR、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表達(dá)的電泳圖

表4 各組大鼠腦組織中EPO、EPOR、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表達(dá)水平比較（±s，n＝5）

表4 各組大鼠腦組織中EPO、EPOR、JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白表達(dá)水平比較（±s，n＝5）

a：與假手術(shù)組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.01。

組別假手術(shù)組模型組陽性對(duì)照組貫葉金絲桃高劑量組貫葉金絲桃低劑量組STAT3/β-actin 1 8.77±0.45a 8.41±0.17 6.65±0.11b 7.21±0.45b EPO/β-actin 1 0.20±0.02a 0.54±0.05b 0.92±0.11b 0.42±0.08b EPOR/β-actin 1 0.30±0.07a 0.92±0.13b 0.75±0.10b 0.73±0.07b JAK2/β-actin 1 11.70±0.78a 3.40±0.21b 3.66±0.06b 4.47±0.09b p-STAT3/β-actin 1 13.93±0.52a 6.63±0.46 b 1.97±0.44b 2.56±0.66b

3.6 貫葉金絲桃對(duì)大鼠腦組織EPO、EPOR、JAK2、STAT3 mRNA表達(dá)的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠缺血再灌注側(cè)腦組織中EPO、EPOR mRNA 的表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.01），JAK2、STAT3 mRNA的表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，各藥物組大鼠缺血再灌注側(cè)腦組織中EPO、EPOR mRNA 的表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05 或P＜0.01），JAK2、STAT3 mRNA 的表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)果見表5。

表5 各組大鼠腦組織中EPO、EPOR、JAK2、STAT3 mRNA表達(dá)水平比較（±s，n＝5）

表5 各組大鼠腦組織中EPO、EPOR、JAK2、STAT3 mRNA表達(dá)水平比較（±s，n＝5）

a：與假手術(shù)組比較，P＜0.01；b：與模型組比較，P＜0.01；c：與模型組比較，P＜0.05。

STAT3 mRNA 1 27.04±6.61a 13.90±3.60c 8.16±1.74b 12.25±2.57c組別假手術(shù)組模型組陽性對(duì)照組貫葉金絲桃高劑量組貫葉金絲桃低劑量組EPO mRNA 1 0.16±0.03a 0.83±0.21b 0.91±0.11b 0.62±0.16b EPOR mRNA 1 0.19±0.08a 0.64±0.15b 0.62±0.17b 0.53±0.28c JAK2 mRNA 1 15.48±2.72a 6.73±1.02b 9.56±1.30c 9.79±1.97c

4 討論

腦缺血再灌注損傷是由缺血區(qū)血液供應(yīng)恢復(fù)引起的繼發(fā)損傷，也是缺血性卒中治療后的嚴(yán)重并發(fā)癥[11]。本研究選擇尼莫地平為陽性對(duì)照藥，該藥為二氫吡啶類鈣通道阻滯劑，可用于缺血性腦血管疾病的臨床治療。本課題組前期研究證實(shí)了尼莫地平對(duì)缺血性腦損傷有較好的干預(yù)效果[12]。本研究所用線栓與大鼠體重相配，有固定長度標(biāo)記且粗細(xì)一致，能夠保證造模大鼠腦缺血程度的一致性。同時(shí)，本課題組前期比較了藥物干預(yù)3 d和7 d的效果，結(jié)果顯示，貫葉金絲桃干預(yù)3 d的效果不明顯，可能與干預(yù)時(shí)間偏短有關(guān)，故最終選用了藥物干預(yù)7 d 的方案。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分和腦梗死比例均較假手術(shù)組顯著升高，缺血再灌注側(cè)腦皮層和海馬組織明顯受損，凋亡的神經(jīng)細(xì)胞明顯增多且凋亡率顯著升高；而高、低劑量的貫葉金絲桃均能不同程度地降低模型大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分和腦梗死比例，改善其缺血再灌注側(cè)腦皮層和海馬組織的受損情況，減少其凋亡神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量并降低凋亡率，提示貫葉金絲桃對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷有明顯的改善作用。

研究表明，JAK2/STAT3 信號(hào)通路與腦缺血再灌注損傷關(guān)系密切[13—14]。該信號(hào)通路由3 個(gè)部分組成：接收信號(hào)的酪氨酸激酶相關(guān)受體、傳遞信號(hào)的JAK2 和產(chǎn)生效應(yīng)的STAT3[15]。EPO是紅細(xì)胞生成所需的主要刺激因子，為人體內(nèi)源性糖蛋白激素，主要通過與其受體結(jié)合而發(fā)揮促進(jìn)紅細(xì)胞成熟的作用[16]。Liu 等[17]研究證實(shí)，EPO可作為神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)因子，對(duì)缺血性腦損傷具有一定的修復(fù)作用。當(dāng)腦缺血發(fā)生后，EPO/EPOR軸可通過與JAK2 的相互作用而被激活；隨后，JAK2 可使STAT3發(fā)生磷酸化，生成的p-STAT3進(jìn)一步二聚化并異位至細(xì)胞核內(nèi)，與具有特定位點(diǎn)的靶標(biāo)[如B 細(xì)胞淋巴瘤2（B cell lymphoma 2，Bcl-2）、Bcl-XL等]結(jié)合，從而抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡[18—19]?？梢?，EPO 能通過介導(dǎo)JAK2/STAT3信號(hào)通路在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中發(fā)揮保護(hù)作用。Western blot 和RT-PCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高、低劑量的貫葉金絲桃可顯著上調(diào)大鼠缺血再灌注側(cè)腦組織中EPO、EPOR 蛋白及mRNA 的表達(dá)，下調(diào)JAK2、p-STAT3、STAT3蛋白和JAK2、STAT3 mRNA的表達(dá)，提示貫葉金絲桃的上述作用可能是通過EPO 介導(dǎo)的JAK2/STAT3信號(hào)通路來完成的。

綜上所述，貫葉金絲桃對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)EPO 介導(dǎo)的JAK2/STAT3信號(hào)通路有關(guān)。本課題組后續(xù)將應(yīng)用通路抑制劑，進(jìn)一步闡釋上述通路在貫葉金絲桃改善腦缺血再灌注損傷中的具體機(jī)制。