毛東風(fēng)，姚慧敏，喬洋，孫法良，褚素欣，張磊，任巖峰，付國平，侯立軍

（1.齊魯動物保健品有限公司，山東 濟(jì)南 250000；2.石家莊市畜牧技術(shù)推廣站，河北 石家莊 050000；3.石家莊市農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法支隊(duì) 河北 石家莊 050000；4.河北舒雋科技有限公司，河北 石家莊 050000；5.石家莊正大鴻福牧業(yè)有限公司，河北 石家莊 050000；6.廊坊市畜牧站，河北 廊坊 065000)

雞傳染性法氏囊?。↖BD）是由雞傳染性法氏囊病病毒引起的危害雛雞的一種急性、高度接觸性的傳染??；雞傳染性貧血?。–AV）是由雞傳染性貧血病毒引起的，病雞表現(xiàn)為貧血、骨髓黃染、免疫機(jī)能受損。IBD 和CAV 均可直接導(dǎo)致病雞死亡、雞群生產(chǎn)性能降低，還可導(dǎo)致雞群免疫抑制，進(jìn)而促使雞群并發(fā)或繼發(fā)其它疫病。2018年6 月份，河北某養(yǎng)殖場所飼養(yǎng)的蛋雛雞發(fā)生了一種疫病，發(fā)病雞以精神沉郁、藍(lán)翅、死淘率高為主要特征；以腎臟腫大、腿肌出血、腺胃和肌胃交界處出血為主要剖檢病變；經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷為CAV 和IBDV 混合性感染。為了提升廣大養(yǎng)殖企業(yè)對該病例的認(rèn)識，現(xiàn)將這起病例總結(jié)如下：

1 材料準(zhǔn)備與病例采集

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)用到青霉素、鏈霉素、慶大霉素和制霉菌素；LB 固體培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基；SPF 雞胚。

1.2 病例

河北某蛋雞場所飼養(yǎng)的蛋雛雞，7 日齡免疫新流法三聯(lián)滅活苗，15 日齡出現(xiàn)精神沉郁、藍(lán)翅等癥狀；以腎臟腫大、腿肌以及腺胃和肌胃交界處出血為主要剖檢病變；疑似雞傳染性貧血病毒和法氏囊病毒混合感染。

1.3 剖檢及病料采集

解剖病雞，觀察其病理變化；對肝臟、肝臟、脾臟、腎臟等臟器備用，編號為HB1804。

1.4 細(xì)菌的分離

分別在LB 固體培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基上進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，培養(yǎng)24 小時(shí)左右，觀察結(jié)果。

1.5 法氏囊病病毒的鑒定

1.5.1 雞胚病變

將肝臟、脾臟及腎臟用含適當(dāng)濃度抗生素的PBS（pH7.2）按1∶5 進(jìn)行充分研磨，反復(fù)凍融3次后接種11 日齡SPF 雞胚，經(jīng)絨毛尿囊膜途徑，各接種5 枚。每12 小時(shí)照胚一次，24 小時(shí)內(nèi)死亡雞胚棄去，其他雞胚每日觀察，雞胚死亡則收取絨毛尿囊膜，120 小時(shí)還未死亡胚，置4℃凍死，同法收胚。收獲的絨毛尿囊膜觀察有無痘斑生成。

1.5.2 PCR 檢測

收集絨毛尿囊膜充分研磨后，按照試劑盒說明書提取總RNA，通過RT-PCR 方法檢測IBDV。根據(jù)VP2 序列設(shè)計(jì)1 對引物，上游引物序列為5'-CAAGTGGGAGCCTAGCAGTG-3'，下游引物序列為：5'-GCTCCTGCAATCTTCAGGG-3'，預(yù)計(jì)擴(kuò)增片段約為337 bp。

1.6 雞傳染性貧血病毒的鑒定

1.6.1 病理組織學(xué)檢測用福爾馬林固定病雞肝臟、腿骨，制作石蠟切片，HE 染色后進(jìn)行組織病理學(xué)診斷。

1.6.2 PCR 檢測取采集的病料充分研磨后，按照試劑盒說明書提取總DNA，通過PCR 方法檢測CAV。根據(jù)VP2 序列設(shè)計(jì)1 對引物，上游引物序列為:5'-CATCAACGGTGTTCAGGC-3'，下游引物序列為：5'-CCTTGGAAGCGGATAGTCAT-3'，預(yù)計(jì)擴(kuò)增片段約為550bp。

2 結(jié)果

2.1 剖檢病變

對送檢患病雞進(jìn)行剖檢發(fā)現(xiàn)，患病雞雞翅膀出現(xiàn)皮下出血和皮炎癥狀（見圖1-A），腺胃和肌胃交界處出血（見圖1-B），腿肌條狀出血（見圖1-C）。

2.2 細(xì)菌分離

經(jīng)24 小時(shí)左右的培養(yǎng)后，LB 固體培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基上都沒有出現(xiàn)細(xì)菌生長，沒有分離到細(xì)菌。

2.3 法氏囊病病毒鑒定

2.3.1 雞胚病變

經(jīng)絨毛尿囊膜途徑接種的雞胚，絨毛尿囊膜出現(xiàn)痘斑，如圖2 所示。

圖2 HB1804 通過CAM 途徑接種雞胚后的尿囊膜

2.3.2 PCR 檢測

試驗(yàn)中用到的IBD 檢測引物為VP2 特異性引物，經(jīng)檢測送檢樣品HB1804 呈法氏囊病毒陽性；PCR 產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖3 所示。

圖3 PCR 產(chǎn)物電泳圖

實(shí)驗(yàn)室分離鑒定結(jié)合臨床表現(xiàn)可確定該雞群有傳染性法氏囊病病毒感染，由于該雞群免疫新流法三聯(lián)滅活苗而未免疫法氏囊病活苗，所以排除該病是疫苗毒引起。

2.4 雞傳染性貧血病毒鑒定

2.4.1 病理組織學(xué)診斷

取病雞肝臟、腿骨等用福爾馬林固定后，制作組織切片；通過顯微鏡觀察，肝臟結(jié)構(gòu)清晰，無異常（見圖4-A）；腿骨骨髓內(nèi)大量脂肪浸潤（見圖4-B），造血細(xì)胞大量減少（見圖4-C）；

圖4 組織病理學(xué)病變

與禽傳染性貧血的病理變化一致，故可確定傳染性貧血病毒感染。

2.4.2 PCR 檢測

試驗(yàn)中用到的CAV 檢測引物為VP2 特異性引物，經(jīng)檢測送檢樣品HB1804 呈雞傳染性貧血病毒陽性；PCR 產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖5 所示。

圖5 PCR 產(chǎn)物電泳圖

PCR 檢測結(jié)果結(jié)合臨床表現(xiàn)和病理切片變化可確定該雞群還混合有傳染性貧血病毒感染。

3 討論

IBD 是由IBDV 引起的雛雞的一種急性的、高度接觸性的疾病。IBD 發(fā)病主要以6～8 月多發(fā)，其他季節(jié)發(fā)病較少。主要的傳染源為發(fā)病雞或帶毒雞，主要的傳播途徑為消化道傳播。其流行形式與雞群密度及免疫狀態(tài)有關(guān)，一般呈散發(fā)或地方流行。近幾年隨著法氏囊病滅活苗和高免抗體的大量應(yīng)用，該病發(fā)病趨于減少，但是也有免疫雞群出現(xiàn)法氏囊病癥狀的報(bào)道，究其原因與雞群免疫失敗、免疫時(shí)間不當(dāng)、疫苗質(zhì)量不佳、環(huán)境中存在的超強(qiáng)野毒株等有關(guān)；同時(shí)我們應(yīng)該注意該病的發(fā)生與其他免疫抑制病相輔相成，有報(bào)道稱，國內(nèi)許多地區(qū)IBD 發(fā)病，往往和CAV 的混合感染有關(guān)。

雞傳染性貧血是引起雛雞再生障礙性貧血和全身淋巴組織萎縮的病毒性傳染病。雞是CAV 的主要自然宿主，可水平傳播和垂直傳播。當(dāng)CAV 與IBDV 混合感染，雞群出現(xiàn)免疫抑制狀態(tài)，此外，CAV 常與馬立克病病毒（MDV）、呼腸孤病毒（REO）、新城疫病毒（ND）等混合感染，且存在相互作用。養(yǎng)殖場應(yīng)當(dāng)從飼養(yǎng)環(huán)境、日常消毒、合理制定并執(zhí)行免疫程序等多方面加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，避免發(fā)生這類疫病。