于宏璐,蘇東帥,馬韶澤,祁興順

于宏璐,蘇東帥,馬韶澤,祁興順,北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院消化內(nèi)科 遼寧省沈陽市 110840

于宏璐,大連醫(yī)科大學(xué)研究生院 遼寧省大連市 116044

蘇東帥,中國(guó)人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九六三醫(yī)院 黑龍江省佳木斯市 154000

0 引言

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,H.pylori)是一種革蘭氏陰性桿菌,可經(jīng)口-口、糞-口等途徑在人與人之間傳播,其在全球感染率約為50%,在我國(guó)可達(dá)44.2%[1,2].H.pylori感染與胃炎、消化性潰瘍、胃癌、胃粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤等疾病密切相關(guān),因此,根除H.pylori對(duì)上述疾病防治具有重要意義[3].目前我國(guó)指南對(duì)于H.pylori的治療推薦鉍劑四聯(lián)療法,即1種質(zhì)子泵抑制劑+2種抗生素+1種鉍劑[4].然而,隨著抗生素的大量使用,克拉霉素(Clarithromycin,CLA)、甲硝唑(Metronidazole,MTZ)和左氧氟沙星(Levofloxacin,LVX)耐藥率均超過30%,MTZ甚至高達(dá)78%,使得經(jīng)驗(yàn)性含鉍劑四聯(lián)方案的根除成功率很難達(dá)到90%[5,6].抗生素耐藥是導(dǎo)致H.pylori根除失敗的主要原因,常表現(xiàn)為三種模式,包括單藥耐藥、多重耐藥和異質(zhì)性耐藥[7].單藥耐藥指H.pylori僅對(duì)一種抗生素耐藥;多重耐藥指H.pylori同時(shí)對(duì)兩種或兩種以上抗生素耐藥;異質(zhì)性耐藥指同一亞群內(nèi)或不同亞群H.pylori對(duì)抗生素的敏感性不同.了解H.pylori對(duì)抗生素耐藥情況可幫助醫(yī)生合理化應(yīng)用抗生素,進(jìn)而提高H.pylori根除率.傳統(tǒng)檢測(cè)是H.pylori抗生素耐藥的常用檢測(cè)方法,即先細(xì)菌培養(yǎng)再行藥敏試驗(yàn).隨著分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展,各種新興技術(shù)不斷應(yīng)用于H.pylori的耐藥檢測(cè),方法選擇逐漸多樣化,包括聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)及其相關(guān)技術(shù)、DNA測(cè)序、熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)、基因芯片等.本文旨在通過回顧相關(guān)文獻(xiàn),介紹上述檢測(cè)方法優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用現(xiàn)狀,為醫(yī)生在臨床實(shí)踐中選擇H.pylori抗生素耐藥檢測(cè)方法提供參考.

1 基于細(xì)菌培養(yǎng)的傳統(tǒng)檢測(cè)方法

H.pylori耐藥的傳統(tǒng)檢測(cè)方法是基于細(xì)菌培養(yǎng)進(jìn)行的.藥敏試驗(yàn)包括瓊脂稀釋法、濃度梯度(E-test)法、紙片擴(kuò)散法和微量肉湯稀釋法.一項(xiàng)隨機(jī)對(duì)照研究將90例胃活檢H.pylori培養(yǎng)陽性的患者分為試驗(yàn)組和對(duì)照組,試驗(yàn)組根據(jù)E-test結(jié)果接受四聯(lián)治療,對(duì)照組采取經(jīng)驗(yàn)四聯(lián)治療,發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組根除率顯著高于對(duì)照組(意向性分析:91%vs73%,P=0.027;符合方案分析:95%vs79%,P=0.021)[8].一項(xiàng)前瞻性研究共納入200例單次或多次H.pylori根除失敗的患者,根據(jù)藥敏結(jié)果給予三聯(lián)或鉍劑四聯(lián)治療,研究發(fā)現(xiàn)H.pylori總體根除率可達(dá)94.5%[95%置信區(qū)間(confidence interval,CI): 90.4%-97.5%][9].由此可見,藥敏試驗(yàn)指導(dǎo)的個(gè)體化治療可提高H.pylori根除率.目前,基于細(xì)菌培養(yǎng)的藥敏試驗(yàn)是檢測(cè)H.pylori對(duì)所有常用抗生素耐藥性的唯一方法,對(duì)診斷H.pylori耐藥具有重要作用,但仍存在以下缺點(diǎn): (1)H.pylori細(xì)菌培養(yǎng)需基于內(nèi)窺鏡檢查并取材,為侵入性檢查方法,且培養(yǎng)所需時(shí)間長(zhǎng),可達(dá)1 wk-2 wk;(2)細(xì)菌培養(yǎng)的陽性率易受保存、運(yùn)輸方式及菌株接種濃度等因素影響[10];(3)藥敏試驗(yàn)尚無標(biāo)準(zhǔn)的最低抑菌濃度(minimum inhibitory concentration,MIC)值,結(jié)果可因不同標(biāo)準(zhǔn)的MIC值產(chǎn)生差異;(4)瓊脂稀釋法耗材、耗時(shí),E-test法耗材昂貴,紙片擴(kuò)散法尚缺乏統(tǒng)一判斷標(biāo)準(zhǔn),微量肉湯稀釋法技術(shù)難度大[11].綜上,傳統(tǒng)的基于細(xì)菌培養(yǎng)的耐藥檢測(cè)方法雖可指導(dǎo)個(gè)體化治療,但其不足之處限制了其在臨床的應(yīng)用.

2 分子生物學(xué)檢測(cè)方法

2.1 PCR及其相關(guān)技術(shù)

2.1.1 PCR-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(restriction fragment length polymorphism,RFLP): PCR-RFLP是最早應(yīng)用的一種常規(guī)PCR技術(shù),原理為先利用特定引物擴(kuò)增H.pylori可能的基因突變片段,再使用限制性內(nèi)切酶對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行酶切,最后對(duì)酶切產(chǎn)物行電泳分析其長(zhǎng)度,進(jìn)而判斷有無突變.PCR-RFLP通過基于胃活檢的細(xì)菌培養(yǎng)及直接取材獲取H.pylori基因片段.Khashei等[12]在100株H.pylori臨床分離株中,共發(fā)現(xiàn)20株H.pylori發(fā)生23S rRNA突變,其中18(90%)株A2142G位點(diǎn)突變和2(10%)株A2143G位點(diǎn)突變,與E-test所得CLA耐藥結(jié)果一致;Hussein等[13]在38株耐CLA的H.pylori中檢測(cè)23S rRNA基因突變,發(fā)現(xiàn)10(26.3%)株A2143G位點(diǎn)突變、14(36.8%)株A2144G位點(diǎn)突變、9(23.7%)株A2143G和A2144G雙位點(diǎn)突變,其余5(13.2%)株無位點(diǎn)突變;Pourakbari等[14]在福爾馬林固定石蠟包埋胃活檢標(biāo)本中分析H.pylori的23S rRNA基因突變情況,發(fā)現(xiàn)耐CLA菌株中A2143G位點(diǎn)突變率最高(50%),其次為A2142G位點(diǎn)突變(29%)和A2142C位點(diǎn)突變(21%).與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比,該技術(shù)可直接檢測(cè)耐藥基因突變位點(diǎn),具有操作方便、靈敏度高及耗時(shí)短的優(yōu)勢(shì).但該法結(jié)果依賴于已知的耐藥機(jī)制,若H.pylori發(fā)生耐藥進(jìn)化,則無法檢測(cè);該方法的準(zhǔn)確性易受操作人員技術(shù)水平、取材方式、酶切產(chǎn)物等因素干擾.

2.1.2 雙啟動(dòng)寡聚核苷酸(dual priming oligonucleotide,DPO)-PCR: DPO-PCR屬于多重PCR,無需限制性核酸內(nèi)切酶,可同時(shí)檢測(cè)H.pylori感染及其抗生素耐藥性.目前,商業(yè)化試劑盒Seeplex?ClaR-H.pyloriACE已成功用于評(píng)估H.pylori對(duì)CLA耐藥性.該試劑共包含3對(duì)特異性引物,分別用于擴(kuò)增23S rRNA、檢測(cè)A2142G和A2143G位點(diǎn)突變.Ong等[15]同時(shí)應(yīng)用瓊脂稀釋法和DPO-PCR檢測(cè)胃活檢標(biāo)本H.pylori的CLA耐藥性,發(fā)現(xiàn)以藥敏結(jié)果為對(duì)照時(shí),該技術(shù)的靈敏度是76.4%、特異性是90.1%;Kwon等[16]也使用瓊脂稀釋法和DPOPCR共同檢測(cè)胃活檢標(biāo)本中H.pylori的CLA耐藥性,發(fā)現(xiàn)該技術(shù)的靈敏度和特異性分別是77.8%和95.5%.此外,Choi等[17]應(yīng)用該技術(shù)在101例H.pylori感染患者中檢測(cè)CLA耐藥性,發(fā)現(xiàn)29例患者耐藥,其中25例A2143G位點(diǎn)突變、4例A2142G位點(diǎn)突變.總之,與常規(guī)PCR相比,該技術(shù)省去酶切步驟而更加簡(jiǎn)便;與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比,該技術(shù)特異性強(qiáng),無需細(xì)菌培養(yǎng)而更加快速.

2.1.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR): qPCR已實(shí)現(xiàn)了定性到定量的飛躍,主要是在PCR體系中加入熒光標(biāo)記物,利用隨PCR產(chǎn)物增加而熒光信號(hào)強(qiáng)度等比例增加的現(xiàn)象,進(jìn)而實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)度并在指數(shù)期依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行分析,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定量[18].目前,多種試劑盒已成功用于23S rRNA耐藥基因的檢測(cè),適用于胃黏膜、胃液、糞便等多種標(biāo)本,其靈敏度高、特異性強(qiáng).van den Poel等[19]以瓊脂稀釋法為金標(biāo)準(zhǔn),發(fā)現(xiàn)RIDA?GENE HP assay試劑盒檢測(cè)胃活檢標(biāo)本中H.pylori對(duì)CLA耐藥的靈敏度為92%、特異性為97%.Pichon等[20]以E-test法為金標(biāo)準(zhǔn),發(fā)現(xiàn)AmplidiagH.pyloriClariR試劑盒檢測(cè)糞便標(biāo)本中H.pylori對(duì)CLA耐藥性的靈敏度和特異性分別為100%(95%CI: 88%-100%)和98.4%(95%CI:94%-99%).Redondo等[21]使用LightMix?RT-PCR試劑盒在糞便和胃活檢標(biāo)本上檢測(cè)H.pylori的CLA耐藥性,發(fā)現(xiàn)該法結(jié)果與E-test法的符合率可達(dá)95%.因此,在糞便標(biāo)本中應(yīng)用qPCR可避免侵入性取材,且成本低,但需注意因糞便標(biāo)本中血紅蛋白、多糖復(fù)合物及重金屬等物質(zhì)抑制PCR造成的假陰性結(jié)果[22].Binmaeil等[23]開發(fā)了一種多重qPCR技術(shù),包含擴(kuò)增ureA、23S rRNA、GyrA基因的特異性引物和探針,可同時(shí)檢測(cè)H.pylori感染及CLA、LVX耐藥性;在571例胃活檢標(biāo)本中,該技術(shù)檢測(cè)H.pylori感染的靈敏度為96.4%、特異性為88.5%,檢測(cè)CLA耐藥的靈敏度為100%、特異性為98.7%,檢測(cè)LVX耐藥的靈敏度為100%、特異性為99.8%;因此,多重qPCR技術(shù)尤其適用于低載量和多重耐藥情況下H.pylori的檢測(cè).綜上,與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比,qPCR技術(shù)是一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、適用于多種標(biāo)本的檢測(cè)方法;多重qPCR技術(shù)適用范圍更廣泛.

2.1.4 擴(kuò)增阻滯突變系統(tǒng)(amplification refractory mutation system,ARMS)-實(shí)時(shí)熒光PCR: ARMS-實(shí)時(shí)熒光PCR通過設(shè)計(jì)ARMS引物的3’末端堿基落在突變基因位置,在擴(kuò)增時(shí),鏈延伸只在特定等位基因模板鏈上進(jìn)行,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)突變基因的特異性檢測(cè)[24].Zhang等[25]納入了150例H.pylori根除失敗的患者,分別用DNA測(cè)序、ARMS-實(shí)時(shí)熒光PCR和E-test法檢測(cè)胃粘膜標(biāo)本中H.pylori的CLA耐藥性,發(fā)現(xiàn)DNA測(cè)序結(jié)果與該技術(shù)的符合率為98.7%;E-test結(jié)果與該技術(shù)的符合率為97.1%.此后,開發(fā)了多重ARMS-實(shí)時(shí)熒光PCR方法,其靈敏度和特異性高、價(jià)格成本低、從樣本接受到分析完成僅需2 h.Li等[26]應(yīng)用多重ARMS-實(shí)時(shí)熒光PCR在192例H.pylori感染患者胃活檢標(biāo)本中檢測(cè)H.pylori的CLA、LVX耐藥性,共發(fā)現(xiàn)耐藥患者74例,其中23例(31.1%)耐CLA、21例(28.4%)耐LVX、30例雙重耐藥(40.5%);以Sanger測(cè)序?yàn)榻饦?biāo)準(zhǔn)時(shí),該技術(shù)診斷CLA耐藥的靈敏度、特異性均為100%;診斷LVX耐藥的靈敏度、特異性分別為98.04%和95.04%;診斷多重耐藥的靈敏度和特異性分別為100%和96.91%.Zhang等[27]也評(píng)估了該技術(shù)檢測(cè)H.pylori耐CLA、LVX的準(zhǔn)確性;以Sanger測(cè)序?yàn)榻饦?biāo)準(zhǔn)時(shí),該技術(shù)診斷CLA耐藥、LVX耐藥和多重耐藥的靈敏度分別為96%、95%和95%,特異性分別為93%、92%和95%.綜上,與傳統(tǒng)藥敏檢測(cè)相比,ARMS-實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)大大縮短了檢測(cè)時(shí)間;與Sanger測(cè)序相比,其成本更低;但ARMS引物設(shè)計(jì)依賴于明確的耐藥機(jī)制.

2.1.5 數(shù)字PCR(digital PCR,dPCR): dPCR是一種絕對(duì)核酸定量分析法,通過在擴(kuò)增過程終點(diǎn)觀測(cè)熒光信號(hào)并利用泊松分布計(jì)算基因擴(kuò)增陽性分區(qū)的比例,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)核酸的定量[28].與qPCR相比,dPCR無需使用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行分析,進(jìn)而節(jié)省時(shí)間[18].微滴式數(shù)字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)目前已用于檢測(cè)H.pylori的23S rRNA基因.Talarico等[29]應(yīng)用ddPCR技術(shù)檢測(cè)了102例患者福爾馬林固定石蠟包埋胃活檢組織標(biāo)本中的23S rRNA基因,45例(44%)有CLA耐藥基因,其中12例有耐藥等位基因、33例同時(shí)存在野生和耐藥等位基因.Sun等[30]比較了在胃活檢標(biāo)本中應(yīng)用E-test法、ddPCR技術(shù)與在糞便標(biāo)本中應(yīng)用ddPCR技術(shù)檢測(cè)H.pylori感染者CLA耐藥性的結(jié)果,發(fā)現(xiàn)三種檢測(cè)方法高度一致;并在49例H.pylori感染者中比較了在胃活檢與糞便標(biāo)本中分別應(yīng)用ddPCR技術(shù)檢測(cè)CLA耐藥的結(jié)果,發(fā)現(xiàn)35例(71%)患者CLA耐藥基因型一致,兩種方法檢測(cè)結(jié)果不一致的原因可能是糞便標(biāo)本中H.pylori載量低或假性混合基因型比例高.由此可見,ddPCR無需進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng),可直接在胃活檢或糞便標(biāo)本中檢測(cè)H.pylori的耐藥基因型,且檢測(cè)異質(zhì)性耐藥情況尤為方便,但在糞便中應(yīng)用該技術(shù)應(yīng)警惕假陰性結(jié)果.與傳統(tǒng)方法相比,ddPCR結(jié)果準(zhǔn)確且更加迅速、簡(jiǎn)便;與qPCR相比,其耗時(shí)短且結(jié)果準(zhǔn)確,但仍需進(jìn)一步研究證實(shí)其實(shí)用性.

2.2 DNA測(cè)序 DNA測(cè)序是檢測(cè)H.pylori耐藥基因的金標(biāo)準(zhǔn),通過對(duì)H.pylori進(jìn)行全基因組分析,可以檢測(cè)已知和未知耐藥基因突變,也可驗(yàn)證其他分子檢測(cè)方法的性能.Sanger測(cè)序?yàn)橐淮鷾y(cè)序技術(shù).Tian等[31]應(yīng)用Sanger測(cè)序和瓊脂稀釋法檢測(cè)了160例H.pylori感染者胃活檢標(biāo)本中的抗生素耐藥性,發(fā)現(xiàn)Sanger測(cè)序與瓊脂稀釋法檢測(cè)CLA、LVX與阿莫西林(amoxicillin,AMX)耐藥的一致性分別為84.8%、70.5%和72.7%.此后,開發(fā)了焦磷酸測(cè)序也已用于檢測(cè)H.pylori的23S rRNA基因突變.初等[32]建立了一種檢測(cè)CLA耐藥的焦磷酸測(cè)序方法,與Sanger測(cè)序相比,焦磷酸測(cè)序無需電泳、熒光標(biāo)記,是一種快速、靈敏度高的檢測(cè)方法.近年來,新一代測(cè)序(next-generation sequencing,NGS)技術(shù)是繼Sanger測(cè)序后的一次革命性技術(shù)進(jìn)展,已成為DNA測(cè)序的主要方法.與Sanger測(cè)序相比,NGS是一種強(qiáng)大的高通量方法,時(shí)間-成本效益比和測(cè)序產(chǎn)量極大增加;與傳統(tǒng)H.pylori耐藥性檢測(cè)方法相比,NGS結(jié)果更可靠[33,34].Subsomwong等[35]應(yīng)用NGS技術(shù)發(fā)現(xiàn)H.pylori抗生素耐藥基因發(fā)生了新突變,如23S rRNA的T248C位點(diǎn)突變和GyrA的D210N、K230Q等位點(diǎn)突變;Azzaya等[36]發(fā)現(xiàn)了23S rRNA的新突變位點(diǎn)A1410G、C1707T、A2167G、C2248T、C2922T.總之,DNA測(cè)序檢測(cè)H.pylori耐藥基因快速、準(zhǔn)確,但其制備過程嚴(yán)苛、檢測(cè)周期長(zhǎng)及測(cè)序儀器昂貴,限制了臨床應(yīng)用,故尚未在臨床上推廣.

2.3 FISH FISH的原理是先用半抗原或熒光素分子修飾的核苷酸分子標(biāo)記DNA(或RNA)探針,再將探針與目標(biāo)序列雜交,通過含熒光素分子的抗體與探針特異性結(jié)合,最后利用熒光顯微鏡直接觀察目標(biāo)序列在細(xì)胞核、染色體或切片組織中的分布情況[37].Demiray-Gürbüz等[38]分別應(yīng)用E-test法和FISH法在114例H.pylori培養(yǎng)陽性者中檢測(cè)CLA耐藥情況,研究發(fā)現(xiàn),E-test法檢測(cè)出耐藥患者23例(20.2%),FISH法檢測(cè)出耐藥患者32例(28.0%),兩種檢測(cè)方法一致性為89.5%.Vazirzadeh等[39]應(yīng)用E-test法和FISH法檢測(cè)了83例H.pylori培養(yǎng)陽性患者的CLA耐藥性,研究發(fā)現(xiàn),兩種方法檢測(cè)結(jié)果一致性為95%.此外,FISH技術(shù)在檢測(cè)H.pylori異質(zhì)性耐藥時(shí)更加便捷,單個(gè)活檢標(biāo)本上即可同時(shí)顯示敏感與耐藥菌群,直接獲得結(jié)果[40].由此可見,與傳統(tǒng)耐藥性檢測(cè)方法相比,FISH技術(shù)更加便捷、可靠及適用范圍更廣.此外,與PCR技術(shù)相比,FISH無需DNA制備,3 h即可獲得結(jié)果,可在熒光顯微鏡下直觀顯示CLA耐藥菌株,不易受DNA污染影響.總之,FISH檢測(cè)技術(shù)是一種快速、方便、準(zhǔn)確的耐藥性檢測(cè)方法,但其所需儀器價(jià)格高、獲取標(biāo)本方式單一、無法檢測(cè)除CLA外的抗生素耐藥性,故尚未廣泛用于臨床檢測(cè).

2.4 基因芯片 基因芯片的原理是將含有大量不同DNA或寡核苷酸片段的探針按規(guī)律排列在載體上,同時(shí)用熒光素標(biāo)記待測(cè)樣本核酸,然后將樣本與芯片探針雜交,通過計(jì)算機(jī)掃描分析芯片熒光信號(hào)強(qiáng)度,進(jìn)而獲取樣本核酸基因序列和表達(dá)水平信息.Yin等[41]在267例兒童患者的胃活檢標(biāo)本中應(yīng)用了基因芯片技術(shù),發(fā)現(xiàn)與藥敏試驗(yàn)相比,該技術(shù)診斷H.pylori的靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性分別是96.1%、85.0%和93.6%;檢測(cè)H.pylori耐藥性的結(jié)果表明,耐CLA的主要位點(diǎn)是2143A/G、耐LVX的主要位點(diǎn)是GyrA 91和GyrA 87;并對(duì)藥敏試驗(yàn)和基因芯片結(jié)果不一致的25個(gè)樣本行DNA測(cè)序,發(fā)現(xiàn)該技術(shù)檢測(cè)CLA、LVX耐藥性與DNA測(cè)序一致率均高達(dá)95%.Song等[42]建立了一種可同時(shí)檢測(cè)CLA、LVX耐藥性和CYP2C19多態(tài)性的可視化基因芯片,以DNA測(cè)序?yàn)榻饦?biāo)準(zhǔn)時(shí),發(fā)現(xiàn)該技術(shù)檢測(cè)CLA耐藥性的靈敏度、特異性及與DNA測(cè)序一致性分別為92.13%、93.75%和95.94%;當(dāng)該技術(shù)檢測(cè)LVX耐藥性時(shí),GyrA 87位點(diǎn)靈敏度、特異性及與DNA測(cè)序一致性分別為91.11%、98.20%和96.82%,GyrA 91位點(diǎn)靈敏度、特異性及與DNA測(cè)序一致性分別為91.23%、98.90%和98.26%.總之,基因芯片是一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確、快速的檢測(cè)方法,單張芯片即可一次性同時(shí)分析H.pylori對(duì)多種抗生素的多個(gè)耐藥基因突變位點(diǎn),但其價(jià)格昂貴、無法檢測(cè)到數(shù)目小于100拷貝的待測(cè)基因;因此,目前并不適用于臨床檢測(cè).可視化基因芯片為芯片技術(shù)的未來發(fā)展提供了新思路,準(zhǔn)確性與DNA測(cè)序相當(dāng),成本大幅下降,這為臨床推廣奠定了基礎(chǔ).

3 結(jié)論

H.pylori對(duì)抗生素的耐藥形勢(shì)嚴(yán)峻,通過耐藥性檢測(cè)實(shí)施個(gè)體化治療的重要性日益突顯.隨著分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展,檢測(cè)方法選擇眾多.傳統(tǒng)檢測(cè)方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力,未在臨床常規(guī)開展.分子生物學(xué)方法快速、準(zhǔn)確,在臨床研究中備受關(guān)注,但也并非完美.PCR的酶切、電泳步驟較繁瑣;測(cè)序技術(shù)的儀器造價(jià)昂貴;FISH只可檢測(cè)CLA耐藥性;基因芯片技術(shù)的基因模板數(shù)目需達(dá)最低要求.因此,臨床醫(yī)生在選擇檢測(cè)抗生素耐藥性方法時(shí),應(yīng)結(jié)合不同檢測(cè)方法的優(yōu)缺點(diǎn)、患者經(jīng)濟(jì)狀況和臨床實(shí)際等因素綜合考量,選擇適宜耐藥性檢測(cè)方法,以期減少H.pylori耐藥性并提高根除率.目前仍需開發(fā)快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、價(jià)廉的H.pylori抗生素耐藥性檢測(cè)方法.