王姿月,張子卉,吳文學(xué),彭 辰

(中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院,北京 100193)

猴痘主要流行于中非與西非地區(qū),但在2022年出現(xiàn)了由西非分支引起的大量非流行地區(qū)的病例,且存在明顯的人際傳播特點。從2022年1月1日至9月18日,來自世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)所有六個區(qū)域的105個國家或地區(qū)向世衛(wèi)組織報告了61 753例實驗室證實的猴痘病例和23例死亡病例,其中,確診病例中非洲的死亡率較高[1]。世衛(wèi)組織于2022年7月23日宣布全球不斷升級的猴痘暴發(fā)為“國際關(guān)注的突發(fā)公共衛(wèi)生事件”(PHEIC)。鑒于上述情況,建立高效快速且靈敏度高的猴痘病毒實驗室檢測方法并尋找有效的疫苗及藥物在病毒的防控上尤為重要。

1 猴痘病毒

猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)是正痘病毒屬的一種雙鏈DNA病毒,其外層由管狀物質(zhì)構(gòu)成,內(nèi)部為啞鈴樣芯髓,包含病毒DNA及若干蛋白質(zhì)。病毒大小為200～250 nm,具有復(fù)雜的對稱性,外觀呈磚形或卵圓形。MPXV約有19萬堿基對,在其基因組中檢測到190余個開放閱讀框(open reading frame,ORF),與其他正痘病毒核苷酸相似性超過90%,其特異性核酸序列位于5′-和3′-末端[2-3]?；诤锒徊《镜幕蛐图傲餍胁W(xué)研究,將其分為中非分支(MPXV-CB,現(xiàn)在命名為I分支)和西非分支(MPXV-WA,現(xiàn)在命名為IIa、IIb分支)[4-5]。MPXV-WA主要從喀麥隆西部流傳到塞拉利昂[6],而MPXV-CB主要從喀麥隆中部和南部流傳播至剛果共和國[7],二者的序列相似度為99.5%,但其毒力基因存在顯著差異,分別為BR-203、BR-209、COP-C3L b和COP-H5R、COP-A9L、COP-A50R和COP-A36R。據(jù)統(tǒng)計,MPXV-CB的毒性較低,致死率在1%～3%,而MPXV-WA致死率可達(dá)10%以上[8]。此外,腹腔內(nèi)注射MPXV-USA到嚴(yán)重合并免疫缺陷BALB/c小鼠中導(dǎo)致的平均死亡時間比剛果盆地毒株更長[5]。

痘病毒對人與動物具有較大影響,可被分為昆蟲痘病毒亞科(包括4屬31種)和脊椎動物痘病毒亞科(包括18屬52種)。脊椎動物痘病毒亞科中,除軟疣病毒屬外的各屬病毒均對動物均有致病性。在2021年的一項研究中,流行病及傳染病學(xué)家對于887種人獸共患病的病原體進行了長期監(jiān)測并根據(jù)其風(fēng)險性進行了排名,結(jié)果顯示痘病毒屬中的猴痘病毒和牛痘病毒分別排在第24與28位[9]。

MPXV的自然宿主包括繩松鼠、樹松鼠、岡比亞袋鼠和睡鼠等嚙齒類動物和草原犬等哺乳動物[10],可經(jīng)過直接接觸途徑在人與動物之間發(fā)生傳播,潛伏期為4～21 d[11-13]。人與人之間可能通過接觸感染者的唾液、體液、糞便、呼吸道飛沫、病變組織及滲出物和受污染的物品發(fā)生傳播,并可通過接觸或食用受感染的動物及其肉類實現(xiàn)動物與人間的傳播[11,14-16]。1958年,MPXV被首次分離于哥本哈根丹麥國家血清研究所(Statens Serum Institut)出現(xiàn)水皰的食蟹猴[17]。1970年,剛果共和國(DRC)報告了首例人感染MPXV的案例[18]。此后,1970—1990年,非洲共記錄了400余名猴痘患者,且多數(shù)來源于DRC[19]。2022年6月,出現(xiàn)了首例由猴痘患者傳染給寵物狗的案例,在患者出現(xiàn)癥狀12 d后其雄性意大利灰狗出現(xiàn)了皮膚黏膜病變,對病毒進行基因序列分析后發(fā)現(xiàn)患者與其寵物狗來源的病毒基因序列表現(xiàn)出100%的相似性,均屬于hMPXV-1 B.1譜系,該病毒自2022年4月以來一直在非流行國家傳播[20]。此外,MPXV存在垂直傳播的可能性,但相關(guān)數(shù)據(jù)有限[21]。

2 診斷方法

2.1 臨床診斷

猴痘病毒的易感動物包括草原犬及岡比亞袋鼠等。其中,草原犬在感染后可出現(xiàn)厭食、消瘦、打噴嚏、咳嗽、眼皮腫脹和產(chǎn)生鼻腔分泌物的癥狀,在舌頭和眼瞼上形成潰瘍性病變,嚴(yán)重時可出現(xiàn)支氣管肺炎,并在肝、脾出現(xiàn)炎癥及壞死[22]。3只岡比亞袋鼠實驗室感染猴痘病毒后,臨床上出現(xiàn)了不同程度的嗜睡、厭食、體重減輕和皮膚病變,并在口腔中形成囊泡和牙齦壞死[23]。

猴痘病毒感染也可引起人體發(fā)熱、頭痛、咽痛、眼瞼結(jié)膜炎及淋巴結(jié)腫脹等癥狀,通常在前驅(qū)癥狀顯現(xiàn)后1～5 d時出現(xiàn)皮疹,存在時間持續(xù)2～4周[24]。皮疹可能分布于面部、口腔、眼部、手掌、足底及生殖器周圍組織,首先表現(xiàn)為斑丘疹(1～2 d),轉(zhuǎn)變?yōu)閮?nèi)含透明液體的囊泡(2～5 d),隨后是豌豆大小的硬性膿皰(5～7 d),最終結(jié)痂脫落(7～14 d)[25],待病變組織完全脫落并長出健康組織后,認(rèn)為該病例不再具有傳染性。此外,猴痘的并發(fā)癥可能包括繼發(fā)感染、呼吸窘迫、支氣管肺炎、敗血癥、腦炎、角膜感染導(dǎo)致的視力喪失、胃腸道受累、嘔吐和脫水腹瀉等[26]。

單純基于臨床癥狀對猴痘進行的診斷具有高敏感性(93%～98%)以及低特異性(9%～26%)的特點[11]。本文將臨床上可產(chǎn)生皰疹的猴痘和水痘、天花等疾病在病變的發(fā)生發(fā)展過程上進行了對比,可見,相較于水痘與天花,猴痘病毒通常侵襲患者的黏膜組織及以面部和四肢為主的體表,會對手掌和腳掌的皮膚產(chǎn)生影響,同時形成淋巴結(jié)病變(詳見表1[22-25,27])。

表1 猴痘、水痘與天花的臨床鑒別[22-25,27]

2.2 實驗室診斷

確診應(yīng)依賴實驗室診斷方法,通常采集發(fā)病患者或動物具有較強傳染性的皮膚病變組織用于猴痘病毒的實驗室檢測,例如水皰液、滲出物或結(jié)痂等[22,28],可通過用力摩擦病變組織,以獲取足夠的病毒DNA[29]。由于猴痘病毒病導(dǎo)致的病毒血癥持續(xù)時間很短,通常不使用血液作為實驗室檢測的樣本[30]。目前猴痘病毒診斷方法包括電子顯微鏡檢查、核酸擴增檢測(nucleic acid amplification test,NAAT)、RT-PCR、重組酶聚合酶擴增(recombinase polymerase amplification,RPA)、CRISPR-Cas12a檢測技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、免疫印跡試驗(Western blot)、免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry,IHC)、基因測序技術(shù)、限制片段長度多態(tài)性分析(restriction fragment length polymorphism,RFLP)和病毒分離培養(yǎng)等,在實際應(yīng)用中分別具有不同的優(yōu)缺點。

2.2.1 病毒分離培養(yǎng) MPXV可以在哺乳動物細(xì)胞系和雞胚的絨毛膜中培養(yǎng),但操作過程費時費力[31]。病毒的分離培養(yǎng)是傳染病診斷的金標(biāo)準(zhǔn),但猴痘病毒的分離培養(yǎng)具有較高風(fēng)險性,需要在適當(dāng)?shù)膶嶒炇壹鞍踩O(shè)施中進行規(guī)范操作,且對環(huán)境的條件較嚴(yán)格,因此,世界衛(wèi)生組織(WHO)沒有建議將其作為常規(guī)診斷方法[29,32]。

2.2.2 分子生物學(xué)診斷方法 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的檢測方法,具有較好的準(zhǔn)確性與靈敏度[3]。目前已開發(fā)了幾種用于檢測猴痘病毒的基因,包括包膜蛋白基因B6R、B7R,DNA聚合酶基因E9L,結(jié)合蛋白基因C3L,DNA依賴性RNA聚合酶亞基18基因(rpo18),F3L基因和N3R基因等[30,33-34]。可采用具有高靈敏度的雙PCR組合分析對MPXV進行檢測,基于TaqMan的檢測方法可以特異性地將正痘病毒的DNA聚合酶基因與其它痘病毒進行區(qū)分,針對MPXV B6R基因的雜交試驗可以將MPXV與所有其他正痘病毒區(qū)分開[35]。根據(jù)美國疾控中心(Centers for Disease Control and Prevention,CDC)痘病毒和狂犬病科(Poxvirus and Rabies Branch,PRB)于2022年6月6日發(fā)布的最新診斷程序,MPXV DNA可通過實時PCR進行一般檢測,使用一對擴增MPXV通用基因的引物和一對擴增人類DNA的引物作為質(zhì)量控制[36]。實時熒光定量PCR作為目前實驗室診斷的最佳方法,仍存在一些弊端。由于應(yīng)當(dāng)確保試驗的全程嚴(yán)格遵守對MPXV采樣、診斷等的規(guī)定和生物安全要求,為此,需要準(zhǔn)確地從病變組織中采集樣本,隨后存儲于病毒運輸介質(zhì)(VTM),避免人為操作對樣本質(zhì)量造成影響,進而干擾試驗結(jié)果[37]。試驗人員應(yīng)正確使用的個人防護設(shè)備(PPE)并在P2級實驗室中進行試驗,以降低暴露風(fēng)險[3]。嚴(yán)格的生物安全要求限制了RT-qPCR作為MPXV檢測方法的實時性與廣泛性[3]。此外,重組酶聚合酶擴增(RPA)已被證明可用于替代RT-PCR,通過靶向腫瘤壞死因子結(jié)合蛋白基因,每微升可完成16個DNA分子的檢測,具有較高的敏感性[38]。

相較于RT-qPCR等檢測方法,基于CRISPR-Cas12a的猴痘病毒檢測方法對檢測成本、時間及環(huán)境的限制更少,具有快速、準(zhǔn)確、易于實施的特點。Sui等[39]設(shè)計了猴痘病毒DNA熒光檢測系統(tǒng),在DNA靶分析物存在的情況下,在3′端標(biāo)記為6-FAM和5′端標(biāo)記為BHQ-1的G-quadruplex寡核苷酸通過Cas12a介導(dǎo)的側(cè)支降解,從而產(chǎn)生熒光信號。而在沒有DNA靶分析物的情況下,Cas12a不能切割熒光標(biāo)記的G-quadruplex寡核苷酸,使其在100 mmol·L-1K+條件下可以形成G-quadruplex結(jié)構(gòu),導(dǎo)致熒光猝滅。結(jié)果顯示2 min內(nèi)即可檢測到FAM熒光信號,10 min內(nèi)即可形成強信號,這表明該熒光系統(tǒng)具有潛在的快速檢測能力。使用該系統(tǒng)檢測F3L和N3R基因時,在相同濃度范圍內(nèi)(0.2 fmol·L-1～100 nmol·L-1)F3L和N3R基因的DNA樣本經(jīng)該系統(tǒng)處理后,在低至2 fmol·L-1的濃度條件下,與猴痘DNA一起增強的FAM熒光信號具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),具備高靈敏度。

對MPXV進行測序和分析有助于了解病毒的起源和流行病學(xué)特征等,可以使用Sanger或下一代測序(NGS)方法生成GSD[40]。利用下一代測序技術(shù)進行的全基因組測序是表征猴痘病毒和其他正痘病毒的金標(biāo)準(zhǔn),但其成本較高,且下游處理需要強大的計算能力,目前使用范圍有限[41]。MinION納米孔測序技術(shù)已經(jīng)產(chǎn)生了足夠的序列質(zhì)量,可以直接從病變中完全測序MPXV[1]。Wolf等[42]對暴露于天花疫苗ACAM2000及猴痘病毒zaire-79前后的小鼠循環(huán)CD4+和CD8+T細(xì)胞群進行了采樣,通過對245個血液樣本進行分析獲得了大于2.8×106種獨特的TCRβ克隆型,并借此生成了具有廣泛TCRb序列的數(shù)據(jù)庫,經(jīng)分析進而確定了病毒特異性T細(xì)胞應(yīng)答,并確定了一個公共疫苗相關(guān)TCRb序列(VATS)庫,這些序列僅與接種過天花疫苗的樣本相關(guān)。VATS文庫用于訓(xùn)練診斷分類器,該分類器跟蹤隨時間推移在血液中循環(huán)的病毒特異性TCRs,并以99%的準(zhǔn)確率正確區(qū)分接種過疫苗和未接種過疫苗的樣本,包括接種疫苗后9個月的小鼠樣本。診斷分類器的準(zhǔn)確性通過檢測感染高度相關(guān)MPXV的無關(guān)小鼠隊列進行了驗證,以96%的準(zhǔn)確率區(qū)分未感染MPXV的小鼠和感染MPXV的小鼠。經(jīng)疫苗特異性CD8+T細(xì)胞四聚體分選和ACAM2000輔助體外培養(yǎng),證實VATS文庫含有疫苗特異性TCRb序列。該診斷方法能通過識別低頻病毒特異性TCR序列來確定個體之前的病原體暴露情況[42]。

2.2.3 血清學(xué)診斷方法 酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和間接免疫熒光試驗(IFA)是應(yīng)用于MPXV檢測的兩種較為常見的血清學(xué)檢測方法。2003年,對美國36例猴痘確診病例使用了IgM和IgG的ELISA檢測方法,IgG和IgM反應(yīng)率分別為29/36和34/36[43]。由于猴痘病毒與正痘病毒屬的其他病毒之間普遍存在抗原交叉反應(yīng),注射疫苗等可能會導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性結(jié)果,因此僅依靠血清學(xué)檢測結(jié)果不足以對猴痘病毒進行診斷。但在大規(guī)模暴發(fā)或研究相關(guān)疫苗的群體保護效力時,ELISA仍然是流行病學(xué)調(diào)查的最佳選擇[43]。

空斑減少中和試驗(plaque reduction neutralization test,PRNT)可用于評估疫苗接種期間病毒的中和反應(yīng)。使用已感染動物的未免疫血清和免疫血清作為陰性和陽性對照,通過點對點線性回歸分析,根據(jù)與病毒控制相比產(chǎn)生50%噬斑減少(PRNT50)的測試血清的互惠稀釋度,計算中和滴度[44]。

2.2.4 其它診斷方法 目前尋找快速、靈敏和低成本的檢測方法作為護理點分析(point of care testing,POCT)的有效替代方法備受關(guān)注。橫向流動分析(lateral flow assay,LFA)是基于乳膠凝集試驗的用于生物傳感和量化多種分析物的方法[45]。在Townsend等[46]報道的一項調(diào)查中,對市售的Tetracore Orthopox BioThreat?LFA對MPXV、VACV和OPV的檢測方法進行了評估。該裝置使用與抗VACV抗體偶聯(lián)的AuNPs作為探針,將抗VACV抗體固定在TL上以捕獲檢測到的OPV,此法的檢測限為107pfu·mL-1,在11份非OPV樣本中出現(xiàn)了1份假陽性結(jié)果。可用于MPXV等痘病毒的篩查和檢測。

3 預(yù)防措施

由于猴痘具有較長的潛伏期,因此在感染初期接種疫苗有助于減輕疾病癥狀,甚至預(yù)防疾病。當(dāng)前MPXV的易感人群主要是未接種天花疫苗的群體,占世界總?cè)丝?0%～96%[27]。此外,猴痘感染的死亡病例與天花相似,大多出現(xiàn)于兒童[47]。

具有復(fù)制能力的減毒活疫苗存在一定程度的禁忌癥與副反應(yīng),但仍是用于天花病毒預(yù)防的主要疫苗類別。猴痘病毒與天花病毒同屬正痘病毒屬,具有相同的遺傳及抗原特征,因此接種天花疫苗可使機體對猴痘病毒產(chǎn)生一定程度的免疫保護。據(jù)現(xiàn)有數(shù)據(jù)可知,天花疫苗接種在預(yù)防MPXV方面有85%的有效性,未接種疫苗的人的病例死亡率為9.8%[12]。一項免疫原性臨床研究和來自動物研究的診療數(shù)據(jù)證明了天花疫苗預(yù)防猴痘的有效性。ACAM2000和JYNNEOS是兩種美國目前批準(zhǔn)可用于猴痘預(yù)防的疫苗。建議存在猴痘病毒感染風(fēng)險且在過去3年內(nèi)未接種天花疫苗的人群進行接種。根據(jù)美國疾控中心的建議,該疫苗應(yīng)在接觸后4 d內(nèi)接種,以防止發(fā)生猴痘感染。如果在暴露后4～14 d內(nèi)接種疫苗,可減輕猴痘的癥狀,但尚不明確其用于猴痘預(yù)防的效果。根據(jù)世衛(wèi)組織關(guān)于猴痘疫苗免疫的臨時指南,部分國家在1980年天花根除計劃后所儲備的部分第一代天花疫苗已不符合當(dāng)前的安全及生產(chǎn)要求,因此不建議使用。該指南建議使用已被批準(zhǔn)用于猴痘病毒預(yù)防的更安全的第二、三代天花疫苗,如MVA-BN株天花疫苗等[48]。

天花疫苗ACAM2000 是一種從Dryvax(Wyeth)中提取的噬斑提純產(chǎn)物,被美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準(zhǔn)用于天花的主動免疫接種[49]。自2015年以來,免疫實踐咨詢委員會(ACIP)建議對直接處理或培養(yǎng)牛痘苗病毒的實驗室人員接種ACAM2000常規(guī)疫苗。ACAM2000在非洲綠猴腎(Vero)細(xì)胞中生長,經(jīng)測試不含已知的外來因子[50-52]。經(jīng)臨床試驗的安全性數(shù)據(jù)表明,ACAM2000的安全性與Dryvax相似。ACAM2000的疫苗病毒可通過接觸接種部位病變或滲出物從疫苗接種者向未接種者傳播,因此在免疫功能低下及慢性皮膚病(如特應(yīng)性皮炎或濕疹)人群中禁用[49]。ACAM2000可致極少數(shù)接種者出現(xiàn)嚴(yán)重藥物不良反應(yīng)(ADRs),包括心肌炎、泛發(fā)性牛痘和接種后腦炎等[53]。

JYNNEOS是一種由MVA-BN生產(chǎn)的活病毒疫苗,由該毒株在原代雞胚成纖維細(xì)胞中傳代超過570代后獲得,其復(fù)制局限于禽類和特定的哺乳動物細(xì)胞,不能在人類細(xì)胞中復(fù)制[54-55]。這種第三代天花疫苗的商品名稱包括Imvamune和Imvanex等,由巴伐利亞北歐A/S公司生產(chǎn),可用于預(yù)防18歲及以上成年人的天花和猴痘病。JYNNEOS疫苗僅用于皮下注射,以單劑量(0.5 mL)小瓶的形式提供,兩劑注射間隔4周,在接種第2針疫苗兩周后即可獲得完整的免疫。副作用包括注射部位產(chǎn)生瘙癢、疼痛、紅腫等反應(yīng),同時對疫苗成分或其添加物(慶大霉素、環(huán)丙沙星、雞蛋蛋白等)嚴(yán)重過敏是接種的禁忌癥。該疫苗在歐洲被批準(zhǔn)以IMVANEX?的商品名用于天花,盡管英國一直在適應(yīng)癥范圍之外用于猴痘病例的治療[56]。

弱毒活疫苗LC16 m8是一種毒性和復(fù)制能力較低的B5R突變株,其主要通過細(xì)胞外包膜病毒(EEV)抗原B5R的突變從而阻斷蛋白的表達(dá),以達(dá)到減弱該毒株毒力的作用[57]。LC16 m8疫苗注射后未見嚴(yán)重的不良反應(yīng)或心電圖異常等[58],大多數(shù)不良反應(yīng)為腋下淋巴結(jié)腫大與低燒,其中初次免疫受試者出現(xiàn)不良反應(yīng)的概率分別為15.5%和2.6%,曾接種過天花疫苗的受試者出現(xiàn)不良反應(yīng)的概率分別為3.5%和1.4%[59]。使用老鼠、兔和獼猴三種動物模型進行研究的結(jié)果表明,LC16 m8具有一定程度的保護力,且具有良好的安全性,神經(jīng)毒性低,相較于第一代天花疫苗,接種后致使機體產(chǎn)生的不良反應(yīng)少,可用于存在免疫缺陷的動物[60]。

mRNA疫苗基于具有高精度和特異性的mRNA分子,可以觸發(fā)特定的免疫反應(yīng)并限制傳統(tǒng)疫苗的常見副作用,具有更精確和有針對性的特點[61-62]。但由于mRNA分子的穩(wěn)定性有限,給藥后體內(nèi)核酸的酶促降解率很高,且細(xì)胞攝取量具有局限性[56,63-64],尚需進一步研究。

4 抗病毒藥物

猴痘屬于自限性疾病,大多數(shù)人與動物均無需醫(yī)療干預(yù)即可恢復(fù)。目前對感染者主要給予支持治療以緩解其臨床癥狀,并對感染期間出現(xiàn)的繼發(fā)性細(xì)菌感染進行癥狀管理和治療[32,57]。針對重癥病例可使用特考韋瑞(tecovirimat)等藥物,但尚無對其治療作用的明確研究。

特考韋瑞(也稱為TPOXX或ST-246)是一種通過口服或靜注給藥的小分子細(xì)胞內(nèi)病毒釋放抑制劑,目前已證實對猴痘、水痘、牛痘等正痘病毒具有特異性療效[36,65],并于2022年獲得了歐洲藥品管理局(EMA)對其用于猴痘治療的許可,但尚未被廣泛應(yīng)用[66]。該藥物禁用于存在嚴(yán)重腎功能不全(肌酐清除率低于30 mL·min-1)的患者,常見的副作用是頭痛、惡心、腹痛和嘔吐[32,67-69]。特考韋瑞可抑制VARV VP37蛋白及其在其它正痘病毒中同源蛋白的合成[70],該蛋白是合成和釋放包膜病毒所必須的,與正痘病毒的毒力增強有關(guān)[71-72]。但其單點突變會導(dǎo)致產(chǎn)生抗病毒耐藥性[73]。在Russo等[74]使用ACAM2000接種聯(lián)合特考韋瑞治療小鼠的研究中,使用特考韋瑞的動物相較于未使用的動物,其接種部位出現(xiàn)病變的嚴(yán)重程度和緩解時間均有所降低。在對獼猴感染猴痘病毒3 d后接種ACAM2000疫苗并給予特考韋瑞的研究中,無論是否給予ACAM2000,接受特考韋瑞治療的所有動物均存活。所有接受特考韋瑞治療的MPXV感染動物在再次受到MPXV侵染后存活,沒有任何外部疾病體征,這表明無論是否同時接種ACAM2000疫苗[54],特考韋瑞都不會干擾對MPXV感染的完整免疫保護的發(fā)展[43,74]。

西多福韋(cidofovir,CDV)是一種用于獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)患者巨細(xì)胞病毒(CMV)視網(wǎng)膜炎的抗病毒藥物,通過抑制DNA聚合酶活性發(fā)揮其抗病毒活性[1,64]。西多福韋只能作為靜脈制劑進行給藥,由于該藥可能導(dǎo)致腎損傷,因此應(yīng)在使用期間需配合使用丙諾西酸并通過靜脈注射生理鹽水。

布林西多福韋(brincidofovir,BCV)是西多福韋的脂質(zhì)共軛物,具有口服生物可利用性[75],相較于西多福韋,BCV的腎毒性較低,具有更好的安全性與抗病毒活性[53],作為一種正痘病毒核苷酸類似物DNA聚合酶抑制劑,BCV已被批準(zhǔn)用于治療成人和兒童患者的人類天花疾病,可用的劑型包括片劑(100 mg)和口服混懸液(10 mg·mL-1)。目前,沒有足夠的數(shù)據(jù)表明其在治療人類猴痘時的有效性,但經(jīng)過廣泛評估已證實對痘病毒具有良好療效[76]。BCV對免疫功能低下患者的療效可能會降低,常見的胃腸道不良反應(yīng)包括腹瀉、惡心、嘔吐和腹痛等。BCV可增加血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT或AST)和血清膽紅素含量,因此在使用前通常需要進行肝功能測試[64]。在一些猴痘病例中使用藥物的有限研究表明,特考韋瑞比BCV更有效,因為后者可能對F13L(高度保守的病毒膜蛋白)和E9L(DNA聚合酶)突變產(chǎn)生耐藥性[32,77-78]。

注射免疫球蛋白作為一種人工被動免疫療法,可為有病毒暴露風(fēng)險的人及時提供免疫保護。純化的牛痘病毒(VACV)免疫球蛋白(VIG)可用于治療天花疫苗接種所致的并發(fā)癥[79],但可能由于針對靶向抗原的抗體含量少,導(dǎo)致療效很差[80]。重組VACV免疫球蛋白(rVIG)在一定程度上對VIG進行了改進,它包括了26種針對不同VACV蛋白的特異性IgG抗體,同時具有較VIG更高的特異性與活性[81]。Parker等[80]通過對MPXV、VACV、CPXV和ECTV進行斑塊中和試驗,證明rVIG對上述正痘病毒均表現(xiàn)出顯著的抗病毒活性,在體外表現(xiàn)出優(yōu)異的功效,其中MPXV的rVIG的EC50值低于VIG約2倍。

銀納米顆粒已被證明對MPXV等病毒具有體外抗病毒活性,是良好的抗病毒劑。通常通過對病毒與宿主細(xì)胞之間的結(jié)合進行物理抑制以發(fā)揮作用[81]。Rogers等[60]對帶有多糖涂層的AgNPs針對MPXV的抗病毒活性的評估表明,大小約為10 nm的AgNP可以有效抑制病毒活性。

吉非替尼(gefitinib)是一種口服小分子酪氨酸激酶抑制劑(TKI),商品名為IressaTM,用于EGFR酪氨酸激酶激活突變的非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者的治療[46,62]?？娠@著抑制正痘病毒的復(fù)制,可以通過劑量依賴性與非毒性的方式抑制痘病毒在受感染的上皮細(xì)胞中傳播[36]。研究顯示,PD153035、凡德他尼(vandetanib)和吉非替尼等酪氨酸激酶抑制劑對正痘病毒DNA的復(fù)制具有顯著抑制作用,其中吉非替尼對于VACV和CPXV DNA復(fù)制的抑制作用最顯著。同時,吉非替尼會使正痘病毒病毒感染的單層細(xì)胞培養(yǎng)中病毒噬斑的大小縮小,但不會顯著減少,與其對病毒傳播的抑制、使EGFR和ERK1/2的磷酸化受損以及VACV蛋白的減少相關(guān)[82]。

其他有待研究的可能具有抗猴痘活性的潛在抗病毒藥物包括C-CA3-ADO和C3-NPCA等S-腺苷同型半胱氨酸水解酶抑制劑,以及利巴韋林和硫唑呋林作為一磷酸肌氨酸脫氫酶(IMP)抑制劑[83]。

5 小 結(jié)

猴痘是一種由猴MPXV引起的人畜共患病,MPXV屬于痘病毒科、脊椎動物痘病毒亞科、正痘病毒屬。20世紀(jì)70年代初,首次報告了人類病例,從那時起,確診的猴痘病例有所增加,或出現(xiàn)了感染的暴發(fā)[14,84-85]。在2020年以前,猴痘作為一種地方性流行病,其流行特點為散發(fā)或局部暴發(fā)。中非和西非國家,如尼日利亞、中非共和國、科特迪瓦、喀麥隆、剛果民主共和國、加蓬、利比里亞和塞拉利昂等是報告病例較多的地區(qū)。在2020年以后,非流行地區(qū)出現(xiàn)了大量與地方性旅行史無關(guān)的猴痘病例,這些病例表現(xiàn)出人際傳播的特點,同時可能已出現(xiàn)社區(qū)內(nèi)的多代傳播[86]。

MPXV可通過與嚙齒類及靈長類等已感染動物的接觸進行傳播。因此避免與生病或死亡野生動物的無防護接觸,可降低其傳播的風(fēng)險。由于目前暫無被明確證實有效的MPXV感染治療方案,主要采取對感染者的隔離和感染動物的撲殺。此外,MPXV在56 ℃ 30 min或60 ℃ 10 min即可滅活,因此在猴痘的流行國家中獵捕并食用岡比亞袋鼠等各種野生易感動物時應(yīng)徹底煮熟[22]。

目前主要通過臨床診斷結(jié)合實驗室檢測方法對猴痘進行診斷,主要的實驗室檢測方法包括病毒的分離培養(yǎng)、分子生物學(xué)檢測方法及血清學(xué)檢測方法等,根據(jù)不同檢測方法的特點具有不同的優(yōu)缺點。目前可用于猴痘預(yù)防的疫苗包括ACAM2000和JYNNEOS兩種天花疫苗、弱毒活疫苗LC16 m8及mRNA疫苗,并有特考韋瑞、西多福韋、布林西多福韋、牛痘病毒免疫球蛋白、銀納米顆粒及吉非替尼等具有抗猴痘病毒潛力的藥物有待進一步研究。面對當(dāng)前猴痘的流行,應(yīng)當(dāng)建立一種快速、便捷的MPXV檢測方法,適用于流行病學(xué)大規(guī)模篩查。同時降低檢測對設(shè)備環(huán)境的要求,簡化樣品的運輸環(huán)節(jié),進行就地即時檢測。對于MPXV檢測能力和預(yù)防接種的改進,有助于提高群體對于可能出現(xiàn)大規(guī)模流行傳染病的應(yīng)對能力,盡量減少其傳播。