王小萍,劉 飛,李明紅,張 廳,賴 謙,劉 曉,熊元元,唐曉波,李春華,王 云

(1.四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所,成都 610066;2.瀘州市經(jīng)濟(jì)作物站,四川 瀘州 646000;3.古藺縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局,四川 古藺 646500)

【研究意義】茶樹屬多年生異花授粉經(jīng)濟(jì)作物,起源于我國(guó)云貴高原,栽培歷史悠久,主要種植于我國(guó)華南、西南、江南以及江北茶區(qū)。四川盆地位于我國(guó)西南腹地,位于26°03′～34°19′ N,97°21′～108°31′ E,屬西南茶區(qū),地勢(shì)西高東低,氣候、生態(tài)類型復(fù)雜多樣,造就了區(qū)域內(nèi)豐富的茶樹種質(zhì)資源,包括地方品種、有性群體種、野生茶樹等。四川省野生茶樹主要分布在金沙江沿岸以及龍門、邛崍山脈一帶[1]。野生茶樹具有品質(zhì)特異、抗性強(qiáng)的特點(diǎn),是茶樹育種重要的物質(zhì)基礎(chǔ),因此研究野生茶樹的演化進(jìn)程、群體遺傳結(jié)構(gòu),明確野生茶樹的遺傳多樣性和親緣關(guān)系,對(duì)優(yōu)良茶樹品種的選育具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】單核苷酸多態(tài)性(SNP)是基于簡(jiǎn)化基因組測(cè)序(GBS)技術(shù)發(fā)展起來(lái)的第3代最具優(yōu)勢(shì)的分子標(biāo)記技術(shù),具有簡(jiǎn)單、快速、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定遺傳、便于檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)[2]。張鵬等[3]利用SNP芯片技術(shù)研究107份云南玉米自交系,發(fā)現(xiàn)云南地區(qū)玉米種質(zhì)資源遺傳基礎(chǔ)豐富,可創(chuàng)建新的具有良好應(yīng)用潛力的雜交優(yōu)勢(shì)群。孫倩等[4]采用SNP和Indel標(biāo)記揭示了巴西木薯的遺傳多樣性。周新桐等[5]利用GBS測(cè)序技術(shù)構(gòu)建了甘藍(lán)型油菜連鎖圖譜,并對(duì)油菜粉色花性狀進(jìn)行了QTL定位。Hou等[6]基于GBS測(cè)序技術(shù)對(duì)信陽(yáng)藍(lán)殼雞面部色素性狀進(jìn)行了全基因組關(guān)聯(lián)分析,定位到10個(gè)與面部色素性狀緊密關(guān)聯(lián)的SNP標(biāo)記。周艷春等[7]利用SNP標(biāo)記對(duì)93份無(wú)芒雀麥種質(zhì)資源產(chǎn)量性狀進(jìn)行全基因組關(guān)聯(lián)分析,篩選出33個(gè)核心SNP(P<0.001),有利于縮短無(wú)芒雀麥的育種進(jìn)程。由此可見,GBS測(cè)序技術(shù)研究結(jié)果可靠,已廣泛應(yīng)用于動(dòng)植物遺傳多樣性分析、群體遺傳結(jié)構(gòu)分析、QTL定位、遺傳圖譜構(gòu)建以及全基因組關(guān)聯(lián)分析等研究領(lǐng)域,且研究結(jié)果可靠。【本研究切入點(diǎn)】古藺縣位于四川省南部邊緣,位于27°41′～28°20′ N,105′34′～106°20′ E,與貴州畢節(jié)縣、赤水縣相鄰。前期調(diào)查發(fā)現(xiàn),古藺縣蘊(yùn)含豐富的野生茶樹,多以喬木、小喬木為主,樹徑多大于0.3 m,最大可達(dá)2.0 m,且這些野生茶樹具有較強(qiáng)的抗性或優(yōu)異的品質(zhì)性狀,是茶樹新品種選育的寶貴資源。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】為分析古藺當(dāng)?shù)匾吧铇涞倪z傳多樣性與群體遺傳結(jié)構(gòu),揭示其遺傳分化特征,本研究以65份野生茶樹為研究對(duì)象,利用GBS測(cè)序技術(shù),基于獲得的SNP分子標(biāo)記研究參試茶樹的遺傳多樣性和群體遺傳結(jié)構(gòu),以期為四川省茶樹種質(zhì)創(chuàng)新、優(yōu)良品種選育等提供理論依據(jù),同時(shí)也為今后優(yōu)良性狀基因深度挖掘提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試野生茶樹共65份(表1),其中古藺野生茶樹49份(以G1、G2、G3......表示)、敘永野生茶樹5份(以X1、X2、X3......表示)、合江野生茶樹1份(以H1表示)、崇州枇杷茶4份(以CP1、CP2、CP3......表示)、雷波野生茶4份(以LB1、LB2、LB3......表示)、云南野生茶樹2份(以YD1、YD2表示)。于2019年9月取參試材料新鮮成熟葉片,-80 ℃液氮冷凍保存用于GBS測(cè)序。

表1 65份野生茶樹資源

1.2 茶樹基因組DNA提取及建庫(kù)測(cè)序

采用改良CTAB法提取茶樹基因組DNA,使用Qubit和Nanodrop檢測(cè)DNA質(zhì)量。質(zhì)檢合格的基因組DNA由基迪奧生物科技公司進(jìn)行30×的GBS測(cè)序,利用Novaseq6000測(cè)序儀平臺(tái),按照GBS實(shí)驗(yàn)流程,對(duì)基因組DNA進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切,加上帶barcode的測(cè)序接頭,對(duì)樣本進(jìn)行混合,構(gòu)建小片段文庫(kù)(250～550 bp),采用PE125雙末端測(cè)序。

1.3 SNP與InDel標(biāo)記檢測(cè)

用 FASTP (版本 0.18.0)[8]對(duì) Illumina 平臺(tái)的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行過(guò)濾,過(guò)濾標(biāo)準(zhǔn)如下:①去除含有未知核苷酸(N)≥10%的 reads;②去除低質(zhì)量reads(質(zhì)量值Q≤10 的堿基數(shù)占整條read的50%以上);③去除含接頭的reads。過(guò)濾后的clean reads 用于組裝分析。使用比對(duì)軟件 BWA(v0.7.12)[9]采用mem算法將過(guò)濾后的reads 比對(duì)到參考基因組上,比對(duì)參數(shù)為-k32-M;比對(duì)結(jié)束后使用軟件 picard(版本 1.129)對(duì)結(jié)果進(jìn)行標(biāo)記,并使用變異檢測(cè)軟件 GATK(版本 3.4-46)[101]進(jìn)行群體變異檢測(cè),利用ANNOVAR(版本2)[11]對(duì)檢測(cè)出的變異進(jìn)行功能注釋。

1.4 野生大樹茶遺傳多樣性與遺傳結(jié)構(gòu)分析

采用POPGENE軟件計(jì)算各地區(qū)茶樹遺傳多樣性參數(shù):多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)(PLN)、多態(tài)位點(diǎn)百分比(PPL)、有效等位基因數(shù)(Ae)、觀測(cè)等位基因數(shù)(Na)、最小等位基因頻率(Maf)、觀測(cè)雜合度(Ho)、期望雜合度(He)以及多態(tài)信息含量(PIC)和Shannon’s指數(shù);利用VCFtools軟件[12]計(jì)算各居群的群體分化指數(shù)(Fst)。采用Plink和Admixture軟件[13]進(jìn)行群體結(jié)構(gòu)分析,估算出最佳的群體亞群數(shù)。

根據(jù)所得到的SNP信息,計(jì)算樣品間距離,對(duì)樣品進(jìn)行聚類分析,利用treebest軟件[14]通過(guò)鄰接法(Neighbor-joining methods)構(gòu)建SNP進(jìn)化樹。并基于個(gè)體間的SNP差異程度,利用R語(yǔ)言包(http://www.r-project.org/)進(jìn)行主成分分析,根據(jù)各個(gè)樣本在第一主成分(PC1)和第二主成分(PC2)兩個(gè)綜合指標(biāo)中的數(shù)值大小,繪制二維坐標(biāo)圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 野生茶樹基因組測(cè)序結(jié)果與SNP注釋

對(duì)65份野生茶樹基因組DNA進(jìn)行分析,構(gòu)建GBS文庫(kù)及酶切測(cè)序,共獲得77.30 G數(shù)據(jù),過(guò)濾后獲得74.48 G數(shù)據(jù),540 633 846條高質(zhì)量reads,平均每份茶樹資源獲得1.15 G數(shù)據(jù),8317 444條高質(zhì)量reads。65份野生茶樹Q20≥93.30%,Q30≥91.84%,表明測(cè)序質(zhì)量較好,GC含量在40.02%～41.71%,分布正常。將高質(zhì)量reads比對(duì)到茶樹參考基因組上,65份野生茶樹共獲得799 217個(gè)變異,其中769 893個(gè)SNPs,29 324個(gè)Indels。

利用 ANNOVAR軟件對(duì)769 893個(gè)高質(zhì)量的SNPs進(jìn)行檢測(cè)(圖1-a),692 570個(gè)SNPs位于基因間區(qū)(Intergenic region),占比89.96%;31 173個(gè)SNPs位于內(nèi)含子區(qū)(Intronic region),占比4.05%;19 754個(gè)SNPs位于外顯子區(qū)(Exonic region),占比2.57%;8994個(gè)SNPs位于轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)下游區(qū)域(Downstream region),占比1.17%;7703個(gè)SNPs位于轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)上游區(qū)域(Upstream region),占比1.0%;1801個(gè)SNPs位于3′端UTR變異(UTR3),占比0.23%;949個(gè)SNPs位于5′端UTR變異(UTR5),占比0.12%;812個(gè)SNPs位于轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)(Downstream; Upstream),占比0.11%;137個(gè)SNPs位于可變剪切位點(diǎn)(Splicing region),占比0.02%。

a:SNPs位置;b:SNPs功能;c:SNPs變異類型。a: Location of SNPs;b:Function of SNPs;c:Types of SNPs.圖1 SNPS注釋結(jié)果Fig.1 The results of SNP annotation

對(duì)編碼區(qū)SNPs進(jìn)行功能注釋(圖1-b),其中11 791個(gè)SNPs屬非同義突變(Nonsynonymous),7640個(gè)SNPs屬同義突變(Synonymous),311個(gè)SNPs屬無(wú)義突變(Stop gain),12個(gè)SNPs屬起始缺失(Stop loss)。

對(duì)SNP變異類型進(jìn)行注釋(圖1-c),76.08%的SNPs屬于堿基轉(zhuǎn)換(Transition,ts),其中G->A占比26.47%,C->T占比26.53%,T->C占比11.65%,A->G占比11.61%;23.92%的SNPs屬于堿基顛換(Transversion,tv),其中A->C與A->T分別占比2.57%與3.48%,G->C與G->T分別占比2.11%與3.76%,C->A與C->G分別占比3.81%與2.11%,T->A與T->G則分別占比3.52%與2.57%。表明SNP變異類型以堿基轉(zhuǎn)換為主,且ts/tv值為3.18,表明SNP變異類型多以同類型核苷酸之間的變異為主。

2.2 野生茶樹群體遺傳多樣性與遺傳結(jié)構(gòu)分析

從表2可知,6個(gè)群體平均有效等位基因數(shù)(Ne/Ae)為1.1284個(gè),平均多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)(PLN)為9475 456,最高為Gulin群體(2828 344),多態(tài)性位點(diǎn)比例(PPL)為57.33%,最低為合江野生茶樹(172 911),多態(tài)性位點(diǎn)比例為8.53%;各群體觀測(cè)等位基因數(shù)(Na)分別在0.4267～0.9147,平均為0.7677;最小等位基因頻率(Maf)介于0.1514～0.5000,均值為0.3213;基因多樣性指數(shù)(Nei)最高是古藺野生茶樹(0.1328),最低是云南野生茶樹(0.0632),均值為0.0979;各群體觀測(cè)雜合度(Ho)與期望雜合度(He)僅古藺地區(qū)變化范圍稍大,為0.0636～0.1233,其余變化范圍較小;多態(tài)性信息含量(PIC)則介于0.0312～0.1025,均值為0.0596;香農(nóng)指數(shù)(Shi)最高的為古藺地區(qū)(0.199),最低的為云南地區(qū)(0.0576),均值為0.1122。

表2 參試野生茶樹群體遺傳多樣性

從表3可知,不同地區(qū)野生茶樹群體間遺傳分化指數(shù)Fst變化范圍為-0.7042～0.4372,云南野生茶樹與崇州枇杷茶、古藺野生茶樹、雷波野生茶樹、敘永野生茶樹和合江野生茶樹群體間遺傳分化指數(shù)分別是0.3898、0.3375、0.3673、0.4372和0.3094,表明群體間存在非常強(qiáng)的遺傳分化,其中與敘永群體間遺傳分化最高,為0.4372;合江野生茶樹與崇州枇杷茶、古藺野生茶樹、雷波野生茶樹、敘永野生茶樹種群間遺傳分化均為負(fù)數(shù),表明這些群體間存在普遍的基因交流,遺傳親緣關(guān)系較近,其中與古藺群體遺傳分化值最小,為-0.7042;古藺野生茶樹與崇州枇杷茶、雷波野生茶樹、敘永野生茶樹種群間遺傳分化指數(shù)分別為0.04373、0.11740和-0.03481,表明古藺群體與崇州枇杷茶群體間存在遺傳分化,但分化較弱,與雷波群體間存在中等程度的遺傳分化,而與敘永群體間則存在基因交流。

表3 野生茶樹群體遺傳分化指數(shù)(Fst)

利用769 893個(gè)高質(zhì)量的SNPs變異,采用Plink和Admixture軟件對(duì)65份野生茶樹進(jìn)行群體結(jié)構(gòu)分析。將亞群數(shù)K值范圍設(shè)定為2～9,計(jì)算不同K值下的交叉驗(yàn)證錯(cuò)誤率(Cross-validation error,CV error),由圖2-a可知,當(dāng)K值為2時(shí),CV值最小,因此可將參試的65份茶樹種質(zhì)分成2個(gè)亞群,再根據(jù)Q值的大小,將野生茶樹劃分到最大Q值所在的亞群(圖2-b)。2個(gè)亞群中CP4、G19、LB5、YD1、YD2共5份野生茶樹歸為亞群Ⅰ(紅色),其余60份野生茶樹歸為亞群Ⅱ(藍(lán)色)。

a:計(jì)算K為2～9時(shí)的CV error。b:K=2時(shí)的群體結(jié)構(gòu),在該群體結(jié)構(gòu)中,紅、藍(lán)分別代表亞群1～2,根據(jù)顏色占比推斷該野生茶樹屬于哪個(gè)亞群。a:The cross-validation error was calculated when K was 2 to 9.b:The Population structure at K=2,in this Population structure,red,blue represented subgroups 1 to 2,and the subgroup to which the individual belonged was inferred based on the proportion of the color.圖2 65份野生茶樹群體遺傳結(jié)構(gòu)Fig.2 Population genetic structure of 65 wild tea resources

2.3 野生茶樹的SNP系統(tǒng)進(jìn)化分析

利用769 893個(gè)高質(zhì)量SNPs計(jì)算樣品間距離,并對(duì)樣品進(jìn)行聚類分析,從而推斷出種群間的親緣關(guān)系遠(yuǎn)近。利用treebest軟件鄰接法(Neighbor-joining methods)構(gòu)建進(jìn)化樹(圖3)。65份野生茶樹可以明顯分為兩大群,其中YD2、YD1、CP4、LB5、G19、G10為Ⅰ類群,其余59份為Ⅱ類群,這與遺傳結(jié)構(gòu)分析結(jié)果存在差異,系統(tǒng)進(jìn)化分析將G10聚在Ⅰ類群,而在遺傳結(jié)構(gòu)分析中G10與大部分野生茶樹聚為一類。同時(shí),Ⅱ類群可以分為3個(gè)亞群(Ⅱ-a、Ⅱ-b和Ⅱ-c),其中亞群Ⅱ-a僅包含材料G65,Ⅱ-b包含G67、G69、G70、G71和G725 5份野生茶樹,均源自相近地理位置,Ⅱ-c則包含其余53份野生茶樹。

紫色為古藺野生茶樹;紅色為敘永野生茶樹;暗紅色為雷波野生茶樹;淺藍(lán)色為合江野生茶樹;藍(lán)色為崇州枇杷茶;淺綠色為云南野生茶樹。Purple was wild tea resources in Gulin;Red was wild tea resources in Xuyong;Dull red was wild tea resources in Leibo; Light blue was wild tea resources in Hejiang;Blue was Chongzhou Pipa tea; Light green was wild tea resources in Yunnan.圖3 65份野生茶樹系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹Fig.3 Phylogenetic tree of the 65 wild tea resources

2.4 PCA主成分分析

基于個(gè)體間SNPs差異程度,利用R軟件進(jìn)行主成分分析,分別利用PCA1與PCA2、PCA1與PCA3以及PCA2與PCA3繪制散點(diǎn)圖(圖4),發(fā)現(xiàn)PCA1與PCA2最能解釋65份野生茶樹的遺傳變異情況,PCA1vPCA3和PC2vPC3次之。由圖4-a可知,65份野生茶樹能明顯區(qū)分為4個(gè)亞群,亞群1包含42份古藺野生茶樹、5份敘永野生茶樹、1份合江野生茶樹、3份雷波野生茶樹以及3份崇州枇杷茶,亞群2包含3份茶樹茶樹,分別來(lái)自古藺、雷波、崇州,間于云南與大部分古藺茶樹集中點(diǎn)間,亞群3包含6份古藺野生茶樹,分布在Y軸上方,與亞群1大部分古藺野生茶樹集中點(diǎn)距離較遠(yuǎn),亞群4則是2份云南野生茶樹,和其余茶樹區(qū)分明顯。

a:PC1vPC2; b:PC1vPC3;c:PC2vPC3.圖4 65份野生茶樹SNP基因型主成分分析Fig.4 Principal components analysis of SNP genotype of the 65 wild tea resources

3 討 論

SNP是最常見的一種遺傳變異,具有數(shù)量多、分布廣的特點(diǎn),通過(guò)比較分析種群內(nèi)個(gè)體的SNP位點(diǎn),可研究種群的遺傳多樣性、親緣關(guān)系以及群體遺傳結(jié)構(gòu)。王麗鴛等[15]研究發(fā)現(xiàn)茶樹SNP的分布規(guī)律,即茶樹SNP分布頻率高,變異類型主要是G/A與C/T的堿基轉(zhuǎn)換為主。郭燕等[16]利用GBS技術(shù)對(duì)貴州久安100份古茶樹資源開展全基因組簡(jiǎn)化測(cè)序分析,共獲得548 597個(gè)高質(zhì)量SNP,其中G/A和C/T的SNP變異類型最多,且ts/tv為2.95。本研究利用GBS技術(shù)對(duì)65份野生茶樹進(jìn)行簡(jiǎn)化基因組測(cè)序分析,獲得769 893個(gè)高質(zhì)量SNPs,變異類型以G/A與C/T為主,這與上述結(jié)果一致,但ts/tv為3.18,較上述研究高,表明參試茶樹SNP變異類型較豐富。通過(guò)對(duì)外顯子區(qū)域(基因編碼區(qū))19 754個(gè)SNP進(jìn)行功能注釋,SNP導(dǎo)致的非同義突變與同義突變的比例為1.54,表明參試茶樹在進(jìn)化過(guò)程中受到自然環(huán)境的正選擇效應(yīng),環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng),同時(shí)這些變異為后續(xù)SNP標(biāo)記的開發(fā)、功能基因的研究提供基礎(chǔ)。

遺傳多樣性是作物群體內(nèi)個(gè)體基因水平的變異與環(huán)境等多因素共同作用的結(jié)果,是物種適應(yīng)環(huán)境、保持遺傳潛力的基礎(chǔ),對(duì)種群的進(jìn)化發(fā)展具有重要意義[17]。研究表明,雷波野生茶樹[18]、云南野生茶樹[19-20]、江華苦茶群體種[21]、貴州野生茶樹[22]以及廣西野生茶樹[23]均具有較高的遺傳多樣性,而本研究中基于獲取的SNP對(duì)參試茶樹的遺傳多樣性進(jìn)行分析,結(jié)果表明茶樹群體的遺傳多樣性參數(shù)與之相比處于較低水平(基因多樣性指數(shù)Nai=0.0979、期望雜合度 He=0.0745、多態(tài)信息含量PIC=0.0596、Shannon信息指數(shù)=0.1122)。推測(cè)原因可能與供試茶樹的數(shù)量和種群來(lái)源有關(guān),本研究的65份野生茶樹源于四川省古藺縣(49份)、合江縣(1份)、敘永縣(5份)、雷波縣(4份)、崇州(枇杷茶,4份)和云南省德宏芒市(2份),其中古藺、合江和敘永地理位置相鄰,氣候環(huán)境較一致,在文中后續(xù)遺傳分化研究中也發(fā)現(xiàn)這3個(gè)地方野生茶樹在遺傳演化的過(guò)程中,存在頻繁的基因交流,遺傳親緣關(guān)系近,而源于這3個(gè)地區(qū)野生茶樹達(dá)55份,占比85%,這可能是導(dǎo)致本研究總體遺傳多樣性低的原因之一。另外前人研究多選用多態(tài)性豐富的SSR標(biāo)記對(duì)茶樹遺傳多樣性進(jìn)行研究,而多態(tài)性豐富的標(biāo)記獲得的等位基因變異數(shù)較多,檢測(cè)到的有效等位基因、雜合度、香農(nóng)指數(shù)等參數(shù)也較高[24-25],這可能也是研究獲得較高遺傳多樣性參數(shù)的原因。何旭東等[26]利用SLAF-seq測(cè)序技術(shù)研究舒瑪櫟遺傳多樣性時(shí)也獲得了較低的遺傳多樣性參數(shù),且遺傳多樣性指數(shù)遠(yuǎn)低于利用SSR標(biāo)記的研究結(jié)果。

群體結(jié)構(gòu)分層、等位基因分布不均容易導(dǎo)致基因型與表型分析結(jié)果假陽(yáng)性或假陰性,因此對(duì)參試群體進(jìn)行群體結(jié)構(gòu)研究是基因與表型關(guān)聯(lián)分析的基礎(chǔ)。本研究采用Plink和Admixture軟件對(duì)65份野生茶樹進(jìn)行群體結(jié)構(gòu)分析,當(dāng)K=2時(shí),CV值最小,由此將65份野生茶樹分成2個(gè)亞群,該結(jié)果與系統(tǒng)進(jìn)化樹分析結(jié)果基本相符,而與主成分分析存在差異。主成分分析不僅將遺傳距離較遠(yuǎn)的YD1、YD2劃分在一起,也將其余川內(nèi)野生茶樹劃分為3個(gè)亞群,其中亞群2分布介于亞群1與亞群4之間,且劃分在亞群2的3份野生茶樹在群體結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)進(jìn)化分析中則和YD1、YD2聚在一起,亞群3則是從古藺野生茶樹中劃出,因此主成分分析結(jié)果是對(duì)群體結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)進(jìn)化分析的補(bǔ)充,更好地解釋了野生茶樹的遺傳結(jié)構(gòu)。

我國(guó)西南云貴高原一直被認(rèn)為是茶樹的原產(chǎn)地,四川省在地理位置上處于云貴高原的過(guò)渡地帶。本研究結(jié)果顯示65份野生茶樹資源來(lái)自2個(gè)血統(tǒng),四川崇慶、雷波、古藺3個(gè)地區(qū)各1份材料與云南材料血統(tǒng)一致,表明四川與云南茶樹資源存在演化進(jìn)程;而17份古藺地區(qū)和1份雷波地區(qū)的茶樹組成另一血統(tǒng)且和前者區(qū)別明顯,無(wú)任何交集,表明四川省存在原產(chǎn)的野生大茶樹,與鐘渭基[1]的四川野生大茶樹系本地原產(chǎn)一致,也與周斌等[18]的“四川與云南的野生茶樹群落相互獨(dú)立”一致。本研究對(duì)四川古藺、雷波、敘永、合江、崇州5個(gè)茶樹群體結(jié)構(gòu)研究中,四川純正血統(tǒng)的野生茶樹集中在古藺地區(qū),其余茶樹存在2個(gè)血統(tǒng)雜合現(xiàn)象,但主要以四川血統(tǒng)為主,表明古藺地區(qū)存在更原始的茶樹血統(tǒng),其余區(qū)域的野生茶樹均以此血統(tǒng)為主與另一血統(tǒng)雜交。筆者經(jīng)過(guò)近幾年實(shí)地考察發(fā)現(xiàn),古藺地區(qū)野生大茶樹數(shù)量較多,以原桂花鄉(xiāng)和黃荊鄉(xiāng)為中心廣泛分布,據(jù)此推測(cè)古藺地區(qū)及周邊可能是四川野生大茶樹的發(fā)源中心,這與周斌等[18]的雷波地區(qū)可能是川內(nèi)野生茶樹的發(fā)源中心觀點(diǎn)不一致。因此,針對(duì)此觀點(diǎn),需在今后研究中進(jìn)一步擴(kuò)大各地區(qū)試驗(yàn)樣本數(shù)進(jìn)行驗(yàn)證。

4 結(jié) 論

65份古藺野生茶樹具有較低的遺傳多樣性,親緣關(guān)系較近,存在頻繁的基因交流;遺傳結(jié)構(gòu)分析可將65份野生茶樹分為兩個(gè)亞群。