郝寶娟，臧 莉，王 輝，鄭艷坤，李 麗，潘國峰

（1.天津市農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，天津 300061；2.天津市農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心，天津 300221）

牛結(jié)核病是一種由牛型結(jié)核分枝桿菌引起的慢性人畜共患傳染病，屬于二類動(dòng)物疫病。該病一年四季均可發(fā)生，病理變化以組織器官的結(jié)核結(jié)節(jié)性肉芽腫和鈣化的壞死病灶為主要特征。牛結(jié)核病的發(fā)生與流行不僅危害養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟(jì)利益，而且可能帶來與牛及其產(chǎn)品相關(guān)的職業(yè)染疫和食品安全等公共衛(wèi)生安全風(fēng)險(xiǎn)。因此，做好牛結(jié)核病防治知識(shí)和管控意識(shí)宣傳，逐步完善牛結(jié)核病防控體系至關(guān)重要。

1 牛結(jié)核病的病原

牛結(jié)核病的病原為牛型結(jié)核分枝桿菌，屬于分枝桿菌科分枝桿菌屬結(jié)核分枝桿菌復(fù)合物中的成員，它們?cè)诤塑账崴缴匣窘M成的同源性超過99.95%，有共線性的表現(xiàn)，無廣泛的倒置、復(fù)制、置換等現(xiàn)象。牛型結(jié)核分枝桿菌具有大部分結(jié)核分枝桿菌不具備的TbD1 的基因位點(diǎn)，該區(qū)呈現(xiàn)為一個(gè)單核苷酸的多態(tài)性，可將其作為牛型結(jié)核分枝桿菌鑒定的重要靶標(biāo)。牛型結(jié)核分枝桿菌以桿狀居多，間有分枝狀且不會(huì)產(chǎn)生芽孢、無法運(yùn)動(dòng)的革蘭氏染色陽性菌。牛型結(jié)核分枝桿菌有蠟質(zhì)膜，常用抗酸染色法進(jìn)行鑒定。牛型結(jié)核分枝桿菌為需氧菌，對(duì)常用消毒藥和高溫的抵抗力較弱，生產(chǎn)中常用3%甲醛溶液、10%漂白粉或75%酒精等消毒液進(jìn)行消毒。

2 牛結(jié)核病的流行病學(xué)

牛結(jié)核病的傳播方式主要為接觸傳播，包括皮膚、消化道和呼吸道3 種傳播途徑。家畜中牛對(duì)該病最易感，尤其是奶牛，水牛、黃牛、牦牛次之，豬、馬等家畜也可感染。除了家畜，猴、鹿等野生動(dòng)物也可感染發(fā)病。人是易感染群體，可通過接觸染疫動(dòng)物、食用受污染的肉乳制品或吸入含菌氣溶膠而感染發(fā)病。病原可通過乳汁、糞便等不同方式對(duì)外擴(kuò)散，污染周圍環(huán)境，導(dǎo)致疫病區(qū)域性傳播。當(dāng)飼養(yǎng)環(huán)境較差時(shí)，如潮濕陰暗等環(huán)境、糞便清理不及時(shí)、食用不良飼料等問題，也會(huì)引發(fā)牛結(jié)核病[1]。隨著人們生活水平的不斷提高，人們對(duì)牛肉乳等相關(guān)動(dòng)物源食品的需求逐漸增加。由于牛結(jié)核病對(duì)人極具傳染性，因此該病也引起了各國衛(wèi)生部門的高度重視。隨著醫(yī)學(xué)研究的不斷深入，人與動(dòng)物交叉感染結(jié)核病的觀點(diǎn)得到了證實(shí)。因此，在養(yǎng)牛業(yè)規(guī)?；l(fā)展的同時(shí)，應(yīng)高度重視牛結(jié)核病的防疫工作，只有優(yōu)先解決牛結(jié)核病，才能夠降低人類感染結(jié)核病風(fēng)險(xiǎn)，為進(jìn)一步對(duì)病毒進(jìn)行分析和征服減輕障礙，保障人類的健康安全[2]。

3 牛結(jié)核病的臨床癥狀

牛結(jié)核病的潛伏期一般約10 ～15 d，但也有特殊情況導(dǎo)致其潛伏期長達(dá)數(shù)月，甚至出現(xiàn)潛伏數(shù)年的情況。牛結(jié)核病本身屬于一種慢性病，隨著病程的延長，呼吸困難、咳嗽、體形消瘦等癥狀逐漸顯現(xiàn)，由于患病牛的體溫變化不明顯，使得其早期癥狀相對(duì)隱匿。受病菌毒力差異、侵害器官不同以及個(gè)體抵抗力高低等因素的影響，患病牛的臨床癥狀差異較大。對(duì)患病牛不同組織器官的侵蝕，也常被作為劃分牛結(jié)核病種類的最重要依據(jù)，其中常見的有肺結(jié)核、淋巴結(jié)核、腸結(jié)核、乳房結(jié)核、腦結(jié)核等。患病部位形成多個(gè)結(jié)核結(jié)節(jié)是牛結(jié)核病的主要病理變化，尤其是肺部病變更為明顯，在患病牛的腹膜與胸膜等部位，也會(huì)出現(xiàn)大小不一、白色珍珠樣的結(jié)節(jié)，所以也將牛結(jié)核病稱為“珍珠病”。

3.1 肺結(jié)核

肺結(jié)核在臨床上最為常見，患病牛在發(fā)病初期常出現(xiàn)干咳癥狀與疲憊狀態(tài)，尤其是在起立行為或吸入冷空氣后更為明顯；發(fā)病后期干咳癥狀加劇，逐步向濕咳癥狀轉(zhuǎn)變，表現(xiàn)為呼吸急促且困難，伴有氣喘現(xiàn)象。隨著病程的延長，患病牛食欲逐日下降，消瘦、貧血、體溫升高等癥狀越發(fā)明顯，尤其是處于哺乳期的患病牛，其產(chǎn)奶量會(huì)逐漸下降。剖檢患病?？砂l(fā)現(xiàn)肺臟內(nèi)有大量呈黃白色、形態(tài)大小不一的增生性結(jié)節(jié)，切開結(jié)節(jié)可見鈣化或干酪樣的壞死病變，肺臟組織壞死或軟化溶解直至形成空洞。

3.2 淋巴結(jié)核

患病牛體內(nèi)不同位置的淋巴結(jié)均可呈現(xiàn)極為明顯的結(jié)核病變，特別是在股后淋巴結(jié)、肩前淋巴結(jié)發(fā)生病變后，前后跛行的癥狀表現(xiàn)明顯；當(dāng)縱隔淋巴結(jié)腫大時(shí)，瘤胃鼓氣的癥狀表現(xiàn)明顯。咽部淋巴結(jié)一旦呈現(xiàn)結(jié)核病變時(shí)，染疫牛因咽喉受到壓迫導(dǎo)致聲音出現(xiàn)改變，如呼吸聲音變得粗厲等。

3.3 腸結(jié)核

病原菌會(huì)破壞患病牛的腸壁細(xì)胞，導(dǎo)致患病牛腸道功能逐步弱化，食欲不斷下降。發(fā)病初期常出現(xiàn)便秘或者腹瀉癥狀，患病后期則更多以腹瀉為主，甚至可出現(xiàn)排泄物中摻雜膿汁或血的情況，常伴有強(qiáng)烈的腥臭味，后期脫水癥狀更加明顯，尤其患病犢牛脫水更為嚴(yán)重。

3.4 乳房結(jié)核

患病牛主要表現(xiàn)為乳房炎癥，產(chǎn)奶量與乳汁質(zhì)量雙重下降，發(fā)病初期變化尚不明顯，但到發(fā)病后期，乳汁逐漸稀薄，甚至停止分泌。

3.5 腦結(jié)核

病原菌損害患病牛的腦細(xì)胞后，患病牛出現(xiàn)明顯的震顫、不安、驚嚇、興奮等異常行為，也會(huì)出現(xiàn)頸部的局部僵硬，長年臥地?zé)o法站立等現(xiàn)象。隨著病情的不斷惡化，心律失常、痙攣、昏迷、呼吸急促等癥狀越發(fā)明顯。

4 牛結(jié)核病的診斷

牛結(jié)核病的診斷方法有很多，為提高診斷方法的有效性和診斷結(jié)果的準(zhǔn)確度，最好采取多種診斷方式進(jìn)行綜合判斷。

4.1 臨床診斷

牛結(jié)核病的初期癥狀不明顯或癥狀不典型，隨著病情的發(fā)展會(huì)逐漸出現(xiàn)消瘦、厭食、體弱、呼吸困難、咳嗽、淋巴結(jié)腫大等癥狀。在日常飼養(yǎng)管理過程中，如發(fā)現(xiàn)牛群出現(xiàn)上述臨床癥狀時(shí)，應(yīng)及時(shí)采樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷，對(duì)確診牛進(jìn)行果斷處置。

4.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.2.1 細(xì)菌分離鑒定 細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定是最早采用的診斷方法，主要是利用細(xì)菌分離與染色鏡檢法直接檢測牛結(jié)核分枝桿菌。細(xì)菌分離鑒定具有操作簡單的優(yōu)勢，但在檢測過程中難以在第一時(shí)間直接區(qū)分致病菌和非典型的分枝桿菌，此外，這種方式存在培養(yǎng)細(xì)菌所需時(shí)間過長和影響細(xì)菌生長因素較多的問題。在細(xì)菌分離培養(yǎng)法中，可配套利用生化試驗(yàn)或PCR 檢測法進(jìn)行鑒定。在實(shí)際操作過程中，為避免因各種原因造成培養(yǎng)物污染，可利用豚鼠進(jìn)行接種，再進(jìn)行細(xì)菌分離與鑒定。

4.2.2 分子生物學(xué)技術(shù) 應(yīng)用于牛結(jié)核病診斷的分子生物學(xué)方法有很多，包括DNA 圖譜、DNA指紋技術(shù)、DNA 探針技術(shù)、PCR 檢測法等，最常用的是PCR 檢測法。PCR 檢測法主要以檢測目的基因片段和分析研究基因序列為主，PCR 檢測法的優(yōu)勢突出，包括靈敏度高、檢測速度快等，尤其是隨著檢測技術(shù)的不斷優(yōu)化，該方法的應(yīng)用范圍更廣。在實(shí)際檢測工作中，該項(xiàng)技術(shù)對(duì)操作人員的知識(shí)水平、儀器設(shè)備使用熟練度和自身操作規(guī)范程度等方面均具有極高的要求。此外，牛結(jié)核病還可采用DNA 探針法進(jìn)行診斷，即先標(biāo)記被分開的寡核苷酸，再將標(biāo)記的片段與體外的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行特異性雜交診斷。

4.2.3 免疫學(xué)診斷 結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)是檢測牛結(jié)核病的最標(biāo)準(zhǔn)方法，在實(shí)踐操作中存在明顯的優(yōu)勢。該方法采用皮內(nèi)注射0.1 mL 的結(jié)核菌素，定期觀察注射部位的變態(tài)反應(yīng)情況，72 h 后觀察結(jié)果。如果注射部位皮膚呈現(xiàn)紅腫狀態(tài)，并且整體的皮厚增加超過4 mm 時(shí)，則判定為牛結(jié)核病陽性；如果在注射結(jié)核菌素部位的皮膚沒有紅腫變化或皮厚差為2.0 mm 以下，則判定為牛結(jié)核病陰性；如果局部炎性反應(yīng)不明顯，皮厚差大于或等于2.0 mm、小于4.0 mm，則判定為疑似病例。針對(duì)疑似病例需要在30 d 后進(jìn)行復(fù)檢。

4.2.4 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化技術(shù) 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)屬于新型技術(shù)，在實(shí)踐操作中，需先將淋巴細(xì)胞從全血中分離，在復(fù)合物組織培養(yǎng)介質(zhì)中培養(yǎng)細(xì)胞3 ～5 d，再用放射核酸技術(shù)檢測細(xì)胞的增值水平。該方法對(duì)操作人員的專業(yè)技能要求更高，難以推廣應(yīng)用。

4.2.5 血清學(xué)技術(shù) 目前，實(shí)驗(yàn)室常用的血清學(xué)診斷技術(shù)主要包括固相抗體競爭夾心酶聯(lián)法、固相抗體競爭試驗(yàn)、免疫印記法、斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)、熒光偏振檢測法、免疫斑點(diǎn)測定法、酶聯(lián)免疫吸附法等。

5 牛結(jié)核病的防控策略

由于牛結(jié)核病的危害較大，易造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，因此做好預(yù)防工作至關(guān)重要，一旦發(fā)現(xiàn)疫情，要做到立即報(bào)告、及時(shí)診斷，對(duì)確診疫情嚴(yán)格按照技術(shù)規(guī)范果斷處置。

5.1 加強(qiáng)外防輸入與內(nèi)防檢測的協(xié)同效應(yīng)

對(duì)健康的牛群定期進(jìn)行健康監(jiān)測，強(qiáng)化風(fēng)險(xiǎn)意識(shí)和對(duì)疫病防控的重視。配種盡量采用人工授精技術(shù)取代本交，選用品質(zhì)優(yōu)良與來源可靠的奶牛精液，人工授精的操作行為要嚴(yán)格規(guī)范。對(duì)于外部引入的補(bǔ)充家畜，養(yǎng)殖戶要提高安全警惕，嚴(yán)格依據(jù)“檢疫—隔離—檢疫—合群”的程序規(guī)范落實(shí)引種工作，隔離檢疫確認(rèn)無結(jié)核病菌攜帶后，再進(jìn)行混群飼養(yǎng)。養(yǎng)殖場內(nèi)的工作人員需定期進(jìn)行體檢，預(yù)防感染牛結(jié)核病病菌[3]。

5.2 污染牛群的凈化

對(duì)污染的牛群要強(qiáng)化檢測工作，對(duì)疑似患病牛與陽性牛及時(shí)做好隔離和剔除工作。對(duì)患病牛和陽性牛不準(zhǔn)治療，要嚴(yán)格按照《中華人民共和國動(dòng)物防疫法》等國家現(xiàn)行的規(guī)定及時(shí)撲殺，施以無害化處理，防止疫病擴(kuò)散。在檢出并剔除患病牛、陽性牛后，需在30 ～40 d 后再進(jìn)行1 次檢測，其后每隔30 ～45 d 進(jìn)行連續(xù)檢測。按照國家相關(guān)的防控法規(guī)定，檢測出陽性牛的牛群，須在半年內(nèi)連續(xù)3 次檢測均無陽性牛檢出，則可判定為健康牛群。

5.3 規(guī)范執(zhí)行獸醫(yī)防疫制度

養(yǎng)殖牛場要建立完善的防疫制度并嚴(yán)格執(zhí)行。一是合理劃分養(yǎng)殖區(qū)域，養(yǎng)殖區(qū)域應(yīng)符合生物安全要求，在牛場門口設(shè)置消毒池并定期更換消毒液，場內(nèi)避免環(huán)境陰暗潮濕，夏季做好防蚊蟲工作；二是飼養(yǎng)用具每隔5 ～10 d 消毒1 次；三是牛群運(yùn)動(dòng)場所應(yīng)每月消毒1 ～2 次，合理選擇消毒藥物，輪換使用過氧乙酸、甲醛等環(huán)境消毒藥物，以達(dá)到理想的養(yǎng)殖場所環(huán)境消毒效果。此外，發(fā)現(xiàn)患病?；蜿栃耘：螅瑧?yīng)及時(shí)處置，嚴(yán)格防止疫情的場內(nèi)傳播與外泄。在嚴(yán)格執(zhí)行防疫制度的同時(shí)，要在社會(huì)上宣傳動(dòng)物疫病防控工作，促使全員支持和配合疫病防控工作的開展，為獸醫(yī)防疫制度的規(guī)范落實(shí)提供良好的氛圍保障[4]。

5.4 疫情報(bào)告

任何單位和個(gè)人發(fā)現(xiàn)疑似患病牛，應(yīng)及時(shí)向當(dāng)?shù)貏?dòng)物防疫機(jī)構(gòu)報(bào)告，動(dòng)物防疫機(jī)構(gòu)接到疫情報(bào)告并確認(rèn)后，按《動(dòng)物疫情報(bào)告管理辦法》等有關(guān)規(guī)定及時(shí)上報(bào)。

5.5 生物安全培訓(xùn)

首先，養(yǎng)殖場要定期組織養(yǎng)殖人員接受系統(tǒng)性的生物安全培訓(xùn)，豐富培訓(xùn)內(nèi)容與方式，通過聘請(qǐng)專家介入指導(dǎo)、開設(shè)講座、線上學(xué)習(xí)等形式，使養(yǎng)殖人員接受繼續(xù)教育培訓(xùn)。其次，防疫主管部門開設(shè)線上信息交流平臺(tái)，定期推動(dòng)國家現(xiàn)行的養(yǎng)殖和疫病防控政策宣傳，幫助養(yǎng)殖人員解讀和深入理解政策規(guī)定，加強(qiáng)對(duì)牛結(jié)核病防控的重視，促使養(yǎng)殖行為更加規(guī)范。養(yǎng)殖戶可通過線上咨詢專業(yè)養(yǎng)殖和疫病防控等方面的問題，接受系統(tǒng)性的培訓(xùn)，確保養(yǎng)殖場的衛(wèi)生環(huán)境達(dá)標(biāo)，及時(shí)規(guī)避潛在的風(fēng)險(xiǎn)因素，防止喂養(yǎng)不良等環(huán)節(jié)引起的?；疾栴}，在提高養(yǎng)殖效益的同時(shí)，確保公共衛(wèi)生安全[5]。

6 結(jié)論

牛結(jié)核病的防控工作是一項(xiàng)系統(tǒng)工程，需要全社會(huì)的共同關(guān)注和參與。為推進(jìn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展壯大，需不斷創(chuàng)新牛結(jié)核病的診斷技術(shù)和防控技術(shù)，提高養(yǎng)殖管理水平，規(guī)范落實(shí)對(duì)養(yǎng)殖戶的培訓(xùn)學(xué)習(xí)，實(shí)現(xiàn)牛結(jié)核病的無死角防控。