田 雪 胡少樸 歐光銀 王春輝 高 磊 韓 斐

(1 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院廣安門(mén)醫(yī)院,北京,100053; 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院,北京,100078)

抽動(dòng)障礙(Tic Disorders,TD)是兒童時(shí)期起病的神經(jīng)精神性疾病,主要表現(xiàn)為突然的、快速的、反復(fù)的、無(wú)節(jié)奏的一個(gè)或多個(gè)部位肌肉運(yùn)動(dòng)性抽動(dòng)和(或)發(fā)聲性抽動(dòng),其發(fā)病率為0.4%～3.8%,并且有逐年上升的趨勢(shì)[1]。TD患兒病情反復(fù)遷延難愈,易伴發(fā)多種精神疾病,嚴(yán)重影響兒童及青少年的身心健康和生長(zhǎng)發(fā)育,給家庭帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)和心理負(fù)擔(dān)[2]。自身免疫失衡引起的大腦神經(jīng)炎癥反應(yīng)是TD發(fā)病的重要原因,越來(lái)越多的研究提示腦內(nèi)免疫吞噬細(xì)胞(小膠質(zhì)細(xì)胞)的過(guò)度活化介導(dǎo)的腦神經(jīng)炎癥反應(yīng)參與TD的發(fā)病過(guò)程[3]。

課題組認(rèn)為T(mén)D的核心病機(jī)為心神失養(yǎng)、內(nèi)外風(fēng)動(dòng),以從心論治、肝肺同調(diào)為治療大法,在古方琥珀散化裁的基礎(chǔ)上創(chuàng)立院內(nèi)制劑靜心止動(dòng)方,經(jīng)十余年反復(fù)臨床驗(yàn)證療效顯著,能夠緩解TD患兒的癥狀,顯著提高其生命質(zhì)量,并在安全性方面體現(xiàn)出較大優(yōu)勢(shì)[4-6],但目前尚缺乏靜心止動(dòng)方治療TD的作用機(jī)制探討。本研究擬從網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的角度探討靜心止動(dòng)方治療TD的潛在作用機(jī)制,并通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證,以期為靜心止動(dòng)方臨床治療TD提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 靜心止動(dòng)方活性成分篩選及靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 通過(guò)中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP,https://old.tcmsp-e.com/tcmsp.php),以口服生物利用度(Oral Bioavailability,OB)≥30%和 Likeness,DL)≥0.18為篩選條件,分別獲取百部、板藍(lán)根、北沙參、柴胡、藁本、蔓荊子、木蝴蝶、酸棗仁、辛夷的活性成分;鑒于TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)暫未收錄方中天麻的相關(guān)活性成分?jǐn)?shù)據(jù),所以我們從中醫(yī)藥百科全書(shū)(The Encyclopedia of Traditional Chinese Medicine,ETCM,http://www.tcmip.cn/ETCM/index.php/Home/Index/)數(shù)據(jù)庫(kù)獲取天麻的活性成分。將上面獲取的中藥各種活性成分,導(dǎo)入PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)獲得各成分的canonical SMILES序列號(hào),然后將序列號(hào)導(dǎo)入SwissTargetPrediction數(shù)據(jù)庫(kù)(http://swisstarget prediction.ch/)中,限定物種為“Homosapiens”,以“probability”>0為篩選條件,以預(yù)測(cè)各活性成分的作用靶點(diǎn)。

1.2 TD靶點(diǎn)的預(yù)測(cè) 利用關(guān)鍵詞“Tic Disorders”從以下數(shù)據(jù)庫(kù)中收集疾病相關(guān)靶點(diǎn):GeneCards(https://www.genecards.org/),人類孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM,https://www.omim.org/),治療性靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)(Therapeutic Target Database,TTD,http://db.idrblab.net/ttd/),PharmGkb(https://www.pharmgkb.org/)和DisGeNET(https://www.disgenet.org/)。然后利用jvenn(http://jvenn.toulouse.inra.fr/app/index.html)獲得交集靶點(diǎn),即為T(mén)D相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3 構(gòu)建中藥-活性成分-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò) 將各中藥和TD的靶點(diǎn)導(dǎo)入jvenn平臺(tái),二者交集靶點(diǎn)作為靜心止動(dòng)方治療TD的潛在作用靶點(diǎn)。運(yùn)用Cytoscape 3.8.0軟件(https://cytoscape.org/)建立中藥-活性成分-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。

1.4 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(Protein-protein Interaction,PPI)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建及核心靶點(diǎn)篩選 將靜心止動(dòng)方和TD的交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 11.5數(shù)據(jù)庫(kù)(https://cn.string-db.org/),限定物種為Homosapien”,并以最低互作分?jǐn)?shù)為中度可信度(0.4分)為條件,構(gòu)建PPI。將得到的PPI網(wǎng)絡(luò)的數(shù)據(jù)以.tsv格式保存,導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件進(jìn)行可視化分析,然后使用軟件的內(nèi)置插件CytoNCA計(jì)算該P(yáng)PI網(wǎng)絡(luò)的中間性中心性(Betweenness Centrality,BC)、緊密性中心性(Closeness Centrality,CC)、程度中心性(Degree Centrality,DC)、特征向量中心性(Eigenvector Centrality,EC)、網(wǎng)絡(luò)中心性(Network Centrality,NC)和局部平均連通性(Local Average Connectivity,LAC)參數(shù)用于評(píng)估PPI網(wǎng)絡(luò)節(jié)點(diǎn)的拓?fù)鋵傩?隨后以各參數(shù)的中位值為篩選條件,篩選得到靜心止動(dòng)方治療TD的核心靶點(diǎn)。

1.5 核心靶點(diǎn)通路注釋分析 使用R 4.1.3軟件的clusterProfiler包對(duì)上述得出的核心靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體(Gene Ontology,GO)功能富集分析和基于京都基因與基因組百科全書(shū)(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然后使用enrichplot包對(duì)分析結(jié)果進(jìn)行可視化,使用ggplot2包繪制圖片。然后在KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)(https://www.genome.jp/kegg/)對(duì)相關(guān)通路進(jìn)行分析。

1.6 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

1.6.1 材料

1.6.1.1 細(xì)胞 小鼠BV2小膠質(zhì)細(xì)胞(上海富衡生物科技有限公司,貨號(hào):FH0355),使用DMEM培養(yǎng)基(含有10%FBS和1%雙抗)置于細(xì)胞培養(yǎng)箱(37 ℃,5%CO2)中常規(guī)培養(yǎng)。

1.6.1.2 藥物 靜心止動(dòng)方顆粒劑(酸棗仁12 g、珍珠粉0.9 g、柴胡9 g、天麻9 g、辛夷9 g、藁本9 g、蔓荊子9 g、木蝴蝶6 g、板藍(lán)根9 g、百部9 g、北沙參9 g)由北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院提供。參考既往文獻(xiàn)[7],藥品制備時(shí)取2付藥量,共180 g,加水濃縮至180 mL,獲得1 g/mL分裝至離心管,1 500 r/min,離心半徑12.5 cm,離心25 min,取上清液,0.22 μm篩網(wǎng)過(guò)濾除菌,-20 ℃保存以供后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。

1.6.1.3 試劑與儀器 BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司,貨號(hào):P0010S);磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(Phosphorylated Phosphoinositide 3-kinase,p-PI3K)抗體(BIOSS,貨號(hào):BS-5570R);磷脂酰肌醇3激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)抗體、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated Protein Kinase B,p-AKT)抗體和蛋白激酶B(Protein Kinase B,AKT)抗體(Cell Signaling Technology,美國(guó),貨號(hào)分別為4257、4060和4691);β-actin抗體(Boster,美國(guó),貨號(hào):BM3873);740 Y-P(MedChemExpress,美國(guó),貨號(hào):HY-P0175);脂多糖LPS(Solarbio,貨號(hào):L8880);特超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司,P0018AS);放射免疫沉淀測(cè)定(Radio Immunoprecipitation Assay,RIPA)裂解液(上海碧云天生物技術(shù)有限公司,P0013B)等。Multiskan酶標(biāo)儀(Bio-Rad公司,美國(guó),型號(hào):Go1510);ChemiDocMP成像和分析系統(tǒng)(Bio-Rad公司,美國(guó),型號(hào):1708283)。

1.6.2 方法

1.6.2.1 BV2細(xì)胞活化模型建立 用聚丁二酸丁二醇酯(Poly Butylenes Succinate,PBS)配制1 mg/mL脂多糖母液,于-20 ℃冰箱避光保存。以2×104個(gè)細(xì)胞/孔的濃度將BV2細(xì)胞接種到6孔板中,待細(xì)胞量長(zhǎng)至80%時(shí),加入脂多糖(終濃度1 μg/mL)共同孵育,藥物作用24 h以使BV2細(xì)胞達(dá)活化狀態(tài)[8]。

1.6.2.2 細(xì)胞分組及干預(yù)方法 將活化的BV2細(xì)胞分為4組:1)脂多糖組用無(wú)血清培養(yǎng)基干預(yù)24 h;2)740Y-P組用25 μg/mL 740Y-P干預(yù)24 h;3)JXZDF組用25 mg/mL JXZDF干預(yù)24 h(給藥濃度參考文獻(xiàn)[9]);4)JXZDF+740 Y-P組用25 μg/mL 740Y-P+25 mg/mL JXZDF聯(lián)合干預(yù)24 h。

1.6.2.3 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、β-actin蛋白的表達(dá)水平 使用RIPA裂解液冰上裂解細(xì)胞30 min,收集裂解液于離心管內(nèi),4 ℃、15 000 r/min,離心半徑12.5 cm,離心20 min,收集上清液,并采用二辛可寧酸(Bicinchoninic Acid,BCA)法進(jìn)行濃度檢測(cè)。將各組蛋白濃度配平并變性,進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳,轉(zhuǎn)膜100 min,5%牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)室溫封閉1 h。按抗體說(shuō)明書(shū)加入最優(yōu)比例一抗,4 ℃冰箱孵育過(guò)夜。第2天用洗膜緩沖液(Tris Buffered Saline-Tween 20,TBST)洗膜3次,10 min/次。加入相應(yīng)種屬二抗,室溫孵育1 h,TBST洗膜3次,10 min/次。采用增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光(Enhanced Chemiluminescence,ECL)法顯影,將圖片導(dǎo)入ImageJ軟件中進(jìn)行定量分析。

1.6.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用GraphPad Prism軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,組間顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 靜心止動(dòng)方活性成分及靶點(diǎn) 共獲取靜心止動(dòng)方活性成分173個(gè)。共收集到靜心止動(dòng)方中153個(gè)活性分子的潛在靶點(diǎn)1 175個(gè)。

2.2 靜心止動(dòng)方治療TD潛在靶點(diǎn) 得到2 693個(gè)TD相關(guān)靶點(diǎn)。共得到交集靶點(diǎn)291個(gè)。見(jiàn)圖1。

圖1 TD靶點(diǎn)韋恩圖和靜心止動(dòng)方與TD交集靶點(diǎn)韋恩圖

2.3 中藥-活性成分-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò) 所構(gòu)建的中藥-活性成分-疾病靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)模型共涉及447個(gè)節(jié)點(diǎn),以及3 780條邊,不同顏色及形狀分別代表靜心止動(dòng)方的藥物、活性成分以及治療TD的潛在靶點(diǎn)。其中黃色菱形代表藥物,紫色矩形代表活性成分,藍(lán)色圓形代表作用靶點(diǎn),其Degree越大,則節(jié)點(diǎn)形狀越大。見(jiàn)圖2。選取到Degree前5的活性成分主要為槲皮素、豆甾醇、高車前素、β-谷甾醇、山柰酚等。見(jiàn)表1。

表1 度值前5的活性成分

圖2 靜心止動(dòng)方治療TD的“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)及核心靶點(diǎn) 結(jié)果顯示有291個(gè)節(jié)點(diǎn),3 670條邊,平均節(jié)點(diǎn)度值為25.2。見(jiàn)圖3。篩選核心靶點(diǎn)過(guò)程及各參數(shù)閾值見(jiàn)圖4。最后得到28個(gè)核心靶點(diǎn)。見(jiàn)表2。

表2 28個(gè)核心靶點(diǎn)及其度值

圖3 靜心止動(dòng)方與TD交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)

圖4 PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龊诵陌悬c(diǎn)流程

2.5 GO和KEGG通路富集分析 通過(guò)對(duì)28個(gè)核心靶點(diǎn)的富集分析,最后得到GO富集條目共有1 893條,其中生物過(guò)程(Biological Process,BP)1 760條,細(xì)胞組分(Cellular Component,CC)51條,分子功能(Molecular Function,MF)82條。BP排名靠前的有神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化、膠質(zhì)細(xì)胞再生、肽基-絲氨酸磷酸化、肽基-絲氨酸修飾、神經(jīng)元死亡等;CC排名靠前的有早期內(nèi)體、膜筏、膜微結(jié)構(gòu)域、谷氨酸能突觸、晚期內(nèi)體等;MF排名靠前的有磷酸酶結(jié)合、RNA聚合酶Ⅱ-特異性DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、脫氧核糖核酸-結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、蛋白磷酸酶結(jié)合等。KEGG富集通路分析條目有158條。BP,CC,MF各排名前10的GO條目和排名前20的KEGG相關(guān)通路見(jiàn)圖5。結(jié)果提示,PI3K/AKT信號(hào)通路可能是靜心止動(dòng)方治療TD的關(guān)鍵通路,預(yù)測(cè)相關(guān)作用靶點(diǎn)為AKT1、MAPK3、IL6、TP53、EGFR、MTOR、VEGFA、MAPK1、NTRK2、ERBB2、RELA、GSK3B、MAP2K1、ERBB4。見(jiàn)圖6。

圖5 GO和KEGG富集分析氣泡圖

2.6 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果 740 Y-P組和靜心止動(dòng)方組分別與脂多糖組比較,結(jié)果顯示,PI3K激動(dòng)劑740 Y-P組可提高PI3K/p-PI3K和AKT/p-AKT蛋白表達(dá)水平,靜心止動(dòng)方組抑制BV2細(xì)胞PI3K/p-PI3K、AKT/p-AKT蛋白的表達(dá),而當(dāng)聯(lián)合應(yīng)用740 Y-P時(shí),靜心止動(dòng)方的抑制效應(yīng)被逆轉(zhuǎn)。見(jiàn)圖7。

圖7 免疫組化檢測(cè)各組PI3K/AKT通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)注:與模型組比較,**P<0.01,***P<0.001;與對(duì)照組比較,△△P<0.01,△△△P<0.001

3 討論

韓斐教授從臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn),患有TD的患兒或多或少均存在性格內(nèi)向、執(zhí)拗,脾氣暴躁易怒,甚至狂躁的性格特點(diǎn),這種情緒問(wèn)題出現(xiàn)在抽動(dòng)癥狀出現(xiàn)之前,并且貫穿疾病的整個(gè)過(guò)程。而“心為臟腑之主,而總統(tǒng)魂魄,并駭意志”(張介賓《類經(jīng)》),患兒長(zhǎng)期存在情緒問(wèn)題,耗傷心血,會(huì)導(dǎo)致心神失養(yǎng),統(tǒng)領(lǐng)失權(quán),而五志各異;故心神失養(yǎng)是導(dǎo)致患兒出現(xiàn)抽動(dòng)癥狀的病理基礎(chǔ),而癥狀的易于變化、易于反復(fù),是肝陽(yáng)風(fēng)動(dòng)或肝血不足,導(dǎo)致肝風(fēng)內(nèi)動(dòng)的表現(xiàn);心肺同屬上焦,患兒心血虧虛,日久傷及肺陰、肺氣,致使易感外邪而至肺竅不利,鼻咽癥狀突出,而成為抽動(dòng)癥狀發(fā)生的重要誘因。據(jù)此,韓斐教授總結(jié)出“從心論治,肝肺同調(diào)”的治療大法,創(chuàng)立靜心止動(dòng)方(由酸棗仁、珍珠粉、柴胡、天麻、辛夷、藁本、蔓荊子、木蝴蝶、板藍(lán)根、百部、北沙參等11味藥物組成)[10],方中以珍珠粉、酸棗仁寧心安神為君,天麻、柴胡疏肝解郁為臣,加以疏風(fēng)解表之藁本、蔓荊子等,全方共奏寧心安神、祛風(fēng)疏肝之功。課題組前后進(jìn)行了持續(xù)而多維度的臨床研究[4-6,10-20],從不同角度證實(shí)了靜心止動(dòng)方治療TD的臨床療效,發(fā)現(xiàn)其在改善運(yùn)動(dòng)性抽動(dòng)和發(fā)聲性抽動(dòng)的次數(shù)、頻率及總損害率方面明顯優(yōu)于西藥,同時(shí)能改善TD患兒心理情緒癥狀,顯著提高其生命質(zhì)量,并在安全性方面體現(xiàn)出較大優(yōu)勢(shì)。

本研究首先采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法,以靜心止動(dòng)方與TD為研究對(duì)象,通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)與文獻(xiàn)索引獲得交集靶點(diǎn),借助PPI網(wǎng)絡(luò)預(yù)測(cè)靜心止動(dòng)方治療TD的活性成分及潛在的分子靶點(diǎn)。最后通過(guò)信號(hào)通路富集分析,將研究的重點(diǎn)聚焦在了PI3K/AKT信號(hào)通路上。

TD作神經(jīng)精神類疾病,嚴(yán)重影響兒童身心健康,雖然TD的發(fā)病機(jī)制不清,但自身免疫失衡引起的大腦神經(jīng)炎癥反應(yīng)是重要的一種假說(shuō)。作為“腦內(nèi)吞噬細(xì)胞”,小膠質(zhì)細(xì)胞發(fā)揮免疫與神經(jīng)的交互作用,在TD的發(fā)病過(guò)程中起到重要作用。2016年LENNINGTON等[21]對(duì)TD患者尸檢后腦組織的研究發(fā)現(xiàn),TD患者腦尾狀核區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞異?；罨?研究同時(shí)采用基底神經(jīng)核區(qū)腦組織RNA測(cè)序的方法,發(fā)現(xiàn)這些區(qū)域同樣存在過(guò)度活化的小膠質(zhì)細(xì)胞分泌的炎癥介質(zhì)的高表達(dá)。因此TD患者腦中存在異?；罨男∧z質(zhì)細(xì)胞,同時(shí)分泌炎癥介質(zhì),這些炎癥介質(zhì)作為重要的神經(jīng)炎癥調(diào)節(jié)分子,起到神經(jīng)與炎癥之間的交互作用,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)的主要參與者,可以增加血腦屏障的通透性,誘發(fā)自身免疫,促進(jìn)神經(jīng)遞質(zhì)的異常釋放,進(jìn)而導(dǎo)致TD的發(fā)病。

PI3K/AKT信號(hào)可能參與TD發(fā)病。研究表明,PI3K/AKT/NF-κB通路在DOI誘導(dǎo)的TD動(dòng)物模型中被激活,而LY294002(一種PI3K抑制劑)治療后不僅減輕了TD動(dòng)物的癥狀,同時(shí)也減少了PI3K/AKT/NF-κB介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥[22],其關(guān)鍵靶標(biāo)亦被證實(shí)與神經(jīng)精神疾病有關(guān),主要作用包括促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子釋放,調(diào)控谷氨酸能系統(tǒng)功能,抑制海馬神經(jīng)元凋亡,改善線粒體功能異常,調(diào)節(jié)糖和脂質(zhì)代謝紊亂,促進(jìn)腦血管新生等。PI3K/AKT信號(hào)通路調(diào)控小膠質(zhì)細(xì)胞活化介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥的研究越來(lái)越多,其中最具總結(jié)性的文獻(xiàn)[3]綜述指出,在神經(jīng)炎癥的發(fā)生過(guò)程中,PI3K通路發(fā)揮了至關(guān)重要的作用,PI3K的激活/沉默直接影響小膠質(zhì)細(xì)胞M1/M2極化平衡狀態(tài),即發(fā)揮促炎還是抗炎效應(yīng),這對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)尤為重要。

本研究通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證靜心止動(dòng)方是否通過(guò)PI3K/AKT信號(hào)通路發(fā)揮TD的治療作用,為此研究選擇了活化的小膠質(zhì)細(xì)胞作為研究對(duì)象,旨在模擬TD患兒大腦神經(jīng)炎癥反應(yīng)狀態(tài)。在靜心止動(dòng)方干預(yù)后,小膠質(zhì)細(xì)胞中PI3K/p-PI3K、AKT/p-AKT蛋白的表達(dá)水平下調(diào)。為進(jìn)一步證實(shí)該信號(hào)通路的存在,本研究進(jìn)一步加用了PI3K激動(dòng)劑作為合并用藥,從結(jié)果中也可以看出,PI3K激動(dòng)劑740 Y-P上調(diào)了PI3K/p-PI3K、AKT/p-AKT蛋白的表達(dá),740 Y-P與靜心止動(dòng)方聯(lián)合干預(yù)后,靜心止動(dòng)方對(duì)PI3K/AKT信號(hào)通路的抑制效應(yīng)被逆轉(zhuǎn),提示PI3K/AKT信號(hào)通路參與了靜心止動(dòng)方治療TD的生物過(guò)程。

綜上所述,本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí),靜心止動(dòng)方的主要活性成分為槲皮素、豆甾醇、高車前素、β-谷甾醇、山柰酚等,其通過(guò)PI3K/AKT信號(hào)通路調(diào)控紋狀體小膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度活化,抑制大腦神經(jīng)炎癥反應(yīng),從而發(fā)揮TD治療作用。從上述主要活性成分的藥物來(lái)源來(lái)看,柴胡和蔓荊子在本方中的意義較為重大,在臨床應(yīng)用中可考慮適當(dāng)加大用量,而二者與TD的具體量效關(guān)系待于進(jìn)一步研究。本研究為闡釋“心神失養(yǎng)、內(nèi)外風(fēng)動(dòng)”的TD病機(jī)、“從心論治、肝肺同調(diào)”的治療大法提供了生物學(xué)線索和依據(jù),為下一步開(kāi)展高級(jí)別臨床研究提供了實(shí)驗(yàn)支持。

利益沖突聲明:無(wú)。