吳淑娟，王新軍，張武勝，孟衛(wèi)紅，夏禹承，張潤(rùn)光，張有林,*

（1.陜西師范大學(xué)食品工程與營(yíng)養(yǎng)科學(xué)學(xué)院，陜西 西安 710119；2.陜西潼關(guān)縣紅寶石軟籽石榴農(nóng)民專業(yè)合作社，陜西 渭南 714300）

結(jié)腸炎是一種由細(xì)菌、真菌感染或遺傳、免疫及環(huán)境等多種因素引發(fā)的炎癥性腸病，包括潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）和克羅恩病[1]。其中，UC主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、便血等癥狀，伴隨強(qiáng)烈的氧化應(yīng)激和細(xì)胞炎癥因子的聚集，且病程長(zhǎng)、易反復(fù)，長(zhǎng)期的慢性炎癥狀態(tài)易引發(fā)結(jié)腸癌及其他相關(guān)疾病[2]，多數(shù)研究認(rèn)為其發(fā)病機(jī)制與各因素共同作用引起的中性粒細(xì)胞增生、腸黏膜屏障損傷、促炎因子過(guò)度表達(dá)及腸道菌群異常免疫反應(yīng)[3-5]有關(guān)。目前主要通過(guò)生物制劑、免疫調(diào)節(jié)劑等藥物治療[6]，但藥物治療往往表現(xiàn)出長(zhǎng)期依賴、暫時(shí)愈合及不可預(yù)測(cè)的副作用，因此利用天然產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)療法逐漸受到人們的關(guān)注和青睞[7-9]。

石榴（Punica granatumL.）被譽(yù)為“天下奇果”，因其富含碳水化合物、氨基酸、多酚、黃酮類化合物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中具有很高的藥食兩用價(jià)值。據(jù)報(bào)道，石榴具有抗氧化、抗炎、抗菌、預(yù)防心血管、糖尿病及神經(jīng)性系統(tǒng)疾病[10-12]等多種功能。Yang Jieping等[13]報(bào)道石榴提取物可通過(guò)調(diào)節(jié)結(jié)腸炎相關(guān)基因及盲腸微生物組成減輕白細(xì)胞介素-10（interleukin-10，IL-10）基因敲除小鼠的結(jié)腸炎癥狀；George等[14]發(fā)現(xiàn)石榴皮提取物中高濃度的多酚可以減輕鉻引起的腸道內(nèi)環(huán)境紊亂；Parisio等[15]分別利用石榴的全煎劑、多糖、鞣花單寧處理結(jié)腸炎SD大鼠，發(fā)現(xiàn)三者均能顯著減少由2,4-二硝基苯磺酸引發(fā)的結(jié)腸變化。石榴汁、石榴皮、石榴渣三者的多酚組成相似，但石榴汁具有更高的抗氧化活性[16]。Seeram等[17]發(fā)現(xiàn)由于協(xié)同效應(yīng)石榴汁表現(xiàn)出優(yōu)于單純安石榴苷或鞣花酸的生物活性。石榴富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，對(duì)人體具有多種有益作用。然而，目前關(guān)于石榴汁緩解結(jié)腸炎的作用機(jī)理以及防御功能的研究較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究石榴汁對(duì)葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium salt，DSS）誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎的防御作用，旨在為利用石榴汁營(yíng)養(yǎng)療法治療炎癥性腸病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

健康S P F（無(wú)特定病原體）級(jí)雌性昆明小鼠，6～8 周齡，體質(zhì)量20～25 g，購(gòu)于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（陜）2018-001。

突尼斯軟籽石榴購(gòu)于陜西省渭南市潼關(guān)軟籽石榴試驗(yàn)站。

IL-1β、IL-6、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、干擾素γ（interferon-γ，IFN-γ）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate amino transferase，AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alaninetransaminase，ALT）、肌酐（creatinine，CR）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）、NO試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所；其他化學(xué)試劑均為分析純，購(gòu)于西安晶博化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Velocity 18R型高速冷凍離心機(jī) 英國(guó)Dynamica公司；DW-HL438型超低溫冰箱 合肥美菱股份有限公司；1530型多功能酶標(biāo)儀 美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司；BY-TR型光學(xué)顯微鏡 重慶奧特光學(xué)儀器有限責(zé)任公司；8890-5977B型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）儀 美國(guó)安捷倫科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 石榴汁的制備

以突尼斯軟籽石榴為原料，通過(guò)清洗、去皮、護(hù)色液（0.01%（體積分?jǐn)?shù)，下同）VC、0.3%檸檬酸）護(hù)色、榨汁、酶解（果膠酶添加量0.09%，酶解溫度40 ℃，酶解時(shí)間120 min）、滅酶（90 ℃滅酶10 min）、過(guò)濾離心得到石榴汁，4 ℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 小鼠實(shí)驗(yàn)

取12 只雌性昆明小鼠，于溫度20～22 ℃、相對(duì)濕度60%、24 h明暗交替的環(huán)境下自由飲食進(jìn)水，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為2 組，分別為對(duì)照組（Normal組）和模型組（DSS組），每組6 只。DSS組每日自由飲用3 g/100 mL的新鮮DSS溶液，連續(xù)9 d，對(duì)照組飲用無(wú)菌水。觀察小鼠的精神狀況并檢測(cè)小鼠血清炎癥因子表達(dá)。

取30 只雌性昆明小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后隨機(jī)分為5 組，分別為對(duì)照組（Normal組）、模型組（DSS組）、美沙拉嗪陽(yáng)性對(duì)照組（5-ASA組）、石榴汁低劑量組（LPJ組）、石榴汁高劑量組（HPJ組），每組6 只。除對(duì)照組外，其余各組均給予3 g/100 mL DSS溶液，連續(xù)9 d自由飲用，每日更換新鮮DSS溶液，造模成功后5-ASA組按照人與動(dòng)物等效體表面積劑量關(guān)系灌胃美沙拉嗪腸溶片（5-ASA，130 mg/（kgmb·d）），LPJ組和HPJ組分別自由飲用30%（體積分?jǐn)?shù)，下同）和100%的石榴汁10 mL/d，對(duì)照組和DSS組飲用無(wú)菌水。對(duì)造模后的小鼠干預(yù)14 d后解剖并測(cè)定相應(yīng)指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)周期共23 d。

1.3.3 疾病活動(dòng)指數(shù)測(cè)定

每3 d記錄一次小鼠體質(zhì)量，并觀察小鼠活動(dòng)狀況、精神狀態(tài)、糞便性狀，測(cè)定小鼠糞便隱血，按下式計(jì)算疾病活動(dòng)指數(shù)（disease activity index，DAI）。DAI評(píng)判值及相應(yīng)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)見表1。

表1 小鼠DAI評(píng)判值及相應(yīng)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)Table 1 DAI values and its standard in mice

1.3.4 血清生化指標(biāo)及炎癥因子水平測(cè)定

最后一次飼喂結(jié)束后，小鼠禁食不禁水12 h，采用150～300 mg/kg戊巴比妥酸鈉注射進(jìn)行安樂(lè)死，腹腔主動(dòng)脈取血，靜置30 min，3 000 r/min、4 ℃條件下離心10 min收集血清。取上清液按試劑盒說(shuō)明書測(cè)定小鼠血清ALT、AST、CR、BUN水平，酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ水平。

1.3.5 結(jié)腸氧化應(yīng)激因子及MPO、NO水平測(cè)定

解剖小鼠結(jié)腸組織，用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗，按照結(jié)腸與PBS質(zhì)量體積比1∶9冰浴勻漿待用。按照試劑盒方法分別測(cè)定結(jié)腸氧化應(yīng)激因子MDA、SOD、GSH-Px和MPO、NO水平。

1.3.6 組織病理學(xué)觀察

取新鮮結(jié)腸組織用質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%多聚甲醛溶液固定24 h，乙醇梯度脫水后石蠟包埋切片，脫蠟后分別用蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）和阿利新藍(lán)染液染色并封片，干燥后在顯微鏡下觀察結(jié)腸組織形態(tài)。

1.3.7 糞便短鏈脂肪酸含量測(cè)定

糞便短鏈脂肪酸（short-chain fatty acids，SCFAs）含量的測(cè)定參照Wang Guoliang等[18]的方法。SCFAs是含1～6 個(gè)碳的飽和脂肪酸，對(duì)腸道健康起重要的作用。取0.1 g小鼠糞便樣品與1 mL磷酸溶液（0.1%）渦旋混勻，4 ℃、15 000×g條件下離心10 min，移取上清液并與乙酸乙酯按照體積比1∶1提取，乙酸乙酯萃取相過(guò)0.45 μm濾膜，用DB-WAX毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）進(jìn)行GC-MS分析。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

使用SPSS 23.0軟件進(jìn)行方差分析和Tukey多重比較檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（n＝6）表示，以P＜0.05表示差異顯著，P＜0.01表示差異極顯著。使用Origin 8.0軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型構(gòu)建

根據(jù)炎癥因子的表達(dá)能準(zhǔn)確判斷機(jī)體的炎癥狀態(tài)，由表2可以看出，模型組小鼠自由飲用DSS溶液9 d后，均出現(xiàn)溏便、血便癥狀，DAI極顯著升高（P＜0.01），各促炎因子的表達(dá)水平均約是對(duì)照組的2 倍，表明飲用DSS成功誘導(dǎo)了小鼠結(jié)腸炎，造模成功。

表2 小鼠炎癥因子表達(dá)水平Table 2 Expression levels of inflammatory factors in mice

2.2 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠體質(zhì)量和DAI值的影響

由圖1可以看出，對(duì)照組小鼠在實(shí)驗(yàn)期間體質(zhì)量呈現(xiàn)平穩(wěn)上升趨勢(shì)，其余各組在飲用DSS溶液9 d內(nèi)體質(zhì)量持續(xù)下降，給予美沙拉嗪和石榴汁后小鼠體質(zhì)量減輕癥狀有所緩解，但LPJ、HPJ組小鼠體質(zhì)量與DSS組相比無(wú)明顯差異，可能是石榴汁抑制了胰脂肪酶的活性，降低了腸道對(duì)食物能量的攝取[19]。與DSS組相比，各干預(yù)組小鼠的DAI極顯著下降（P＜0.01），表明石榴汁在一定程度上緩解了DSS引起的小鼠結(jié)腸炎癥狀。

圖1 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠體質(zhì)量（A）及DAI（B）的影響Fig.1 Effect of pomegranate juice on body mass (A) and DAI (B) in mice with colitis

2.3 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度的影響

小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度的變化可以作為評(píng)判結(jié)腸炎癥的一項(xiàng)重要指標(biāo)[20]。由圖2可以看出，DSS組小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度較其他各組極顯著縮短（P＜0.01），5-ASA、LPJ、HPJ組小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度接近對(duì)照組，其中HPJ組結(jié)腸更長(zhǎng)，且腸內(nèi)容物呈現(xiàn)健康的黑色狀態(tài)，表明飲用石榴汁可以緩解由DSS引起的小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度縮短。

圖2 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸長(zhǎng)度的影響Fig.2 Effect of pomegranate juice on colon length in mice with colitis

2.4 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠肝腎功能的影響

潰瘍性結(jié)腸炎以及用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的藥物能引起肝腎受損[21]，ALT、AST均可由肝細(xì)胞分泌，當(dāng)肝細(xì)胞出現(xiàn)炎癥及損傷時(shí)，它們能以極高的敏感度進(jìn)入血清，因此其水平可以用于指示機(jī)體損傷；CR和BUN水平與腎功能及其受損程度密切相關(guān)，其升高可指示腎功能障礙。由圖3可以看出，與對(duì)照組相比，DSS組的ALT、AST活力和CR、BUN濃度均極顯著升高（P＜0.01），表明DSS會(huì)引起肝腎損傷并發(fā)癥；與DSS組相比，5-ASA、LPJ、HPJ組上述指標(biāo)水平均得到較好的改善，LPJ、HPJ組與對(duì)照組總體無(wú)顯著差異（P＞0.05），說(shuō)明飲用石榴汁對(duì)肝腎功能有一定的保護(hù)作用。

圖3 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠肝腎功能的影響Fig.3 Effect of pomegranate juice on liver and kidney functions in mice with colitis

2.5 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠血清炎癥因子表達(dá)的影響

促炎因子水平的升高及抗炎因子水平的降低是結(jié)腸炎的典型特征[22]，可反映結(jié)腸炎的發(fā)展進(jìn)程及嚴(yán)重程度。由圖4可以看出，與對(duì)照組相比，經(jīng)DSS處理后小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IFN-γ質(zhì)量濃度均極顯著升高（P＜0.01），抗炎因子IL-10質(zhì)量濃度極顯著下降（P＜0.01）；給予陽(yáng)性藥物（5-ASA組）和石榴汁（LPJ、HPJ組）干預(yù)后，炎癥因子的表達(dá)水平得到改善，LPJ和HPJ組與5-ASA組表現(xiàn)出相同的變化趨勢(shì)，表明石榴汁可以通過(guò)降低促炎因子的表達(dá)及提高抗炎因子的水平，緩解由DSS引起的結(jié)腸炎癥。

圖4 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠血清炎癥因子水平的影響Fig.4 Effect of pomegranate juice on serum inflammatory factors level in mice with colitis

2.6 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸氧化應(yīng)激水平的影響

炎癥因子的過(guò)度表達(dá)會(huì)加劇機(jī)體的氧化應(yīng)激[23]，而抗氧化物酶類可以消除由炎癥引起的過(guò)量活性氧（reactive oxygen species，ROS），減輕ROS對(duì)機(jī)體的氧化脅迫。由圖5可以看出，與對(duì)照組相比，DSS組小鼠結(jié)腸組織的GSH-Px和SOD活力極顯著降低（P＜0.01），MDA的釋放量極顯著增加（P＜0.01），表明DSS處理的小鼠結(jié)腸組織細(xì)胞出現(xiàn)破壞和凋亡，機(jī)體穩(wěn)態(tài)失調(diào)。5-ASA組和石榴汁組小鼠機(jī)體的GSH-Px和SOD活力均極顯著升高（P＜0.01），MDA的釋放量均極顯著降低（P＜0.01），LPJ和HPJ組表現(xiàn)出較好的調(diào)節(jié)作用，表明飲用石榴汁能緩解由DSS引起的結(jié)腸氧化應(yīng)激。

圖5 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠氧化應(yīng)激水平的影響Fig.5 Effect of pomegranate juice on oxidative stress levels in mice with colitis

2.7 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸MPO活力及NO濃度的影響

MPO主要存在于嗜中性粒細(xì)胞中，是組織中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)的生物標(biāo)志物，它的異常表達(dá)會(huì)加重結(jié)腸組織黏膜的損傷[24]。NO與炎癥性腸病發(fā)病機(jī)制相關(guān)，可以作為結(jié)腸炎的重要生物標(biāo)志物[25]。由圖6可以看出，與對(duì)照組相比，DSS組的結(jié)腸MPO活力和NO濃度均極顯著升高（P＜0.01），表明DSS能引起結(jié)腸組織損傷及炎癥性細(xì)胞浸潤(rùn)；與DSS組相比，5-ASA組和LPJ、HPJ組結(jié)腸MPO活力和NO濃度均顯著降低（P＜0.05，P＜0.01），LPJ、HPJ組與對(duì)照組無(wú)顯著差異，表明飲用石榴汁能緩解DSS引起的結(jié)腸組織損傷和炎癥性細(xì)胞浸潤(rùn)。

圖6 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠MPO活力（A）及NO濃度（B）的影響Fig.6 Effect of pomegranate juice on MPO activity (A) and NO content (B) in mice with colitis

2.8 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸HE染色及杯狀細(xì)胞數(shù)量的影響

由圖7可以看出，對(duì)照組結(jié)腸上皮細(xì)胞及黏膜隱窩結(jié)構(gòu)完整、排列整齊，無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。DSS組結(jié)腸組織出現(xiàn)腺體萎縮，黏膜損傷，多處表現(xiàn)出上皮細(xì)胞脫落及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，且存在大量淋巴細(xì)胞聚集，腸絨毛變短。與DSS組相比，5-ASA組和LPJ、HPJ組隱窩結(jié)構(gòu)趨于正常，上皮結(jié)構(gòu)趨于完整，腺體數(shù)量明顯增多，絨毛變長(zhǎng)。杯狀細(xì)胞可以分泌黏液，能夠潤(rùn)滑和保護(hù)腸上皮，黏液中的黏蛋白可以被阿拉新藍(lán)染液染成藍(lán)色，用于判斷結(jié)腸黏液層的完整性[26]。由圖8可以看出，相比對(duì)照組，DSS組杯狀細(xì)胞明顯減少，且體積不一，表明DSS處理?yè)p壞了小鼠的腸黏膜層結(jié)構(gòu)。經(jīng)石榴汁干預(yù)后，LPJ、HPJ組杯狀細(xì)胞數(shù)量明顯增多，排列緊密有序，表明石榴汁能有效緩解結(jié)腸炎引起的杯狀細(xì)胞減少，減輕腸黏膜損傷。

圖8 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸杯狀細(xì)胞數(shù)量的影響Fig.8 Effect of pomegranate juice on the number of colonic goblet cells in mice with colitis

2.9 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠糞便SCFAs含量的影響

SCFAs由腸道內(nèi)相關(guān)有益菌屬產(chǎn)生，對(duì)維持腸道穩(wěn)態(tài)及正常功能有積極意義。由圖9可以看出，與對(duì)照組比較，DSS組小鼠的糞便中除乙酸外的其余5 種SCFAs及總SCFAs含量均極顯著降低（P＜0.01），表明DSS成功誘導(dǎo)造成了小鼠腸道環(huán)境紊亂；LPJ組小鼠糞便SCFAs與DSS組相比均顯著增加（P＜0.05，P＜0.01），除乙酸和異丁酸外，其余4 種SCFAs含量均高于對(duì)照組，表明石榴汁干預(yù)不僅可以緩解DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎引發(fā)的SCFAs含量下降，還能使其含量高于正常對(duì)照組，通過(guò)維持腸道內(nèi)穩(wěn)態(tài)平衡緩解由DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。

圖9 石榴汁對(duì)結(jié)腸炎小鼠糞便SCFAs組成及含量的影響Fig.9 Effect of pomegranate juice on the compositions and contents of SCFAs in the feces of mice with colitis

3 討論

結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展與腸道微生態(tài)激發(fā)的氧化應(yīng)激及免疫應(yīng)答密切相關(guān)[27]，發(fā)病期間，活化的嗜中性粒細(xì)胞產(chǎn)生大量ROS和活性氮，使MDA、NO濃度升高，導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化，同時(shí)降低抗氧化酶的活性，進(jìn)一步加劇機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)[28]。有研究表明，空腸和結(jié)腸上皮細(xì)胞中足夠的GSH-Px、SOD能通過(guò)消除有害的過(guò)氧化物以防止組織損傷和降解[29]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)美沙拉嗪或石榴汁干預(yù)后，小鼠結(jié)腸的GSH-Px、SOD活力均顯著提高，MDA、NO釋放量均顯著降低，這在一定程度上減輕了自由基和NO對(duì)腸黏膜的破壞作用，緩解了DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸組織損傷。機(jī)體內(nèi)輔助性T細(xì)胞（helper T cell，TH1）免疫反應(yīng)是細(xì)胞介導(dǎo)的促炎反應(yīng)，與炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ等的分泌有關(guān)，而TH2主要與抗炎因子（如IL-10）的分泌有關(guān)，結(jié)腸炎發(fā)生時(shí)TH1/TH2紊亂的免疫應(yīng)答會(huì)使結(jié)腸產(chǎn)生不受控制的組織損傷[30]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)DSS誘導(dǎo)后小鼠的促炎因子分泌顯著增加，抗炎因子分泌顯著減少，使用美沙拉嗪或石榴汁干預(yù)的小鼠與DSS組相比促炎因子分泌顯著降低，抗炎因子分泌顯著增加，TH1/TH2免疫應(yīng)答趨于平衡，石榴汁組表現(xiàn)出良好的治療效果，但LPJ組和HPJ組無(wú)明顯差異，同時(shí)結(jié)腸組織病理切片也觀察到相同的趨勢(shì)，這與Zhao Ruiqi等[31]的研究結(jié)果一致，即飲用石榴汁可以通過(guò)平衡機(jī)體內(nèi)TH1/TH2免疫應(yīng)答，緩解炎癥因子介導(dǎo)的結(jié)腸組織損傷，修復(fù)結(jié)腸黏膜屏障，但并不遵循劑量-效應(yīng)關(guān)系。

有研究表明，結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展與腸道微生物菌群密切相關(guān)，如糞桿菌的存在與結(jié)腸炎的發(fā)病率呈負(fù)相關(guān)[32]，乳酸桿菌和擬桿菌的生長(zhǎng)有助于腸道黏膜屏障的修復(fù)[33]。SCFAs由腸道微生物菌群產(chǎn)生，對(duì)于腸道炎癥性疾病具有重要影響，其中丁酸由梭狀芽孢桿菌屬產(chǎn)生[34]，其作為腸上皮細(xì)胞能量底物的同時(shí)還能通過(guò)抑制炎癥細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)發(fā)揮抗炎作用[35]。本研究結(jié)果顯示，除乙酸外，石榴汁干預(yù)組小鼠的其他SCFAs含量均顯著增加，其中低劑量的石榴汁比高劑量表現(xiàn)出更好的效果，Zhao Ruiqi等[31]在研究石榴皮提取物對(duì)大鼠腸道微生物菌群的作用時(shí)也發(fā)現(xiàn)低劑量干預(yù)效果更好的現(xiàn)象，這可能是小鼠在飲用過(guò)多石榴汁的同時(shí)也增加了糖的攝入，影響了代謝產(chǎn)物組成及含量[36]。但高劑量石榴汁干預(yù)的小鼠在日?；顒?dòng)及血清生化指標(biāo)等方面并沒(méi)有顯示出毒性跡象，且對(duì)小鼠各項(xiàng)生化指標(biāo)及SCFAs組成及含量顯示出有益效果。飲用石榴汁可以通過(guò)調(diào)節(jié)SCFAs的組成及含量維持腸道內(nèi)穩(wěn)態(tài)，緩解DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎癥狀。

石榴富含多酚、黃酮類化合物、花青素等抗氧化活性物質(zhì)，其中多酚類物質(zhì)被報(bào)道具有較好的抗炎作用。尹珊珊等[37]利用從石榴皮中提取的安石榴苷干預(yù)潰瘍性結(jié)腸炎小鼠，發(fā)現(xiàn)其能激活SIRT1/PGC-1α/NRF1通路介導(dǎo)的抗炎、抗氧化和抗蛋白凋亡保護(hù)路徑，改善結(jié)腸黏膜的病理?yè)p傷。鞣花酸也被證明對(duì)結(jié)腸炎癥具有改善作用[38]，其作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)腸道菌群、改善腸道環(huán)境有關(guān)[39]，但研究過(guò)程并未排除石榴中其他成分如糖、纖維等物質(zhì)的影響。此外，石榴多糖在結(jié)腸炎引起的慢性內(nèi)臟疼痛方面也有類似石榴多酚的療效，多糖雖效力不如多酚，卻能與多酚表現(xiàn)出協(xié)同增強(qiáng)作用[15]。由此可見，石榴汁中的多酚、多糖及其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠潰瘍性結(jié)腸炎均具有一定貢獻(xiàn)，其作用機(jī)制與降低生物機(jī)體內(nèi)氧化應(yīng)激、平衡免疫應(yīng)答、改善腸道環(huán)境有關(guān)。

4 結(jié)論

本研究以DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠為模型，探究石榴汁及其飲用量對(duì)結(jié)腸炎的改善作用。造模后小鼠的DAI、炎癥因子表達(dá)量均顯著升高，表明小鼠結(jié)腸炎模型建造成功；對(duì)造模小鼠給予石榴汁干預(yù)，小鼠結(jié)腸炎癥狀減輕，炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ的表達(dá)量降低，氧化應(yīng)激水平降低，經(jīng)切片觀察，結(jié)腸組織上皮及隱窩結(jié)構(gòu)完整、杯狀細(xì)胞數(shù)量增多，SCFAs含量增加。綜上，小鼠飲用石榴汁對(duì)由DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎有顯著的緩解和改善作用。