施崇精，宋 英，石征蓉，袁強(qiáng)華*

基于“火力火候”探討川牛膝工業(yè)化酒炙工藝量變關(guān)系及標(biāo)準(zhǔn)化研究

施崇精1，宋 英2，石征蓉1，袁強(qiáng)華2*

1. 成都市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，四川 成都 610095 2. 成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610075

探究川牛膝工業(yè)化酒炙工藝與其內(nèi)外特征、終點(diǎn)藥溫的量變關(guān)系，優(yōu)選川牛膝最佳酒炙工藝并量化酒炙終點(diǎn)。采用外觀顏色評(píng)分量化外在特征；采用HPLC法測(cè)定的15個(gè)HPLC特征峰峰質(zhì)比量化內(nèi)在特征；采用紅外線溫度計(jì)量化終點(diǎn)藥溫；采用單因素法探究加酒量、悶潤時(shí)間、最大炒藥量比重、炒制溫度、炒制時(shí)間、炒筒轉(zhuǎn)速在不同水平下與川牛膝外觀顏色、HPLC特征峰、終點(diǎn)藥溫之間的量變關(guān)系。最大炒藥量比重、炒制溫度、炒制時(shí)間對(duì)內(nèi)外特征、終點(diǎn)藥溫有明顯影響，加酒量、悶潤時(shí)間、炒筒轉(zhuǎn)速對(duì)內(nèi)外特征、終點(diǎn)藥溫?zé)o明顯影響。優(yōu)選的酒炙工藝為取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片，加飲片質(zhì)量10%的黃酒悶潤2 h，置控溫200 ℃、轉(zhuǎn)速15 r/min的鼓式炒藥機(jī)中炒制20 min，傾出晾涼。酒炙終點(diǎn)藥溫在130～140 ℃。優(yōu)選的川牛膝酒炙工藝參數(shù)明確、合理穩(wěn)定、易于量化酒炙終點(diǎn)，適合于川牛膝酒炙工業(yè)化生產(chǎn)。

川牛膝；火力火候；工業(yè)化酒炙工藝；內(nèi)外特征；終點(diǎn)藥溫；5-羥甲基糠醛；杯莧甾酮

中藥炮制是我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中獨(dú)具一格的制藥技術(shù)，已列入了我國非物質(zhì)文化遺產(chǎn)。明代陳嘉謨?cè)凇侗静菝审堋分袑懙溃骸胺菜幹圃?，貴在適中，不及則功效難求，太過則氣味反失”，中藥炮制既不能“不及”又不能“太過”，而講究“適中”。中藥炮制“適中”才能發(fā)揮其增效減毒等特殊作用，常見的中藥炮制方法有凈制、切制、炒制、酒炙、醋炙、蒸制等，其中酒炙具有溫煦、通達(dá)、升提等炮制作用。

川牛膝屬川產(chǎn)道地藥材，具有逐瘀通經(jīng)、通利關(guān)節(jié)、利尿通淋之功，臨床上用于治療經(jīng)閉癥瘕、胞衣不下、跌撲損傷、風(fēng)濕痹痛、足痿筋攣、尿血血淋，經(jīng)酒炙后能增強(qiáng)其逐瘀通經(jīng)，通利關(guān)節(jié)之功[1-2]。根據(jù)《中國藥典》2020年版規(guī)定，酒川牛膝經(jīng)酒炙后其形如川牛膝片，表面棕黑色，微有酒香氣，味甜。酒川牛膝較川牛膝片的主要差異為表面棕黑色、微有酒香氣等主觀性性狀描述，并未闡述具體的酒炙參數(shù)和客觀性差異，難以體現(xiàn)出“適中”的客觀性和標(biāo)準(zhǔn)性。現(xiàn)代工業(yè)化酒炙多采用鼓式炒藥機(jī)等自動(dòng)化設(shè)備進(jìn)行炒制，而現(xiàn)有酒炙工藝研究多以傳統(tǒng)手工炒制為考察對(duì)象，并未考察工業(yè)化炮制設(shè)備特有參數(shù)對(duì)酒炙工藝的影響，嚴(yán)重脫離了工業(yè)化炮制的實(shí)際情況。有學(xué)者對(duì)中藥炮制技術(shù)提出“火力火候”概念[3-5]，即“火力”是使藥物或受熱體溫度變化的能力，是藥物或受熱體的溫升速度，或藥物、受熱體在單位時(shí)間內(nèi)的溫度變化值；“火候”是火力持續(xù)作用的結(jié)果，是藥物或受熱體在火力作用下達(dá)到的溫度或熱的程度。炮制中炒制過程是熱能量傳遞的過程，通過外在熱源使飲片熱能發(fā)生變化而引起其理化性質(zhì)改變，從而達(dá)到增效減毒等炮制作用。飲片熱能變化體現(xiàn)在飲片的溫度，即為藥溫。本研究基于“火力火候”，結(jié)合現(xiàn)代工業(yè)化炮制技術(shù)，采用鼓式炒藥機(jī)依次考察加酒量、悶潤時(shí)間、最大炒藥量比重、炒制溫度、炒制時(shí)間、炒筒轉(zhuǎn)速與川牛膝外觀顏色、HPLC特征峰、終點(diǎn)藥溫之間的量變關(guān)系，優(yōu)選最佳酒炙工藝并驗(yàn)證，同時(shí)對(duì)酒炙終點(diǎn)進(jìn)行藥溫量化，以期為酒川牛膝工業(yè)化酒炙工藝參數(shù)和酒炙終點(diǎn)客觀化提供參考依據(jù)[6]。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀，美國安捷倫科技有限公司；BP-211D型十萬分之一電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器（中國）有限公司；LE204E型萬分之一電子天平，梅特勒托利多儀器公司；111B型高速中藥粉碎機(jī)，瑞安市永厲制藥機(jī)械有限公司；KH-250B型超聲波清洗器，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司；CG-750型自控溫鼓式炒藥機(jī)，設(shè)備最大炒藥量50 kg，杭州海善制藥設(shè)備有限公司；Testo 830-T1型紅外線溫度計(jì)，德圖儀表（深圳）有限公司。

1.2 材料

杯莧甾酮對(duì)照品，批號(hào)111804-201303，質(zhì)量分?jǐn)?shù)93.5%，購自中國食品藥品檢定研究院；5-羥甲基糠醛（5-HMF）對(duì)照品，批號(hào)170825，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%，購自成都植標(biāo)化純生物技術(shù)有限公司；甲醇、乙腈、磷酸為色譜純，美國Tedia公司；水為自制超純水；川牛膝飲片H（批號(hào)171205）、川牛膝飲片K（批號(hào)180321）、川牛膝飲片M（批號(hào)180530），購自四川省中藥飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科主任中藥師宋英鑒定，均為來源于莧科杯莧屬植物川牛膝Kuan的干燥根，符合《中國藥典》2020年版的要求。

2 方法與結(jié)果

2.1 酒川牛膝飲片的制備

取川牛膝飲片，加適量黃酒悶潤透，炒制至顏色明顯加深，表面棕黑色，微有酒香氣，味甜時(shí)，傾出晾涼，作為酒川牛膝飲片。

2.2 色譜條件

色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫程序?yàn)?～8 min，1%乙腈；8～15 min，1%～4%乙腈；15～53 min，4%～9%乙腈；53～70 min，9%～15%乙腈；70～100 min，15%～16%乙腈；100～110 min，16%～22%乙腈；110～130 min，22%～33%乙腈；130～145 min，33%～42%乙腈；145～160 min，42%乙腈。檢測(cè)波長為多波長切換：0～15 min，220 nm；15～20 min，200 nm；20～25 min，250 nm；25～90 nm，220 nm；90～109 min，250 nm；109～116 min，200 nm；116～160 min，220 nm。體積流量1.0 mL/min；進(jìn)樣量20 μL；柱溫20 ℃。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

2.3.1 杯莧甾酮 取杯莧甾酮對(duì)照品適量，精密稱定為10.64 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度線，搖勻，得杯莧甾酮對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取杯莧甾酮對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度線，搖勻，即得含杯莧甾酮99.484 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3.2 5-HMF 取5-HMF對(duì)照品適量，精密稱定為20.03 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度線，搖勻，得5-HMF對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密吸取5-HMF對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度線，搖勻，即得含5-HMF 196.294 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備

取待測(cè)飲片粉末（過3號(hào)篩）約1.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入45%甲醇20 mL，密閉，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率500 W、頻率25 kHz）1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用45%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 專屬性考察 取川牛膝飲片H適量，按照“2.4”項(xiàng)下方法制得供試品溶液；取對(duì)照品溶液和供試品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果各特征峰分離度良好，相互之間無干擾，表明該方法專屬性強(qiáng)。

2.5.2 精密度考察 取川牛膝飲片H適量，按“2.4”項(xiàng)下方法制得供試品溶液，在24 h內(nèi)按“2.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，由結(jié)果可知，以色譜峰10（杯莧甾酮）為參照峰，15個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積RSD值均在3.0%內(nèi)，表明該儀器精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性考察 取川牛膝飲片H適量，共6份，分別按“2.4”項(xiàng)下方法制得供試品溶液，在24 h內(nèi)按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果以色譜峰10（杯莧甾酮）為參照峰，15個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積RSD值均在3.0%內(nèi)，表明該供試品溶液制備方法重現(xiàn)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性考察 取川牛膝飲片H適量，按“2.4”項(xiàng)下方法制得供試品溶液，在0、3、6、9、12、15、18、21、24、48 h后，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果以色譜峰10（杯莧甾酮）為參照峰，15個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積RSD值均在3.0%內(nèi)，表明供試品溶液在室溫下放置48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已測(cè)定杯莧甾酮含量（615.8 μg/g）的川牛膝飲片H 0.5 g共6份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入杯莧甾酮對(duì)照品溶液（186.025 6 μg/mL）1.5 mL，按照“2.4”項(xiàng)下方法制得供試品溶液6份，再按照“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算得杯莧甾酮的平均加樣回收率為101.64%，RSD為2.22%，結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確度良好。

2.6 川牛膝酒炙內(nèi)外特征與終點(diǎn)藥溫量化

2.6.1 酒炙工藝預(yù)試 參考現(xiàn)有研究，結(jié)合工業(yè)化酒炙技術(shù)和CG-750型自控溫鼓式炒藥機(jī)（以下簡稱鼓式炒藥機(jī)）設(shè)備，對(duì)川牛膝酒炙工藝進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。由預(yù)試驗(yàn)結(jié)果可知，取川牛膝飲片H 20 kg（最大炒藥量比重為40%，最大炒藥量比重＝投料量/設(shè)備最大炒藥量），加飲片質(zhì)量10%的黃酒悶潤2 h，置控溫200 ℃、轉(zhuǎn)速15 r/min的鼓式炒藥機(jī)中炒制15 min，傾出晾涼，所得酒川牛膝飲片與傳統(tǒng)手工炮制的外觀顏色較為一致，且炒制過程中外觀顏色容易控制，可行性較好。取川牛膝飲片H 20 kg，共4份，按預(yù)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行酒炙，即得酒川牛膝飲片H1～H4。

2.6.2 外在特征 外在特征量化采取外觀顏色評(píng)分法，由四川省中藥飲片有限責(zé)任公司生產(chǎn)技術(shù)部3名經(jīng)驗(yàn)豐富的炮制老藥工進(jìn)行觀察評(píng)分，以分?jǐn)?shù)為0分附近視為炮制“適中”，即符合酒川牛膝的外觀顏色要求；分?jǐn)?shù)為正值視為炮制“太過”，即飲片顏色過深，呈焦黑色或炭化；分?jǐn)?shù)為負(fù)值視為炮制“不及”，即飲片顏色未明顯加深。外觀顏色評(píng)分為?100～100分，作為外在特征量化指標(biāo)。酒川牛膝飲片H1～H4外觀顏色趨于一致，均符合酒川牛膝外觀顏色的要求，即顏色較川牛膝飲片H明顯加深，表面棕黑色，微有酒香氣，味甜。酒川牛膝飲片H1～H4的外觀顏色評(píng)分見表1。

2.6.3 內(nèi)在特征 取川牛膝飲片H、酒炙飲片H1～H4適量，按“2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，取“2.3”項(xiàng)下杯莧甾酮對(duì)照品溶液和5-HMF對(duì)照品溶液及上述供試品溶液適量，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果見圖1。

參考前期研究工作[7-9]，以特征峰10（杯莧甾酮）為參照峰，篩選響應(yīng)值較大的15個(gè)特征峰（編號(hào)依次為1～15），采用以上15個(gè)特征峰峰質(zhì)比（峰質(zhì)比＝峰面積/稱樣質(zhì)量）作為內(nèi)在特征量化指標(biāo)。15個(gè)特征峰指認(rèn)了其3號(hào)峰為5-HMF，10號(hào)峰為杯莧甾酮，各特征峰峰質(zhì)比結(jié)果見表1。由結(jié)果可知，川牛膝飲片經(jīng)酒炙后，新增了峰2～4、6共4個(gè)特征峰，峰1、5、12、13共4個(gè)特征峰峰質(zhì)比出現(xiàn)明顯下降，峰7～11、14、15共7個(gè)特征峰峰質(zhì)比基本保持不變，表明川牛膝酒炙前后在某些組分上發(fā)生了一定的變化，以此作為酒炙前后特征峰量變規(guī)律要求。

表1 川牛膝酒炙前后特征峰峰質(zhì)比、終點(diǎn)藥溫、外觀顏色評(píng)分

3-5-HMF 10-杯莧甾酮

2.6.4 終點(diǎn)藥溫 采用紅外線溫度計(jì)測(cè)定酒川牛膝飲片H1～H4炒制結(jié)束時(shí)飲片表面溫度，即為終點(diǎn)藥溫，結(jié)果見表1。終點(diǎn)藥溫用以體現(xiàn)“火力火候”的強(qiáng)弱[10]。

2.7 不同酒炙工藝與內(nèi)外特征、終點(diǎn)藥溫量變關(guān)系

2.7.1 酒炙工藝設(shè)計(jì)與測(cè)定 根據(jù)“2.6”項(xiàng)下結(jié)果和實(shí)際生產(chǎn)狀況，取川牛膝飲片H，采用鼓式炒藥機(jī)依次對(duì)加酒量、悶潤時(shí)間、最大炒藥量比重、炒制溫度、炒制時(shí)間、炒筒轉(zhuǎn)速6個(gè)酒炙工藝因素的不同水平進(jìn)行單因素考察，以期探索酒炙工藝與內(nèi)外特征、終點(diǎn)藥溫之間的量變關(guān)系，為優(yōu)選川牛膝最佳酒炙工藝提供一定的參考依據(jù)。

取各酒炙工藝炮制的酒川牛膝飲片，按“2.6.2”項(xiàng)下方法對(duì)外觀顏色逐一評(píng)分，按“2.6.4”項(xiàng)下方法測(cè)定終點(diǎn)藥溫，結(jié)果見表2～7。按“2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄并計(jì)算“2.6.3”項(xiàng)下所示的15個(gè)特征峰峰質(zhì)比，結(jié)果見表2～7。

表2 川牛膝酒炙工藝中加酒量對(duì)特征峰峰質(zhì)比、終點(diǎn)藥溫和外觀顏色評(píng)分的影響

表3 川牛膝酒炙工藝中悶潤時(shí)間對(duì)特征峰峰質(zhì)比、終點(diǎn)藥溫和外觀顏色評(píng)分的影響

表4 川牛膝酒炙工藝中最大炒藥量比重對(duì)特征峰峰質(zhì)比、終點(diǎn)藥溫和外觀顏色評(píng)分的影響

表5 川牛膝酒炙工藝中炒制溫度對(duì)特征峰峰質(zhì)比、終點(diǎn)藥溫和外觀顏色評(píng)分的影響

2.7.2 加酒量 取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片H（20 kg）共5份，加飲片質(zhì)量10.0%、12.5%、15.0%、17.5%、20.0%的黃酒悶潤2 h，分別置控溫200 ℃、轉(zhuǎn)速15 r/min的鼓式炒藥機(jī)中炒制15 min，傾出晾涼，即得編號(hào)依次為A1～A5的酒川牛膝飲片，按“2.7.1”項(xiàng)下方法測(cè)定并記錄結(jié)果。

由表2結(jié)果可知，在外在特征方面，各樣品外觀顏色均整體差異不大，符合酒川牛膝外在特征要求，表明加酒量與外在特征無明顯相關(guān)性。在內(nèi)在特征方面，除A5樣品未完全達(dá)到酒炙前后特征峰量變規(guī)律要求外，其余樣品均符合特征峰量變規(guī)律，表明加酒量對(duì)內(nèi)在特征影響不大。

表6 川牛膝酒炙工藝中炒制時(shí)間對(duì)特征峰峰質(zhì)比、終點(diǎn)藥溫和外觀顏色評(píng)分的影響

表7 川牛膝酒炙工藝中炒筒轉(zhuǎn)速對(duì)特征峰峰質(zhì)比、終點(diǎn)藥溫和外觀顏色評(píng)分的影響

特征峰峰質(zhì)比變化趨勢(shì)表明加酒量與峰2～4、6共4個(gè)類特征峰呈負(fù)相關(guān)性，與峰1、5共2個(gè)特征峰呈正相關(guān)性，與峰7～15共9個(gè)特征峰無明顯相關(guān)性。在終點(diǎn)藥溫方面，各樣品終點(diǎn)藥溫差異不大，表明加酒量與終點(diǎn)藥溫?zé)o明顯相關(guān)性。

從“火力火候”而言，由于黃酒用量的不同，使飲片升溫速度略有不一致，從而導(dǎo)致飲片終點(diǎn)藥溫差異，并表現(xiàn)出酒川牛膝內(nèi)外特征和終點(diǎn)藥溫的差異。經(jīng)觀察10%及以上的黃酒用量均能將飲片潤透。綜上所述，加酒量對(duì)酒川牛膝的內(nèi)外特征并未產(chǎn)生明顯影響，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際情況考慮，擬定加酒量為10%。

2.7.3 悶潤時(shí)間 取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片H（20 kg）共7份，加飲片質(zhì)量10%的黃酒分別悶潤0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 h，分別置控溫200 ℃、轉(zhuǎn)速15 r/min的鼓式炒藥機(jī)中炒制15 min，傾出晾涼，即得編號(hào)依次為B1～B7的酒川牛膝飲片，按“2.7.1”項(xiàng)下方法測(cè)定并記錄結(jié)果。

由表3結(jié)果可知，各樣品外觀顏色基本一致，符合酒川牛膝外在特征要求，均達(dá)到酒炙前后特征峰量變規(guī)律要求，同時(shí)悶潤時(shí)間與內(nèi)外特征、終點(diǎn)藥溫之間均無明顯相關(guān)性。經(jīng)觀察悶潤2 h及以上可達(dá)到悶透的效果。綜上所述，悶潤時(shí)間對(duì)酒川牛膝內(nèi)外特征未產(chǎn)生明顯影響，結(jié)合實(shí)際情況和生產(chǎn)效率考慮，擬定悶潤時(shí)間為2 h。

2.7.4 最大炒藥量比重 取最大炒藥量比重分別為20%、30%、40%、60%、80%、100%的川牛膝飲片H（依次為10、15、20、30、40、50 kg）共6份，加飲片質(zhì)量10%的黃酒悶潤2 h，分別置控溫200 ℃、轉(zhuǎn)速15 r/min的鼓式炒藥機(jī)中炒制15 min，傾出晾涼，即得編號(hào)依次為C1～C6的酒川牛膝飲片，按“2.7.1”項(xiàng)下方法測(cè)定并記錄結(jié)果。

由表4結(jié)果可知，在外在特征方面，各樣品外觀顏色差異很大，其中C1樣品顏色基本成焦黑色且少量炭化，C5、C6樣品整體顏色未變深且不均勻，不符合酒川牛膝外在特征要求，其余樣品符合酒川牛膝外在特征要求。最大炒藥量比重越大，酒炙飲片外觀顏色明顯越淺，表明最大炒藥量比重與外在特征呈負(fù)相關(guān)。

在內(nèi)在特征方面，C4、C5、C6樣品未完全達(dá)到酒炙前后特征峰量變規(guī)律要求，C1、C2、C3樣品均符合酒炙前后特征峰量變規(guī)律要求，表明最大炒藥量比重對(duì)內(nèi)在特征影響很大。

特征峰峰質(zhì)比變化趨勢(shì)表明最大炒藥量比重與峰2～4、6共4個(gè)特征峰呈負(fù)相關(guān)性，與峰1、5、7～11、14、15共9個(gè)特征峰呈正相關(guān)性，與峰12、13共2個(gè)特征峰無明顯相關(guān)性。在終點(diǎn)藥溫方面，最大炒藥量比重越大，終點(diǎn)藥溫明顯越低，加酒量與終點(diǎn)藥溫呈負(fù)相關(guān)。

從“火力火候”而言，由于最大炒藥量比重不同，使飲片升溫速度不一致，從而導(dǎo)致飲片終點(diǎn)藥溫差異，并表現(xiàn)出酒川牛膝內(nèi)外特征和終點(diǎn)藥溫的差異。綜上所述，最大炒藥量比重對(duì)酒川牛膝的內(nèi)外特征產(chǎn)生明顯影響，根據(jù)內(nèi)外特征分析，擬定最大炒藥量為40%。

2.7.5 炒制溫度 取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片H（20 kg）各6份，加飲片質(zhì)量的10%的黃酒悶潤2 h，分別置控溫250、225、200、175、150、125 ℃轉(zhuǎn)速15 r/min的鼓式炒藥機(jī)中炒制15 min，傾出晾涼，即得編號(hào)依次為D1～D6的酒川牛膝飲片，按“2.7.1”項(xiàng)下方法測(cè)定并記錄結(jié)果。

由表5結(jié)果可知，在外在特征方面，各樣品外觀顏色差異很大，其中D1樣品顏色基本成焦黑色且部分炭化，D5、D6樣品整體顏色較淺，不符合酒川牛膝外在特征要求，其余樣品符合酒川牛膝外在特征要求。炒制溫度越高，酒炙飲片外觀顏色明顯越深，表明炒制溫度與外在特征呈正相關(guān)。在內(nèi)在特征方面，D4～D6樣品未完全達(dá)到酒炙前后特征峰量變規(guī)律要求，D1～D3樣品均符合酒炙前后特征峰量變規(guī)律要求，表明炒制溫度對(duì)內(nèi)在特征影響很大。

特征峰峰質(zhì)比變化趨勢(shì)表明炒制溫度與峰2～4、6共4個(gè)特征峰呈正相關(guān)性，與峰1、5、7～11、14、15共9個(gè)特征峰呈負(fù)相關(guān)性，與峰12、13共2個(gè)特征峰無明顯相關(guān)性。在終點(diǎn)藥溫方面，炒制溫度越高，終點(diǎn)藥溫明顯越高，炒制溫度與終點(diǎn)藥溫呈正相關(guān)。

從“火力火候”而言，由于炒制溫度不同，使飲片升溫速度明顯不一致，從而導(dǎo)致飲片終點(diǎn)藥溫差異，并表現(xiàn)出酒川牛膝內(nèi)外特征和終點(diǎn)藥溫的差異。綜上所述，炒制溫度對(duì)酒川牛膝的內(nèi)外特征產(chǎn)生明顯影響，根據(jù)內(nèi)外特征分析，擬定炒制溫度為200 ℃。

2.7.6 炒制時(shí)間 取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片H（20 kg）各7份，加飲片質(zhì)量的10%的黃酒悶潤2 h，分別置控溫200 ℃、轉(zhuǎn)速15 r/min的鼓式炒藥機(jī)中炒制22.5、20.0、17.5、15.0、12.5、10.0、7.5 min，傾出晾涼，即得編號(hào)依次為E1～E7的酒川牛膝飲片，按“2.7.1”項(xiàng)下方法測(cè)定并記錄結(jié)果。

由表6結(jié)果可知，在外在特征方面，各樣品外觀顏色差異很大，其中E1樣品顏色基本成焦黑色且多數(shù)炭化，E7樣品整體顏色較淺，不符合酒川牛膝外在特征要求，其余樣品符合酒川牛膝外在特征要求。炒制時(shí)間越長，酒炙飲片外觀顏色明顯越深，表明炒制時(shí)間與外在特征呈正相關(guān)。

在內(nèi)在特征方面，E5～E7樣品未完全達(dá)到酒炙前后特征峰量變規(guī)律要求，E1～E4樣品均符合酒炙前后特征峰量變規(guī)律要求，表明炒制時(shí)間對(duì)內(nèi)在特征影響很大。特征峰峰質(zhì)比變化趨勢(shì)表明炒制時(shí)間與峰2～4、6共4個(gè)特征峰呈正相關(guān)性，與峰1、5、7～11、14、15共9個(gè)特征峰呈負(fù)相關(guān)性，與峰12、13共2個(gè)特征峰明顯無明顯相關(guān)性。在終點(diǎn)藥溫方面，炒制時(shí)間越長，終點(diǎn)藥溫明顯越高，炒制時(shí)間與終點(diǎn)藥溫呈正相關(guān)。

從“火力火候”而言，由于炒制時(shí)間不同，從而導(dǎo)致飲片終點(diǎn)藥溫差異，并表現(xiàn)出酒川牛膝內(nèi)外特征和終點(diǎn)藥溫的差異。綜上所述，炒制時(shí)間對(duì)酒川牛膝的內(nèi)外特征產(chǎn)生明顯影響，根據(jù)內(nèi)外特征分析，擬定炒制時(shí)間為15 min。

2.7.7 炒筒轉(zhuǎn)速 取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片H（20 kg）各5份，加飲片質(zhì)量的10%的黃酒悶潤2 h，置控溫200 ℃、轉(zhuǎn)速分別為5、10、15、20、25 r/min的鼓式炒藥機(jī)中炒制15 min，傾出晾涼，即得編號(hào)依次為G1～G5的酒川牛膝飲片，按“2.7.1”項(xiàng)下方法測(cè)定并記錄結(jié)果。

由表7結(jié)果可知，各樣品外觀顏色均基本一致，符合酒川牛膝外在特征要求，均達(dá)到酒炙前后特征峰量變規(guī)律要求，同時(shí)炒筒轉(zhuǎn)速與內(nèi)外特征、終點(diǎn)藥溫之間均無明顯相關(guān)性。經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)在低轉(zhuǎn)速下，極少部分飲片易長期粘附在炒筒內(nèi)壁，導(dǎo)致成品中含有少量的焦黑飲片。

綜上所述，炒筒轉(zhuǎn)速對(duì)酒川牛膝內(nèi)外特征未產(chǎn)生明顯影響，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)情況考慮，擬定炒筒轉(zhuǎn)速為15 r/min。

2.8 酒炙工藝、內(nèi)外特征、終點(diǎn)藥溫的相關(guān)性分析

對(duì)各酒炙工藝樣品與其外觀顏色、特征峰、終點(diǎn)藥溫的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見表8。由酒炙工藝與外觀顏色、特征峰、終點(diǎn)藥溫的相關(guān)性分析可知，不同酒炙工藝對(duì)酒川牛膝內(nèi)外特征、終點(diǎn)藥溫的變化影響不一，其中最大炒藥量比重、炒制溫度、炒制時(shí)間對(duì)內(nèi)外特征、終點(diǎn)藥溫有明顯影響，而加酒量、悶潤時(shí)間、炒筒轉(zhuǎn)速未產(chǎn)生明顯的影響。

表8 川牛膝酒炙工藝與特征峰、終點(diǎn)藥溫和外觀顏色的相關(guān)性

“＋”代表正相關(guān)性，“－”代表負(fù)相關(guān)性，“〇”代表無明顯相關(guān)性

“＋” represents positive correlation,“－” represents negative correlation, and “〇” represents no significant correlation

對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行歸納總結(jié)后得出，終點(diǎn)藥溫與外在特征呈正相關(guān)，而終點(diǎn)藥溫、外在特征與峰2～4、6共4個(gè)特征峰呈正相關(guān)性，與峰1、5、7～11、14、15、12、13共9個(gè)特征峰呈負(fù)相關(guān)性，與峰12、13共2個(gè)特征峰無明顯相關(guān)性。

酒炙飲片外觀顏色越深，與之呈正相關(guān)的峰2～4、6共4個(gè)特征峰越高，與之呈負(fù)相關(guān)的峰1、5、7～11、14、15、12、13共9個(gè)特征峰越低，體現(xiàn)了川牛膝酒炙前后內(nèi)外特征變化之間的相關(guān)性。

從“火力火候”而言，是由于不同酒炙工藝下酒炙飲片的藥溫變化趨勢(shì)和終點(diǎn)藥溫的不一致，從而導(dǎo)致了酒川牛膝內(nèi)外特征的差異。

2.9 驗(yàn)證試驗(yàn)與酒炙終點(diǎn)量化

對(duì)優(yōu)選的川牛膝酒炙工藝進(jìn)行批內(nèi)重復(fù)性驗(yàn)證，即取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片H（20 kg）各4份，加飲片質(zhì)量10%的黃酒悶潤2 h，置控溫200 ℃、轉(zhuǎn)速15 r/min的鼓式炒藥機(jī)中炒制15 min，傾出晾涼，即為“2.6.1”項(xiàng)下的酒川牛膝飲片H1～H4。

對(duì)優(yōu)選的川牛膝酒炙工藝進(jìn)行批間重復(fù)性驗(yàn)證，即取最大炒藥量比重為40%的川牛膝飲片K、川牛膝飲片M各20 kg，同上法炮制，即得酒川牛膝飲片K1、酒川牛膝飲片M1。

取酒川牛膝飲片H1～H4、K1、M1，按“2.6.2”項(xiàng)下方法對(duì)外觀顏色逐一評(píng)分，按“2.6.4”項(xiàng)下方法測(cè)定終點(diǎn)藥溫，結(jié)果見表1。

取川牛膝飲片H、K、M，酒川牛膝飲片H1～H4、K1、M1適量，按“2.4”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄并計(jì)算“2.6.3”項(xiàng)下所示的15個(gè)特征峰峰質(zhì)比，結(jié)果見表1。

由結(jié)果可知，川牛膝飲片經(jīng)酒炙后外觀顏色趨于一致，均符合酒川牛膝外在特征要求，均符合規(guī)定的酒炙前后特征峰量變規(guī)律要求，終點(diǎn)藥溫均在130～140 ℃。取酒川牛膝飲片H1～H4、K1、M1，按《中國藥典》2020年版川牛膝項(xiàng)下“酒川牛膝”飲片的規(guī)定進(jìn)行檢測(cè)，其中杯莧甾酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)依次為685.0、704.3、692.3、669.1、715.2、665.4 μg/g，所有檢驗(yàn)結(jié)果均符合《中國藥典》2020年版要求。

根據(jù)“2.8”項(xiàng)下相關(guān)性分析，可知在實(shí)際的生產(chǎn)過程中，終點(diǎn)藥溫能快速、準(zhǔn)確、有效地反映出酒炙飲片的內(nèi)在特征，從而量化酒炙工藝的終點(diǎn)。根據(jù)上述批內(nèi)和批間重復(fù)性驗(yàn)證試驗(yàn)可知，以炒制過程中藥溫達(dá)到130～140 ℃時(shí)，可作為酒炙終點(diǎn)量化標(biāo)準(zhǔn)。

綜上所述，表明優(yōu)選的川牛膝酒炙工藝參數(shù)明確、合理穩(wěn)定、易于量化酒炙終點(diǎn)，適合于川牛膝酒炙工業(yè)化生產(chǎn)。

3 討論

中藥炮制是我國獨(dú)特的制藥技術(shù)，千百年來中藥炮制對(duì)用藥選擇產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響，傳統(tǒng)中藥炮制技術(shù)多為口耳相傳，多對(duì)性狀進(jìn)行表述，并未對(duì)內(nèi)在物質(zhì)變化機(jī)理進(jìn)行闡述，難以達(dá)到現(xiàn)代中藥炮制技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化、客觀化的要求。酒炙工藝相關(guān)研究多以手工炮制為基礎(chǔ)，主要對(duì)加酒量、悶潤時(shí)間、炒制溫度、炒制時(shí)間為考察因素，嚴(yán)重脫離了現(xiàn)代工業(yè)化機(jī)器炒制的客觀事實(shí)[11-13]。川牛膝酒炙工藝研究的文獻(xiàn)報(bào)道較少，童凱等[14-16]采用HPLC法和GC-MS法對(duì)川牛膝酒炙前后化學(xué)成分變化進(jìn)行分析，對(duì)川牛膝酒炙品的鑒定和質(zhì)量控制提供參考依據(jù)，但其并未分析不同酒炙工藝參數(shù)與化學(xué)成分變化之間的規(guī)律。

本實(shí)驗(yàn)新增了最大炒藥量比重、炒筒轉(zhuǎn)速2個(gè)工業(yè)化酒炙工藝考察因素，采用HPLC多波長切換技術(shù)分析樣品特征峰，其中有13個(gè)特征峰與各酒炙工藝參數(shù)有一定的相關(guān)性，表明選用的特征峰可反映出了酒炙工藝的變化，具有一定的代表性。

飲片受熱炒制后原化學(xué)成分的分解或轉(zhuǎn)化是酒炙后化學(xué)成分變化的主要原因，化學(xué)成分的分解或轉(zhuǎn)化與飲片受熱程度有關(guān)，其主要由溫度的高低、時(shí)間長短和變化率決定，即與炒制溫度、炒制時(shí)間和最大炒藥量比重3個(gè)酒炙工藝參數(shù)有關(guān)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明以上3個(gè)酒炙工藝對(duì)酒川牛膝的內(nèi)外特征、終點(diǎn)藥溫有明顯影響。5-HMF是一種美拉德反應(yīng)產(chǎn)物，主要由多糖類成分在高溫下反應(yīng)生成，在含糖類中藥受熱炮制后易于生成，對(duì)發(fā)掘質(zhì)量評(píng)價(jià)新指標(biāo)和規(guī)范炮制工藝拓展了新思路[17-19]。研究可知，川牛膝飲片經(jīng)酒炙后新增的3號(hào)峰為5-HMF，且終點(diǎn)藥溫、外在特征與5-HMF呈正相關(guān)性，其有望作為川牛膝酒炙過程中是否炒制和炒制程度的標(biāo)志產(chǎn)物，對(duì)建立酒川牛膝質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范酒炙生產(chǎn)有參考意義。同時(shí)擬進(jìn)一步采用液質(zhì)聯(lián)用法對(duì)川牛膝酒炙前后變化的化學(xué)成分作進(jìn)一步分析，以期鑒定更多酒炙特征性產(chǎn)物。

本研究考慮到外在特征判斷存在主觀誤差的缺陷，納入終點(diǎn)藥溫達(dá)130～140 ℃作為酒炙終點(diǎn)的客觀量化標(biāo)準(zhǔn)，體現(xiàn)了主客觀優(yōu)劣互補(bǔ)的特質(zhì)，具有準(zhǔn)確、快速、簡便等特點(diǎn)，更符合工業(yè)化酒炙終點(diǎn)需快速判斷的實(shí)際情況?；谟^察外觀顏色易受主觀個(gè)體的差異性和不敏感性的影響，故易對(duì)炮制程度判斷產(chǎn)生偏差。近年來，有學(xué)者利用分光測(cè)色儀對(duì)中藥炮制前后或不同基原的傳統(tǒng)色澤評(píng)價(jià)進(jìn)行量化分析，以探究飲片顏色值與其內(nèi)在特征的客觀關(guān)聯(lián)性，為飲片的快速識(shí)別及質(zhì)量評(píng)價(jià)體系建立提供參考[20-22]。本研究在完善川牛膝酒炙工藝研究的基礎(chǔ)上，擬進(jìn)一步通過分光測(cè)色技術(shù)對(duì)川牛膝酒炙前后進(jìn)行顏色值數(shù)字化研究，以期建立顏色值標(biāo)準(zhǔn)范圍并確立判別分析模型，為揭示酒川牛膝外觀顏色與內(nèi)在特征相關(guān)性和質(zhì)量快速評(píng)價(jià)提供科學(xué)客觀依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Exploring quantitative relationship and standardization research of wine stir-fry industrial technology ofbased on “fire heat”

SHI Chong-jing1, SONG Ying2, SHI Zheng-rong1, YUAN Qiang-hua2

1. Chengdu Integrated TCM&Western Medicine Hospital, Chengdu 610095, China 2. Teaching Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610075, China

To explore the quantitative relationship between the wine stir-fry industrial technology of Chuanniuxi (, CR) and its its internal, external characteristics, the end point temperature, and to optimize the best wine stir-fry technology of CR and quantifying the end point of processed.The appearance color score was used to quantify the external characteristics; The internal characteristics were quantified by the 15 HPLC characteristic peak mass ratios determined by HPLC; The infrared thermometer was used to quantify the temperature of the end point drug temperature of the wine stir-fry industrial technology; The single factor method was used to explore the quantitative relationship between the amount of wine added, the soak time, the proportion of the maximum stir-fry amount, the stir-fry temperature, the stir-fry time, the rotation speed of the stir-fry tube at different levels and the appearance color, the HPLC characteristic peak, and the end point temperature of the wine stir-fry industrial technology of CR.The proportion of the maximum stir-fry amount, stir-fry temperature and stir-fry time had significant effects on the internal and external characteristics and the end point drug temperature, while the amount of wine added, the soak time and the rotation speed of the stir-fry tube had no significant effects on the internal and external characteristics and the end point drug temperature. The optimal wine stir-fry industrial technology of CR is as follows: take the CR slices with the maximum stir-fry amount of 40%, add 10% yellow rice wine to moisten for 2 h, put them in a drum stir-fry machine with a controlled temperature of 200 ℃ and a rotating speed of 15 r/min, fry for 20 min, and pour them out to cool. The drug temperature at the end point temperature of the wine stir-fry industrial technology is between 130—140 ℃.The optimized wine stir-fry industrial technology of CR is clear, reasonable and stable, easy to quantify the end point of processed, and suitable for wine stir-fry industrial technology of CR.

; fire heat; wine stir-fry industrial technology; internal and external characteristics; end point drug temperature; 5-hydroxymethylfurfural; cyasterone

R283.6

A

0253 - 2670(2023)15 - 4839 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.15.009

2023-02-28

國家中醫(yī)藥管理局國家中藥標(biāo)準(zhǔn)化項(xiàng)目（ZYBZH-Y-SC-41）；四川省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科學(xué)技術(shù)研究專項(xiàng)項(xiàng)目（2017ZY001）

施崇精（1995—），男，碩士研究生，主管中藥師，主要從事中藥藥劑與炮制研究。E-mail: 1124758663@qq.com

通信作者：袁強(qiáng)華，男，碩士研究生，主管中藥師，主要從事中藥藥劑與炮制研究。Tel: (028)87783257 E-mail: 369271467@qq.com

[責(zé)任編輯 鄭禮勝]