范曉蘇，沈方科 ，韋建玉，石保峰，賈海江，路 丹，顧明華

(1.廣西大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，植物科學(xué)國家級實驗教學(xué)示范中心，廣西 南寧 530004；2.廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司，廣西 南寧 530001；3.廣西壯族自治區(qū)煙草公司賀州市公司，廣西 賀州 542899)

煙草是世界上種植面積最廣的經(jīng)濟作物，具有很高的經(jīng)濟價值，在中國廣泛種植，是中國農(nóng)民增加收入的重要組成部分[1-2]。在廣西賀州、百色和河池種植的K326、云煙85 和云煙87 其適應(yīng)性不同，其中云煙87 的農(nóng)藝性狀和原煙外觀質(zhì)量最好，是中國各煙區(qū)種植面積較廣的品種之一[3-4]。近年來，人們除了關(guān)注烤煙的經(jīng)濟價值外，卷煙制品的安全性也備受關(guān)注。相關(guān)研究表明：種植過程中可通過葉面噴硒或土壤施硒提高煙葉的硒含量，而硒含量增加對煙氣的主要有害成分如苯酚、巴豆醛和氨等的釋放量具有抑制作用[5]；也有研究認為：烤煙的生物量大，對硒有較強的富集能力，烤煙中硒含量的提高可以緩解重金屬毒害，從而減輕吸煙對人體的危害，有效提高煙草的安全性[6]。已有研究表明：硒對烤煙的生長、化學(xué)成分及礦質(zhì)營養(yǎng)元素有影響，增施低濃度硒肥對烤煙的經(jīng)濟性狀和品質(zhì)有明顯影響[7-9]，硒在烤煙中的作用逐漸受到重視。

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，離子組學(xué)和代謝組學(xué)技術(shù)備受關(guān)注。離子組學(xué)(metallomics)的概念由HARAGUCHI 于2002 年提出，是繼基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)及代謝組學(xué)之后探究生命體的一種新方法，主要研究金屬和非金屬元素的分布及含量，其與代謝組學(xué)相結(jié)合，可更好地了解金屬和非金屬元素的生物學(xué)效應(yīng)及機制[10-11]。代謝組學(xué)(metabolomics)是繼基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)之后的又一熱門組學(xué)，主要研究生物體代謝產(chǎn)物的種類、數(shù)量和變化規(guī)律。代謝組學(xué)是系統(tǒng)生物學(xué)的重要組成部分，研究的代謝物多為相對分子質(zhì)量小于1 500 ku 的小分子物質(zhì)[12-13]。MISHRA 等[14]利用激光誘導(dǎo)擊穿光譜(laser-induced breakdown spectroscopy，LIBS)和原子吸收光譜(atomic absorption spectroscopy，AAS)對煙草樣本的元素進行測定，再通過主成分分析對不同煙草樣品進行區(qū)分。HU 等[15]利用代謝組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究煙草對寒冷反應(yīng)的關(guān)鍵途徑，共篩選出參與這些途徑的26 種代謝物。梁珂馨等[16]利用基于氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀(gas chromatograph-mass spectrometer，GC-MS)法的非靶向代謝組學(xué)技術(shù)對云南省3 個產(chǎn)區(qū)(曲靖、紅河和昆明)的煙葉進行分析，篩選出醇化前期至醇化中期的16 種差異代謝物以及醇化中期至醇化后期的10 種差異代謝物。WANG 等[17]基于電感耦合等離子體質(zhì)譜儀(inductively coupled plasma mass spectrometry，ICPMS)和GC-MS 揭示了鐵皮石斛施用納米Fe3O4肥料后的生理和代謝反應(yīng)。目前，從金屬組學(xué)及代謝組學(xué)角度探究硒肥對烤煙中元素及化學(xué)成分積累影響的研究較少，因此，本研究利用金屬組學(xué)和代謝組學(xué)分析不同外源硒肥在不同施肥方式下對烤煙元素及化學(xué)活性成分含量的影響，旨在通過采用基于ICP-MS 和電感耦合等離子發(fā)射光譜儀 (inductively coupled plasma optical emission spectrometer，ICP-OES)的金屬組學(xué)技術(shù)分析不同外源硒施肥方式對烤煙中元素含量的影響，再采用基于超高效液相色譜儀—四級桿飛行時間質(zhì)譜聯(lián)用儀 (ultra performance liquid chromatographyquadrupole-time of flight-mass spectrometer，UPLCqTOF)的代謝組學(xué)技術(shù)分析不同外源硒施肥方式對烤煙次生代謝物積累的影響，以期為硒在烤煙生產(chǎn)中的科學(xué)施肥方式提供參考依據(jù)，促進硒肥在烤煙生產(chǎn)中的應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 供試材料和試驗處理

試驗于2017 年2—9 月在廣西壯族自治區(qū)賀州市富川縣朝東鎮(zhèn)東水村的大田(N24°37′21″～25°09′20″，E111°05′～111°28′，海拔1 700 m)進行。供試烤煙品種為云煙87；供試土壤基本性質(zhì)為：pH 7.57，有機質(zhì)含量43.05 g/kg，銨態(tài)氮含量29.77 mg/kg，硝態(tài)氮含量32.51 mg/kg，有效磷含量4.90 mg/kg，鉀含量421.66 mg/kg，總硒含量0.44 mg/kg。

根據(jù)烤煙中的硒含量水平設(shè)置4 個試驗處理：未施用硒肥的對照處理(CK)；根際施用生物質(zhì)碳摻雜殼聚糖納米硒93.75 g/hm2處理(S1)，隨基肥一次性施用；葉面噴施氨基酸納米硒33.75 g/hm2處理(S2)和67.50 g/hm2處理(S3)。分別于團棵期、旺長初期、旺長中期、現(xiàn)蕾期和打頂后期5 個時期進行處理，每個時期處理1 次，共處理5 次。每個處理小區(qū)55.56 m2。煙葉成熟后各小區(qū)按照S 型路線多點采樣組成平均樣品，先用自來水再用去離子水清洗樣品，迅速干燥后進行烘烤，烘烤措施按照《烤煙烘烤技術(shù)規(guī)程》(GB/T 23219—2008)執(zhí)行。烘烤結(jié)束后將煙葉裝入密封袋并保存于干燥的環(huán)境中，5 d 內(nèi)用植物粉碎機粉碎，裝入密封袋留存。

1.2 烤煙硒含量的測定

1.2.1 樣品前處理

稱取制備好的煙葉0.25 g (精確到0.000 1 g)置于消化管中，加入硝酸(優(yōu)級純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司) 6 mL 和30%過氧化氫(優(yōu)級純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司) 2 mL，混合均勻，放置預(yù)消解1 h，置于微波消解儀(SINEO，上海新儀微波化學(xué)科技有限公司)中消解，微波消解升溫程序見表1。消解結(jié)束待冷卻后，將消化液轉(zhuǎn)入錐形瓶中，加幾粒玻璃珠，在電熱板上繼續(xù)加熱至近干；加入6 mol/L 鹽酸溶液5 mL，繼續(xù)加熱至溶液變?yōu)榍辶翢o色并伴有白煙出現(xiàn)，取下冷卻后轉(zhuǎn)移至10 mL 容量瓶中，用超純水(Milli-Q，美國)定容混勻待測。以空白和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(國家一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，灌木枝葉GSV-2)為對照。

表1 微波消解升溫程序Tab.1 Temperature program of microwave digestion

1.2.2 硒含量測定

采用原子熒光光度計(寶德BAF-2000，中國)測定。采集參數(shù)為：負高壓280 V；主陰極電流40 mA；輔陰極電流40 mA；爐溫200 ℃；載氣流量400 mL/min；屏蔽氣流量800 mL/min；延遲時間2 s；讀數(shù)時間20 s；進樣時間10 s；進樣體積1 mL；自動進樣。用移液管吸取適量硒標(biāo)準(zhǔn)使用液于 25 mL 容量瓶中，用 1%硝酸定容至刻度，得到標(biāo)準(zhǔn)系列溶液質(zhì)量濃度分別為0、1、2、5、10 和20 μg/L。分別以待測元素的信號值為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合得到標(biāo)準(zhǔn)曲線y=118.606x-5.567 (峰面積)，R2=0.999 6。分別測定空白與樣品的信號值，計算樣品含量。

1.3 富硒烤煙離子組學(xué)測定

1.3.1 樣品前處理

稱取煙葉0.30 g (精確到0.000 1g)于消煮管，加入硝酸6 mL，于PROD60 型石墨消化儀(ZEROM，中國)中100 ℃預(yù)消解1 h；滴入30%過氧化氫2 mL，120 ℃消解1 h；滴入30%過氧化氫2 mL，保持0.5 h；再滴入30%過氧化氫2 mL，搖勻，升溫至180 ℃消煮至澄清；140 ℃趕酸至5 mL 以下，消煮完成。冷卻后轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，加入超純水定容。以空白和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(國家一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，灌木枝葉GSV-2)為對照。

1.3.2 微量元素的測定

煙葉中微量元素用ICP-MS (PerkinElmer Nex-ION 350X，美國)測定。采集參數(shù)為：霧化氣流速0.92 L/min，輔助氣流量1.20 L/min，等離子體流量18.00 L/min，射頻功率1 500 W，脈沖電壓1 250 V，碰撞模式入口電壓4 V，碰撞模式輸出電壓24 V；參數(shù)采集方法：掃描20 次，重復(fù)1 次，數(shù)據(jù)采集3 次，樣品清洗50 s (轉(zhuǎn)速30 r/min)，延遲15 s (轉(zhuǎn)速20 r/min)，清洗45 s (轉(zhuǎn)速30 r/min)，自動進樣，采用碰撞模式，碰撞氣體為氦氣，碰撞氣流速為2.50 L/min，低質(zhì)量截取值為0.25。測定過程中用內(nèi)標(biāo)液進行儀器校準(zhǔn)。待測元素的同位素見表2。

表2 待測元素同位素信息表Tab.2 Information of element to be measured and internal standard isotopes

1.3.3 定量分析

對組間差異較大的元素進行進一步的定量分析。Mn 和Na 采用ICP-MS 進行定量分析，儀器參數(shù)同1.3.2 節(jié)，配置的標(biāo)準(zhǔn)曲線質(zhì)量濃度為50、100、250、500 和1 000 μg/L，得到Mn 的標(biāo)準(zhǔn)曲線y=0.007 0x，R2=0.999 9；Na 的標(biāo)準(zhǔn)曲線y=1.818 5x-6.596 1，R2=0.999 0。大量元素 S、Mg、Al 和P 用ICP-OES (聚光科技ICP-5000，中國)測定，采集參數(shù)為：發(fā)射功率1 150 W，冷卻氣流量12.00 L/min，輔助氣流量1.00 L/min，霧化氣流量0.60 L/min，少量冷卻氣流量，光室吹掃氣流量12.00 L/min，循環(huán)冷卻水2.21 L/min，蠕動泵轉(zhuǎn)速50 r/min，積分時間為短波10 s、長波0.5 s，分析時間25 s；測定元素的分析譜線為：S 180.731 nm，Mg 279.553 nm，Al 396.152 nm，P 178.284 nm；以ICP-OES 測定樣品溶液前配制S、Mg、Al 和P 的混合標(biāo)曲濃度，得到曲線質(zhì)量濃度和相關(guān)參數(shù)(表3)。

表3 標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)Tab.3 Standard curve parameters

1.4 富硒烤煙代謝組學(xué)測定

1.4.1 樣品前處理

稱取粉碎的烤煙0.09 g (精確到0.000 1g)置于10 mL 帶蓋離心管中，加入80%甲醇(色譜純，F(xiàn)isher 公司)—水(Milli-Q 公司超純水儀制備)5 mL，加蓋漩渦混勻30 s，超聲提取30 min，3 500 r/min，室溫離心10 min，取上清液，過0.22 μm 有機濾膜(津騰)。

1.4.2 色譜—質(zhì)譜分析

采用UPLC-qTOF (Waters UPLC-xevo-QTof，美國)對CK、S1、S2和S3的烤煙樣本進行色譜—質(zhì)譜分析。

色譜條件。樣品離子源為電離子源(ESI)，正負離子模式均采用MSEContinuum 模式進行(Waters ACQUITY UPLC I-Class)。樣品采用梯度洗脫模式在Waters ACQUITY UPLC?BEH C18柱(50.00 mm×2.1 mm，0.17 μm)分離。以0.1%甲酸水作為流動相A，100%甲醇作為流動相B。初始流動相條件為95% A 和5% B；5 min 后線性下降至75% A；從5 min 至12 min 線性下降至0% A，保持3 min。流動相流速為0.4 mL/min，柱溫35 ℃，進樣體積2 μL。

質(zhì)譜條件。質(zhì)量掃描范圍：低能量為50～1 200 ku，高能量為100～1 200 ku；霧化氣為氮氣(N2，PEAK NM32LA 氮氣發(fā)生器)；碰撞氣為氬氣(Ar，純度99.999%)；毛細管電壓3 KV；錐孔電壓40 V；源偏移電壓80 V；離子源溫度100 ℃；脫溶劑氣體溫度50 ℃；錐孔氣體流量50 L/h；脫溶劑氣體流速50 L/h；碰撞能量：低能量為關(guān)，高能量為20 V；校正液為亮氨酸腦啡肽。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理

烤煙硒含量以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS 22 軟件進行t檢驗，P＜0.05 表示結(jié)果具有顯著性差異。

烤煙代謝組數(shù)據(jù)用QI 鑒別代謝物，離子組學(xué)和代謝組學(xué)的數(shù)據(jù)首先進行數(shù)據(jù)預(yù)處理，之后統(tǒng)一采用SIMCA-p 14.1 軟件進行主成分分析 (principal component analysis，PCA)和正交偏最小二乘法判別分析(orthogonal partial least square discriminant analysis，OPLS-DA)。PCA 是一種無監(jiān)督學(xué)習(xí)算法，它結(jié)合UV 標(biāo)度化對原始數(shù)據(jù)進行降維處理，從而達到多元統(tǒng)計分析的目的。然后在PCA 基礎(chǔ)上利用有監(jiān)督的OPLS-DA 模型過濾矩陣中的無關(guān)組分，最大限度凸顯組間的差異，實現(xiàn)對不同處理的預(yù)測。最后結(jié)合變量投影重要性(variable importance in the projection，VIP)等參數(shù)篩選潛在標(biāo)記元素及差異代謝物。

2 結(jié)果與分析

2.1 烤煙硒含量差異分析

由表4 可知：CK、S1和S3處理間的硒含量差異極顯著，CK 處理的硒含量為0.029～0.033 mg/kg，S1處理的硒含量為0.188～0.271 mg/kg，S3處理的硒含量為0.360～0.523 mg/kg；S1和S2處理間的硒含量無顯著差異，S2處理的硒含量為0.168～0.299 mg/kg。即根際施肥與葉面噴施2 種不同施肥方式的硒量處于同一水平，而葉面噴施處于2 個不同的硒水平，試驗設(shè)計可滿足后續(xù)試驗要求。

表4 不同處理的硒含量Tab.4 Selenium content in different treatments

2.2 富硒烤煙離子組學(xué)分析

圖1 顯 示：CK 和S1處理在PC1 和PC2 負軸上的偏移量較大，S2和S3處理在PC1 和PC2正軸上的偏移量較大，說明葉面噴施對烤煙離子組的影響較根際施肥大；CK、S1、S2和S3分別位于主成分分析的4 個象限，有明顯的分布特征，說明施肥方式能引起烤煙元素組成的變化；此外，施肥量水平的變化也造成元素組成的變化。為了解各元素在PCA 圖中的載荷，繪制載荷圖(圖2)，可以看出：S、Mg、Mn、Al 和Na等元素與PC1 呈正相關(guān)，P 與PC1 呈負相關(guān)；S、Al、P、Cr 和Ca 等元素與PC2 呈正相關(guān)，Na、Mn 和Mg 等元素與PC2 呈負相關(guān)。第1 組成分中貢獻最大的元素是S、Mg、Mn、Al、Na 和P，說明在不同施肥方式及不同施肥量下烤煙中元素組分發(fā)生了變化。

圖1 烤煙元素主成分分析得分圖Fig.1 Principal component analysis (PCA)score plot of flue-cured tobacco

圖2 烤煙元素主成分分析載荷圖Fig.2 PCA loading plot of flue-cured tobacco

分別建立兩兩分組比較的OPLS-DA 模型，各模型的R2值和Q2值均高于0.69，且兩者的差值不大；以 VIP 值＞1.0 作為潛在生物標(biāo)志物的標(biāo)準(zhǔn)，篩選出兩兩處理組間的潛在標(biāo)志元素(表5)，進一步篩選出S、Mg、Mn、Al、P 和Na 作為CK、S1、S2和S3處理的6 種潛在標(biāo)記元素，并對其進行進一步的定量分析，結(jié)果(表6)顯示：這6 個標(biāo)記元素的含量組間差異大，與統(tǒng)計分析篩選的結(jié)果一致。

表5 組間差異元素比較Tab.5 Comparison of different elements between groups

表6 差異元素在富硒烤煙樣本中的含量Tab.6 Content of different element in tobacco samples

2.3 富硒烤煙代謝組學(xué)分析

由圖3 和圖4 可知：4 組樣本的峰形和峰強度存在差異，即4 組烤煙樣本的代謝物有差異。為了獲得更準(zhǔn)確的代謝差異，需要進行無監(jiān)督的PCA 分析及有監(jiān)督的OPLS-DA 模型分析。

圖3 對照組(a)、根際施肥組(b)以及葉面噴施組(c 和d)樣本的負離子模式總離子流圖Fig.3 Negative ionize mode total ion current chromatography of control (a),rhizosphere fertilizer treatment (b) and foliar spray treatments (c and d)

圖4 對照組(a)、根際施肥組(b)以及葉面噴施組(c 和d)樣本的正離子模式總離子流圖Fig.4 Positive ionize mode total ion current chromatography of control (a),rhizosphere fertilizer treatment (b) and foliar spray treatments (c and d)

用非監(jiān)督的主成分分析方法(PCA)對CK、S1、S2和S3烤煙樣品進行分析，得到烤煙代謝物主成分分析得分圖(圖5)，由圖可知：CK 與S1、S2和S3烤煙之間的次生代謝物差異明顯，S1與S2和S3之間次生代謝物也存在明顯差異，而S2與S3之間雖存在差異但并不明顯。

圖5 不同硒肥處理下各處理間PCA 圖Fig.5 PCA plot of different treatments under different selenium fertilization

有監(jiān)督的OPLS-DA 模型分析結(jié)果顯示：樣品都處于95%置信區(qū)間內(nèi)，Q2≥0.5，說明OPLSDA 預(yù)測性可接受；2 組樣本分布于左右側(cè)置信區(qū)間內(nèi)，樣品之間沒有重疊，區(qū)分效果較好，說明硒肥的施肥方式和施肥量對烤煙代謝有一定的影響。利用OPLS-DA 模型第1 主成分的VIP 值篩選各組間的差異代謝物，共鑒定出29 種差異代謝物，其中植物甾醇及其衍生物4 種，酚類化合物9 種，氨基酸類化合物7 種，醛類化合物3 種及其他物質(zhì)6 種(表7)。相較于CK 處理，葉面噴施硒肥(S2和S3)的烤煙中植物甾醇及其衍生物含量上升，根施處理(S1)中植物甾醇及其衍生物含量下降，說明不同的硒肥施用方式對烤煙中植物甾醇及其衍生物的影響不一。由表7 還可知：根際施硒和葉面噴硒都會影響酚類、氨基酸類和醛類差異代謝物的含量，但硒肥的施用對以上3 類差異代謝物的影響相較于對烤煙中植物甾醇及其衍生物差異代謝物影響小。此外，相較于CK 處理，相對豐度低于1.000 說明該物質(zhì)的合成受到抑制。值得注意的是，在其他類差異代謝物中，3-乙氧基苯甲酰胺含量增加，且硒肥施用方式對該差異代謝物的影響較其他類別中的其他差異代謝物大。

表7 不同處理間差異代謝物的相對豐度Tab.7 Relative abundance of differential metabolites among treatments

3 討論

3.1 硒肥對烤煙元素差異的影響

有文獻報道：硒的施用會對植物中其他某些元素的吸收與積累有影響，磷是植物生長過程中必需的三大營養(yǎng)元素之一，而硫則作為必需的第四大營養(yǎng)元素。有研究表明：磷和硫的豐缺對煙株的生長發(fā)育以及煙葉的產(chǎn)量和品質(zhì)等具有重要的影響[18-19]。馬友華等[20]研究認為：施硫?qū)煵葜形姆e累與硫含量不同有關(guān)，既可為協(xié)同作用，也可為拮抗作用。BLOEM 等[21]研究表明：磷、硫和硒在土壤中均以陰離子形態(tài)被植株吸收，磷或硫元素的豐缺影響植物對硒的吸收與積累，磷和硫間存在顯著的正交互作用。本研究發(fā)現(xiàn)：硒處理可提高煙葉硫的含量，這與前人研究結(jié)果一致；而磷含量卻有所降低，這與前人研究結(jié)果有所不同，有待進一步研究其原因。研究還發(fā)現(xiàn)：施硒對煙草中錳和鋁的含量也產(chǎn)生了影響，根施降低了煙葉中錳含量，而葉面噴施則反之；施硒可提高煙葉中鋁的含量。JIANG 等[22]研究表明：施用硒肥主要通過提高光合作用、氣孔導(dǎo)度羧化效率及Rubisco 含量來促進煙草的生長，而光合作用過程離不開鎂。本研究發(fā)現(xiàn)：施用硒肥可提高煙葉中的鎂含量，促進煙株的生長，且以葉面噴施效果更佳，這與JIANG 等[22]的研究結(jié)果一致。雖然施用硒肥對烤煙鈉的影響鮮見報道，但本研究發(fā)現(xiàn)：施硒方式及施硒量會影響烤煙中鈉的吸收與積累。

3.2 硒肥對烤煙代謝物差異的影響

FAN 等[23]研究表明：過量施硒會造成煙草合成蛋白質(zhì)的氨基酸在細胞質(zhì)中儲存或在細胞壁中固定。LIU 等[24]研究表明：適當(dāng)濃度的納米硒可以促進煙草生長，且噴施納米硒后煙草植株的生物量、根系生長、葉綠素含量、養(yǎng)分積累和活性氧含量的變化與煙草品種有關(guān)。在本研究鑒定出的29 種差異代謝物中，施用硒肥后大部分代謝物含量都發(fā)生了變化，且葉面噴施硒肥對煙草代謝物的影響大于根施；此外，葉面噴施硒肥還造成了煙草酚類、氨基酸類及醛類化合物略微下降。甾醇物質(zhì)對煙草的抗性具有重要作用。研究表明：Ergosterol 能夠激活煙草多種防御基因的表達，增強煙草對病原體的抵抗力[25]；OUYANG等[26]研究表明：Syringaresinol 對煙草花葉病毒的增殖有一定的抑制作用；本研究表明：施用硒肥后，煙葉中植物甾醇類物質(zhì)變化較大。值得注意的是，根施硒肥可導(dǎo)致煙草甾醇類物質(zhì)含量下降，而葉面噴施硒肥則增加了煙草葉片中甾醇類物質(zhì)的含量，其影響機制還需后續(xù)試驗驗證。

硒的施用除了引起元素含量的變化，也會引起煙草代謝物的變化，兩者是相輔相成的。研究表明：施硒肥時，硒含量增加會引起元素與次生代謝物變化。相關(guān)文獻也曾報道S、P、N 等的使用會對硒的吸收與積累產(chǎn)生影響，但是鮮有施用次生代謝物對硒的吸收與積累的影響報道，三者間的相關(guān)性需進一步研究驗證。

4 結(jié)論

外源施加不同硒肥可影響云煙87 S、Mg、Mn、Al、P 和Na 等元素的分布，且不同的施肥方式和不同的硒含量都會影響烤煙的代謝物。從富硒烤煙中鑒定出29 種差異代謝物，且葉面噴施硒肥對烤煙元素及次生代謝物的影響大于根際施硒肥。本研究結(jié)果為研究富硒烤煙元素及次生代謝物的積累機制提供了參考。