頂空氣相色譜法測(cè)定6B 型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮?dú)埩袅?/h1>
2023-07-30 12:05:44齊秋煥黃春華鄭學(xué)學(xué)王翠杰李向群
中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2023年18期
齊秋煥 黃春華 鄭學(xué)學(xué) 韓 菲 王翠杰 李向群
北京民海生物科技有限公司，北京 102600
肺炎鏈球菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，有毒株在體內(nèi)形成莢膜，其莢膜多糖為重要致病物質(zhì)，可引起肺炎、腦膜炎、支氣管炎、心內(nèi)膜炎等疾病[1-3]。23 價(jià)肺炎球菌多糖疫苗能有效預(yù)防老年人下呼吸道感染[4-7]。肺炎球菌精制多糖是生產(chǎn)各種肺炎類疫苗的基本成分。肺炎球菌精制多糖生產(chǎn)過(guò)程中沉淀核酸、粗制多糖和精制多糖引入乙醇，在清洗粗制多糖和精制多糖時(shí)引入丙酮。乙醇略有毒性，能達(dá)到一定的麻醉效果，主要抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)。當(dāng)乙醇攝入量增大時(shí)，可引起延髓血管運(yùn)動(dòng)中樞和呼吸中樞麻痹。丙酮為低毒類致癌物，主要對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有麻醉作用[8]。它們對(duì)人體有一定危害，因此必須控制乙醇、丙酮?dú)埩袅?。目前，?guó)內(nèi)對(duì)于化學(xué)藥、原料藥中有機(jī)溶劑殘留量檢測(cè)已有相關(guān)文獻(xiàn)記載[9-17]，但關(guān)于疫苗中有機(jī)溶劑殘留量檢測(cè)方法文獻(xiàn)較少[18]，且尚未有肺炎球菌精制多糖測(cè)定乙醇、丙酮?dú)埩袅康姆椒╗8,19-24]。因此，本研究采用頂空氣相色譜法對(duì)6B 型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮?dú)埩袅繖z測(cè)方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，按照外標(biāo)法方法進(jìn)行計(jì)算。
1 儀器與試藥
1.1 試劑及儀器
6B 型肺炎球菌精制多糖（樣品批號(hào)：38-6B-22202001、38-6B-22203002、38-6B-22203003、38-6B-22204004、38-6B-22205005、38-6B-22206006、38-6B-22206007、38-6B-22210008、38-6B-22210009，北 京民海生物科技有限公司）；無(wú)水乙醇對(duì)照品（批號(hào)：20170522，氣相色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；丙酮對(duì)照品（批號(hào)：20170511，氣相色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；實(shí)驗(yàn)室用水為注射用水和純化水。氣相色譜儀（GC-2010 Plus AF，島津公司）；頂空進(jìn)樣器（HS-20，島津公司）；DB-624 毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm 膜厚1.80 μm，Agilent Technologies）。
1.2 溶液制備
1.2.1 供試品溶液 用純化水將6B 型肺炎球菌精制多糖溶解成5 000 μg/ml 的溶液。
1.2.2 乙醇、丙酮對(duì)照品貯備液 稱取無(wú)水乙醇210 mg、丙酮280 mg 加入100 ml 容量瓶中，用注射用水定容至刻度。搖勻，得到2 100 μg/ml 乙醇、2 800 μg/ml 丙酮對(duì)照品貯備液。
1.2.3 乙醇、丙酮對(duì)照品溶液 量取2 100 μg/ml 乙醇、2 800 μg/ml 丙酮對(duì)照品貯備液1 ml 到100 ml 容量瓶中，用注射用水定容至刻度，搖勻，得到21 μg/ml 乙醇、28 μg/ml 丙酮對(duì)照品溶液。
1.3 色譜條件
采用頂空進(jìn)樣器使用DB-624 毛細(xì)管色譜柱（Agilent Technologies），載氣為高純氮?dú)猓V柱流量為3.00 ml/min，分流比為10∶1。起始柱溫為40℃，保持2 min；以5℃/min 升溫至80℃，保持4 min；以20℃/min 升溫至200℃，保持2 min。檢測(cè)器溫度為240℃。恒溫爐溫度為80℃、平衡時(shí)間為30 min。
2 方法與結(jié)果
2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
取21 μg/ml 乙醇、28 μg/ml 丙酮對(duì)照品溶液5份，每份2 ml 置20 ml 頂空瓶中。按照“1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖。乙醇峰、丙酮峰的理論板數(shù)均≥5 000，乙醇峰、丙酮峰分別與其相鄰色譜峰的分離度均≥1.5，符合《中華人民共和國(guó)藥典》[25]四部留溶劑測(cè)定法的要求。
2.2 專屬性
肺炎球菌精制多糖制備過(guò)程中按照特定比例使用苯酚抽提去除蛋白質(zhì)，經(jīng)過(guò)離心剩余苯酚量最大≤10%，再經(jīng)過(guò)超濾過(guò)程基本能將苯酚去除[26]。分別配制一定濃度乙醇溶液和丙酮溶液，并配制為乙醇含10%苯酚的溶液、丙酮含10%苯酚的溶液、6B 型肺炎球菌精制多糖含10%苯酚的溶液。分別取乙醇溶液、丙酮溶液、6B 型肺炎球菌精制多糖溶液、苯酚、乙醇含10%苯酚的溶液、丙酮含10%苯酚的溶液、6B 型肺炎球菌精制多糖含10%苯酚的溶液2 ml 置20 ml 頂空瓶中，按照“1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖。乙醇保留時(shí)間約為2.413 min、丙酮保留時(shí)間約為2.794 min、苯酚保留時(shí)間約為18.776 min，且所有峰均達(dá)到分離，分離度應(yīng)＞1.5。見(jiàn)圖1。苯酚的保留時(shí)間遠(yuǎn)大于乙醇、丙酮的保留時(shí)間，提示，苯酚對(duì)乙醇、丙酮?dú)埩袅繖z測(cè)無(wú)干擾。
圖1 氣相色譜圖
2.3 檢測(cè)限（limit of detection，LOD）與定量限（limit of quantitation，LOQ）
先分別配制10 μg/ml 乙醇溶液和10 μg/ml 丙酮溶液，再采用逐步稀釋法將其分別稀釋到0.596、0.199、0.152、0.051 μg/ml。按照“1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，以信噪比3∶1 作為L(zhǎng)OD；以信噪比10∶1 作為L(zhǎng)OQ[25]。在該方法條件下，乙醇的LOD 為0.199 μg/ml，LOQ 為0.596 μg/ml；丙酮的LOD 為0.051 μg/ml，LOQ 為0.152 μg/ml。
2.4 線性范圍
將“1.2.2”中對(duì)照品貯備液用純化水分別稀釋乙醇濃度為0.090、3.000、12.000、21.000、30.000 μg/ml的溶液，丙酮濃度為0.120、4.000、16.000、28.000、40.000 μg/ml 的溶液，按“1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示乙醇的線性方程式為Y=2 276.471 86X-265.405 07，相關(guān)系數(shù)r=0.999 99，線性范圍為0.090～30.000 μg/ml，表明乙醇對(duì)照品色譜峰峰面積與其濃度呈線性關(guān)系，乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2；丙酮的線性方程式為Y=7790.898 42X+4 216.806 23，相關(guān)系數(shù)r=0.998 13，線性范圍為0.120～40.000 μg/ml，表明丙酮對(duì)照品色譜峰峰面積與濃度呈線性關(guān)系，丙酮標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖3。
圖2 乙醇線性范圍標(biāo)準(zhǔn)曲線
圖3 丙酮線性范圍標(biāo)準(zhǔn)曲線
2.5 準(zhǔn)確度
取6B 型肺炎球菌精制多糖溶液4 ml 置離心管中，共12 份。其中3 份分別加純化水6 ml。剩余9 份，分成3 組，每組分別量取2 100 μg/ml 乙醇、2 800 μg/ml丙酮對(duì)照品貯備液0.050、0.100、0.150 ml，再分別加純化水5.950、5.900、5.850 ml?？疾旃┰嚻返?、中、高3個(gè)濃度的加標(biāo)回收率。每份2 ml 置20 ml 頂空瓶中，按照“1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖。
供試品低、中、高3 個(gè)濃度的加標(biāo)回收率乙醇為86.20%～100.66%，丙酮82.89%～91.42%；RSD 乙醇為1.88%～6.44%，丙酮為3.84%～4.50%。見(jiàn)表1。表明在該檢測(cè)條件下乙醇、丙酮準(zhǔn)確度較高，則系統(tǒng)誤差較小。計(jì)算公式為：回收率（%）=（測(cè)定值-初始值）/加入量×100。
表1 6B 型肺炎球菌精制多糖溶液準(zhǔn)確度結(jié)果
2.6 重復(fù)性
取6B 型肺炎球菌精制多糖溶液6 份，每份取2 ml置20 ml 頂空瓶中，按照“1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖。在相同條件下，由同一人對(duì)6B 型肺炎球菌精制多糖溶液試驗(yàn)6 次，供試品RSD 乙醇為2.3%，丙酮為5.5%。表明在同一條件下，采用該檢測(cè)方法乙醇、丙酮?dú)埩袅恐貜?fù)性良好。
2.7 重現(xiàn)性
在不同時(shí)間，由甲、乙、丙3 人對(duì)6B 型肺炎球菌精制多糖溶液共試驗(yàn)3 次，供試品RSD 乙醇為7.2%，丙酮為4.2%。表明不同時(shí)間，不同人員檢測(cè)乙醇、丙酮?dú)埩袅恐噩F(xiàn)性良好。
2.8 樣品測(cè)定
取9 批6B 型肺炎球菌精制多糖按照儀器與試藥中的“1.3”色譜條件進(jìn)行乙醇、丙酮?dú)埩袅繖z測(cè)。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。表明6B 型肺炎球菌精制多糖乙醇、丙酮?dú)埩袅烤^低。
表2 6B 型肺炎球菌精制多糖測(cè)定結(jié)果
3 討論
乙醇的沸點(diǎn)為78.3℃，易溶于水；丙酮的沸點(diǎn)為56.5℃，易溶于水。因此可采用水溶解樣品，同時(shí)使用氣相色譜法進(jìn)行乙醇、丙酮的檢測(cè)。由于6B 型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮含量很低，因此采用頂空氣相色譜法檢測(cè)乙醇、丙酮?dú)埩袅俊?/p>
本研究結(jié)果表明，乙醇、丙酮理論板數(shù)≥5 000，分離度≥1.5，表明各組分可得到較好的分離，系統(tǒng)的適用性良好；苯酚對(duì)6B 型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮?dú)埩袅繖z測(cè)沒(méi)有干擾；乙醇的LOD 為0.199 μg/ml，LOQ 為0.596 μg/ml；丙酮的LOD 為0.051 μg/ml，LOQ為0.152 μg/ml，表明在定量限以上能定量測(cè)定乙醇、丙酮的殘留量。6B 型肺炎球菌精制多糖對(duì)低、中、高3 個(gè)濃度加標(biāo)回收法測(cè)得回收率乙醇為86.20%～100.66%，丙酮為82.89%～91.42%，表明該方法具有良好的準(zhǔn)確性。重復(fù)性RSD 乙醇為2.3%，丙酮為5.5%，表明該方法具有良好的重復(fù)性；重現(xiàn)性RSD 乙醇為7.2%，丙酮為4.2%，表明該方法具有良好的重現(xiàn)性；乙醇的線性回歸方程式為Y=2 276.471 86X-265.40507，相關(guān)系數(shù)r=0.999 99，線性范圍為0.090～30.000 μg/ml，表明乙醇對(duì)照品色譜峰面積與濃度呈線性關(guān)系；丙酮的線性回歸方程式為Y=7 790.898 42X+4 216.806 23，相關(guān)系數(shù)r=0.998 13，線性范圍為0.120～40.000 μg/ml，表明丙酮對(duì)照品色譜峰面積與濃度呈線性關(guān)系。
因此，使用該方法檢測(cè)6B 型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮的殘留量結(jié)果可靠、操作方便?？捎糜?B 型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮的殘留量。
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肺炎鏈球菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，有毒株在體內(nèi)形成莢膜，其莢膜多糖為重要致病物質(zhì)，可引起肺炎、腦膜炎、支氣管炎、心內(nèi)膜炎等疾病[1-3]。23 價(jià)肺炎球菌多糖疫苗能有效預(yù)防老年人下呼吸道感染[4-7]。肺炎球菌精制多糖是生產(chǎn)各種肺炎類疫苗的基本成分。肺炎球菌精制多糖生產(chǎn)過(guò)程中沉淀核酸、粗制多糖和精制多糖引入乙醇，在清洗粗制多糖和精制多糖時(shí)引入丙酮。乙醇略有毒性，能達(dá)到一定的麻醉效果，主要抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)。當(dāng)乙醇攝入量增大時(shí)，可引起延髓血管運(yùn)動(dòng)中樞和呼吸中樞麻痹。丙酮為低毒類致癌物，主要對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有麻醉作用[8]。它們對(duì)人體有一定危害，因此必須控制乙醇、丙酮?dú)埩袅?。目前，?guó)內(nèi)對(duì)于化學(xué)藥、原料藥中有機(jī)溶劑殘留量檢測(cè)已有相關(guān)文獻(xiàn)記載[9-17]，但關(guān)于疫苗中有機(jī)溶劑殘留量檢測(cè)方法文獻(xiàn)較少[18]，且尚未有肺炎球菌精制多糖測(cè)定乙醇、丙酮?dú)埩袅康姆椒╗8,19-24]。因此，本研究采用頂空氣相色譜法對(duì)6B 型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮?dú)埩袅繖z測(cè)方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，按照外標(biāo)法方法進(jìn)行計(jì)算。
1 儀器與試藥
1.1 試劑及儀器
6B 型肺炎球菌精制多糖（樣品批號(hào)：38-6B-22202001、38-6B-22203002、38-6B-22203003、38-6B-22204004、38-6B-22205005、38-6B-22206006、38-6B-22206007、38-6B-22210008、38-6B-22210009，北 京民海生物科技有限公司）；無(wú)水乙醇對(duì)照品（批號(hào)：20170522，氣相色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；丙酮對(duì)照品（批號(hào)：20170511，氣相色譜純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；實(shí)驗(yàn)室用水為注射用水和純化水。氣相色譜儀（GC-2010 Plus AF，島津公司）；頂空進(jìn)樣器（HS-20，島津公司）；DB-624 毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm 膜厚1.80 μm，Agilent Technologies）。
1.2 溶液制備
1.2.1 供試品溶液 用純化水將6B 型肺炎球菌精制多糖溶解成5 000 μg/ml 的溶液。
1.2.2 乙醇、丙酮對(duì)照品貯備液 稱取無(wú)水乙醇210 mg、丙酮280 mg 加入100 ml 容量瓶中，用注射用水定容至刻度。搖勻，得到2 100 μg/ml 乙醇、2 800 μg/ml 丙酮對(duì)照品貯備液。
1.2.3 乙醇、丙酮對(duì)照品溶液 量取2 100 μg/ml 乙醇、2 800 μg/ml 丙酮對(duì)照品貯備液1 ml 到100 ml 容量瓶中，用注射用水定容至刻度，搖勻，得到21 μg/ml 乙醇、28 μg/ml 丙酮對(duì)照品溶液。
1.3 色譜條件
采用頂空進(jìn)樣器使用DB-624 毛細(xì)管色譜柱（Agilent Technologies），載氣為高純氮?dú)猓V柱流量為3.00 ml/min，分流比為10∶1。起始柱溫為40℃，保持2 min；以5℃/min 升溫至80℃，保持4 min；以20℃/min 升溫至200℃，保持2 min。檢測(cè)器溫度為240℃。恒溫爐溫度為80℃、平衡時(shí)間為30 min。
2 方法與結(jié)果
2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
取21 μg/ml 乙醇、28 μg/ml 丙酮對(duì)照品溶液5份，每份2 ml 置20 ml 頂空瓶中。按照“1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖。乙醇峰、丙酮峰的理論板數(shù)均≥5 000，乙醇峰、丙酮峰分別與其相鄰色譜峰的分離度均≥1.5，符合《中華人民共和國(guó)藥典》[25]四部留溶劑測(cè)定法的要求。
2.2 專屬性
肺炎球菌精制多糖制備過(guò)程中按照特定比例使用苯酚抽提去除蛋白質(zhì)，經(jīng)過(guò)離心剩余苯酚量最大≤10%，再經(jīng)過(guò)超濾過(guò)程基本能將苯酚去除[26]。分別配制一定濃度乙醇溶液和丙酮溶液，并配制為乙醇含10%苯酚的溶液、丙酮含10%苯酚的溶液、6B 型肺炎球菌精制多糖含10%苯酚的溶液。分別取乙醇溶液、丙酮溶液、6B 型肺炎球菌精制多糖溶液、苯酚、乙醇含10%苯酚的溶液、丙酮含10%苯酚的溶液、6B 型肺炎球菌精制多糖含10%苯酚的溶液2 ml 置20 ml 頂空瓶中，按照“1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖。乙醇保留時(shí)間約為2.413 min、丙酮保留時(shí)間約為2.794 min、苯酚保留時(shí)間約為18.776 min，且所有峰均達(dá)到分離，分離度應(yīng)＞1.5。見(jiàn)圖1。苯酚的保留時(shí)間遠(yuǎn)大于乙醇、丙酮的保留時(shí)間，提示，苯酚對(duì)乙醇、丙酮?dú)埩袅繖z測(cè)無(wú)干擾。
圖1 氣相色譜圖
2.3 檢測(cè)限（limit of detection，LOD）與定量限（limit of quantitation，LOQ）
先分別配制10 μg/ml 乙醇溶液和10 μg/ml 丙酮溶液，再采用逐步稀釋法將其分別稀釋到0.596、0.199、0.152、0.051 μg/ml。按照“1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，以信噪比3∶1 作為L(zhǎng)OD；以信噪比10∶1 作為L(zhǎng)OQ[25]。在該方法條件下，乙醇的LOD 為0.199 μg/ml，LOQ 為0.596 μg/ml；丙酮的LOD 為0.051 μg/ml，LOQ 為0.152 μg/ml。
2.4 線性范圍
將“1.2.2”中對(duì)照品貯備液用純化水分別稀釋乙醇濃度為0.090、3.000、12.000、21.000、30.000 μg/ml的溶液，丙酮濃度為0.120、4.000、16.000、28.000、40.000 μg/ml 的溶液，按“1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示乙醇的線性方程式為Y=2 276.471 86X-265.405 07，相關(guān)系數(shù)r=0.999 99，線性范圍為0.090～30.000 μg/ml，表明乙醇對(duì)照品色譜峰峰面積與其濃度呈線性關(guān)系，乙醇標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2；丙酮的線性方程式為Y=7790.898 42X+4 216.806 23，相關(guān)系數(shù)r=0.998 13，線性范圍為0.120～40.000 μg/ml，表明丙酮對(duì)照品色譜峰峰面積與濃度呈線性關(guān)系，丙酮標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖3。
圖2 乙醇線性范圍標(biāo)準(zhǔn)曲線
圖3 丙酮線性范圍標(biāo)準(zhǔn)曲線
2.5 準(zhǔn)確度
取6B 型肺炎球菌精制多糖溶液4 ml 置離心管中，共12 份。其中3 份分別加純化水6 ml。剩余9 份，分成3 組，每組分別量取2 100 μg/ml 乙醇、2 800 μg/ml丙酮對(duì)照品貯備液0.050、0.100、0.150 ml，再分別加純化水5.950、5.900、5.850 ml?？疾旃┰嚻返?、中、高3個(gè)濃度的加標(biāo)回收率。每份2 ml 置20 ml 頂空瓶中，按照“1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖。
供試品低、中、高3 個(gè)濃度的加標(biāo)回收率乙醇為86.20%～100.66%，丙酮82.89%～91.42%；RSD 乙醇為1.88%～6.44%，丙酮為3.84%～4.50%。見(jiàn)表1。表明在該檢測(cè)條件下乙醇、丙酮準(zhǔn)確度較高，則系統(tǒng)誤差較小。計(jì)算公式為：回收率（%）=（測(cè)定值-初始值）/加入量×100。
表1 6B 型肺炎球菌精制多糖溶液準(zhǔn)確度結(jié)果
2.6 重復(fù)性
取6B 型肺炎球菌精制多糖溶液6 份，每份取2 ml置20 ml 頂空瓶中，按照“1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，記錄色譜圖。在相同條件下，由同一人對(duì)6B 型肺炎球菌精制多糖溶液試驗(yàn)6 次，供試品RSD 乙醇為2.3%，丙酮為5.5%。表明在同一條件下，采用該檢測(cè)方法乙醇、丙酮?dú)埩袅恐貜?fù)性良好。
2.7 重現(xiàn)性
在不同時(shí)間，由甲、乙、丙3 人對(duì)6B 型肺炎球菌精制多糖溶液共試驗(yàn)3 次，供試品RSD 乙醇為7.2%，丙酮為4.2%。表明不同時(shí)間，不同人員檢測(cè)乙醇、丙酮?dú)埩袅恐噩F(xiàn)性良好。
2.8 樣品測(cè)定
取9 批6B 型肺炎球菌精制多糖按照儀器與試藥中的“1.3”色譜條件進(jìn)行乙醇、丙酮?dú)埩袅繖z測(cè)。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。表明6B 型肺炎球菌精制多糖乙醇、丙酮?dú)埩袅烤^低。
表2 6B 型肺炎球菌精制多糖測(cè)定結(jié)果
3 討論
乙醇的沸點(diǎn)為78.3℃，易溶于水；丙酮的沸點(diǎn)為56.5℃，易溶于水。因此可采用水溶解樣品，同時(shí)使用氣相色譜法進(jìn)行乙醇、丙酮的檢測(cè)。由于6B 型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮含量很低，因此采用頂空氣相色譜法檢測(cè)乙醇、丙酮?dú)埩袅俊?/p>
本研究結(jié)果表明，乙醇、丙酮理論板數(shù)≥5 000，分離度≥1.5，表明各組分可得到較好的分離，系統(tǒng)的適用性良好；苯酚對(duì)6B 型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮?dú)埩袅繖z測(cè)沒(méi)有干擾；乙醇的LOD 為0.199 μg/ml，LOQ 為0.596 μg/ml；丙酮的LOD 為0.051 μg/ml，LOQ為0.152 μg/ml，表明在定量限以上能定量測(cè)定乙醇、丙酮的殘留量。6B 型肺炎球菌精制多糖對(duì)低、中、高3 個(gè)濃度加標(biāo)回收法測(cè)得回收率乙醇為86.20%～100.66%，丙酮為82.89%～91.42%，表明該方法具有良好的準(zhǔn)確性。重復(fù)性RSD 乙醇為2.3%，丙酮為5.5%，表明該方法具有良好的重復(fù)性；重現(xiàn)性RSD 乙醇為7.2%，丙酮為4.2%，表明該方法具有良好的重現(xiàn)性；乙醇的線性回歸方程式為Y=2 276.471 86X-265.40507，相關(guān)系數(shù)r=0.999 99，線性范圍為0.090～30.000 μg/ml，表明乙醇對(duì)照品色譜峰面積與濃度呈線性關(guān)系；丙酮的線性回歸方程式為Y=7 790.898 42X+4 216.806 23，相關(guān)系數(shù)r=0.998 13，線性范圍為0.120～40.000 μg/ml，表明丙酮對(duì)照品色譜峰面積與濃度呈線性關(guān)系。
因此，使用該方法檢測(cè)6B 型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮的殘留量結(jié)果可靠、操作方便?？捎糜?B 型肺炎球菌精制多糖中乙醇、丙酮的殘留量。
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