蔡小艷 馬登云 逯金海 馬穎才

1.青海紅十字醫(yī)院病理科 (青海 西寧, 810001) 2.青海省人民醫(yī)院消化內(nèi)科

原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)是全球最常見惡性腫瘤之一,也是全球癌癥相關(guān)死亡第3大原因[1]。由于早期無(wú)特異性癥狀、缺乏早期診斷標(biāo)志物、根治性可切除HCC的比例較低,大多數(shù)HCC患者往往被診斷為晚期,且其預(yù)后較差,5年生存率僅為17%～53%[2]。目前,根治手術(shù)為HCC最有效治療方法,但僅在疾病早期階段有效,而大多數(shù)患者確診時(shí)已處于晚期,喪失了手術(shù)機(jī)會(huì)。有研究發(fā)現(xiàn),腫瘤復(fù)發(fā)及腫瘤轉(zhuǎn)移是HCC患者預(yù)后不良主要因素[3]。因此,迫切需要對(duì)HCC機(jī)制的新見解,以確定新的預(yù)后分子標(biāo)志物和潛在有效治療靶點(diǎn),從而提高患者存活率。泛素化是腫瘤重要相關(guān)生物學(xué)過(guò)程,近年來(lái)已有大量研究表明泛素化過(guò)程是介導(dǎo)腫瘤侵襲遷移的重要因素[4]。泛素化家族已被證實(shí)在乳腺癌、結(jié)直腸癌等多種惡性腫瘤中具有一定診斷、治療及預(yù)后價(jià)值,但在HCC中的價(jià)值有待進(jìn)一步探索[5]。腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子相互作用蛋白(TRAIP)是一種E3泛素蛋白連接酶,由N端環(huán)指基序和推定卷曲螺旋和亮氨酸拉鏈樣結(jié)構(gòu)域組成。據(jù)報(bào)道[6],TRAIP對(duì)DNA修復(fù)及紡錘體裝配檢查點(diǎn)控制至關(guān)重要,當(dāng)細(xì)胞退出細(xì)胞周期或經(jīng)歷分化時(shí),TRAIP表達(dá)下調(diào),且TRAIP與多種癌癥類型病程發(fā)展有關(guān)。然而,關(guān)于TRAIP在HCC中的作用知之甚少[7]?；诖?本研究旨在通過(guò)探討TRAIP在HCC中的表達(dá)情況,分析其在病理診斷和預(yù)后中的意義,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年2月至2019年2月醫(yī)院收治行手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)確診的60例HCC患者為研究組,其中男37例,女23例,年齡31～75歲,平均(46.32±5.63)歲。另選取同期本院體檢健康者60例為對(duì)照組,其中男34例,女26例,年齡30～75歲,平均(45.85±5.82)歲。兩組研究對(duì)象一般資料比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) HCC患者納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合HCC診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]：乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)感染(HBV或HCV抗原陽(yáng)性);影像學(xué)特征：多期CT或增強(qiáng)磁共振成像(MRI)檢查顯示肝臟占位在動(dòng)脈期快速不均質(zhì)血管強(qiáng)化,而靜脈期或延遲期快速洗脫,結(jié)節(jié)≥1 cm;血清甲胎蛋白(AFP)≥400 μg/L持續(xù)1個(gè)月或≥200 μg/L持續(xù)2個(gè)月。②病理活檢初次確診為HCC者;③無(wú)治療禁忌證;④檢測(cè)前未使用化療藥物、靶向藥物;⑤臨床資料完整。健康者納入標(biāo)準(zhǔn)：①無(wú)其他系統(tǒng)癌癥病史;②無(wú)甲、乙、丙、丁、戊型肝炎。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重心、肺、腎功能障礙者;②伴有嚴(yán)重精神類疾病者;③活動(dòng)性肝炎患者;④藥物或酒精肝損傷者。

1.3 觀察指標(biāo)與方法 ①比較兩組研究對(duì)象血清TRAIP水平,取研究組患者化療后清晨空腹靜脈血4 ml,對(duì)照組患者取體檢外周靜脈血4 ml,離心后取上清液,得血清,放置冷凍箱保存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血清中TRAIP水平,試劑盒由上海擇業(yè)生物科技有限公司提供,操作步驟按照說(shuō)明書進(jìn)行。②HCC患者血清TRAIP表達(dá)與病理參數(shù)間的關(guān)系,病理參數(shù)包括性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤包膜、微血管侵犯、腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(TNM)分期、分化程度等。③HCC患者TRAIP表達(dá)與其生存預(yù)后的關(guān)系。預(yù)后判定：60例HCC患者均按照常規(guī)流程治療,出院后隨訪3年統(tǒng)計(jì)患者預(yù)后情況,以患者疾病進(jìn)展及死亡為預(yù)后不良。④HCC患者預(yù)后的單因素Cox比例回歸模型分析。⑤HCC患者預(yù)后的多因素Cox比例回歸模型分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組研究對(duì)象TRAIP表達(dá)水平比較 見表1和圖1。

圖1 研究組和對(duì)照組血清TRAIP表達(dá)水平散點(diǎn)圖

表1 兩組研究對(duì)象TRAIP表達(dá)水平比較

2.2 HCC患者TRAIP表達(dá)水平與病理參數(shù)間的關(guān)系 TRAIP表達(dá)水平與HCC患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤包膜無(wú)明顯相關(guān)性(P>0.05),但與微血管侵犯、TNM分期和分化程度相關(guān)(P<0.05)。見表2。

表2 HCC患者TRAIP表達(dá)與HCC患者病理參數(shù)間的關(guān)系 [n(%)]

2.3 HCC患者TRAIP不同表達(dá)水平與其生存預(yù)后的關(guān)系 根據(jù)隨訪3年結(jié)果及TRAIP在血清的表達(dá)進(jìn)行Kaplan-Meier單因素生存分析顯示,TRAIP高表達(dá)組預(yù)后生存時(shí)間低于TRAIP低表達(dá)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3和圖2。

圖2 TRAIP表達(dá)與HCC患者生存時(shí)間的生存曲線

表3 HCC患者TRAIP不同表達(dá)水平生存時(shí)間比較月)

2.4 HCC患者預(yù)后的單因素Cox比例回歸模型分析 HCC患者性別、年齡、腫瘤包膜與患者預(yù)后不相關(guān)(P>0.05),腫瘤大小、微血管侵犯、TNM分期、分化程度及TRAIP表達(dá)與患者預(yù)后相關(guān)(P<0.05)。見表4。

表4 HCC患者預(yù)后的單因素Cox比例回歸模型分析

2.5 HCC患者預(yù)后的多因素Cox比例回歸模型分析 以HCC患者預(yù)后情況為因變量,腫瘤大小、微血管侵犯、TNM分期、分化程度及TRAIP表達(dá)為自變量,根據(jù)表5進(jìn)行賦值,將上述賦值納入Cox比例回歸模型中,發(fā)現(xiàn)腫瘤大小>4 cm、微血管有侵犯、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度高、TRAIP呈高表達(dá)是HCC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表5、6。

表5 賦值

3 討論

HCC是原發(fā)性肝癌最常見疾病類型之一,據(jù)報(bào)道,我國(guó)肝癌發(fā)病率占惡性腫瘤第2位,死亡數(shù)居第2位[9]。病毒感染(包括HBV和HCV)、肥胖、炎癥、纖維化和肝硬化是HCC的主要危險(xiǎn)因素[10]。由于HCC具有高度異質(zhì)性、進(jìn)展迅速、侵襲度高、易轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為及早期癥狀隱匿、現(xiàn)有篩查診斷方法敏感性與特異性不足,多數(shù)患者失去早期手術(shù)根治良機(jī),手術(shù)切除率不足20%,術(shù)后5年內(nèi)有近70%患者復(fù)發(fā),且缺乏系統(tǒng)有效治療藥物,5年生存率僅為40%～50%,甚至更低[11]。術(shù)后高復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率嚴(yán)重影響患者長(zhǎng)期生存率,是導(dǎo)致HCC預(yù)后不良重要原因[12]。因此,深入研究HCC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移機(jī)制及生物學(xué)特性,對(duì)于尋找更有效診斷和預(yù)后標(biāo)志物、有效防治HCC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移具有重要意義。

泛素化是一種調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)細(xì)胞命運(yùn)保守翻譯后蛋白質(zhì)修飾,涉及增殖、分化、凋亡及炎癥等多種生物學(xué)功能,TRAIP異位表達(dá)可抑制TNF介導(dǎo)的NF-κB活化[13]。已有研究表明,泛素化過(guò)程是介導(dǎo)腫瘤侵襲遷移的重要因素[14]。泛素化修飾動(dòng)態(tài)不可逆,E3泛素連接酶及去泛素化酶對(duì)維持泛素化平衡起關(guān)鍵作用。TRAIP是一種環(huán)狀E3泛素連接酶,又稱TRAF相互作用蛋白,是腫瘤壞死因子(TNF)誘導(dǎo)核因子(NF)-κB活化的負(fù)調(diào)節(jié)因子,其抑制功能主要通過(guò)TRNF2和TRAF1直接相互作用介導(dǎo)[15]。除此之外,TRAIP還參與DNA損傷反應(yīng)、細(xì)胞分裂和致癌作用等許多細(xì)胞功能[16]。DNA損傷若不能得到及時(shí)修復(fù)可能會(huì)誘發(fā)免疫缺陷、癌癥等重大疾病。最初,TRAIP被認(rèn)為是基底細(xì)胞癌和乳腺癌的腫瘤抑制因子。有報(bào)道稱,TRAIP在肝癌中表現(xiàn)為致癌基因,可通過(guò)驅(qū)動(dòng)肝癌上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)腫瘤發(fā)生[17]。本研究結(jié)果顯示,研究組TRAIP水平顯著高于對(duì)照組,提示TRAIP可能與HCC發(fā)生有關(guān)。分析可能是癌基因所誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化的主要防御屏障,凋亡異常與腫瘤發(fā)生密切相關(guān),而TRAIP介導(dǎo)的泛素化推定底物可通過(guò)參與細(xì)胞周期進(jìn)程和細(xì)胞周期分化的控制,調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和凋亡。研究表明,TRAIP在肝癌患者中上調(diào)并在肝癌的發(fā)生發(fā)展中可促進(jìn)肝癌的惡性行為[18]。本研究顯示,TRAIP表達(dá)水平與HCC患者性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤包膜和AFP無(wú)明顯相關(guān)性,但與微血管侵犯、TNM分期和分化程度密切相關(guān),表明TRAIP表達(dá)可能是促進(jìn)HCC惡性發(fā)生發(fā)展的有利因素,其中TNM分期Ⅲ～Ⅳ期HCC患者TRAIP高表達(dá)量顯著高于Ⅰ～Ⅱ期,分化程度高HCC患者TRAIP高表達(dá)量顯著高于分化程度中、低患者,表明TRAIP促進(jìn)HCC侵襲。TRAIP高表達(dá)能激活NF-κB,而NF-κB激活誘導(dǎo)各種基因表達(dá),并且還抑制細(xì)胞死亡,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,從而增加HCC惡性程度。

國(guó)外有研究表明,TRAIP缺乏能誘導(dǎo)小鼠胚胎發(fā)育中增殖缺陷及細(xì)胞凋亡[19]。此外,有研究表明,TRAIP高表達(dá)與肝癌患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)[20]。本研究中采用Kaplan-Meier法分析TRAIP表達(dá)水平與HCC患者生存預(yù)后關(guān)系發(fā)現(xiàn),TRAIP水平高表達(dá)組生存率顯著低于TRAIP水平低表達(dá)組,結(jié)果表明TRAIP呈高表達(dá)HCC患者預(yù)后生存時(shí)間較短。癌細(xì)胞能夠加速細(xì)胞進(jìn)程,減少細(xì)胞凋亡。泛素化是腫瘤重要相關(guān)生物學(xué)過(guò)程,E3泛素連接酶呈高表達(dá)水平時(shí),對(duì)細(xì)胞凋亡起抑制作用,進(jìn)而促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展,降低HCC患者生存率。也有研究指出,TRAIP能通過(guò)腫瘤抑制因子調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生及發(fā)展,其高水平可能會(huì)促進(jìn)腫瘤發(fā)展進(jìn)程[21]。本研究經(jīng)Cox比例回歸模型單因素分析發(fā)現(xiàn),腫瘤大小、微血管侵犯、TNM分期、分化程度及TRAIP表達(dá)與HCC患者預(yù)后相關(guān),提示上述因素可能影響患者預(yù)后。本研究分析發(fā)現(xiàn),腫瘤大小>4 cm、微血管有侵犯、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度高、TRAIP呈高表達(dá)是HCC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,表明上述HCC患者更易預(yù)后不良。故在治療過(guò)程中,應(yīng)對(duì)上述特征HCC患者加強(qiáng)監(jiān)測(cè),及時(shí)采取相應(yīng)治療措施,以提高患者預(yù)后生存率。

綜上所述,TRAIP在HCC中表達(dá)顯著上調(diào),其表達(dá)水平與患者臨床TNM分期、生存情況密切相關(guān),能促進(jìn)HCC遷移及侵襲,TRAIP高表達(dá)是HCC患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素,是預(yù)測(cè)HCC患者預(yù)后新靶點(diǎn),同時(shí)也是HCC發(fā)生發(fā)展的影響因素,有望成為HCC潛在治療新靶點(diǎn)。但本研究納入HCC樣本量較少,未來(lái)應(yīng)擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證TRAIP表達(dá)對(duì)HCC病理診斷及預(yù)后的影響。