劉彥朋 張 瑞 孫 柏 徐 賡 黃科昌 任占杰△

（1 濰坊醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)院，濰坊 261053；2 濰坊護(hù)理職業(yè)學(xué)院，濰坊 261041；3 濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院疼痛科，濰坊 261000）

神經(jīng)病理性疼痛是由軀體感覺神經(jīng)系統(tǒng)的損傷或疾病引起的疼痛[1]，其發(fā)病率高，在普通人群中約占7%～8%[2]，且疼痛嚴(yán)重，并常表現(xiàn)為灼燒樣、針刺樣的自發(fā)性疼痛，常伴有疼痛區(qū)域的感覺異常，甚至伴有睡眠障礙、抑郁焦慮等身心健康問題，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜[3]。目前針對(duì)不同的損傷機(jī)制，已經(jīng)存在許多神經(jīng)病理性疼痛模型，如坐骨神經(jīng)慢性卡壓損傷、糖尿病周圍神經(jīng)損傷模型、臂叢神經(jīng)撕脫等外周神經(jīng)損傷模型。

熱效應(yīng)治療已在臨床廣泛應(yīng)用。常見的熱效應(yīng)治療方式包括微波消融術(shù)、射頻熱凝術(shù)、經(jīng)皮激光消融術(shù)和高強(qiáng)度聚焦超聲等，其工作機(jī)理均是通過不同的能量方式產(chǎn)生局部熱效應(yīng)作用于靶組織，通過高溫作用使組織凝固壞死達(dá)到滅活細(xì)胞和組織的目的。另外臨床手術(shù)過程中，為滿足視野要求，術(shù)中使用熱凝止血時(shí)，由于器械頭部的高溫以及應(yīng)用過程中的橫向熱擴(kuò)散作用，導(dǎo)致醫(yī)源性熱損傷的發(fā)病率有所增加[4]，因此熱損傷已成為周圍神經(jīng)損傷的常見原因，并由此引發(fā)病人術(shù)后出現(xiàn)神經(jīng)性疼痛[5]。與牽拉、卡壓損傷類似，熱損傷通常難以發(fā)現(xiàn)和識(shí)別，其后果可能更加不可逆[6]。正因如此，治療后神經(jīng)損傷的并發(fā)癥以及神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生也隨之增多[5,7,8]。

既往有關(guān)于熱效應(yīng)對(duì)動(dòng)物神經(jīng)損傷的研究，發(fā)現(xiàn)40℃、5 min 不會(huì)對(duì)豬的神經(jīng)根功能產(chǎn)生任何影響，而70℃、5 min 則會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)根功能完全阻滯，不同溫度對(duì)神經(jīng)損傷的程度不同，且與溫度的增高呈正相關(guān)，說明溫度的高低在神經(jīng)損傷過程中有決定性的作用[9]。對(duì)于損傷的機(jī)制，既往的研究發(fā)現(xiàn)大鼠周圍神經(jīng)的溫度在58℃以上時(shí)會(huì)對(duì)神經(jīng)內(nèi)膜造成破壞，引起損傷，但在58℃下，無髓神經(jīng)纖維電位最先消除并且發(fā)現(xiàn)了無髓神經(jīng)纖維的變性，揭示了無髓神經(jīng)纖維在高溫下更易損傷[10,11]。但另外的研究顯示，在組織病理學(xué)觀察中，髓鞘是神經(jīng)纖維中較為脆弱的部分[12]，在44℃、30 min 熱處理后，觀察到大量軸突出現(xiàn)脫髓鞘，同時(shí)其他的神經(jīng)結(jié)構(gòu)保持正常[13]。這些發(fā)現(xiàn)反映了不同溫度及熱效應(yīng)時(shí)間對(duì)神經(jīng)的損傷不同，同時(shí)其損傷機(jī)制可能也存在差異。并且有研究顯示傳導(dǎo)痛覺的神經(jīng)纖維較運(yùn)動(dòng)纖維更易受到熱效應(yīng)的損傷，這可能與神經(jīng)熱損傷后病理性神經(jīng)痛的發(fā)生密切相關(guān)[14]。由于缺乏神經(jīng)熱損傷動(dòng)物模型，使得臨床中出現(xiàn)的熱損傷后神經(jīng)痛缺乏相關(guān)基礎(chǔ)研究。本研究通過射頻熱凝技術(shù)的熱效應(yīng)處理模擬臨床中存在的相關(guān)熱損傷后神經(jīng)痛病人的發(fā)病過程，由此創(chuàng)建一種新型的穩(wěn)定的熱損傷后神經(jīng)病理性疼痛模型，并探討可能存在的發(fā)病機(jī)制，為臨床中熱效應(yīng)治療后并發(fā)的神經(jīng)痛的預(yù)防與治療提供依據(jù)。

方 法

1.動(dòng)物及飼養(yǎng)

成年雄性SD 大鼠44 只(220～250 g)，以2～3只為一組飼養(yǎng)在塑料盒中，大鼠由濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（魯）20190003。動(dòng)物房及行為實(shí)驗(yàn)室溫度為23～26℃，相對(duì)濕度40%～60%。為保證動(dòng)物的生物節(jié)律，實(shí)行12 小時(shí)的光照/黑暗循環(huán)環(huán)境設(shè)定，并自由攝取食物和水。本研究過程嚴(yán)格按照2006 年科技部頒發(fā)的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》及濰坊醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的相關(guān)管理規(guī)定（倫理批號(hào)2020SLD137）。

2.主要設(shè)備及試劑

射頻熱凝電極套管針（德國英諾曼德醫(yī)療科技有限公司，批號(hào)：LOT19B051D, 編號(hào)/型號(hào)：240100，規(guī)格：22G-50 mm-4 mm）,射頻手術(shù)電極（北京北琪醫(yī)療科技股份有限公司，型號(hào)：CD2201，規(guī)格：4 mm-50 mm），射頻控溫?zé)崮鱎-2000B D1（北京北琪醫(yī)療科技股份有限公司），PL-200 熱刺痛儀（成都泰盟科技有限公司），vonFrey 纖維絲(Aesthesio)，多樣品組織研磨儀Tissuelyser-48 L（上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司），高速冷凍離心機(jī)Neofuge 13 R（力康發(fā)展有限公司），微量離心機(jī)（賽默飛世爾科技有限公司），生物安全柜（上海力申科學(xué)儀器有限公司），核酸蛋白分析儀Nanodrop 2000 c（賽默飛科技有限公司），Light-Cycler 480 II實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀（羅氏診斷產(chǎn)品有限公司），TRLZOL Reagent RNA 提取試劑（賽默飛科技有限公司），無水乙醇500 ml（煙臺(tái)遠(yuǎn)東精細(xì)化工有限公司），異丙醇500 ml（天津科茂化學(xué)試劑有限公司），高效切片石蠟（上海華靈康復(fù)器械廠），4%多聚甲醛通用型組織固定液(Biosharp)等。

3.實(shí)驗(yàn)方案

將24 只SD 大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分成4 組，每組6只。假手術(shù)組（Sham組）僅進(jìn)行手術(shù)相關(guān)操作，不采取射頻熱凝處理。其余三組設(shè)定不同的射頻溫度，分別為55℃(RF55)組、65℃(RF65)組和75℃(RF75)組。術(shù)后觀察大鼠行為學(xué)變化。根據(jù)行為學(xué)觀察，選擇出最佳造模溫度。再根據(jù)最佳溫度(65℃)另取20 只大鼠隨機(jī)分為2 組：假手術(shù)組（Sham 組）和模型組（RF65組），每組10 只，14 天后觀察大鼠坐骨神經(jīng)病理切片及背根神經(jīng)節(jié)Nav1.8 mRNA的表達(dá)。

4.手術(shù)操作及射頻熱凝處理

應(yīng)用腹腔注射戊巴比妥鈉（實(shí)驗(yàn)室提供，50 mg/kg）對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉。大鼠取俯臥位，伸展大鼠四肢，固定于固定架上。取大鼠右側(cè)股骨附近清理表層鼠毛，碘伏消毒3 遍，鋪洞巾，在右側(cè)股后正中縱切6～8 mm 切口。暴露皮下肌肉，用止血鉗鈍性分離肌肉后，暴露出粗大的、乳白色的坐骨神經(jīng)，神經(jīng)刺激后出現(xiàn)右足抽動(dòng)，說明坐骨神經(jīng)選擇正確。于神經(jīng)分叉處向上1 cm 處放置射頻熱凝穿刺針，使用雙極模式，兩穿刺針之間間隔5 mm，將射頻熱凝電極套管針的電極導(dǎo)線連接射頻治療儀，針尖貼近大鼠坐骨神經(jīng)。RF55組、RF65組和RF75組分別采取55℃、65℃和75℃，其余射頻參數(shù)為：脈率2 Hz、脈寬20 ms、持續(xù)時(shí)間 1 min，重復(fù)進(jìn)行2 次射頻熱凝，間隔5 min。手術(shù)結(jié)束后將坐骨神經(jīng)歸位，整理肌肉，縫合創(chuàng)口。本實(shí)驗(yàn)由專人進(jìn)行，保證手術(shù)方式和處理方式的一致。

5.行為學(xué)觀察

行為學(xué)實(shí)驗(yàn)均在白天進(jìn)行，測試都固定在每日9:00～12:00 之間進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)前3 天每日將大鼠置于行為學(xué)觀察箱中適應(yīng)。術(shù)前、術(shù)后1、3、5、7、10、15、20、25、30、35、40 天進(jìn)行機(jī)械刺激縮足反射閾值(mechanical withdrawal threshold, MWT) 和熱縮足反射潛伏期(thermal withdrawal latency, TWL)測試。于術(shù)前、術(shù)后1、3 天分別觀察大鼠后爪休息時(shí)姿勢(shì)(assessments of resting paw posture)評(píng)價(jià)大鼠自發(fā)性痛行為和大鼠右下肢運(yùn)動(dòng)功能變化。

MWT 是測定大鼠機(jī)械痛閾值的重要指標(biāo)[15]，為消除大鼠心理因素對(duì)測試結(jié)果的影響，于測試前將大鼠放于測試箱內(nèi)15～20 min，實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制在(23±2)℃，實(shí)驗(yàn)室維持在安靜環(huán)境。然后在底為有孔金屬網(wǎng)格的相互隔開又透明的容器內(nèi)，選用不同質(zhì)量的vonFrey 纖維絲垂直刺激大鼠右側(cè)后爪外側(cè)部，設(shè)置單位為g，從小強(qiáng)度刺激開始，逐步上升，每個(gè)壓力刺激10 次，間隔3～5 s，10 次刺激中有5 次以上發(fā)生縮足、抖動(dòng)與舔足反應(yīng)的刺激強(qiáng)度，即為大鼠的MWT。TWL 是測定大鼠對(duì)熱痛刺激的重要指標(biāo)[16]，測試前將大鼠處于靜息狀態(tài)15～20 min，實(shí)驗(yàn)環(huán)境控制在(23±2)℃，實(shí)驗(yàn)室維持在安靜環(huán)境。大鼠置于有機(jī)玻璃罩內(nèi)，通過PL-200 熱刺痛儀輻照大鼠的足底，設(shè)置參數(shù)為強(qiáng)度60%，每次連續(xù)光熱刺激不超過30 s，單位為s。當(dāng)大鼠出現(xiàn)快速抬足反應(yīng)時(shí)，記錄開始照射至出現(xiàn)縮足逃避反應(yīng)的時(shí)間，重復(fù)測量5 次，每次間隔時(shí)間不低于5 min，取5 次平均值作為該大鼠的TWL。

實(shí)驗(yàn)前將大鼠放于試驗(yàn)箱中適應(yīng)30 min 以上，在經(jīng)射頻熱凝處理后，于術(shù)前、術(shù)后1、3 天觀察20 min 大鼠后爪休息時(shí)姿勢(shì)，評(píng)價(jià)大鼠自發(fā)性疼痛程度[17]。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：大鼠后足可正常平放地面上記0 分；大鼠后足平放地面，足趾并攏向下記1 分；大鼠后足僅后爪內(nèi)側(cè)緣著地記2 分；大鼠僅有后跟觸地，足趾向內(nèi)卷起記3 分；大鼠全腳抬高，遠(yuǎn)離地面記4 分；大鼠出現(xiàn)舔舐足部的表現(xiàn)記5 分。

選取各組大鼠于術(shù)前、術(shù)后1、3 天行改良的Tarlov 評(píng)分[18]，觀察射頻前后大鼠手術(shù)側(cè)肢體活動(dòng)及功能的改變，判斷神經(jīng)的損傷程度。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：大鼠完全癱瘓?jiān)u0 分；大鼠完全癱瘓，對(duì)下肢針刺有反應(yīng)，但肢體不能移動(dòng)評(píng)1 分；雖然四肢可以移動(dòng)，但不能站立或只能穩(wěn)定站立(< 5 s)評(píng)2 分；大鼠可以站立，但不能行走評(píng)3 分；大鼠可以行走幾步，但不能穩(wěn)定行走評(píng)4 分；大鼠可以緩慢行走，但行走不靈活，有一些缺陷評(píng)5 分；大鼠能正常行走評(píng)6 分。

6.組織形態(tài)學(xué)觀察

根據(jù)射頻熱凝后大鼠行為學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)RF65大鼠神經(jīng)病理性疼痛臨床表現(xiàn)較為典型，且具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性，遂選擇65℃作為最佳造模溫度對(duì)模型進(jìn)行復(fù)制。模型復(fù)制后14 天，對(duì)Sham 組和RF65組大鼠取材，取大鼠L4～L6背根神經(jīng)節(jié)于-80℃凍存，行Nav1.8 mRNA 分析。取大鼠損傷側(cè)坐骨神經(jīng)行石蠟包埋，制備成5 μm 的切片進(jìn)行蘇木精-伊紅 (hematoxylin-eosin, HE)染色，光鏡下觀察坐骨神經(jīng)結(jié)構(gòu)。

7.Nav1.8 mRNA 測定

采用RT-PCR 分析L4～L6背根神經(jīng)節(jié)Nav1.8 mRNA 含量。將凍存背根神經(jīng)節(jié)按Trizol 法進(jìn)行RNA 提取，分光光度法對(duì)提取的RNA 進(jìn)行質(zhì)和量的鑒定。按照FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit V2 試劑盒說明書行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，再對(duì)Nav1.8 基因與內(nèi)參β-Actin 基因進(jìn)行擴(kuò)增。擴(kuò)增后行水平電泳，用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析。

引物序列如下：Nav1.8 上游引物：5'-GCCATTCCTCTCACTGTTCC-3'，下游引物：5'-CTTCT CTCATTGGCGTTTTTG-3'，擴(kuò)增片段長345 bp；β-Actin上游引物：5'-AGGGAAATCGTGCGTGAC-3'，下游引物：5'-CATGGATGCCACAGGATTC-3'，擴(kuò)增片段長211 bp。引物由華大基因公司合成提供。

8.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，對(duì)符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±SD)表示，多組間比較使用重復(fù)測量方差分析，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，以P< 0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.MWT 測定

Sham 組整個(gè)觀察期間MWT 無明顯變化，在到達(dá)刺激閾值時(shí)僅有短時(shí)間的回縮躲避反應(yīng)。射頻熱凝術(shù)后的大鼠對(duì)于機(jī)械痛的刺激出現(xiàn)較長時(shí)間躲避刺激的反應(yīng)。RF55組術(shù)后3～10 天MWT 較術(shù)前降低(P< 0.01)，但術(shù)后15 天即可恢復(fù)術(shù)前狀態(tài)；與Sham 組對(duì)比，術(shù)后3～10 天差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05)。RF65組術(shù)后1 天MWT 升高，5～30 天MWT 降低(P< 0.05)，35 天大鼠MWT 回歸術(shù)前水平；與Sham 組對(duì)比，5～30 天對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05)。RF75組，3～15 天MWT 明顯增高(P< 0.05)，在整個(gè)觀測期間，MWT 未見降低的現(xiàn)象；3～10 天與Sham 組對(duì)比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，見圖1）。

圖1 大鼠機(jī)械痛閾值變化比較*P < 0.05，**P < 0.01，與Sham 組相比；#P < 0.05，##P < 0.01，與術(shù)前相比Fig.1 Comparison of mechanical withdrawal threshold of rats between different group*P < 0.05, **P < 0.01, compared with group Sham;#P < 0.05, ##P < 0.01, compared with 0 day.

2.TWL 測定

整個(gè)觀察期間，Sham 組TWL 未見明顯變化，RF55組TWL 于術(shù)后1 天有延長(P< 0.05)，7～15天較術(shù)前有明顯縮短(P< 0.05)，第20 天恢復(fù)術(shù)前水平；與Sham 組對(duì)比，7～15 天有明顯的縮短(P< 0.05)。RF65組術(shù)后1～3 天TWL 較術(shù)前有明顯的延長(P< 0.01)，7～30 天TWL 較術(shù)前有明顯的縮短(P< 0.05)，35 天恢復(fù)術(shù)前水平；與Sham 組對(duì)比，術(shù)后1～3 天期間TWL 有明顯的延長(P< 0.05)，7～25 天TWL 有明顯的縮短(P< 0.01)。整個(gè)觀測期間RF75組大鼠TWL 均明顯長于術(shù)前(P< 0.01)，且與Sham 組對(duì)比，TWL 均顯著延長（P< 0.01，見圖2）。

圖2 大鼠足底熱痛刺激潛伏期變化比較*P < 0.05，**P < 0.01，與Sham 組相比；#P < 0.05，##P < 0.01，與術(shù)前相比Fig.2 Comparison of thermal withdrawal latency of rats between different group*P < 0.05, **P < 0.01, compared with group Sham;#P < 0.05, ##P < 0.01, compared with 0 day.

3.術(shù)后自發(fā)性痛

大鼠術(shù)后清醒后，經(jīng)射頻熱凝處理的當(dāng)天，抬足舔足次數(shù)較術(shù)前增加不明顯，但從術(shù)后1 天開始自發(fā)性舔足次數(shù)增加，并出現(xiàn)啃咬術(shù)側(cè)足部腳趾的情況。RF55、RF65和RF75組術(shù)后1 天的自發(fā)性痛評(píng)分分別為0.88±0.35、1.38±0.14 和1.94±0.77，術(shù)后3 天分別為2.33±0.54、3.08±0.26 和3.83±0.25，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.01，見圖3）。在休息姿勢(shì)時(shí)，射頻后大鼠間歇性地突然舔術(shù)側(cè)后爪，同時(shí)用嘴輕輕咬或拉指甲。這種行為開始于術(shù)后1 天，在術(shù)后20 天內(nèi)常見，但在25～40 天頻率降低。RF65和RF75組出現(xiàn)自噬現(xiàn)象，消融后3～7 天最明顯，常見滴血、反復(fù)啃咬狀態(tài)，術(shù)后20 天大鼠自噬減少，傷口結(jié)痂愈合。手術(shù)側(cè)大鼠足部多彎曲，腳趾聚攏，后爪外翻。

圖3 大鼠休息時(shí)爪姿勢(shì)評(píng)分比較**P < 0.01，與Sham 組相比；##P < 0.01，與術(shù)前相比Fig.3 Comparison of assessments of resting paw posture of rats between different group**P < 0.01, compared with group Sham; ##P < 0.01,compared with 0 day.

4.運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分

射頻熱凝后，Sham 組大鼠運(yùn)動(dòng)功能未見有明顯異常，而經(jīng)過射頻熱凝的大鼠手術(shù)側(cè)肢體活動(dòng)減少，RF55、RF65和RF75組Tarlov 評(píng)分術(shù)后1 天較術(shù)前對(duì)比均出現(xiàn)差異(P< 0.05)，術(shù)后3 天僅RF75組較術(shù)前有差異(P< 0.01)。RF55組大鼠術(shù)后，能正常行走和著地。RF65組大鼠后爪外翻，能正常行走，行走時(shí)后爪的內(nèi)側(cè)邊緣與地板接觸，后足受力向健側(cè)偏移。RF75組大鼠還出現(xiàn)肢體拖曳和下肢腫脹的情況，運(yùn)動(dòng)功能明顯受累。與Sham 組比較，RF65組術(shù)后1 天Tarlov 評(píng)分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P< 0.05)，RF75組術(shù)后1 天和3 天差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.01，見圖4）。

圖4 大鼠運(yùn)動(dòng)功能變化比較*P < 0.05，**P < 0.01，與Sham 組相比；#P < 0.05，##P < 0.01，與術(shù)前相比Fig.4 Comparison of Tarlov scoring of rats between different group*P < 0.05, **P < 0.01, compared with group Sham;#P < 0.05, ##P < 0.01, compared with 0 day.

5.組織形態(tài)學(xué)觀察

根據(jù)既往確定的最佳造模溫度，對(duì)模型進(jìn)行復(fù)制，觀察模型組大鼠坐骨神經(jīng)的神經(jīng)病理變化。Sham 組大鼠坐骨神經(jīng)纖維排列相對(duì)規(guī)整，神經(jīng)纖維粗細(xì)、走行較為一致，神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)較為完整。而RF65組大鼠局部損傷明顯，出現(xiàn)了神經(jīng)斷裂，空泡增多，組織水腫的情況，神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)疏松。說明65℃射頻熱凝對(duì)神經(jīng)造成了一定程度的損傷（見圖5）。

圖5 大鼠坐骨神經(jīng)HE 染色切片（HE 染色，標(biāo)尺 = 60 μm）空泡Fig.5 Photomicrographs of the sciatic nerve after operation stained with HE, Bar scale = 60 μm, Vacuoles

6.RT-PCR

大鼠坐骨神經(jīng)射頻熱凝后14 天，RF65組大鼠的背根神經(jīng)節(jié)組織內(nèi)的Nav1.8 mRNA 表達(dá)量較Sham組顯著增加（P< 0.05，見圖6）。

圖6 射頻熱凝后大鼠背根神經(jīng)節(jié)Nav1.8 mRNA 的表達(dá)(n = 10)**P < 0.01，與Sham 組相比Fig.6 Expression of Nav1.8 mRNA in rat dorsal root ganglion after radiofrequency thermocoagulation (n = 10)**P < 0.01, compared with group Sham.

討 論

神經(jīng)纖維對(duì)溫度的耐受不同。既往的研究表明42℃的脈沖射頻對(duì)于任何神經(jīng)均沒有損傷，造成神經(jīng)損傷的溫度一般大于50℃。60℃時(shí)傳遞痛覺和溫覺的Aδ 和C 類纖維破壞，而傳導(dǎo)運(yùn)動(dòng)和觸壓覺的Aα 纖維、Aβ 纖維和運(yùn)動(dòng)纖維能耐受更高的溫度[14]。郝玢[19]報(bào)道65℃射頻5 min 對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)造成明顯的損傷。Heavner 等[20]在新鮮蛋清中采用不同溫度的射頻熱凝對(duì)比，發(fā)現(xiàn)在42℃時(shí)沒有產(chǎn)生凝固物，但當(dāng)溫度在60℃以上時(shí)就開始產(chǎn)生蛋清的凝固現(xiàn)象。所以我們的實(shí)驗(yàn)分別設(shè)置了55℃、65℃、75℃三個(gè)溫度來進(jìn)行坐骨神經(jīng)的連續(xù)射頻熱凝處理。

RF65組和RF55組均于術(shù)后逐漸開始出現(xiàn)MWT和TWL 的改變。兩組MWT 的明顯降低分別出現(xiàn)于第3 天和第5 天，RF55組持續(xù)時(shí)間僅為1 周，而RF65組持續(xù)降低有25 天。兩組TWL 均于術(shù)后7 天開始明顯縮短，RF55組持續(xù)8 天，而RF65組持續(xù)長達(dá)23 天。RF55組損傷程度較輕，痛覺敏感維持的時(shí)間較短，大鼠術(shù)后神經(jīng)功能恢復(fù)較快，2 周左右其神經(jīng)功能即可恢復(fù)至術(shù)前狀態(tài)。RF75組術(shù)后神經(jīng)損傷較為嚴(yán)重，出現(xiàn)了較明顯的運(yùn)動(dòng)功能損傷，大鼠術(shù)后出現(xiàn)拖曳、自噬嚴(yán)重的現(xiàn)象，且TWL 較Sham 組及術(shù)前明顯上升，未出現(xiàn)MWT、TWL 降低的情況，不符合病理性神經(jīng)痛相關(guān)的臨床表現(xiàn)[21,22]。通過不同溫度的射頻熱凝，以及損傷后大鼠行為學(xué)的變化，對(duì)比發(fā)現(xiàn)RF65組術(shù)后大鼠的行為學(xué)變化更加符合神經(jīng)病理性疼痛模型的臨床表現(xiàn)。

RF65組的損傷后表現(xiàn)，與Bennett 等[21]創(chuàng)建的經(jīng)典的大鼠坐骨神經(jīng)結(jié)扎模型表現(xiàn)出的坐骨神經(jīng)損傷后的臨床表現(xiàn)類似，在坐骨神經(jīng)的處理后，出現(xiàn)了患側(cè)肢體自發(fā)性痛敏感和對(duì)有害刺激反應(yīng)閾值明顯減低的過程。王厚融等[23]通過坐骨神經(jīng)卡壓損傷動(dòng)物模型顯示，機(jī)械痛閾值和熱痛閾值術(shù)后7天開始降低，能維持1 個(gè)月余。Song 等[24]建立的大鼠背根神經(jīng)節(jié)慢性卡壓模型術(shù)后第1 天開始出現(xiàn)間歇性舔舐手術(shù)側(cè)后爪，輕微的自噬現(xiàn)象，在術(shù)后前2 周常見，第5 周后頻率減低；機(jī)械痛閾方面第1 天就開始降低，第1 周過后開始緩慢恢復(fù)，到第5 周仍低于術(shù)前水平。而本研究中RF65組大鼠術(shù)后MWT 先有一個(gè)短暫的閾值增高，于第5 天開始有明顯的閾值降低，MWT 能維持到術(shù)后30 天，臨床表現(xiàn)類似?？梢?，本研究創(chuàng)建的模型與一些經(jīng)典的病理神經(jīng)痛模型的病程相似。

Nav1.8 的外周表達(dá)增加已被證明與慢性疼痛的癥狀有關(guān)[25]，坐骨神經(jīng)卡壓損傷使大鼠出現(xiàn)神經(jīng)病理性疼痛的癥狀，且損傷神經(jīng)中的Nav1.8 mRNA的表達(dá)增加[26]。本研究RF65組其背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)Nav1.8 mRNA 的表達(dá)水平較Sham 組也有明顯的增加，說明Nav1.8 通道可能參與本研究創(chuàng)建的射頻熱凝病理性神經(jīng)痛模型的機(jī)制。

目前有多種坐骨神經(jīng)損傷的病理性神經(jīng)痛模型，大多數(shù)病理性神經(jīng)痛模型[3,27]是通過對(duì)坐骨神經(jīng)的套扎、卡壓造成損傷，其卡壓的松緊程度、力度等存在一定的人為誤差，難以避免。其余的坐骨神經(jīng)局部炎癥性損傷、非壓迫性髓核移植等[28,29]也不能完全確保損傷程度的一致性。而本研究創(chuàng)建的65℃射頻熱凝后神經(jīng)病理性疼痛模型的創(chuàng)建過程操作相對(duì)穩(wěn)定，客觀的多種射頻熱凝參數(shù)能保證神經(jīng)損傷的一致性更高，使模型大鼠的表現(xiàn)也相對(duì)更加穩(wěn)定。

當(dāng)前臨床中射頻熱凝的相關(guān)參數(shù)設(shè)定沒有固定標(biāo)準(zhǔn)，神經(jīng)的損傷程度與溫度、暴露時(shí)間有關(guān)，電壓[30]與電流的頻率對(duì)神經(jīng)的損傷程度也有相關(guān)性，本研究中射頻參數(shù)主要是溫度控制，改變射頻熱凝的其他參數(shù)，會(huì)對(duì)模型的建立產(chǎn)生何種影響需要進(jìn)一步去探索。另外本研究僅選擇了行為學(xué)表現(xiàn)較為明顯的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行了Nav1.8 mRNA 的測定，沒有對(duì)該觀察指標(biāo)進(jìn)行多時(shí)間點(diǎn)的動(dòng)態(tài)監(jiān)測，因此對(duì)于Nav1.8 mRNA 的最佳觀測時(shí)間點(diǎn)仍需要進(jìn)一步的觀測。

本研究建立的大鼠射頻熱凝損傷病理性神經(jīng)痛模型是一種新型的熱損傷神經(jīng)病理性疼痛模型。其潛在的價(jià)值是通過對(duì)該動(dòng)物模型的觀察和研究，發(fā)現(xiàn)熱損傷可能的機(jī)制，以及在臨床中預(yù)防和處理熱效應(yīng)損傷后并發(fā)的神經(jīng)痛。

利益沖突聲明：作者聲明本文無利益沖突。