王松子 王怡翀 李柳冰 梁嘉穎 鄧間開 崔穎鵬

中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科，廣州 510080；2中山大學(xué)南方學(xué)院，廣州 510970

艾滋病，全稱獲得性免疫缺陷綜合征（acquired immunodeficiency syndrome，AIDS），是由人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）引起的一種傳染性疾病，具有較高的致死率及致殘率，嚴重危害人類健康。

HIV 病毒檢測是診斷艾滋病的重要手段。目前，應(yīng)用較廣泛的化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析技術(shù)（CMIA），具有靈敏度高、特異性強［1］、重復(fù)性好、交叉污染少等優(yōu)點［2］，是HIV篩查試驗的較佳選擇之一［3］。然而，我們在實際工作中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)CMIA 法進行HIV 初篩檢測為陽性，后經(jīng)艾滋病確證實驗結(jié)果為陰性（即假陽性）的情況較多。假陽性率高會引起臨床醫(yī)生和患者及其家屬的心理負擔(dān)增加，稍有不慎會造成醫(yī)患關(guān)系的惡化［4］。因此，探究出現(xiàn)假陽性結(jié)果的影響因素，對減少不必要的醫(yī)療糾紛、提升CMIA 檢測方法的確診結(jié)果相符率、降低檢測成本具有重大意義。

本研究回顧分析了中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院2018 至2020 年經(jīng)CMIA 法初篩陽性的病例資料，發(fā)現(xiàn)患者性別、年齡、S/CO 值和假陽性的發(fā)生顯著相關(guān)，并且患者所患疾病、部分其他實驗室檢測結(jié)果的異常也和HIV 假陽性結(jié)果有關(guān)，現(xiàn)報道如下。

資料與方法

1.一般資料

收集2018 年1 月至2020 年12 月在中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院就診，HIV 檢測陽性的病歷資料（295 例）。年齡（47.4±16.7）歲（1～86歲）；其中，男185例，年齡（47.5±17.4）歲（3～86歲）；女110例，年齡（47.2±15.5）歲（1～65歲）。根據(jù)廣州市疾病預(yù)防控制中心的HIV 確證試驗結(jié)果，分為真陽性組（101 例）和假陽性組（194 例）。分析假陽性結(jié)果與患者檢測時間、性別、年齡和S/CO 值的關(guān)系。收集經(jīng)CMIA 法檢測HIV 呈陽性的患者（155 例），根據(jù)確證實驗結(jié)果，分為真陽性組（77 例）和假陽性組（78 例），以HIV 篩查陰性患者（78例）作為陰性對照組。分析患者所患疾病與假陽性的關(guān)系，及其他實驗室檢測項目結(jié)果異常，對出現(xiàn)假陽性結(jié)果的影響，其他實驗室檢測包括免疫、生化、血常規(guī)、出凝血等。

2.儀器與試劑

2.1.篩查試驗 使用ARCHITECT i2000SR 全自動免疫分析儀（雅培，美國）及其原裝檢測試劑盒：HIV 抗原及抗體聯(lián)合檢測試劑盒（HIV Ag/Ab Combo Reagent Kit），定性檢測人血清中HIV 1/2 型抗體及p24 抗原。使用雅培原裝標準品、質(zhì)控品，根據(jù)說明書進行校準和質(zhì)控。S/CO 值≥1 為HIV陽性，S/CO＜1為HIV陰性。

2.2.復(fù)檢 嚴格遵守《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（2015 版）［5］對不能區(qū)分抗體抗原的試劑進行初篩陽性樣本的復(fù)檢要求：用抗體檢測試劑進行復(fù)檢試驗（兩種試劑可以是原有試劑加另一種試劑，也可以是兩種不同試劑），結(jié)果均有反應(yīng)或一有反應(yīng)一無反應(yīng)，進行抗體補充試驗；結(jié)果均無反應(yīng)，進行HIV-1 核酸試驗、HIV-1 p24 抗原試驗或2～4周后隨訪。本院對初篩陽性標本高速離心后，用原有試劑進行檢測，再使用美艾利爾的HIV 1+2 型抗體檢測試劑盒（膠體硒法）進行檢測。

2.3.補充試驗（確證試驗） 將HIV 檢測陽性上報廣州市疾病預(yù)防控制中心（CDC），并再次抽取患者血標本，送檢至HIV 確證實驗室，經(jīng)特定條件下的替代檢測［為《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》（2015 版）的抗體確證試驗之一，包括3 種方法：3 種酶聯(lián)免疫試驗、3 種快速試驗、酶聯(lián)免疫加快速試驗］［5］以及免疫印跡法對標本進行確證試驗。

2.4.標本處理 標本收到后立即使用JW-1044R（立式）低速冷凍離心機以4 000 r/min離心10 min，然后進行檢測。

3.統(tǒng)計學(xué)分析

采用Excel 2016 軟件進行資料收集及整理，SPSS 24.0軟件進行統(tǒng)計分析，使用χ2檢驗進行率的比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1.真陽性組（101例）與假陽性組（194例）的比較

1.1.HIV 檢測陽性與檢測時間的關(guān)系分析 2018 年1 月至2020 年12 月本研究收集的病例中，陽性結(jié)果逐年增多，假陽性率也逐年增加（圖1）。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)2019 年和2020 年較2018 年，假陽性結(jié)果增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），2019 年和2020 年比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表1）。結(jié)果提示，需要分析假陽性出現(xiàn)的原因，以提高與確證實驗結(jié)果的相符率。

表1 2018至2020年HIV陽性患者的檢測結(jié)果比較

圖1 2018至2020年HIV陽性患者的檢測結(jié)果分布情況

2.2.年齡、性別和結(jié)果假陽性的關(guān)系分析 HIV 篩查陽性患者的年齡與假陽性的關(guān)系見圖2，20 歲以下及70 歲以上的患者呈現(xiàn)檢測假陽性率較高。HIV 篩查陽性患者的性別與假陽性的關(guān)系見表2，女性較男性更容易出現(xiàn)假陽性。

表2 HIV篩查陽性患者的性別與假陽性的關(guān)系[例（%）]

圖2 HIV篩查陽性患者的年齡和性別與假陽性的關(guān)系

2.3.檢測S/CO 值與結(jié)果假陽性的關(guān)系分析 將檢測結(jié)果的S/CO 值分成不同區(qū)間，分析與假陽性的關(guān)系（圖3）。當(dāng)S/CO 值≥100 時，假陽性僅為1.03%；1＜S/CO≤10 時，假陽性率高達91.75%。本研究結(jié)果表明，S/CO＞10，假陽性率在≤4.64%以內(nèi)，與確證實驗相符率高；而S/CO＜10，假陽性率極高。

圖3 HIV篩查陽性患者的S/CO值與假陽性的關(guān)系

2.真陽性組（77 例）、假陽性組（78 例）、陰性對照組（78例）的比較

帕累托圖（圖4）展示了假陽性組患者的患病情況，疾病按系統(tǒng)歸類。結(jié)果表明，循環(huán)系統(tǒng)疾病的患者最容易出現(xiàn)假陽性，其次是消化系統(tǒng)疾病、泌尿及男性生殖系統(tǒng)疾病，而危重癥、風(fēng)濕性疾病、眼科疾病的假陽性率最低。

圖4 HIV假陽性患者所患疾病的分布情況

為計算假陽性組、真陽性組、陰性對照組之間其他實驗室檢測指標的差異，我們把其他實驗室檢測結(jié)果按正常值和異常值，劃分為兩類，實施χ2檢驗。結(jié)果顯示，假陽性組和真陽性組有14 項檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義：梅毒螺旋體抗體、C 反應(yīng)蛋白（快速）、白細胞計數(shù)（WBC）、淋巴細胞百發(fā)比（LY%）、中性分葉粒細胞計數(shù)絕對值（NEUT#）、血小板計數(shù)（PLT）、尿素氮（UREA）/肌酐（CREA）、丙氨酸轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶（AST）、球蛋白GLB、δ膽紅素、高敏肌鈣蛋白T（Tn-T）（發(fā)光法）、抗鏈球菌溶血素O（ASO）、免疫球蛋白A（IgA），見表3（僅列出具有顯著差異的項目）。假陽性組和陰性組間的WBC、NEUT、陰離子間隙（AG）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、Tn-T 比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05），見表4。

表3 HIV假陽性組和真陽性組間存在顯著差異的實驗室檢驗項目

表4 HIV假陽性組和陰性對照組存在顯著差異的實驗室檢驗項目

討論

根據(jù)2018 年、2019 年全國艾滋病病毒抗體診斷試劑臨床質(zhì)量評估報告［6-7］，使用雅培第四代試劑的CMIA 法篩查HIV，具有高靈敏性、特異性、功效性，但在實際工作中，我們發(fā)現(xiàn)檢測結(jié)果假陽性率較高。因此，于2018至2020年間對中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院行CMIA 檢測HIV 呈陽性的病例進行回顧性分析，結(jié)果證實，在2018至2020年間，假陽性率逐年遞增，與工作中的直觀感受相符。

在對出現(xiàn)假陽性可能的原因的探究中，我們發(fā)現(xiàn)假陽性和患者年齡、性別有關(guān)。年齡小于20 歲、大于70 歲的患者，女性患者更容易出現(xiàn)假陽性的情況。其他研究者在HIV 篩查檢測中，也發(fā)現(xiàn)女性和兒童的檢測結(jié)果特異性較低，即更容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果［8］。70 歲以上老年人的HIV篩查假陽性率較高，這可能與老年人患者患惡性腫瘤的概率較大［9］的原因有關(guān)。性別和年齡這兩個因素造成的假陽性率偏高，被許多研究證實［10-11］，原因可能包括患者在做HIV 篩查檢測前接受了含人抗動物抗體的藥物治療，或是患者血清中含有異嗜性抗體等能影響免疫測試結(jié)果的一些與被檢物質(zhì)不同但活性成分相似的物質(zhì)，但目前對于異嗜性抗體的產(chǎn)生機制尚無明確解釋。

本研究顯示，在1＜S/CO≤10 的中發(fā)生假陽性率高達91.75%，隨著S/CO 值增加，假陽性率大幅度降低，當(dāng)S/CO＞10，假陽性率控制在≤4.64%以內(nèi)?？梢奡/CO 值為10 時，是S/CO用于提示假陽性可能的一個有意義的臨界值。其他研究者也報道了S/CO 值的提示作用［12-13］。此外，有學(xué)者還計算出在高特異性前提下，靈敏度接近100%的HIV篩查試驗最佳S/CO 值［14］。我國學(xué)者也依據(jù)其所在醫(yī)院情況，計算出CMIA法檢測HIV篩查試驗結(jié)果的最佳S/CO值［15］。

本研究分析了假陽性患者所患疾病的分布情況，發(fā)現(xiàn)循環(huán)、消化、泌尿與男性生殖系統(tǒng)疾病的患者，出現(xiàn)假陽性的情況較多。而來自西安交通大學(xué)附屬第一醫(yī)院的研究［16］，發(fā)現(xiàn)假陽性患者更多患有腫瘤、消化、循環(huán)、泌尿系統(tǒng)疾病，與我們的發(fā)現(xiàn)存在一致性。

本研究分析了假陽性患者的其他實驗室檢測結(jié)果的異常情況，發(fā)現(xiàn)真陽性患者與假陽性相比，存在淋巴細胞減少、CRP增高、血清GLB含量增加（均P＜0.05）。而假陽性患者的WBC 和NEUT#和真陽性患者、陰性對照患者均存在顯著區(qū)別（P＜0.05）。值得注意的是，我們發(fā)現(xiàn)假陽性患者梅毒螺旋體抗體的結(jié)果陽性率低于真陽性患者（P＜0.05），這與其他學(xué)者的研究報告不相符［17］。原因可能是不同區(qū)域、不同醫(yī)院收治患者的疾病種類具有差異所導(dǎo)致的。

組間存在差異的實驗室檢測項目并不一定提示HIV 篩查結(jié)果的假陽性可能，需結(jié)合臨床情況來進行考慮［18］。在2019 版《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》［19］中也提到，HIV感染的診斷原則是以實驗室的檢測結(jié)果為確診依據(jù)，但需參考流行病學(xué)史、結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)來綜合進行診斷。

本研究亦存在不足，如受電子病歷系統(tǒng)限制，只有住院患者的資料，我們剔除了門診患者和住院患者中病歷資料不完整的患者，也剔除了因沒有我們納入研究的全部檢測項目結(jié)果的患者，這可能造成了偏倚。此外，我們根據(jù)患者的主要診斷進行的系統(tǒng)分組，這可能存在患者同時患有其他系統(tǒng)疾病，也存在對假陽性的影響可能，但未列入統(tǒng)計的情況。下一步研究應(yīng)對病歷資料進行多因素分析，根據(jù)多因素分析有顯著意義的指標，判斷聯(lián)合診斷假陽性的價值；繼續(xù)收集更多假陽性患者的病歷資料，以便能發(fā)現(xiàn)更多可能對CMIA法HIV篩查試驗有影響的特異性指標。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻聲明王松子：醞釀和設(shè)計試驗，實施研究，采集數(shù)據(jù)，分析/解釋數(shù)據(jù)，起草文章，統(tǒng)計分析，行政、技術(shù)或材料支持；王怡翀：對文章的知識性內(nèi)容作批評性審閱，獲取研究經(jīng)費，支持性貢獻；李柳冰、崔穎鵬：對文章的知識性內(nèi)容作批評性審閱，指導(dǎo)，支持性貢獻；梁嘉穎：醞釀和設(shè)計試驗，實施研究，采集數(shù)據(jù)，起草文章，統(tǒng)計分析；鄧間開：對文章的知識性內(nèi)容作批評性審閱，支持性貢獻