姚瓊 徐岷

1河南中醫(yī)藥大學(xué)第五臨床附屬醫(yī)院 鄭州人民醫(yī)院檢驗科，鄭州 450000；2鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗科，鄭州 450000

念珠菌性陰道炎為一種十分常見的陰道炎類型。有數(shù)據(jù)顯示，臨床約有80%陰道炎患者發(fā)病由白色念珠菌引起，且近年此病患病率呈逐步上升趨勢［1］。臨床實踐表明，白色念珠菌感染較為頑固，受個人不良衛(wèi)生習(xí)慣影響，絕大部分女性再次感染的風險較高。早期明確患者的感染類型并予以針對性抗菌治療對改善女性生活質(zhì)量有重要意義［2-3］。既往臨床將陰道分泌物培養(yǎng)作為鑒別陰道炎感染類型的金標準，此方法耗時較長，臨床應(yīng)用存在一定局限性［4］。鏡檢法為一種病原微生物檢測的常用方法，但其檢測結(jié)果的準確性可受多種主觀、客觀因素影響［5］。免疫磁珠分離技術(shù)為一種新型微生物檢測技術(shù)，通過制備致病菌血清抗體即可讓靶物質(zhì)中的抗原與免疫磁珠表面抗體相結(jié)合，從而分離靶物質(zhì)［6］。目前，該技術(shù)已在多種環(huán)境、食品微生物及病原微生物檢測中得到廣泛應(yīng)用。本研究主要探討免疫磁珠分離技術(shù)對白色念珠菌所致陰道炎的臨床檢測價值。

資料與方法

1.一般資料

選取2021年6月至2023年1月于鄭州人民醫(yī)院接受陰道分泌物檢查的190名女性作為研究對象，將102例陰道炎患者列為病例組，其余88 例行常規(guī)婦科檢查的健康志愿者列為對照組。病例組年齡25～40（32.53±5.33）歲；婚姻情況：已婚80例，未婚22例；生育情況：已育62例，未育40例。對照組年齡27～38（36.14±5.27）歲；婚姻情況：已婚70 例，未婚18 例；生育情況：已育55 例，未育33 例。兩組患者一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。

納入標準：⑴病例組患者均符合陰道炎臨床診斷標準［7］，均伴有不同程度白帶異常、陰部瘙癢癥狀，經(jīng)分泌物培養(yǎng)確認為白色念珠菌所致陰道炎；⑵入組成員近2 d內(nèi)無性生活；⑶近3 個月內(nèi)未服用過任何抗生素藥物；⑷均已知悉此次研究試驗內(nèi)容，同意獲取既往臨床資料。

排除標準：⑴處于妊娠期、哺乳期女性；⑵伴有免疫功能異常或其他感染性癥狀者；⑶存在心肺、肝腎功能障礙者；⑷惡性腫瘤者；⑸臨床資料缺失者。

2.方法

2.1.陰道分泌物培養(yǎng) ⑴樣本采集：囑受檢者呈截石位，經(jīng)窺陰器陰道下將無菌棉簽置于陰道后端穹隆處，按順時針方向旋轉(zhuǎn)棉簽蘸取陰道分泌物樣本，旋轉(zhuǎn)3～5 圈為宜，后將蘸取樣本的棉簽置入含有細胞保存液的無菌試管中，于試管外側(cè)做好相應(yīng)標記，保存待用。⑵培養(yǎng)方法：準備好恒溫的沙堡弱培養(yǎng)基，培養(yǎng)基溫度保持在34～36 ℃之間，將試管中的分泌物樣本放置于培養(yǎng)基中培育7 d，觀察并記錄致病菌的生長情況，若7 d內(nèi)發(fā)現(xiàn)有致病菌則判定為陽性。

2.2.濕片鏡檢法 樣本采集方法同上，具體檢測方法如下：⑴將陰道分泌物樣本制作為樣本涂片并在涂片上滴加1～2 滴濃度為10.0%的氫氧化鉀溶液；⑵將顯微鏡調(diào)節(jié)為200 倍視野，觀察樣本涂片上的真菌類型及分布情況即可。本次鏡檢所采用的設(shè)備為上海鉑悅儀器有限公司提供的XSP-BM-6C生物光學(xué)顯微鏡。

2.3.免疫磁珠分離法 ⑴免抗念珠菌血清的制備：①將濃度為0.50%的生理鹽水滴入玻璃磨菌管中，采用接種環(huán)刮取培養(yǎng)物后置于磨菌管底部并將其捻為乳酪狀，后加入含有1.00%濃度甲醛的生理鹽水進行稀釋，制備為1∶1菌懸液后于37 ℃恒溫下的EP管內(nèi)滅活24 h；②將菌懸液轉(zhuǎn)移至燒杯封口后進行冰浴，應(yīng)用超聲細胞粉碎機破碎培養(yǎng)物，探頭頻率選擇20 kHz，功率選擇150 W，每破碎6 s后間隔4 s，持續(xù)破碎30 min 后將全菌抗原進行分裝，-20 ℃保存待用；③經(jīng)傳統(tǒng)皮下多點注射方法對家兔進行基礎(chǔ)免疫即免疫加強，經(jīng)酶免法測定抗體小家后即可采用1∶100 包被緩沖液稀釋酶標板，然后應(yīng)用PBS 緩沖液進行多次稀釋，待血清稀釋度OD 值達1.000 后即可在頸動脈處放血進行血清分離。⑵抗體與免疫磁珠的偶聯(lián)：①選擇美國Vitrogen公司提供的甲苯磺酰基活化磁珠徹底混勻后取1 ml 轉(zhuǎn)移至EP 管中并置入磁性分離架，等待1 min至磁珠吸附至管壁后吸出移液器中多余液體；②重復(fù)洗滌磁珠待其稀釋至適宜濃度后于室溫下取1 ml 重懸包被磁珠孵育18 h；③孵育完成后再次將磁架置入EP 管，同樣于1 min 后取出并棄去多余液體，加入緩沖液于4 ℃下洗滌磁珠，重復(fù)2 次后加入磁珠封阻液，次日再次按上述步驟洗滌磁珠并加入濃度為0.02%三氮化鈉，4 ℃下保存?zhèn)溆?。⑶免疫磁珠分離：①應(yīng)用磁珠洗滌緩沖液洗滌1次包被磁珠，待其恢復(fù)至原有體積，取50 μl包被磁珠加入至1 ml 念珠菌菌懸液，于30 轉(zhuǎn)/min 旋轉(zhuǎn)混勻儀上反應(yīng)30 min，后采用磁架收集磁珠并洗滌3 次；②將陰道分泌物樣本涂片進行干燥后分別滴加石碳酸復(fù)紅染液、脫色劑和亞甲藍復(fù)染液，根據(jù)涂片抗酸染色結(jié)果觀察免疫磁珠分離后磁珠與菌體的結(jié)合情況。

3.觀察指標

3.1.檢出情況 統(tǒng)計并對比不同檢測方法下念珠菌陰道炎患者的檢出情況，計算不同檢測方法對白色念珠菌所致陰道炎的檢出率，檢出率=（對應(yīng)方法檢出例數(shù)/分泌物培養(yǎng)例數(shù)）×100%。

3.2.診斷效能 統(tǒng)計并對比不同檢測方法對白色念珠菌所致陰道炎的診斷效能，設(shè)定白色念珠菌陰道炎患者為陽性，對照組為陰性，評估指標包括準確率、靈敏度、特異度，準確率=（總例數(shù)-誤診例數(shù)）總例數(shù)×100%，誤診例數(shù)=假陽性+假陰性；靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性），即有病診斷陽性的概率；特異度=真陰性/（假陽性+真陰性），即無病診斷陰性的概率。

4.統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)均采用軟件SPSS 22.0 處理，計數(shù)資料以例（%）表示，采用χ2檢驗，P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1.不同檢測方法檢出情況比較

免疫磁珠分離技術(shù)共檢測出88 例白色念珠菌所致陰道炎，濕片鏡檢法共檢測出70 例；免疫磁珠分離技術(shù)對于白色念珠菌所致陰道炎的檢出率為86.27%（88/102），高于濕片鏡檢法的68.63%（70/102）（χ2=8.908，P=0.003）。

2.不同檢測方法診斷效能比較

⑴190 例中共有102 例念珠菌性陰道炎陽性病例和88例陰性病例，結(jié)合分泌物培養(yǎng)結(jié)果，濕片鏡檢法下共檢出70例白色念珠菌陰道炎陽性，75例陰性，假陽性13例，假陰性32 例，診斷準確率為81.58%（155/190），靈敏度為68.63%（70/102），特異度為85.23%（75/88）。見表1。

表1 接受陰道分泌物檢查的190名女性濕片鏡檢法檢測白色念珠菌陰道炎的結(jié)果（例）

⑵190 例中共有102 例念珠菌性陰道炎陽性病例和88例陰性病例，結(jié)合分泌物培養(yǎng)結(jié)果，免疫磁珠分離法下共檢出88 例白色念珠菌陰道炎陽性，83 例陰性，假陽性5 例，假陰性14 例，診斷準確率為95.26%（181/190），靈敏度為86.27%（88/102），特異度94.32%（83/88），見表2。

表2 接受陰道分泌物檢查的190名女性免疫磁珠分離法檢測白色念珠菌陰道炎的結(jié)果（例）

⑶由結(jié)果⑴、⑵可知，免疫磁珠分離法對白色念珠菌陰道炎的診斷準確率、靈敏度、特異度均高于濕片鏡檢法（P＜0.05），見表3。

表3 不同檢測方法對白色念珠菌陰道炎的診斷效能比較（%）

討論

念珠菌為一種條件致病菌，在人體內(nèi)含量較低，但當機體免疫力下降時，念珠菌可大量繁殖并引發(fā)一系列感染癥狀。白色念珠菌是人體最主要的念珠菌菌屬，也是霉菌性陰道炎患者的常見致病原因［8］。念珠菌性陰道炎可通過多種御外法治愈，但此病極易反復(fù)，對女性生活質(zhì)量及身心健康均可產(chǎn)生嚴重影響，明確患者感染類型并實施針對性抗菌治療為其主要干預(yù)原則［9］。此前，臨床常會通過陰道分泌物培養(yǎng)或鏡檢法明確陰道炎患者的感染類型。研究表明，傳統(tǒng)分泌物培養(yǎng)法耗時較長，無法充分適應(yīng)患者的隨診需求。鏡檢法具有簡單易行、方便快捷等優(yōu)勢，但易受醫(yī)生操作或外部環(huán)境影響，此檢測方法也可存在一定漏診、誤診情況［10］。

免疫磁珠分離為一種新型免疫學(xué)技術(shù)，在細胞分離及微生物檢測中均具有較高應(yīng)用價值。采用此技術(shù)進行臨床檢測的關(guān)鍵在于血清抗體的制備及純化，制備純化抗體及免疫磁珠并將其加入靶物質(zhì)中，在強磁場作用下即可通過抗體、抗原的特異性結(jié)合機制實現(xiàn)對病原微生物的有效分離［11］。本研究結(jié)果顯示，免疫磁珠分離技術(shù)對于白色念珠菌所致陰道炎的檢出率為86.27%（88/102），高于濕片鏡檢法的68.63%（70/102）。研究基于傳統(tǒng)皮下或多點注射方式，從家兔中提取并制成了念珠菌的血清抗體，將其與磁珠混合后實現(xiàn)了對念珠菌的磁場分離。磁珠分離后通過抗酸染色試驗即可實現(xiàn)對磁珠與菌體結(jié)合情況的客觀評估［12］。與此前臨床常用的濕片鏡檢法相比，免疫磁珠分離可規(guī)避因檢測人員操作不當或環(huán)境污染產(chǎn)生的影響，提升檢測結(jié)果的準確性［13］。姚驊珊和陳悅科［14］應(yīng)用免疫磁珠分離技術(shù)實現(xiàn)了對阪崎腸桿菌的快速檢測，他們認為，此檢測技術(shù)具有良好的特異度和穩(wěn)定性，在多種病原微生物檢測中均有較高應(yīng)用價值。李雪利等［15］認為，經(jīng)建立蠟樣芽孢桿菌免疫磁珠，并與環(huán)介導(dǎo)等溫擴增相結(jié)合后可顯著提升食品中病原微生物的檢測靈敏度和特異度。以陰道分泌物培養(yǎng)結(jié)果為金標準，本研究對比不同檢測方法的診斷效能，結(jié)果顯示，免疫磁珠分離法對白色念珠菌陰道炎的診斷準確率、靈敏度、特異度均高于濕片鏡檢法（均P＜0.05），提示免疫磁珠分離技術(shù)在念珠菌性陰道炎的鑒別診斷中也有較高應(yīng)用價值。

綜上所述，免疫磁珠分離技術(shù)可用于白色念珠菌陰道炎患者的臨床檢測中；與傳統(tǒng)鏡檢法相比，此技術(shù)具有高效、快速、準確率高等優(yōu)勢，可更好地適應(yīng)患者的臨床需求。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突

作者貢獻聲明姚瓊：醞釀和設(shè)計試驗，實施研究，采集數(shù)據(jù)，分析解釋數(shù)據(jù)，起草文案，統(tǒng)計分析；徐岷：對文章的知識性內(nèi)容作批評性審閱、指導(dǎo)