周俊華 方治山 袁朝原 覃倩 吳強 楊楷 周志揚 羅鮮青 廖曉光

摘要：【目的】探究不同添加劑對凌云烏雞生長性能、免疫器官指數(shù)、血清免疫指標(biāo)及盲腸微生物多樣性的影響，為凌云烏雞飼養(yǎng)過程中選擇替抗產(chǎn)品提供參考依據(jù)?！痉椒ā窟x取1日齡凌云烏雞500只，公母各半，隨機(jī)分為5組［5個處理，分別為添加劑組的T1～T4處理和對照（CK）］，飼喂基礎(chǔ)飼糧，T1、T2和T4處理分別在試驗雞常規(guī)飲水中添加3.0%復(fù)合乳酸菌、3.5%枯草芽孢桿菌和0.5%復(fù)方中藥，T3處理在基礎(chǔ)飼糧中添加0.3 mg/kg有機(jī)硒（以硒計），測定分析1～6周齡試驗雞的生長性能及6周齡試驗雞的免疫器官指數(shù)、血清免疫指標(biāo)和盲腸微生物多樣性?！窘Y(jié)果】1周齡凌云烏雞的平均日采食量，T2、T3、T4處理和CK均顯著低于T1處理（P<0.05，下同），料重比以T1和T4處理顯著低于T2、T3處理和CK；2周齡凌云烏雞的平均日增重，CK和T1處理顯著高于T2、T3和T4處理，料重比以T2和T3處理顯著低于T1、T4處理和CK；3～6周齡凌云烏雞的平均日增重、平均日采食量和料重比均無顯著差異（P>0.05，下同）。T1～T4處理凌云烏雞的脾臟指數(shù)較CK均有所提高，T1和T3處理的法氏囊指數(shù)均顯著高于CK，T2和T4處理的法氏囊指數(shù)與CK差異不顯著，T1和T3處理的胸腺指數(shù)較CK分別提高13.11%和14.75%。T1～T4處理凌云烏雞的免疫球蛋白A和免疫球蛋白M較CK均有所提高，T1、T2和T4處理的免疫球蛋白G均較CK有所提高，且以T1處理最高。各處理凌云烏雞間的Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)和Chao1指數(shù)差異不顯著，但T1處理較CK及其他處理均有所提高，且T1處理的Pielou均勻度顯著高于CK和T3處理。在門水平，T1、T2、T3、T4處理和CK凌云烏雞盲腸細(xì)菌相對豐度>1.00%的優(yōu)勢菌門總數(shù)分別為5、6、5、7和5個，且優(yōu)勢菌門的總相對豐度分別為95.92%、98.11%、95.96%、97.97%和97.10%。在屬水平，T1、T2、T3、T4處理和CK凌云烏雞盲腸的細(xì)菌優(yōu)勢菌屬總數(shù)分別為18、21、19、19和19個，且優(yōu)勢菌屬的總相對豐度分別為80.46%、83.11%、81.58%、79.23%和81.31%?！窘Y(jié)論】飼喂復(fù)合乳酸菌、有機(jī)硒、復(fù)方中藥和枯草芽孢桿菌均可提高凌云烏雞的平均日增重，降低其料重比，提高免疫器官指數(shù)和血清免疫指標(biāo)，同時提高盲腸微生物多樣性及群落相對豐度，尤其以飼喂復(fù)合乳酸菌的效果更佳。

關(guān)鍵詞：凌云烏雞；添加劑；生長性能；免疫器官指數(shù)；血清免疫指標(biāo)；盲腸微生物

中圖分類號：S831.5? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號：2095-1191（2023）02-0629-09

Abstract：【Objective】This experiment was conducted to investigate the effects of different additives on growth performance，immune organ indexes，serum immune indexes and microbial diversity in cecum of Lingyun black bone chicken to provide reference for the selection of antifungal products in Lingyun black bone chickens. 【Method】Five hundred one-day-old Lingyun black bone chicken were randomly divided into 5 groups［（5 treatments，T1-T4 added additives and control（CK）］. Chickens in the CK were fed a basal dietand normal water，and those in the T1，T2，T4were fed the water with 3.0% compound Lactobacillus，3.5% Bacillus subtilis，organic selenium 0.5% Chinese herbal medicine，respectively. T3 were fed a basal diet with 0.3mg/kg organic selenium（as selenium）. The growth performance of chickens aged from 1 to 6 weeks and immune organ index， serum immune index，cecum microbial diversity at 6 weeks were measured. 【Result】The results showed as follows：at 1week of age，the average daily feed intake（ADFI） of CK，T2，T3，T4 were significantly lower than those of T1（P<0.05，the same below），the feed conversion ratio（F/G） of T1 and T4 were significantly lower than those of T2，T3 and CK. At 2 weeks of age，the average daily gain（ADG） of C and T1 were significantly higher than others of T2，T3 and T4，the F/Gof T2 and T3 were significantly lower than those of CK， T1 and T4. At 3-6 weeks of age，there was no significant differences in the ADG（P>0.05，the same below），the ADFI，the feed conversion ratio between CK and treatment groups. Compared with CK，the spleen indexes of treatment groups increased，bursa of fabricius indexes of T1，T3 were significantly increased，bursa of fabricius indexes of T2，T4 had no significant differences compared with CK，thymus indexes of T1，T3 increased by 13.11% and 14.75% compared with CK respectively. Compared with CK，the immunoglobulin A，immunoglobulin M of treatment groups increased，the immunoglobulin G of T1，T2 and T4 increased，and the T1 was the highest. There was no significant differences in Shannon index，Simpson index，Chao1index among treatment groups，but those of T1 increased compared with CK and other treatments，Pielous evenness of T1 were significantly higher than that of CK and T3. At the phylum level，the number of the dominant bacteria whose relative abundance was over 1.00% of T1，T2，T3， T4 and CK were 5，6，5，7 and 5， with relative abundance of 95.92%，98.11%，95.96%，97.97% and 97.10%. At the genus level，the number of the dominant bacteria of T1，T2，T3，T4 and CK were 18，21，19，19 and19，with relative abundance of 80.46%，83.11%，81.58%，79.23%，81.31%. 【Conclusion】It is concluded that，adding compound Lactobacillu，organic selenium，Chinese herbal medicine and B. subtilis in water can increase ADG decrease feed conversion ratio， improve immune organ indexes，serum immune indexes， and improve the cecalmicrobial diversity and relative abundance of microorganisms of Lingyun black bone chicken，and the compound Lactobacillus has the optimal effects.

Key words：Lingyun black bone chicken； additive； growth performance； immune organ index； serum immune index； cecal microorganism

Foundation items： Guangxi Science and Technology Planning Project（Guike AD20297107）

0 引言

【研究意義】在養(yǎng)殖業(yè)中長期、大量使用抗生素會導(dǎo)致動物腸道菌群失衡、機(jī)體免疫力降低，引發(fā)藥物殘留、產(chǎn)生耐藥菌及污染環(huán)境等一系列問題，因而各國開始限制甚至禁止在畜禽飼料中添加抗生素（Liu et al.，2018；Zhang et al.，2018；劉華等，2020；Parent et al.，2020）。我國已進(jìn)入無抗飼料時代，開發(fā)、尋找可替代抗生素的高效、安全飼料添加劑以提高畜禽機(jī)體健康水平和獲得較高的生產(chǎn)效率，是當(dāng)前畜禽健康養(yǎng)殖研究的熱點及重要方向。已有研究表明，復(fù)合乳酸菌（Compound Lactobacillus）、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）、有機(jī)硒和復(fù)方中藥已應(yīng)用于蛋雞、肉雞、綿羊和犢牛等畜禽養(yǎng)殖業(yè)以提高其生長性能、防治疾病及提高飼料利用率（方磊涵等，2019；魯利萍等，2021；馬文鋒等，2021；烏日力嘎等，2022；謝童等，2022；張靜博等，2022）。凌云烏雞肉質(zhì)細(xì)嫩、鮮甜、黑色素含量高，具有較高的藥用和食用價值，已被命名為廣西烏雞入選《國家畜禽遺傳資源品種名錄》（2021年版），但專門針對凌云烏雞替抗產(chǎn)品的研究鮮有報道。因此，探究不同添加劑對凌云烏雞生長性能、免疫器官指數(shù)、血清免疫指標(biāo)及盲腸微生物多樣性的影響，對其飼用替抗產(chǎn)品的研究和選擇具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】Salman等（2009）研究認(rèn)為，硒具有提高機(jī)體免疫力和拮抗重金屬作用，同時在組織器官發(fā)育及機(jī)體生理生化反應(yīng)過程中發(fā)揮不可替代的作用。王四新等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，在保育豬日糧中添加豬源發(fā)酵乳酸桿菌可提高其免疫力和生長性能，并可提高日糧粗蛋白、鈣和磷的表觀消化率。Blajman等（2017）研究表明，凍干唾液乳桿菌（Lactobacillus salivarius）對試驗肉雞無致病性，且能提高肉雞的生長性能及改善機(jī)體健康狀況，是一種可開發(fā)利用的飼料添加劑。陳星燦等（2018）研究證實，在黑鯛（Acanthopagrus schlegelii）幼魚日糧中添加外源硒可顯著提高其生長性能和血清免疫活性。王洪賀等（2019）研究表明，由黨參、黃芪、蒲公英和白術(shù)等組成的復(fù)合中草藥可提高黑羽烏雞（Gallus domesticus）的生長性能，且添加量為0.1%效果最好。王乙茹等（2019）研究表明，凝結(jié)芽孢桿菌（B. coagulans）可改善21～42日齡AA肉雞的飼料轉(zhuǎn)化率和腹瀉率。申瑞等（2020）研究發(fā)現(xiàn)，在大午金鳳雛雞飼糧中添加枯草芽孢桿菌可提高其生長性能及機(jī)體抗氧化能力。華詩卉等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，中草藥組方黃芪和當(dāng)歸可提高試驗雞機(jī)體的免疫功能。魯利平等（2021）研究指出，在犢牛日糧中添加由女貞子、神曲、益母草和當(dāng)歸等組成的中草藥可改善其生長性能、提高其免疫力，且最佳添加量為1.5%～2.0%。馬文峰等（2021）研究發(fā)現(xiàn)，在產(chǎn)蛋后期蛋雞日糧中添加0.03%枯草芽孢桿菌可改善其腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，改變盲腸微生物組成，但對試驗雞的生產(chǎn)性能無顯著影響。張靜博等（2021）研究表明，枯草芽孢桿菌替代抗生素用于肉雞日糧，可提高其生產(chǎn)性能和改善免疫力。烏日力嘎等（2022）研究認(rèn)為，在放牧綿羊日糧中添加0.2 mg/d酵母硒，可通過調(diào)節(jié)綿羊瘤胃的微生物區(qū)系改變瘤胃發(fā)酵狀況進(jìn)而緩解熱應(yīng)激。謝童等（2022）研究發(fā)現(xiàn)，由乳酸桿菌、苯乳酸和乳酸組成的復(fù)合乳酸菌可提高黃羽肉雞免疫器官指數(shù)，改善盲腸微生物平衡，且在日糧中添加0.3%效果最明顯?！颈狙芯壳腥朦c】迄今，有關(guān)凌云烏雞的研究主要集中在不同周齡營養(yǎng)物質(zhì)需要量及不同世代生產(chǎn)性能比較分析方面，針對不同添加劑在凌云烏雞飼養(yǎng)過程中應(yīng)用的研究鮮見報道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】探究復(fù)合乳酸菌、枯草芽孢桿菌、復(fù)方中藥和有機(jī)硒等添加劑對凌云烏雞生長性能、免疫功能及盲腸微生物多樣性的影響，為凌云烏雞飼養(yǎng)過程中選擇和應(yīng)用替抗產(chǎn)品提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

供試凌云烏雞為廣西百色市凌云縣特產(chǎn)，由廣西瑞東農(nóng)牧有限公司提供，規(guī)格為同一批出雛、體重接近1日齡。供試添加劑為復(fù)合乳酸菌、枯草芽孢桿菌、有機(jī)硒和復(fù)方中藥。其中，復(fù)合乳酸菌由雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌和植物乳桿菌組成，活菌數(shù)合計2.0×1010 CFU/g，由南寧輝瑞生物科技有限公司提供；枯草芽孢桿菌活菌數(shù)1.5×108 CFU/g，由山東寶來利來生物工程股份有限公司提供；有機(jī)硒為亞硒酸二葡萄糖酯，硒含量為1800.00 mg/kg，由廣西匯生生物科技有限公司提供；復(fù)方中藥（顆粒狀）主要成分為黃芪、板藍(lán)根和大青葉，由江西中成藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供。

1. 2 試驗方法

1. 2. 1 試驗設(shè)計 試驗用凌云烏雞500只，公母各半，采用單因素完全隨機(jī)設(shè)計，隨機(jī)分為5組［5個處理，分別為添加劑組的T1～T4處理和對照（CK）］，每處理5個重復(fù)，每重復(fù)20只，分別佩戴翅號。飼養(yǎng)試驗在廣西瑞東農(nóng)牧有限公司雞場進(jìn)行，試驗期42 d，采用地面平養(yǎng)飼養(yǎng)方式，嚴(yán)格按照雞場管理程序進(jìn)行管理。試驗設(shè)計及分組信息見表1。

1. 2. 2 基礎(chǔ)飼糧 選用南寧市某公司生產(chǎn)的玉米—豆粕型小雞配合飼糧，不添加任何促生長類抗生素?；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表2。

1. 2. 3 測定指標(biāo)及方法 生長性能：分別于1日齡、1周齡、2周齡、3周齡、4周齡、5周齡和6周齡晨飼前空腹逐只稱重，計算每個重復(fù)每只雞的平均日增重（ADFI）；以重復(fù)為單位記錄每天的投料量、剩料量和死亡雞只，計算每個重復(fù)每只雞的平均日采食量（ADG）；由每個重復(fù)的總耗料量及總增重量計算每個重復(fù)的平均料重比（F/G）。

免疫器官指數(shù)：試驗結(jié)束時，每個重復(fù)選取4只試驗雞，解剖并摘取胸腺、脾臟和法氏囊，剝離各免疫器官周圍脂肪，用濾紙吸干水分后稱重，計算免疫器官指數(shù)。免疫器官指數(shù)（g/kg）=器官重（g）/活體重（kg）

血清免疫指標(biāo)：試驗結(jié)束時，每個重復(fù)隨機(jī)選取4只試驗雞，翼下靜脈采血5.0 mL，4 ℃冰箱靜置12 h，1200×g離心5 min，移取血清，-20 ℃保存?zhèn)錅y。后續(xù)使用酶標(biāo)儀（賽默飛世爾科技有限公司）以酶聯(lián)免疫吸附處理法測定血清免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）和免疫球蛋白G（IgG）水平。

盲腸微生物多樣性檢測：試驗結(jié)束時，屠宰試驗雞后分離盲腸，擠出腸道食糜于凍存管中-80 ℃保存。使用E.Z.N.A.? Stool DNA Kit試劑盒（美國SDB公司）提取盲腸微生物總DNA，以瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA質(zhì)量，通過紫外分光光度計（瑞士梅特勒托利多公司）對DNA進(jìn)行定量。以16S rDNA為目標(biāo)區(qū)域設(shè)計引物，序列為341F（5'-CCTACGGGNGGC WGCAG-3'），805R（5'-GACTACHVGGGTATCTAAT CC-3'）。PCR反應(yīng)體系25.0 μL：Phusion Hot start flex 2×Master Mix 12.5 μL，正、反向引物各2.5 μL，DNA模板50 ng，ddH20補充至25.0 μL。擴(kuò)增程序：98 ℃ 30 s；98 ℃ 10 s，54 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，進(jìn)行35個循環(huán)；72 ℃ 10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，采用AMPure XT beads（Beckman coulter genomics，Danvers，MA，USA）回收純化，Qubit（Invitrogen，USA）定量，在NovaSeq PE 250平臺測序。

1. 3 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用Excel 16.0和SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，以LSD法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2. 1 不同添加劑對凌云烏雞生長性能的影響

由表3可知，1周齡各處理的平均日增重差異不顯著（P>0.05，下同），但T1～T4處理較CK均有所提高，而平均日采食量表現(xiàn)為T2、T3、T4處理和CK均顯著低于T1處理（P<0.05，下同），料重比表現(xiàn)為T1和T4處理顯著低于T2、T3處理和CK；2周齡T4處理的平均日增重與CK差異不顯著，但二者均顯著低于T1、T2和T3處理，而各處理的平均日采食量差異不顯著，料重比表現(xiàn)為T1和T2處理顯著低于T3、T4處理和CK；3周齡各處理的平均日增重、平均日采食量和料重比均無顯著差異；4周齡各處理的平均日增重、平均日采食量和料重比差異不顯著，但T1～T4處理的料重比較CK均有所降低，而T1處理的平均日增重稍高于T2～T4處理；5周齡各處理的平均日增重、平均日采食量和料重比差異不顯著，但T1～T4處理的平均日增重較CK均有所提高，料重比均稍低于CK；6周齡各處理的平均日增重、平均日采食量和料重比差異不顯著，但T1～T4處理的平均日增重稍高于CK?？梢姡?種添加劑均可在一定程度上提高試驗雞的生長性能，以添加復(fù)合乳酸菌的效果更佳。

2. 2 不同添加劑對凌云烏雞免疫器官指數(shù)的影響

由表4可知，T1～T4處理4凌云烏雞的脾臟指數(shù)分別較CK提高29.05%、28.20%、49.57%和19.65%；在法氏囊指數(shù)方面，T3處理顯著高于CK和其他處理，T1處理顯著高于CK和T2處理，CK與T2和T4處理間差異不顯著；在胸腺指數(shù)方面，各處理間差異不顯著，但T1和T3處理分別較CK提高13.11%和14.75%?？梢?，添加復(fù)合乳酸菌和有機(jī)硒可促進(jìn)試驗雞免疫器官發(fā)育，而添加枯草芽孢桿菌和復(fù)方中藥對試驗雞免疫器官發(fā)育的促進(jìn)效果不明顯。

2. 3 不同添加劑對凌云烏雞血清免疫指標(biāo)的影響

由表5可知，各處理凌云烏雞的免疫球蛋白Ａ水平較CK均有所提高，其中T1處理最高，且顯著高于CK和T2處理，與T4處理差異不顯著；免疫球蛋白G水平以T1、T2和T4處理較高，分別較CK提高20.60%、13.73%和15.01%，而T3處理較CK降低1.53%；T1～T4處理的免疫球蛋白M水平較CK均有所提高，其中T2處理最高，較CK提高8.04%。說明添加復(fù)合乳酸菌、枯草芽孢桿菌、有機(jī)硒和復(fù)方中藥在一定程度上均可提高試驗雞的血清免疫球蛋白水平，尤其添加復(fù)合乳酸菌對提高試驗雞機(jī)體免疫力的效果更佳。

2. 4 不同添加劑對凌云烏雞盲腸細(xì)菌群落多樣性的影響

由表6可知，各處理的覆蓋度均在0.9990以上，說明所測樣本16S rDNA序列的檢出概率較高，測序結(jié)果可代表樣本的真實情況。各處理間的Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)和Chao1指數(shù)均無顯著差異，但T1處理的這幾項指數(shù)總體上較高；Pielou指數(shù)以T1處理最高，且顯著高于CK和T3處理，但與T2和T4處理差異不顯著。說明添加復(fù)合乳酸菌對提高試驗雞盲腸微生物多樣性的效果更明顯。

2. 5 不同添加劑對凌云烏雞盲腸細(xì)菌門水平群落組成及其相對豐度的影響

從圖1可看出，各處理凌云烏雞盲腸共有的相對豐度大于1.00%的優(yōu)勢細(xì)菌門為厚壁菌門（Firmicutes）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、變形菌門（Proteobacteria）、未知細(xì)菌門（unclassified）和放線菌門（Actinobacteria），這5個菌門在各處理中的相對豐度，T1處理為56.23%、24.17%、7.91%、5.87%和2.56%，T2處理為59.52%、20.71%、8.70%、3.88%和2.82%，T3處理為52.66%、27.98%、8.39%、3.20%和1.30%，T4處理為54.81%、27.01%、9.42%、3.98%和1.87%，CK為53.91%、25.47%、8.55%、4.88%和3.11%；脫鐵桿菌門（Deferribacteres）為T3處理（2.53%）和T1處理（1.37%）共有的優(yōu)勢細(xì)菌門；軟壁菌門（Tenericutes）（1.88%）是T3處理中唯一的優(yōu)勢細(xì)菌門；T1、T2、T3、T4處理和CK的優(yōu)勢菌門分別為6、5、7、5和5個，其總相對豐度分別為98.11%、95.96%、97.97%、97.10%和95.92%。說明添加復(fù)合乳酸菌對提高試驗雞盲腸微生物門水平群落相對豐度的效果較添加其他添加劑明顯。

2. 6 不同添加劑對凌云烏雞盲腸細(xì)菌屬水平群落組成及其相對豐度的影響

從圖2可看出，T1～T4處理和CK凌云烏雞的盲腸細(xì)菌優(yōu)勢菌屬分別有21、19、19、19和18個，總相對豐度分別為83.11%、81.58%、79.23%、81.31%和80.46%，其中，T1處理優(yōu)勢菌屬的總相對豐度，分別較T2、T3、T4處理和CK高1.53%、3.88%、1.80%和2.65%。說明添加復(fù)合乳酸菌對提高試驗雞盲腸微生物屬水平群落相對豐度的效果較添加其他添加劑明顯。

3 討論

生長性能是直接反映畜禽生長狀況的指標(biāo)，在育雛階段提高雛雞的生長性能對提高其生長后期的經(jīng)濟(jì)效益具有積極作用。申瑞等（2020）研究證實，在大午金鳳雛雞飼糧中添加枯草芽孢桿菌513N可提高試驗雞的平均日增重和試驗?zāi)w重，降低料重比，且以添加0.15%的效果最佳。謝童等（2022）研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加復(fù)合乳酸菌制劑與添加抗生素效果相似，可降低黃羽肉雞的料重比，提高飼料轉(zhuǎn)化率。本研究中，飼喂復(fù)合乳酸菌、枯草芽孢桿菌、有機(jī)硒及以黃芪、板藍(lán)根、金銀花和蒲公英等組成的復(fù)方中藥均可在一定程度上提高凌云烏雞的生長性能，且以飼喂復(fù)合乳酸菌效果更佳。

Madej等（2015）、王乙茹等（2019）、AL-Khalaifa等（2019）研究表明，免疫器官是免疫細(xì)胞增殖發(fā)育的場所，其發(fā)育狀態(tài)及機(jī)能直接決定動物的免疫狀況，同時，免疫器官指數(shù)是衡量免疫器官發(fā)育程度的重要生物學(xué)指標(biāo)，免疫器官在正常范圍內(nèi)增大、指數(shù)升高，表明器官發(fā)育良好，功能增強，可較好地執(zhí)行免疫功能，進(jìn)而保障動物良好的生長性能。胸腺、法氏囊和脾臟是禽類重要的免疫器官，其重量增加可促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖，提高機(jī)體免疫力（李燕蒙等，2019）。本研究中，添加復(fù)合乳酸菌飼喂凌云烏雞雛雞可顯著提高其法氏囊指數(shù)，在一定程度上提高脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，進(jìn)而增強凌云烏雞的機(jī)體免疫力，與謝童等（2022）對黃羽肉雞的研究結(jié)果一致。硒是家禽生長發(fā)育必需的微量元素，與其生長狀況、免疫力及繁殖性能等密切相關(guān)（Surai et al.，2018）。目前，有關(guān)硒對家禽免疫器官影響的報道較少，本研究中添加有機(jī)硒可顯著提高凌云烏雞的法氏囊指數(shù)，在一定程度上提高脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，而復(fù)方中藥可在一定程度上提高凌云烏雞的脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)，與王洪賀等（2019）對黑羽烏雞的研究結(jié)果一致；枯草芽孢桿菌可在一定程度上促進(jìn)凌云烏雞脾臟增重，對法氏囊指數(shù)和胸腺指數(shù)的影響較小，與申瑞等（2020）對大午金鳳雛雞的研究結(jié)果一致。可見，在飼養(yǎng)過程中添加復(fù)合乳酸菌和有機(jī)硒可促進(jìn)凌云烏雞雛雞免疫器官發(fā)育，加快其免疫系統(tǒng)成熟，而添加復(fù)方中藥和枯草芽孢桿菌對凌云烏雞雛雞免疫器官發(fā)育的促進(jìn)效果不明顯。

免疫球蛋白對動物機(jī)體具有激活補體、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫及結(jié)合抗原等生物學(xué)功能，其水平可反映機(jī)體免疫力（周順伍，2008；Vanderhaeghen and Dewulf，2017）。其中，免疫球蛋白A由呼吸道、生殖道和消化道等的漿細(xì)胞分泌產(chǎn)生，在粘膜免疫中發(fā)揮重要作用，免疫球蛋白M由B細(xì)胞產(chǎn)生，是參與機(jī)體初次免疫應(yīng)答的主要抗體，免疫球蛋白G可中和病毒及毒素，調(diào)理、凝集和沉淀抗原，在體液免疫防御機(jī)制中具有重要作用（崔治中和崔保安，2004）。王四新等（2016）研究發(fā)現(xiàn)，在保育豬日糧中添加乳酸桿菌可顯著提高其血清免疫球蛋白G水平，增強豬只免疫力。魯利萍等（2021）研究表明，在斷奶犢牛日糧中添加中草藥可提高其血清免疫球蛋白A水平。張靜博等（2021）研究證實，枯草芽孢桿菌可提高21～42日齡肉雞血清免疫球蛋白A和免疫球蛋白G水平，提高其免疫功能。本研究中，各添加劑處理凌云烏雞的血清免疫球蛋白A和免疫球蛋白M水平較CK均有所提高，T1、T2和T4處理的免疫球蛋白G水平也高于CK，其中T1處理的血清免疫球蛋白A和免疫球蛋白G水平均高于其他添加劑處理，說明在凌云烏雞雛雞飼養(yǎng)過程中添加復(fù)合乳酸菌、枯草芽孢桿菌、有機(jī)硒和復(fù)方中藥均可在一定程度上提高其血清免疫球蛋白水平，且添加復(fù)合乳酸菌較添加其他添加劑更有利于提高機(jī)體免疫力。

腸道菌群平衡對動物腸道健康及良好的生長和生產(chǎn)性能至關(guān)重要（Clavijo and Flórez，2017；Shang et al.，2018；顧艷麗等，2022）。幼齡家禽的腸道微生物多樣性較其他生長階段低，且日齡和品種是影響腸道微生物結(jié)構(gòu)的主要因素；在后期生長過程中，家禽通過接觸墊料、飼料和飲水，其腸道微生物多樣性不斷提高（Pedroso and Lee，2015）。馬文鋒等（2021）研究報道，飼糧中添加0.03%枯草芽孢桿菌可影響產(chǎn)蛋后期蛋雞的盲腸微生物組成，顯著降低盲腸軟壁菌門、迷蹤菌門和乳酸桿菌屬的相對豐度。方磊涵等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，在商品代AA雛肉雞飼糧中添加400.0和600.0 mg/kg的中草藥復(fù)方多糖，可促進(jìn)其腸道有益菌增殖，進(jìn)而提高機(jī)體免疫功能。乳酸菌是動物機(jī)體腸道微生物群落的重要組成部分，可改善宿主的腸道功能；通過利用碳水化合物產(chǎn)生乳酸，降低腸道pH，抑制病原菌生長（O‘Callaghan and OToole，2011；Ahmed et al.，2019）。Mountzouris等（2007）、Bai等（2013）研究報道，乳酸桿菌可改善雞腸道微生物結(jié)構(gòu)，平衡腸道微生態(tài)區(qū)系。本研究中，T1處理的Shannon指數(shù)、Simpson指數(shù)、Chao1指數(shù)和Pielou指數(shù)均高于其他處理；在門水平，各處理優(yōu)勢菌門的總相對豐度排序為T1處理>T3處理>T4處理>T2處理>CK；在屬水平，T1處理優(yōu)勢菌屬的總相對豐度最高（83.11%），且優(yōu)勢菌屬數(shù)量（21個）最多，其余依次為T2處理（81.58%）、T4處理（81.31%）、CK（80.46%）和T3處理（79.23%）?？梢姡砑訌?fù)合乳酸菌對提高凌云烏雞盲腸微生物多樣性及群落相對豐度的效果較添加其他添加劑明顯。

4 結(jié)論

飼喂復(fù)合乳酸菌、枯草芽孢桿菌、有機(jī)硒及以黃芪、板藍(lán)根和大青葉為主的復(fù)方中藥均可提高凌云烏雞雛雞的平均日增重，降低料重比，提高免疫器官指數(shù)和血清免疫指標(biāo)，同時提高盲腸微生物多樣性及群落相對豐度，尤其以添加復(fù)合乳酸菌的效果更佳。

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（責(zé)任編輯 思利華）