郭丹丹 覃嶺 高文峰 袁春旺 張英華 張永宏

IL-33是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的IL-1家族的新成員,在腫瘤中持續(xù)異常表達(dá),在腫瘤發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起著重要作用[1-3],但目前IL-33水平與HCC發(fā)生及嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究尚無(wú)定論。熱消融治療是HCC根治性方案之一?？梢灾苯託⑺滥[瘤細(xì)胞,減輕腫瘤負(fù)荷,改善機(jī)體免疫功能[4]。熱消融治療對(duì)HCC患者體內(nèi)血漿IL-33水平的影響尚不清楚。本研究采用ELISA檢測(cè)HCC患者血漿IL-33水平,探討其與HCC發(fā)生及腫瘤分期的關(guān)系;進(jìn)一步分析熱消融治療對(duì)HCC患者血漿IL-33水平的影響,為消融治療對(duì)機(jī)體免疫功能的調(diào)節(jié)作用提供理論基礎(chǔ)。

資料與方法

一、研究對(duì)象

選取2018年1月至2020年12月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院就診的HCC患者30例。診斷及治療參照《原發(fā)性肝癌診療指南(2022版)》[5],腫瘤分期參照巴塞羅那( Barcelona clinic liver cancer, BCLC)標(biāo)準(zhǔn)[6]。入組患者均排除轉(zhuǎn)移性肝癌、活動(dòng)性感染及免疫相關(guān)性疾病。既往均未接受過(guò)免疫治療、細(xì)胞治療、基因治療。其中22例HCC患者為完全消融治療(12例射頻消融、10例微波消融),8例患者行單純肝動(dòng)脈化療栓塞(transcatheter arterial chemoembolization, TACE) 或消融治療不完全。納入肝硬化患者25例,診斷按照《肝硬化診治指南》[7]。另選取10例健康體檢成人作為健康對(duì)照組,無(wú)病毒性肝炎和其他傳染病?；颊呒敖】刁w檢者均簽署知情同意書(shū),本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

二、方法

采集全部HCC患者術(shù)前、肝硬化患者和健康對(duì)照組抗凝全血,行完全消融治療HCC患者留取消融術(shù)后1周和術(shù)后4周抗凝全血,離心后取血漿分裝凍存于-80℃?zhèn)溆谩２捎肊LISA法檢測(cè)血漿IL-33水平,儀器為美國(guó)BIORAD伯樂(lè)imark酶標(biāo)儀。IL-33試劑盒為Human IL-33 Quantikine ELISA Kit (D3300B, R&D Systems)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、HCC組、肝硬化組和健康對(duì)照組一般資料及血漿IL-33水平比較

30例HCC患者中,BCLC分期0期2例,A期15例,B期10例,C期3例。HCC組、肝硬化組和健康對(duì)照組的性別、年齡差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3組血漿IL-33水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(H=14.490,P=0.001)。兩兩比較結(jié)果表明,HCC組術(shù)前血漿IL-33水平明顯高于健康對(duì)照組差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001);HCC組術(shù)前血漿IL-33水平高于肝硬化組,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。肝硬化組和健康對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 HCC組、LC組和健康對(duì)照組一般資料及血漿IL-33水平的比較

二、HCC組患者BCLC早期和中晚期血漿IL-33水平比較

30例HCC患者中,早期(BCLC-0/A)患者17例,中晚期(BCLC-B/C)患者13例。比較兩組血漿IL-33水平,結(jié)果顯示中晚期組血漿IL-33水平27.69 (16.06,34.90) pg/mL高于早期組17.18 (11.16,25.85) pg/mL,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (Z=2.031,P=0.043)。

三、HCC患者完全消融治療前后血漿IL-33動(dòng)態(tài)變化

入組HCC患者中,按照肝癌診療規(guī)范進(jìn)行治療且達(dá)到完全消融22例患者,消融術(shù)后4周血漿IL-33水平12.02 (9.23, 12.89) pg/mL低于術(shù)前14.17 (11.16, 22.81) pg/mL、術(shù)后1周15.46 (13.74, 18.05) pg/mL,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P=0.029,P<0.001);術(shù)后1周血漿IL-33水平與術(shù)前相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

討 論

IL-33是一種新發(fā)現(xiàn)的多功能細(xì)胞因子,具有雙重生物學(xué)功能,一種以傳統(tǒng)的細(xì)胞因子形式,參與調(diào)節(jié)免疫反應(yīng);另一種則是作為核因子調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄[8]。IL-33特異性受體為ST2 (suppression of tumorigenicity 2, ST2),兩者結(jié)合后,激活下游信號(hào)通道,與腫瘤發(fā)生發(fā)展、腫瘤微環(huán)境密切相關(guān)[9-10]。

HCC患者外周血及腫瘤組織中,IL-33表達(dá)水平升高[11-13]。Zhao等[14]發(fā)現(xiàn)IL-33在腫瘤組織表達(dá)明顯高于非腫瘤組織,對(duì)95例HCC患者腫瘤微環(huán)境進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)41%腫瘤細(xì)胞和44%基質(zhì)細(xì)胞中高表達(dá)IL-33,且腫瘤細(xì)胞表達(dá)IL-33水平越高者,總生存期越短;該研究進(jìn)一步探討相關(guān)機(jī)制認(rèn)為:IL-33通過(guò)結(jié)合其受體ST2,誘導(dǎo)氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)磷酸化,促進(jìn)HCC干細(xì)胞生長(zhǎng),引起腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。也有研究發(fā)現(xiàn)IL-33在HCC患者中的表達(dá)與健康對(duì)照組相比無(wú)顯著變化,甚至減少[15,16]。本研究發(fā)現(xiàn)HCC組血漿IL-33水平高于肝硬化組、健康對(duì)照組,且與健康對(duì)照組相比差異顯著;進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)中晚期肝癌(BCLC-B/C)患者血漿IL-33水平高于早期(BCLC-0/A)患者,推測(cè)IL-33過(guò)度表達(dá)可能在HCC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,且隨著病情進(jìn)展,IL-33表達(dá)更加失衡。

熱消融治療是一種安全有效的HCC根治性方法,具有創(chuàng)傷小、并發(fā)癥少等優(yōu)點(diǎn)。不僅可以直接滅活腫瘤,降低腫瘤負(fù)荷。同時(shí)可通過(guò)釋放腫瘤抗原,增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫效應(yīng)[17,18]。一項(xiàng)研究對(duì)HCC患者進(jìn)行微波消融治療,發(fā)現(xiàn)在消融術(shù)后1個(gè)月輔助性T淋巴(T helper,Th)1細(xì)胞因子IL-12顯著高于治療前,Th2細(xì)胞因子IL-4、IL-10顯著低于治療前。提示消融治療可糾正Th1/Th2細(xì)胞因子表達(dá)失衡,改善機(jī)體免疫功能[19]。本研究HCC患者中22例完全消融治療患者,與術(shù)前相比,術(shù)后1周血漿IL-33水平較前稍升高,術(shù)后4周較術(shù)前明顯下降。分析可能的機(jī)制:在熱消融治療早期(1周左右),消融治療引起腫瘤組織凝固性壞死及肝臟組織損傷,短期的急性期反應(yīng),促使炎癥因子、細(xì)胞因子等釋放,血漿IL-33可出現(xiàn)一過(guò)性升高。而隨訪(fǎng)到消融術(shù)后4周左右腫瘤負(fù)荷明顯減輕,機(jī)體免疫功能恢復(fù)到穩(wěn)定狀態(tài),IL-33表達(dá)失衡得到糾正。由于本研究例數(shù)相對(duì)較少,細(xì)胞因子變化的復(fù)雜性還需要增大樣本量加以證實(shí)。

綜上所述,IL-33表達(dá)失衡可能是HCC發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一,可以作為HCC疾病嚴(yán)重程度的標(biāo)志物。消融治療可以糾正體內(nèi)IL-33水平,促進(jìn)IL-33逐漸恢復(fù)正常,調(diào)節(jié)機(jī)體免疫狀態(tài)。

利益沖突聲明：所有作者均聲明不存在利益沖突。