許龍，年帥，張浩，曹陽，黃順旺，曹明成

作者單位：合肥創(chuàng)新醫(yī)藥技術(shù)有限公司藥物合成部，安徽 合肥 230088

奧拉帕尼（olaparib）是由 AstraZeneca 公司研發(fā)的多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶（PARP）抑制劑，2014年12 月獲得FDA 批準(zhǔn)上市，商品名Lynparza，臨床用于治療遺傳性晚期卵巢癌［1］。奧拉帕尼作為抗癌藥物不僅單一療法效果好［2］，還可與其他藥物聯(lián)用治療實(shí)體瘤［3-5］，具有很好的應(yīng)用前景。奧拉帕尼結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 奧拉帕尼結(jié)構(gòu)

藥品在臨床使用中產(chǎn)生的不良反應(yīng)除了與藥品本身的藥理活性有關(guān)外，有時(shí)與藥品中存在的雜質(zhì)也有很大關(guān)系。規(guī)范地進(jìn)行雜質(zhì)的研究，并將其控制在一個(gè)安全、合理的限度范圍之內(nèi)，將直接關(guān)系到上市藥品的質(zhì)量及安全性［6］。因此，制備高純度的奧拉帕尼的雜質(zhì)，對(duì)該藥原料及制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂，保證藥品的安全、有效顯得格外重要。

奧拉帕尼的合成，目前已有多條合成路線的相關(guān)報(bào)道［7-15］，基本以先制備關(guān)鍵中間體2-氟-5-［（4-氧代-3，4-二氫酞嗪-1-基）甲基］苯甲酸（5），再與NBoc哌嗪縮合得到化合物（6），水解脫Boc后，再與環(huán)丙基甲酰氯制備得到，或化合物（5）直接與環(huán)丙基哌嗪-1-基甲酮縮合反應(yīng)得到，工藝路線見圖2。

圖2 奧拉帕尼的工藝路線

在化合物（5）制備奧拉帕尼的過程中，未反應(yīng)完全的化合物（5）與中間體或奧拉帕尼的水解產(chǎn)物化合物（7）發(fā)生聚合?；蛘呤褂玫奈锪螻-Boc 哌嗪或環(huán)丙基哌嗪-1-基甲酮中可能引入的哌嗪，參與反應(yīng)后，均可能產(chǎn)生奧拉帕尼的二聚體雜質(zhì)（8）。另外，在儲(chǔ)存過程中，奧拉帕尼的本身結(jié)構(gòu)中酰胺可能發(fā)生水解，然后再進(jìn)行分子間聚合，也是導(dǎo)致二聚體雜質(zhì)產(chǎn)生的一個(gè)重要途徑。因此奧拉帕尼的二聚體雜質(zhì)（8）既是制備奧拉帕尼的工藝雜質(zhì)，同時(shí)也是奧拉帕尼的降解雜質(zhì)。而高純度的雜質(zhì)對(duì)于提高藥品監(jiān)測的準(zhǔn)確性，保證藥品的安全、有效有著重要的意義。但目前國內(nèi)尚無奧拉帕尼二聚體雜質(zhì)制備的任何報(bào)道。

于是，本研究對(duì)奧拉帕尼的二聚體雜質(zhì)進(jìn)行合成，以（3-氧代-1，3-二氫異苯并呋喃-1-基）膦酸二甲酯為（2）原料，通過與2-氟-5-甲?；诫妫?）合成化合物（4），再經(jīng)過水解并且與水合肼環(huán)合得到化合物（5），最后再與哌嗪反應(yīng)得到，合成路線見圖3。

圖3 奧拉帕尼二聚體雜質(zhì)的合成路線

1 儀器與試劑

Agilent6890/Micromass GCT 質(zhì)譜儀；Bruker AV400 MHz 超導(dǎo)核磁共振儀（德國Bruker 公司）；島津LC-10AT高效液相色譜儀。

（3-氧代-1，3-二氫異苯并呋喃-1-基）膦酸二甲酯、2-氟-5-甲?；诫婧瓦哙嘿徲谒_恩化學(xué)技術(shù)（上海）有限公司，其他試劑均為市售分析純。

2 方法

2.1 2-氟-5-［（3-氧代-1（3H）-異苯并呋喃亞基）甲基］苯腈（4）的合成在2 L 三口瓶中加入5.0 g（20.6 mmol）的（3-氧代-1，3-二氫異苯并呋喃-1-基）膦酸二甲酯（2）3.07 g（20.6 mmol）2-氟-5-甲?；诫妫?），加入50 mL四氫呋喃溶解，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，降溫至0~5 ℃，滴加2.08 g（20.6 mmol）三乙胺，滴加完畢后緩慢升溫至室溫并反應(yīng)過夜。濃縮干加入40 mL純化水，打漿攪拌過濾，固體烘干得到化合物（4）5.05 g（收率92.2%）。

2.2 2-氟-5-［（4-氧代-3，4-二氫酞嗪-1-基）甲基］苯甲酸（5）的合成在三口瓶中加入5.05 g（19.0 mmol）化合物（4），加入5 mol/L 氫氧化鈉溶液20 mL，氮?dú)獗Ｗo(hù)，升溫回流反應(yīng)2 h，降溫至內(nèi)溫70 ℃，加入水合肼，保溫過夜。降溫至0~20 ℃，滴加2 mol/L HCl，調(diào)節(jié)pH 至3 以下，室溫下攪拌2 h，過濾。烘干得到化合物（5）5.16 g（收率90.9%）。

2.3 奧拉帕尼二聚體雜質(zhì)（8）的合成在三口瓶中加入5.0 g（16.8 mmol）化合物（5），30 mL 四氫呋喃，氮?dú)獗Ｗo(hù)下降溫至0~10 ℃，分批加入3.26 g（20.1 mmol）N，N'-羰基二咪唑（CDI），加畢保溫1 h，加入0.75 g（8.7 mmol）哌嗪，加畢，移至室溫?cái)嚢柽^夜，濃縮溶劑，向剩余物中加入乙酸乙酯打漿，過濾，烘干。得目標(biāo)化合物4.23 g（收率78.0%），純度98.7%（HPLC歸一化法）。

色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Hypersil-ODS C184.6 mm×250 mm，5 μm）；以磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉0.7 g、磷酸二氫鉀1.3 g，加水1 000 mL 使溶解）-乙腈（90∶10）為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B；按表1 進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為242 nm；柱溫為35 ℃；進(jìn)樣體積20 μL。

3 結(jié)果

3.1 縮合劑的種類和用量對(duì)收率的影響奧拉帕尼二聚體的合成過程中，其中間體化合物（5）的合成也可以參考奧拉帕尼的合成，但其最后一步的縮合，為哌嗪環(huán)的兩端各接一分子的化合物（5），其空間位阻遠(yuǎn)大于奧拉帕尼。因此選擇合適的縮合劑以及合適的縮合劑用量，對(duì)二聚體雜質(zhì)的合成尤為重要，因此我們固定其他反應(yīng)條件不變，對(duì)縮合劑種類和用量進(jìn)行了研究。見表2。

表2 縮合劑種類和用量對(duì)產(chǎn)品收率的影響

由表2 可見，使用縮合劑CDI 的效果明顯優(yōu)于其他縮合劑，且隨著縮合劑的使用量增加，反應(yīng)轉(zhuǎn)化率逐漸升高。但當(dāng)縮合劑增加至1.2 倍當(dāng)量以上時(shí)，轉(zhuǎn)化率的增加不再明顯。因此確定縮合劑的使用量為化合物（5）的1.2倍當(dāng)量。

3.2 乙酸乙酯用量對(duì)收率和純度的影響乙酸乙酯為目標(biāo)產(chǎn)物的析晶溶劑，其用量直接影響到目標(biāo)產(chǎn)物的析晶收率和純度。因此，我們對(duì)析晶溶劑乙酸乙酯的用量進(jìn)行了研究。見表3。

表3 乙酸乙酯用量對(duì)產(chǎn)品收率和純度的影響

由表3可見，當(dāng)乙酸乙酯用量較少時(shí)，產(chǎn)物純度較低，無法有效將其他雜質(zhì)清除，而隨著乙酸乙酯用量的增加，產(chǎn)物收率逐漸降低，其是因?yàn)橐宜嵋阴?duì)產(chǎn)物有一定的溶解度，過量的溶劑會(huì)導(dǎo)致析晶不完全。因此，根據(jù)研究結(jié)果，選擇乙酸乙酯的用量為5倍量。

3.3 結(jié)構(gòu)確證奧拉帕尼二聚體的分子式為C36H28O4F2N6，通過對(duì)制備的雜質(zhì)進(jìn)行了MS 和1HNMR檢測，結(jié)果如下：

MS-ESI m/z：647.2［M+H］+。

1H NMR（400Hz，DMSO-d6）δ：12.588（s，2H）為氨基上的氫，8.277~8.254（dd，J1=1.2 Hz，J2=8.0 Hz，2H）、7.978~7.959（m，2H）、7.917-7.876（m，2H）、7.854-7.813（m，2H）、7.466~7.426（m，2H）、7.382-7.369（d，J=5.2 Hz，2H）、7.264~7.219（t，J=9.2 Hz，2H）均為苯環(huán)上的氫，4.337（s，4H）為亞甲基的氫，3.748~3.592（m，8H）為哌嗪環(huán)上的氫。檢測結(jié)果顯示與目標(biāo)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)一致。

4 討論

隨著奧拉帕尼的上市，其臨床研究及應(yīng)用日漸廣泛，國內(nèi)也有藥企對(duì)此藥物進(jìn)行仿制研究，本研究合成了奧拉帕尼的雜質(zhì)，為原料及片劑的質(zhì)量研究所需的對(duì)照品提供了參考。

本研究合成了奧拉帕尼的二聚體雜質(zhì)，并探討了縮合劑種類和用量對(duì)收率的影響，以及析晶溶劑的用量對(duì)收率和純度的影響，確定了最佳反應(yīng)條件。該研究中使用的各種原料經(jīng)濟(jì)易得，合成工藝簡單，反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)操作簡單，所得產(chǎn)品收率和純度均較高，合成路線可行。