陳 珍，何 蕊，李淑玲，成光宇，位 鴻，楊麗華*

（1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117；2.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長(zhǎng)春 130021）

慢性胃炎是臨床常見慢性疾病，其病因和發(fā)病機(jī)制多樣、復(fù)雜，病程較長(zhǎng)[1-2]。“丹芍清胃方”來源于長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)楊麗華教授的經(jīng)驗(yàn)方，具有清肝泄熱，和胃止痛的功能，用于肝胃郁熱證所致的慢性胃炎、胃潰瘍的治療，經(jīng)臨床反復(fù)驗(yàn)證，行之有效，故將其開發(fā)成院內(nèi)制劑“丹芍清胃顆?！薄１痉街饕赡档て?、白芍、海螵蛸、白術(shù)等10 味藥組成。牡丹皮是處方中的君藥，牡丹皮、白芍均含有芍藥苷，芍藥苷是處方中較穩(wěn)定的有效成分[3-7]。本試驗(yàn)以芍藥苷為對(duì)照，通過方法學(xué)考察，建立了含量測(cè)定方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1.1.1 儀器 高效液相色譜儀Waters e2695，PDA 檢測(cè)器，CP225D 型電子天平（德國sartorius 公司），KH-250DB 超聲波清洗機(jī)（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）[6]。

1.1.2 藥品與試劑 供試樣品：丹芍清胃顆粒（生產(chǎn)批號(hào)：20200601、20200602、20200603）。芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：110736-201741，供含量測(cè)定用，規(guī)格：每只20 mg，購于中國食品藥品檢定研究院）；乙腈為色譜純，水為超純水[6]。

1.2 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑十八烷；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸水（14:86）；檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm；芍藥苷的理論塔板數(shù)＞2 000[5]；流速1.0 mL·min-1；柱溫為25℃；進(jìn)樣量10 μL。

1.3 對(duì)照品溶液的制備

取芍藥苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL 含51.45 μg 的溶液，即得[5]。

1.4 供試品溶液的制備

取本品研細(xì)，取約0.6 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加稀乙醇35 mL，超聲處理（功率240 W，頻率45 kHz）30 min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[5]。

1.5 測(cè)定法

分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得[5]。

2 方法學(xué)驗(yàn)證

2.1 專屬性考察

分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μL，依法測(cè)定[6-7]，色譜圖見圖1、圖2、圖3。結(jié)論：在此hplc 條件下，芍藥苷峰分離好，陰性無干擾。

圖2 供試品溶液的HPLC 圖

圖3 陰性對(duì)照溶液的HPLC 圖

2.2 線性關(guān)系考察

分別精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液2 mL、4 mL、6 mL、10 mL、12 mL、16 mL、18 mL、20 mL，注入液相色譜儀，根據(jù)結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[6-7]。回歸方程：Y= 1 549 492.7 861X+ 4 875.307 7。r= 0.999 9，芍藥苷線性范圍為0.102 9 ～1.029 0 mg，結(jié)果見表1[6-7]。

表1 線性關(guān)系考察

2.3 耐用性考察

2.3.1 流速的考察 選擇1.2 mL·min-1、1.0 mL·min-1、0.8 mL·min-1的流速測(cè)定含量[6-7]，結(jié)果見表2。結(jié)論：流速對(duì)含量測(cè)定影響較小[6-7]。

表2 流速考察的結(jié)果

2.3.2 柱溫考察 選擇35 ℃、30 ℃、25 ℃的柱溫測(cè)定含量[6-7]，結(jié)果見表3。結(jié)論：柱溫對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較小[6-7]。

表3 柱溫考察的結(jié)果

2.3.3 不同色譜柱的考察 選擇不同品牌的色譜柱依法測(cè)定含量[6-7]，結(jié)果見表4。結(jié)論：不同色譜柱對(duì)含量測(cè)定結(jié)果影響較小[6-7]。

表4 不同色譜柱考察的結(jié)果

2.3.4 不同流動(dòng)相比例的考察 選擇4 種不同流動(dòng)相比例測(cè)定含量[6-7]，結(jié)果見表5。結(jié)論：不同流動(dòng)相比例對(duì)含量結(jié)果影響較小[6-7]。

2.4 穩(wěn)定性考察

取同一對(duì)照品和供試品溶液，分別在0 h，2 h，4 h，8 h，12 h，24 h，依法測(cè)定[6-7]，結(jié)果見表6。結(jié)論：試驗(yàn)樣品的穩(wěn)定性好[6-7]。

表6 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.5 精密度考察

取同一芍藥苷對(duì)照品溶液，依法測(cè)定6 次[6-7]，結(jié)果見表7。結(jié)論：本試驗(yàn)方法的精密度好[6-7]。

表7 精密度考察

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱取同一批樣品6 份，制備方法同1.4 供試品溶液項(xiàng)下方法，依法測(cè)定[6-7]，結(jié)果見表8。結(jié)論：本試驗(yàn)方法重現(xiàn)性好[6-7]。

表8 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

稱取已知含量的同一批樣品6 份，每份0.3 g，精密稱定，分別置50 mL 量瓶中，加入1 mL 濃度為1.453 mg·mL-1芍藥苷對(duì)照品溶液和34 mL 稀乙醇，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min，放冷，加入稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液[5-7]，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表9。結(jié)論：本試驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性好[6-7]。

表9 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.8 含量測(cè)定與含量限度確定

取三批中試樣品，依法測(cè)定，每批二份，結(jié)果見表10。本品規(guī)格為每袋裝10 g，含量限度按測(cè)定結(jié)果平均值的80%計(jì)算[9]：3.7 235 mg·g-1×10 g/袋×80% = 29.7 878 mg/袋。故暫定：本品每袋顆粒含芍藥苷（C23H28O11）計(jì)，不得少于29.00 mg[9]。

表10 三批中試樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 結(jié)論

本試驗(yàn)應(yīng)用高效液相色譜法，以芍藥苷對(duì)照品為對(duì)照，建立了丹芍清胃顆粒中含量測(cè)定方法，此方法的專屬性良好，方法學(xué)驗(yàn)證符合規(guī)定，可以作為本制劑的質(zhì)量控制方法。