鄒 多,李海昆,高成乾,李春華,李 琦,于瑞海

(中國海洋大學(xué) 海水養(yǎng)殖教育部重點實驗室,山東 青島 266003)

引 言

近江牡蠣(Crassostreariakensis)屬于軟體動物門(Mollusca)、雙殼綱(Bivalvia)、珍珠貝目(Pterioida),牡蠣科(Ostreidae),巨蠣屬(Crassostrea)。近江牡蠣在太平洋西海岸范圍內(nèi)廣泛分布,不同的地理群體間遺傳多樣性差異較大并在表型上表現(xiàn)出一定的差異[1-3]。近江牡蠣在中國的南北方均有分布,北方主要分布在渤海灣的東營和濰坊等有淡水注入的河口區(qū),喜好低鹽的環(huán)境。近江牡蠣個體較大、殼厚重,易聚集形成牡蠣礁。牡蠣礁對海洋生態(tài)平衡的維護具有重要的作用,包括凈化水、固碳、保持生物多樣性。然而,隨著野生近江牡蠣采捕的增加,北方河口區(qū)的牡蠣礁逐漸減少,牡蠣礁的消失進一步加劇了海洋環(huán)境的惡化[4-5]。開展近江牡蠣人工育苗生產(chǎn),對恢復(fù)近江牡蠣的野生資源,增加我國北方河口區(qū)的牡蠣礁數(shù)量具有重要意義。關(guān)于近江牡蠣的繁育研究主要集中于雜交育種和多倍體育種中,所用近江牡蠣大多都是南方近江牡蠣[6-10]。近年來北方近江牡蠣也開展了人工育苗生產(chǎn)的初步研究[11-12],但產(chǎn)量不高,技術(shù)瓶頸仍未突破,為此作者在2021年5—8月于萊州市曙光漁業(yè)有限公司開展北方近江牡蠣生產(chǎn)性人工育苗技術(shù)的研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 育苗設(shè)施

實驗在萊州市曙光漁業(yè)有限公司育苗車間進行,育苗車間1 200 m3水體,每個培育池大小為20 m3,附著基為櫛孔扇貝殼。

1.1.2 近江牡蠣親貝

親貝是從濰坊市老河口海域采捕的野生貝,2齡,殼高15 cm以上,殼卵圓形(見圖1)。近江牡蠣分兩批運輸至育苗車間,第一批于5月18日入池,共450個;第二批6月15日入池,600個。兩批共1 050個,親貝入池前洗刷,棄去表面的污物以及其他附著物。

圖1 近江牡蠣親貝

1.1.3 餌料

培育期間投喂的餌料主要為單胞藻,有金藻、角毛藻、塔胞藻和小球藻。

1.2 方法

1.2.1 親貝促熟培育

近江牡蠣親貝5月18日入池后,經(jīng)過30多天室內(nèi)促熟培育,到6月下旬成熟待產(chǎn)。親貝蓄養(yǎng)期間管理技術(shù)措施:

水溫:親貝5月18日入池后在自然水溫20～23 ℃條件下,進行促熟培育。6月中旬沉淀池水溫在26 ℃以上時,通過熱交換器利用地下水降溫,降至22～23 ℃。另外還設(shè)計了25～26 ℃和28～29 ℃兩個溫度范圍比較近江牡蠣促熟培育效果。每個溫度組在兩批親貝中各取100個進行實驗,共培育30 d。剩下的沒有進行溫度實驗的牡蠣分別在入池后30 d和32 d時產(chǎn)卵(表 1)。

投餌:以角毛藻、小球藻和塔胞藻為主,每天投喂6次,日投喂量為30×104cell/mL。

換水:每天移池換水2次。

培育密度及方法:10個/m3,采用單層浮動網(wǎng)箱培育。

1.2.2 精卵排放、受精及洗卵

(1)誘導(dǎo)精卵排放

近江牡蠣產(chǎn)卵、排精主要采用陰干刺激和精卵液刺激的方法誘導(dǎo)。將成熟的親貝先經(jīng)8～12 h的陰干,再放入水溫25～26 ℃的海水中,之后加入解剖的精液或卵液刺激,經(jīng)0.5～1 h的適應(yīng)期后,親貝排放率為80%以上。

(2)受精及洗卵

受精:近江牡蠣排放精、卵時,一般是雄貝先排精,排精時呈白色煙霧狀,雌貝排放較雄性晚0.5 h左右,呈顆粒狀噴出,雌貝大量排放時要及時挑出正在排放精液的雄貝。在充氣或攪動條件下,卵子在海水中受精。

洗卵:排放過程中,精子易過多,通過分池洗卵,去除多余的精液,即1池分3池,加水時及時撈出泡沫等雜物。同時,在25～26 ℃水溫下進行了近江牡蠣受精卵分池洗卵與不分池洗卵孵化效果的比較實驗。

1.2.3 幼蟲培育及管理

在25～26 ℃自然溫度下,近江牡蠣受精卵經(jīng)過20 h發(fā)育到D形幼蟲后立即選優(yōu),將幼蟲選育到培育池中,進行幼蟲培育。幼蟲培育期間管理如下:

環(huán)境條件:水溫25～26 ℃,鹽度30～32,連續(xù)微量充氣。

密度:前期應(yīng)控制在6～8個/mL,250 μm后為4～5個/mL。

換水:幼蟲剛?cè)氤貢r,保持水深100 cm,第1天逐漸加水至滿池,以后改為換水。采用浮動網(wǎng)箱換水,所用篩絹規(guī)格視幼蟲大小而定。每天換水2次,每次更換1/3的水體。

移池:在D形幼蟲發(fā)育到殼頂期幼蟲后移池1次,至投附著基前再移池1次。

投餌:近江牡蠣幼蟲發(fā)育到D形幼蟲時開始投餌。前期投喂金藻,日投餌量應(yīng)控制在1×104～2×104cell/mL;后期主要以投喂金藻和扁藻為主,小球藻為輔,一般投餌量為5×104～6×104cell/mL。具體的投餌量應(yīng)根據(jù)水色和鏡檢幼蟲胃飽滿度確定。

此外每天經(jīng)常觀察幼蟲活力、攝食情況以及水質(zhì),測量記錄幼蟲密度和生長大小等。

1.2.4 附著基的投放時機及采苗管理措施

當(dāng)幼蟲殼高平均達到300 μm時或者60%以上幼蟲出現(xiàn)眼點,即開始準備投放櫛孔扇貝殼附著基,進行采苗。

(1)附著基選擇及處理

根據(jù)養(yǎng)殖生產(chǎn)需求選用櫛孔扇貝殼串作為附著基,100片/串。附著基經(jīng)嚴格洗刷、浸泡干凈后使用。

(2)采苗密度

采苗時眼點幼蟲密度為2～3個/mL。

(3)附著基投放量

附著基投放密度為6 000片/m3。具體應(yīng)根據(jù)眼點幼蟲密度及預(yù)期附著密度,確定附著基的具體投放量。

(4)附苗后的日常管理

投附著基后,除加大換水量和投喂量外,其它培育管理措施與普通的太平洋牡蠣幼蟲的管理相同。投放附著基后到出池前,其管理技術(shù)措施如下:

培育水溫:因在6—8月份,培育水溫隨自然海水溫度而定,一般25～28 ℃。

換水:每天換1個水體的量程,分2次,每次1/2水體。

投餌:附著變態(tài)后,餌料主要以扁藻和小球藻為主,金藻為輔;日投喂量為8×104～10×104cell/mL,分4～6次投喂。

此外,附苗期間定期觀察幼蟲的附著情況,及時進行倒串,確保附著均勻。

(5)附苗要求

當(dāng)每片扇貝殼附苗量達到30個以上時,立即把附著基移走,裝入網(wǎng)兜掛放入海上暫養(yǎng)15～20 d后夾苗放入牡蠣礁體上進行增養(yǎng)殖。而原池中未附著的幼蟲移池后繼續(xù)投附著基采苗。

2 結(jié)果

2.1 親貝的促熟培育情況

經(jīng)過30多天的室內(nèi)促熟培育,解剖觀察到性腺發(fā)育飽滿時,親貝已經(jīng)接近成熟,再穩(wěn)定培育2～3 d就開始產(chǎn)卵,親貝蓄養(yǎng)情況見表1,三種不同溫度下親貝促熟發(fā)育情況見表2。

表1 2021年親貝培養(yǎng)情況表

表2 不同溫度下親貝促熟培養(yǎng)情況

從表2中可以看出近江牡蠣親貝在25～26 ℃和28～29 ℃的溫度下培養(yǎng)的存活率明顯低于22～23 ℃時培育的存活率,平均產(chǎn)卵量和親貝活力方面差異也較為明顯,說明22～23 ℃是其性腺發(fā)育的適宜溫度,而25 ℃以上對近江牡蠣促熟培育不利,表現(xiàn)出活力差,攝食不旺盛,死亡率高。

2.2 近江牡蠣的孵化和選優(yōu)

2.2.1 近江牡蠣的胚胎發(fā)育情況

近江牡蠣的成熟卵子的卵徑約為52 μm左右,受精后11 h到達擔(dān)輪幼蟲,20 h后發(fā)育到D形幼蟲。D形幼蟲大小為60 μm左右。

2.2.2 近江牡蠣生產(chǎn)性產(chǎn)卵、受精、孵化情況

受精卵發(fā)育到D形幼蟲時立即選幼。采用300目篩絹網(wǎng)箱虹吸法選幼,在培育池中進行培育。在水溫25～26 ℃、鹽度30的海水中,近江牡蠣精卵受精率可達100 %、孵化率可達80 %(表3)。近江牡蠣受精卵分池洗卵與不分池洗卵孵化的效果比較如表4。

表3 2021年近江牡蠣產(chǎn)卵、受精、孵化情況表

表4 分池洗卵與不分池洗卵孵化效果比較

從表4可看出,近江牡蠣受精卵在不同分池與不分池洗卵情況下,孵化情況有一定的差異,分池洗卵后的孵化率明顯高于不分池洗卵。

2.3 幼蟲生長情況

2021年近江牡蠣幼蟲生長情況見圖2,每2 d測1次幼蟲殼高大小,而存活率是每3 d測量一次,2021年近江牡蠣規(guī)模化生產(chǎn)的幼蟲存活率情況見圖3。

圖2 近江牡蠣幼蟲殼高變化

圖3 近江牡蠣幼蟲培育中幼蟲存活情況

從圖2可看出,近江牡蠣在殼頂期之前生長速度較慢,平均每天5～6 μm的生長速度;而進入殼頂期幼蟲之后,生長速度明顯加快,每天為20～30 μm的生長速度。出現(xiàn)眼點時幼蟲大小為300 μm,比長牡蠣及其他牡蠣眼點幼蟲的個體小,因此,根據(jù)生長觀察和測量及時投附著基是關(guān)鍵,不能按照長牡蠣的時間和大小投放附著基。幼蟲存活率方面在殼頂出現(xiàn)前9 d死亡率較高,呈直線下降趨勢,殼頂期幼蟲以后死亡率較低,最后到眼點幼蟲存活率為60 %(圖3)。

2.4 采苗情況

近江牡蠣幼蟲經(jīng)過21 d的培育,當(dāng)眼點幼蟲出現(xiàn)比率達到60%以上時,開始投放櫛孔扇貝殼作為采苗的附著基,根據(jù)附著情況持續(xù)投放5～10 d,其采苗結(jié)果如表5。

表5 2021年近江牡蠣眼點幼蟲附著變態(tài)情況表

最終共獲得960萬片附著稚貝的扇貝殼,收獲400 μm以上的牡蠣稚貝苗3.84億粒,實現(xiàn)了近江牡蠣生產(chǎn)性人工育苗生產(chǎn)的成功,其中變態(tài)率低的原因是因高溫季節(jié)培育水溫高,海區(qū)水質(zhì)差造成眼點幼蟲變態(tài)率較低。

3 分析與討論

3.1 近江牡蠣親貝促熟培育的探討

本實驗用的近江牡蠣采自濰坊市老河口近江牡蠣自然保護區(qū)的野生牡蠣,3齡,5月18日入池時,性腺發(fā)育較差,經(jīng)過一個多月的培育成熟產(chǎn)卵。由于采用底拖網(wǎng)采撲,近江牡蠣親貝體內(nèi)嗆有大量泥土,這對種貝傷害較大,也是后來培養(yǎng)過程中死亡率高的主要原因,因此,作為育苗用的近江牡蠣親貝最好是人工潛水采撲。另外水溫超過25 ℃以后,對近江牡蠣親貝的生長發(fā)育不利,需要利用地下水降溫,確保其性腺發(fā)育的最適溫度22～23 ℃。因此,前期親貝促熟培育和普通長牡蠣升溫促熟培育一致,后期需要通過降溫來培育親貝,確保親貝充分成熟,這樣產(chǎn)出的卵子質(zhì)量好,孵化率高,幼蟲生長發(fā)育好易培養(yǎng),這與櫛孔扇貝、長牡蠣在水溫高于性腺發(fā)育溫度時,需要采用降溫來維持性腺發(fā)育是一致的。

3.2 近江牡蠣胚胎發(fā)育速度、孵化情況的影響

本研究中,近江牡蠣成熟卵徑為52 μm左右,比長牡蠣的卵小但比香港牡蠣的卵大[7,13]。20 h后發(fā)育到D形幼蟲,生長發(fā)育速度與李華琳等[14]和劉洪軍等[15]的研究一致,與其它牡蠣種類沒有差異,D形幼蟲的規(guī)格比長牡蠣等其他牡蠣小,為60 μm左右。

在保證性腺充分成熟的條件下,及時分池洗卵是提高受精卵孵化率的重要措施,近江牡蠣親貝在產(chǎn)卵、排精過程中,排放大量精液,在高溫下很易腐敗,影響孵化水質(zhì),導(dǎo)致孵化率大大降低。通過及時分池加入大量新鮮過濾海水和充氣撈泡沫,控制孵化密度技術(shù)措施,孵化率可達80%以上,比不分池孵化率提高30%,這與在太平洋牡蠣[15-17]上研究結(jié)果一致。

3.3 近江牡蠣幼蟲發(fā)育及附著變態(tài)的探討

與長牡蠣相比,近江牡蠣幼蟲在附著變態(tài)的時間和大小方面有明顯差異。近江牡蠣D形幼蟲剛孵出時比長牡蠣的小。在23～25 ℃條件下經(jīng)過18 d的培育,殼高達到290 μm,20%幼蟲出現(xiàn)眼點;培育21 d時,60%幼蟲出現(xiàn)眼點,殼高達到300～320 μm,開始附著變態(tài),眼點幼蟲的大小比長牡蠣小,這是與長牡蠣最大的不同。但在整個幼蟲培育期間的存活率上,近江牡蠣比長牡蠣低,但差異較小。但在150 μm前,生長速度比其他牡蠣較慢,僅為5～6 μm/d,不存在太平洋牡蠣幼蟲在130～160 μm時大量死亡的問題[12,16-17],這也與近江牡蠣品種不同有關(guān)。

由于近江牡蠣是生活在鹽度較低的河口附近,對低鹽適應(yīng)能力強[18],而育苗場育苗的海水鹽度一般較高為3左右,因此,近江牡蠣幼蟲開始生長發(fā)育慢,主要是為適應(yīng)高鹽環(huán)境。隨著生長過渡適應(yīng)后,殼頂鼓出即進入殼頂期幼蟲,生長速度加快,此時幼蟲生長速度快于長牡蠣其他品種,很快出現(xiàn)眼點并附著。本研究中近江牡蠣其附著速度也比長牡蠣快,長牡蠣一般需要7～12 d附著,而近江牡蠣僅需要3～5 d,附著時間縮短一半以上。另外,近江牡蠣附著稚貝殼色隨著生長不變色,一直保持白色至幼貝,這也與長牡蠣眼點幼蟲附著后4～5 d變黑不同[19]。

因此,開展近江牡蠣育苗生產(chǎn)要根據(jù)其自身發(fā)育特點,進行科學(xué)培育和管理,不能完全照搬長牡蠣人工育苗生產(chǎn)技術(shù)路線進行操作管理,只有這樣才能保證近江牡蠣育苗生產(chǎn)的成功。培育的近江牡蠣苗種可以向自然海區(qū)投放,構(gòu)建人工牡蠣礁,為近江牡蠣自然資源的恢復(fù)奠定基礎(chǔ)。