劉俊汝，郁春艷，鄭小燕，劉子璇，陳思琦，鄧為民

（天津醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)系，國(guó)家教育部免疫微環(huán)境與疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300070）

乳腺癌是最常見的女性癌癥類型，也是女性癌癥死亡的最常見原因[1]。三陰性乳腺癌（triple negative breast cancer，TNBC）是乳腺癌的一種高度異質(zhì)性亞型，預(yù)后較差[2]。由于缺乏靶向治療，以紫杉烷或鉑類為基礎(chǔ)的化療是三陰性乳腺癌患者的主要治療方法[3]，但致癌驅(qū)動(dòng)因素的異質(zhì)性和多藥耐藥（multidrug resistance，MDR）的發(fā)展導(dǎo)致療效有限[4]。脂肪細(xì)胞是TNBC 腫瘤微環(huán)境（tumor microenvironment，TME）中的主要細(xì)胞成分。越來越多的證據(jù)表明，腫瘤相關(guān)脂肪細(xì)胞會(huì)加重腫瘤進(jìn)展，加劇免疫抑制性TME 并影響治療效果[5]。脂肪細(xì)胞產(chǎn)生大量的脂肪因子（包括細(xì)胞因子），參與腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展和轉(zhuǎn)移[6]。不同的脂肪因子如瘦素、脂聯(lián)素、白細(xì)胞介素－6（IL－6）和腫瘤壞死因子－α 等可通過多種功能機(jī)制誘導(dǎo)不同腫瘤細(xì)胞的耐藥[7]。因此，探尋富脂微環(huán)境（adipocyte－rich microenvironment，ARM）促進(jìn)腫瘤耐藥的潛在機(jī)制，對(duì)提高化療療效具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)利用人脂肪組織提取液（human adipose tissue extracting solution，HATES）模擬ARM[8]，探討HATES 對(duì)TNBC 細(xì)胞MDR 的影響及機(jī)制。

MDR 是阻礙腫瘤藥物成功治療的一個(gè)嚴(yán)重問題。MDR 最突出的機(jī)制之一是ATP 結(jié)合盒（ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的過表達(dá)[9]。ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白通過細(xì)胞膜主動(dòng)泵送多種底物[10]，其中ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G 家族成員2（ATP binding cassette subfamily G member 2，ABCG2），又稱乳腺癌抵抗蛋白（breast cancer resistance protein，BCRP），在賦予腫瘤細(xì)胞干性表型方面具有潛在作用，并且能夠外排抗腫瘤藥物，在腫瘤MDR 的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[11]。過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator activated recep tor gamma，PPARγ）屬于類固醇受體超家族的核受體，在脂肪組織的發(fā)育和脂代謝中起著重要作用[12]。PPARγ 作為重要的脂代謝調(diào)節(jié)分子，參與樹突狀細(xì)胞[13]，胎盤絨毛膜癌[14]中ABCG2 的調(diào)節(jié)。抑制PPARγ可降低ABCG2 介導(dǎo)的M2 巨噬細(xì)胞的外排活性[15]。此外，本實(shí)驗(yàn)室前期生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析發(fā)現(xiàn)，在脂質(zhì)相關(guān)腫瘤上皮性卵巢癌中，PPARγ 是促進(jìn)化療耐藥的脂相關(guān)的關(guān)鍵分子。因此，本研究旨在TNBC細(xì)胞中探討HATES 是否通過PPARγ/ABCG2 途徑促進(jìn)MDR。

1 材料與方法

1.1 材料 人TNBC 細(xì)胞MDA－MB－231 由天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院郭曉靜教授惠贈(zèng)；胎牛血清（FBS）購(gòu)自GIBCO 公司；DMEM 培養(yǎng)基、CCK－8 檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司；紫杉醇（PTX）購(gòu)自揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司；順鉑（DDP）購(gòu)自齊魯制藥有限公司；Annexin V－PE/7－AAD 凋亡試劑盒購(gòu)自江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司；熒光素酶報(bào)告基因試劑盒購(gòu)自Promega 公司；PPARγ激動(dòng)劑曲格列酮Trog、PPARγ 拮抗劑GW9662 均購(gòu)自Selleck 公司；ABCG2 抑制劑KO143 購(gòu)自MCE公司；人PPARγ 抗體購(gòu)自Abcam 公司；ABCG2 抗體購(gòu)自江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司；GAPDH抗體購(gòu)自CST 公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) MDA－MB－231 細(xì)胞以含10%FBS 的DMEM 培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每2～3 天更換培養(yǎng)液并消化傳代。

1.2.2 人脂肪組織提取液HATES 制備 參考Nie等[16]的方法制備HATES，即乳腺癌患者的腫瘤鄰近脂肪組織在術(shù)后1 h 內(nèi)全程無菌送至實(shí)驗(yàn)室，用含1×青鏈霉素混合液的Hanks 緩沖液清洗脂肪組織并剔除筋膜及血塊，進(jìn)行稱重，將脂肪組織剪切成2 mm 左右的小塊，200 目濾網(wǎng)研磨，按0．8 g 脂肪/mL DMEM 的標(biāo)準(zhǔn)加入適量含1×青鏈霉素混合液的DMEM，收集全部濾液，1 000 g/10 min 離心。0．22 μmol/L 的過濾器收集后分裝凍存?zhèn)溆?。使用時(shí)應(yīng)用20% FBS 1∶1 稀釋，終濃度為0．4 g 脂肪/mL。

1.2.3 CCK－8 檢測(cè)細(xì)胞增殖 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDA－MB－231 細(xì)胞以7×103/孔密度接種于96 孔板，待細(xì)胞貼壁后，按分組處理細(xì)胞：（1）不同濃度的GW9662 及曲格列酮（0、5、10、20、40、60 μmol/L）及不同濃度的KO143（0、1、5、10、20、50 μmol/L）處理24 h。（2）GW9662（25 μmol/L）、曲格列酮（25 μmol/L）及KO143（10 μmol/L）處理不同時(shí)間（0、2、6、8、12、24 h）。（3）GW9662（25 μmol/L）、KO143（10 μmol/L）預(yù)處理2 h；HATES（0．4 g/mL）、DDP（30 μmol/L）、PTX（7 nmol/L）等處理48 h。每組設(shè)置3 個(gè)復(fù)孔。細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束前30 min，觀察每組細(xì)胞形態(tài)變化，并拍照記錄。按CCK－8 檢測(cè)試劑盒說明書孵育細(xì)胞，酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm 處的吸光度值（OD450），利用GraphPad prism 9 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.2.4 油紅O 染色檢測(cè)HATES 對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞脂肪酸攝取的情況 將MDA-MB-231 細(xì)胞接種于24 孔板，密度為1×105/mL，細(xì)胞貼壁后處理不同濃度的HATES（0、0.2、0.4、0.8 g/mL）培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)結(jié)束后，按照油紅O 檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行操作，顯微鏡下拍照分析。

1.2.5 流式Annexin V-PE/7-AAD 雙染凋亡檢測(cè)HATES、DDP、PTX 對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、凋亡的影響 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDA-MB-231 細(xì)胞以2.5×105/孔密度接種于12 孔板，待細(xì)胞貼壁后，按分組處理細(xì)胞。培養(yǎng)結(jié)束后用0.25 %胰酶（不含EDTA）消化收集細(xì)胞，加入含2% FBS 的Hanks 洗滌2 次。棄去上清，每管加入100 μL 試劑盒中的1×Annexin V Binding Buffer 重懸細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)組先加入5 μL 的Annexin V 溶液，再加入5 μL 的7-AAD 溶液，混勻，4℃避光染色20 min。細(xì)胞通過400 目篩網(wǎng)過濾成單細(xì)胞懸液備檢。用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，用空白管和單染管調(diào)節(jié)電壓和熒光補(bǔ)償，利用FlowJo 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.2.6 Western 印跡檢測(cè)HATES 對(duì)該細(xì)胞PPARγ及ABCG2 蛋白表達(dá) 將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDA-MB-231 細(xì)胞以5×105/孔密度接種于6 孔板，待細(xì)胞貼壁后，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求按分組處理細(xì)胞，將RIPA、蛋白酶抑制劑以1 000∶1 配置裂解液，提取細(xì)胞總蛋白。BCA 蛋白檢測(cè)試劑盒檢測(cè)蛋白濃度，配置10%的分離膠，將40 μg/孔的蛋白用10% SDS-PAGE 進(jìn)行電泳分離。電泳后將蛋白轉(zhuǎn)印于PVDF 膜，100 V轉(zhuǎn)膜1 h，用3%牛血清白蛋白（BSA）室溫封閉2 h后，加入特異性一抗，4℃孵育過夜。加入HRP 標(biāo)記的二抗室溫孵育2 h。TBST 清洗后化學(xué)發(fā)光底物檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。將目的蛋白與內(nèi)參的灰度比值作為蛋白的相對(duì)表達(dá)豐度。

1.2.7 小干擾RNA（siRNA）的合成和轉(zhuǎn)染 PPARsiRNA 和陰性對(duì)照-siRNA 由中國(guó)吉?jiǎng)P公司基因合成和構(gòu)建。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDA-MB-231 細(xì)胞以1×105/孔密度接種于24 孔板。待細(xì)胞貼壁后，按照Lipofectamine 3000 說明書轉(zhuǎn)染siRNA 至細(xì)胞中培養(yǎng)72 h。培養(yǎng)結(jié)束后Western 印跡驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果。

1.2.8 熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)HATES、GW9662、曲格列酮對(duì)MDA-MB-231 細(xì)胞ABCG2 轉(zhuǎn)錄活性的影響 委托中國(guó)吉?jiǎng)P基因公司構(gòu)建ABCG2-promoter-Luc 質(zhì)粒及空載體GV238-Luc 質(zhì)粒和β-gal質(zhì)粒備用。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDA-MB-231 細(xì)胞以2×105/孔密度接種于24 孔板中。待細(xì)胞貼壁后，按照Lipofectamine 3000 說明書轉(zhuǎn)染質(zhì)粒至細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染6 h 后將培基更換至含不同處理因素的常規(guī)培基進(jìn)行培養(yǎng)48 h，其中曲格列酮濃度25 μmol/L。培養(yǎng)結(jié)束后，按照Promega“熒光素酶報(bào)告基因試劑盒”說明書裂解細(xì)胞，避光加入100 μL 熒光素酶底物，用Promega 熒光素酶標(biāo)儀檢測(cè)ABCG2-promoter Luciferase 的活性。同時(shí)吸取20 μL 裂解上清，避光加入80 μL ONPG，37℃孵育30 min 后，檢測(cè)β-gal活性。Luciferase 的相對(duì)活性為L(zhǎng)uciferase 的活性與β-gal 活性的比值，GraphPad prism 9 統(tǒng)計(jì)并作圖。

1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用GraphPad prism 9 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和作圖。正態(tài)分布的計(jì)量資料使用±s 表示，多組間相互比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t 檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PPARγ 拮抗劑GW9662 及激動(dòng)劑曲格列酮與ABCG2 抑制劑KO143 對(duì)MDA-MB-231 細(xì)胞的劑量和時(shí)間效應(yīng) 本研究側(cè)重探討ARM 對(duì)腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)，首先確定GW9662、曲格列酮及KO143 等試劑的最適濃度和時(shí)間，CCK-8 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，GW9662、曲格列酮及KO143 對(duì)細(xì)胞作用24 h 的IC50 分別為26.91、26.57、13.57 μmol/L。根據(jù)IC50結(jié)果選取25 μmol/L GW9662、25 μmol/L 曲格列酮與10 μmol/L KO143 進(jìn)行時(shí)間效應(yīng)實(shí)驗(yàn)。如圖1B結(jié)果顯示25 μmol/L GW9662、25 μmol/L 曲格列酮與10 μmol/L KO143 處理2 h 均不影響細(xì)胞增殖（均P＞0.05）。結(jié)合預(yù)期結(jié)果，選取25 μmol/L GW9662、25 μmol/L 曲格列酮與10 μmol/L ABCG2 預(yù)處理細(xì)胞2 h，在不影響細(xì)胞增殖的情況下進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)（圖1）。

圖1 GW9662、曲格列酮與KO143 對(duì)MDA-MB-231 細(xì)胞增殖的劑量和時(shí)間效應(yīng)Fig 1 Dose and time effects of GW9662，Trog and KO143 on the proliferation of MDA-MB-231 cells

2.2 HATES 促進(jìn)MDA-MB-231 細(xì)胞脂滴的積累如圖2 結(jié)果顯示，0.4 g/mL HATES 和0.8 g/mL HATES 均顯著促進(jìn)細(xì)胞脂滴的積累，但與對(duì)照組相比0.8 g/mL HATES 處理組，細(xì)胞形態(tài)明顯改變，皺縮變圓。結(jié)合細(xì)胞狀態(tài)最終選擇0.4 g/mL HATES進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

圖2 HATES 促進(jìn)MDA-MB-231 細(xì)胞脂滴的積累Fig 2 The accumulation of lipid droplets in MDA-MB-231 cells promoted by HATES

2.3 HATES 促進(jìn)MDA-MB-231 細(xì)胞MDR 結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，HATES 濃度未影響細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖及凋亡（均P＞0.05，圖3A、3B、3C）。如圖3B CCK-8 結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，DDP 組和PTX 組細(xì)胞增殖顯著降低（t=7.95、16.11，均P＜0.000 1）。與單獨(dú)DDP 相比，DDP+HATES 組細(xì)胞增殖明顯增強(qiáng)（t=3.76，P＜0.05）；PTX+HATES 組與之類似（t=8.54，P＜0.01）。如圖3C、3D 流式凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，DDP 和PTX 組大量細(xì)胞凋亡（t=33.62、34.90，均P＜0.000 1）；與單獨(dú)DDP 組相比，DDP+HATES 組細(xì)胞凋亡顯著降低（t=19.68，P＜0.000 1）；PTX+HATES 組與之類似（t=29.24，P＜0.000 1）。細(xì)胞的增殖和凋亡與形態(tài)圖趨勢(shì)一致。

圖3 HATES 促進(jìn)MDA-MB-231 細(xì)胞MDRFig 3 MDA-MB-231 cell MDR promoted by HATES

2.4 HATES 通過調(diào)節(jié)PPARγ 上調(diào)ABCG2 表達(dá) 本課題組前期生物信息學(xué)分析數(shù)據(jù)表明，PPARγ 是促進(jìn)化療耐藥的脂相關(guān)的關(guān)鍵分子，ABCG2 是其下游重要靶基因之一。為了確定HATES 是否通過PPARγ 促進(jìn)ABCG2 的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)行熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)（圖4A、4B）。結(jié)果顯示，與空載體組相比，PPARγ 拮抗劑GW9662 顯著降低ABCG2 的轉(zhuǎn)錄活性（t=18.45，P＜0.000 1），曲格列酮可顯著提高ABCG2 的轉(zhuǎn)錄活性（t=29.01，P＜0.000 1）。HATES 組ABCG2 的轉(zhuǎn)錄活性顯著增強(qiáng)（t=4.69，P＜0.01）。與HATES 組相比，HATES+GW9662 組ABCG2 的轉(zhuǎn)錄活性顯著降低（t=5.39，P＜0.001），HATES+曲格列酮組ABCG2 的轉(zhuǎn)錄活性顯著增強(qiáng)（t=8.18，P＜0.000 1）。此外，Western 印跡結(jié)果顯示HATES 處理促進(jìn)細(xì)胞PPARγ 和ABCG2 蛋白表達(dá)，而GW9662 降低了HATES 的促進(jìn)作用（圖4C、4D）。

圖4 HATES 通過調(diào)節(jié)PPARγ 上調(diào)ABCG2 表達(dá)Fig 4 HATES upregulated ABCG2 expression by regulating PPARγ

2.5 HATES 通過PPARγ/ABCG2 途徑內(nèi)源性促進(jìn)MDA-MB-231 細(xì)胞MDR 如圖5A Western 印跡結(jié)果顯示，沉默PPARγ 不僅降低了ABCG2 的蛋白表達(dá)，還減弱了由HATES 引起的PPARγ 和ABCG2 蛋白表達(dá)的增強(qiáng)效應(yīng)。如圖5B、5C 結(jié)果顯示，應(yīng)用DDP和PTX 時(shí)，HATES 促進(jìn)細(xì)胞的增殖，而沉默PPARγ可抑制該效應(yīng)（t=9.14，P＜0.01；t=12.84，P＜0.001）。同樣，如圖5D 流式凋亡檢測(cè)結(jié)果所示，應(yīng)用DDP 和PTX 時(shí)，HATES 抑制細(xì)胞的凋亡，沉默PPARγ 減弱了此影響（t=4.763、16.25，均P＜0.000 1）。

圖5 HATES 通過PPARγ/ABCG2 途徑內(nèi)源性促進(jìn)MDA-MB-231 細(xì)胞MDRFig 5 HATES promoted MDA-MB-231 cell MDR via PPARγ/ABCG2 pathway endogenously

2.6 HATES 通過PPARγ/ABCG2 途徑外源性促進(jìn)MDA-MB-231 細(xì)胞MDR 如圖6A、6B 結(jié)果所示，與DDP+HATES 組相比，DDP+HATES+GW9662 組與DDP+HATES+KO143 組的細(xì)胞增殖顯著下降（t=3.02、3.41，均P＜0.05）；與PTX+HATES 組相比，PTX+HATES+GW9662 組與PTX+HATES+KO143 組的細(xì)胞增殖顯著下降（t=4.93、4.59，均P＜0.001）。如圖6C顯示，與DDP+HATES 組相比，DDP+HATES+GW9662組與DDP+HATES+KO143 組細(xì)胞凋亡率顯著增高（t=9.06、14.14，均P＜0.000 1）；與PTX+HATES 組相比，PTX+HATES+GW9662 組與PTX+HATES+KO143 組細(xì)胞凋亡率顯著增高（t=13.72、12.20，均P＜0.000 1）。

3 討論

TNBC 占所有乳腺癌病例的10%～15%，是最致命的乳腺癌亞型[17]。TNBC 缺乏雌激素（ER）和孕激素受體（PR），表達(dá)低水平的人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2），因此對(duì)激素或抗HER2 治療無反應(yīng)[18]。因其具有高異質(zhì)性，侵襲性和缺乏治療選擇，化療仍然是TNBC 的標(biāo)準(zhǔn)療法，但患者經(jīng)常產(chǎn)生耐藥性[19]。脂肪細(xì)胞在構(gòu)成乳腺組織的細(xì)胞中占最大比例，被認(rèn)為是乳腺癌腫瘤微環(huán)境中的關(guān)鍵細(xì)胞類型[20]。脂肪細(xì)胞來源的條件培養(yǎng)基有助于乳腺癌、胰腺導(dǎo)管癌和人類黑色素瘤對(duì)化療和靶向治療的抵抗[21]。因此迫切需要探究ARM 對(duì)TNBC 化療耐藥的影響，以確定新的靶點(diǎn)來減弱或逆轉(zhuǎn)化療耐藥。本研究通過HATES 模擬ARM，發(fā)現(xiàn)其在化療藥物存在情況下促進(jìn)TNBC 細(xì)胞增殖并減少細(xì)胞凋亡，證實(shí)HATES促進(jìn)TNBC 細(xì)胞的MDR。

腫瘤細(xì)胞中的MDR 與許多機(jī)制有關(guān)，包括DNA修復(fù)和損傷，藥物代謝改變，抑制細(xì)胞凋亡和外排轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的過表達(dá)等[22]。ABCG2 可有效的將廣譜化療藥物排出腫瘤細(xì)胞，引起臨床MDR[23]。因此，發(fā)現(xiàn)有效的調(diào)節(jié)劑以規(guī)避ABCG2 介導(dǎo)腫瘤的MDR 非常重要。PPARγ 主要在脂肪組織、造血細(xì)胞和大腸中表達(dá)[12]。脂肪酸是PPARγ 的天然激動(dòng)劑。一項(xiàng)關(guān)于人腦樹突狀細(xì)胞研究顯示PPARγ 是ABCG2 新的調(diào)節(jié)劑[13]。此外，在胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞中使用PPARγ激動(dòng)劑顯著促進(jìn)了ABCG2 的表達(dá)[14]。本研究熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果表示HATES 通過PPARγ 提高ABCG2 的轉(zhuǎn)錄活性。

在各種富含脂肪細(xì)胞的相關(guān)腫瘤中，脂肪細(xì)胞在腫瘤進(jìn)展中起著至關(guān)重要的作用。脂肪細(xì)胞-卵巢癌細(xì)胞共培養(yǎng)導(dǎo)致脂質(zhì)從脂肪細(xì)胞直接轉(zhuǎn)移到卵巢癌細(xì)胞，并促進(jìn)體外和體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)[24]。同時(shí)脂肪細(xì)胞通過脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（FATPs）推動(dòng)黑色素瘤的進(jìn)展[25]。本實(shí)驗(yàn)主要關(guān)注HATES 通過PPARγ/ABCG2 影響TNBC 細(xì)胞耐藥，因此實(shí)驗(yàn)中HATES 調(diào)整為不影響腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡的濃度，以排除其影響耐藥造成的干擾。在膀胱癌中，GW9662 及曲格列酮處理48~96 h 均對(duì)細(xì)胞增殖有影響[26]，本實(shí)驗(yàn)通過探索GW9662、曲格列酮及KO143 的使用濃度及處理時(shí)間，結(jié)合細(xì)胞活性及狀態(tài)選擇GW9662、曲格列酮及KO143 預(yù)處理細(xì)胞2 h[27-28]，在藥物本身不改變腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡以避免干擾的情況下，探討HATES 是否通過PPARγ/ABCG2 途徑參與MDR。在乳腺癌中，腫瘤細(xì)胞自分泌產(chǎn)生的脂肪因子IL-6 可以上調(diào)ABCG2的表達(dá)，從而促進(jìn)MDR 水平[7]。在本實(shí)驗(yàn)中，HATES通過PPARγ/ABCG2 途徑促進(jìn)TNBC 細(xì)胞的MDR，但由于HATES 成分復(fù)雜，且本研究中獲取HATES需進(jìn)行研磨和過濾等操作，會(huì)損失一部分發(fā)揮作用的效應(yīng)因子，因此后續(xù)將應(yīng)用脂質(zhì)組學(xué)分析檢測(cè)HATES 中起主要作用的脂質(zhì)代謝物，以及細(xì)胞因子芯片分析HATES 中發(fā)揮主要作用的脂肪因子。

綜上所述，本研究通過體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)HATES 通過PPARγ/ABCG2 途徑促進(jìn)TNBC 細(xì)胞的MDR，對(duì)臨床干預(yù)TNBC 提供潛在的治療靶點(diǎn)具有指導(dǎo)意義。