唐修然 胡王艷 姚曉寒 李香花

能力驗(yàn)證是利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則評(píng)價(jià)參加者的能力。實(shí)驗(yàn)室參加能力驗(yàn)證工作，要求檢驗(yàn)人員具有較強(qiáng)的操作技能、較高的專(zhuān)業(yè)知識(shí)水平以及具有豐富的實(shí)操判斷經(jīng)驗(yàn)。本文總結(jié)能力驗(yàn)證經(jīng)常遇到的困難及不合格的原因，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室參加能力驗(yàn)證時(shí)實(shí)際采用的試驗(yàn)方法和經(jīng)驗(yàn)，提出參加能力驗(yàn)證應(yīng)注意的幾點(diǎn)建議，供實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員參考，以提高能力驗(yàn)證結(jié)果準(zhǔn)確性。

1.引言

能力驗(yàn)證是實(shí)驗(yàn)室外部質(zhì)量控制的有效手段，是檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)最常采用的質(zhì)量控制方法之一。在食品安全監(jiān)督抽檢承檢機(jī)構(gòu)考核中，能力驗(yàn)證也被列為承檢單位檢測(cè)能力考核計(jì)分項(xiàng)。能力驗(yàn)證是檢查實(shí)驗(yàn)室是否持續(xù)保持相應(yīng)資質(zhì)檢測(cè)能力，檢驗(yàn)人員是否具備相應(yīng)專(zhuān)業(yè)技術(shù)水平的活動(dòng)。農(nóng)產(chǎn)品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)通過(guò)參加能力驗(yàn)證活動(dòng)，發(fā)現(xiàn)并糾正存在問(wèn)題，規(guī)范檢測(cè)業(yè)務(wù)工作流程，確實(shí)提高檢驗(yàn)檢測(cè)能力和技術(shù)水平，有效保證檢測(cè)工作的科學(xué)性、公正性和權(quán)威性，確保為正確評(píng)價(jià)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全提供客觀、公正、科學(xué)、可靠的檢測(cè)數(shù)據(jù)。

2.歷年能力驗(yàn)證基本情況

能力驗(yàn)證項(xiàng)目一般涵蓋農(nóng)業(yè)部門(mén)在各項(xiàng)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)任務(wù)涉及的農(nóng)藥殘留檢測(cè)項(xiàng)目或是食品質(zhì)量安全監(jiān)督抽檢項(xiàng)目。農(nóng)業(yè)農(nóng)村局在農(nóng)產(chǎn)品中開(kāi)展能力驗(yàn)證領(lǐng)域包括農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)、農(nóng)產(chǎn)品中重金屬檢測(cè)、畜禽產(chǎn)品中獸藥和違禁添加物殘留檢測(cè)、水產(chǎn)品中藥物殘留檢測(cè)、土壤中重金屬檢測(cè)等。據(jù)有關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)顯示，近幾年自治區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局在農(nóng)產(chǎn)品各領(lǐng)域檢驗(yàn)檢測(cè)能力驗(yàn)證中，農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)能力驗(yàn)證合格率為63.4%至74.4%之間，而其他各領(lǐng)域如農(nóng)產(chǎn)品中重金屬檢測(cè)等的能力驗(yàn)證合格率幾乎可達(dá)到90%以上的合格率。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部辦公廳發(fā)布的2019年全國(guó)農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測(cè)技術(shù)能力驗(yàn)證結(jié)果的通報(bào)也顯示，地市縣級(jí)檢測(cè)機(jī)構(gòu)在農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)能力驗(yàn)證合格率為78.6%。農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)能力驗(yàn)證合格通過(guò)率遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于農(nóng)產(chǎn)品其他領(lǐng)域能力驗(yàn)證合格率。由此可見(jiàn)，農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)能力驗(yàn)證是困擾許多農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)的難題。

3.考核難度分析

檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)參加能力驗(yàn)證一般有兩種情況，第一種情況是雙盲考核。這里說(shuō)的雙盲考核既不明確考核的具體目標(biāo)物，也不明確目標(biāo)物質(zhì)的濃度范圍，即在考核中要做目標(biāo)物的定性分析和定量檢驗(yàn)，先確定本次考核中的具體目標(biāo)物，再對(duì)目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確定量。在雙盲考核中一般考核目標(biāo)物都比較多，從幾個(gè)到幾十個(gè)不等，并且在定性和定量時(shí)必須缺一不可，全部準(zhǔn)確定量才算合格通過(guò)。所以從考核難度上看，難度系數(shù)是非常大的。第二種是單盲考核。單盲考核對(duì)于雙盲考核來(lái)說(shuō)，考核難度就簡(jiǎn)單很多，單盲考核時(shí)給出了具體考核目標(biāo)物質(zhì)，并且目標(biāo)物一般不會(huì)太多，一般考核2-3個(gè)項(xiàng)目，單盲考核只需要對(duì)指定的目標(biāo)物進(jìn)行準(zhǔn)確定量即可。

4.不合格主要原因分析

從往年對(duì)能力驗(yàn)證不合格原因分析可看出，主要存在以下幾個(gè)方面：一是人員能力不足。參加能力驗(yàn)證的檢驗(yàn)員專(zhuān)業(yè)知識(shí)水平不足，缺乏豐富的實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn)，遇到問(wèn)題沒(méi)有得到合理分析解決。二是儀器設(shè)備條件限制。檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)儀器設(shè)備測(cè)量精度或穩(wěn)定性未能達(dá)到最佳檢測(cè)狀態(tài)，影響了檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。有些地區(qū)特別是落后的市縣區(qū)檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)儀器設(shè)備相對(duì)缺乏，儀器老舊，型號(hào)落后。三是項(xiàng)目漏檢為能力驗(yàn)證不通過(guò)的常見(jiàn)情形。檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)在做考核實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)考核項(xiàng)目定性不正確，出現(xiàn)漏檢錯(cuò)檢現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，這是影響考核通過(guò)的重要原因之一。四是檢測(cè)過(guò)程不規(guī)范。農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)過(guò)程前處理方法選擇不合理，對(duì)樣品的提取、濃縮、凈化等過(guò)程把控不準(zhǔn)確，標(biāo)準(zhǔn)曲線制作不夠合理規(guī)范。質(zhì)控樣品回收率疑義或換算差錯(cuò)，沒(méi)有真正發(fā)揮質(zhì)控作用。還有少數(shù)原因是上報(bào)材料的完整性。未確保提交的原始數(shù)據(jù)記錄、儀器檢測(cè)原始譜圖合理性和完整性。

5.能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)過(guò)程關(guān)鍵控制點(diǎn)

本實(shí)驗(yàn)室參加的能力驗(yàn)證中檢院組織的能力驗(yàn)證計(jì)劃：蔬菜（菠菜）凍干粉中毒死蜱、腐霉利的測(cè)定。蔬菜中毒死蜱、腐霉利的測(cè)定常見(jiàn)方法有GB 20769-2008、NY/T 761-2008、GB 23200.113-2018和GB 23200.121-2021等，涉及氣相色譜法、氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法。檢測(cè)機(jī)構(gòu)可根據(jù)自身實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)資質(zhì)能力范圍選擇合適的檢驗(yàn)方法。本次實(shí)驗(yàn)決定選擇GB 23200.113-2018氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法和GB 23200.121-2021液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法同時(shí)進(jìn)行，氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法的優(yōu)勢(shì)是為質(zhì)譜提供了準(zhǔn)確的定性檢測(cè)方法。較氣相色譜法而言，質(zhì)譜聯(lián)用在定性檢測(cè)時(shí)更加可靠可控，同時(shí)采用多方法和多儀器比對(duì)進(jìn)行定性和定量，可更大程度提高上報(bào)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

主要儀器設(shè)備和材料：島津LCMS-8040液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電噴霧離子源（ESI），色譜柱：島津C18-AQ，粒徑1.9μm，2.1（內(nèi)徑）×100mm（HSS）；島津GCMSTQ-8040氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電子轟擊源（EI），色譜柱：島津毛細(xì)管柱SH-l-5Sil MS，30meter，0.25mmID，0.25μm df；電子天平；高速勻漿機(jī)；氮吹儀；離心機(jī)；渦旋混合器；島津QuEChERS提取鹽包、島津QuEChERS凈化管，乙腈、乙酸乙酯均為色譜純。標(biāo)準(zhǔn)品：新購(gòu)買(mǎi)的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)100μg/mL毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液和100μg/mL腐霉利標(biāo)準(zhǔn)溶液。

5.1樣品前處理過(guò)程的關(guān)鍵控制點(diǎn)

5.1.1毒死蜱和腐霉利兩個(gè)項(xiàng)目均可采用以上四個(gè)檢驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)，而采用GB 23200.113-2018和GB 23200.121-2021優(yōu)勢(shì)更勝一籌，這兩個(gè)方法均使用QuEChERS前處理方法，其優(yōu)點(diǎn)是精確度和準(zhǔn)確度高、可分析農(nóng)藥范圍廣、回收率高、分析速度快、操作簡(jiǎn)便、使用溶劑少等。單次處理所用到的樣品量為10g，較其他兩個(gè)方法的取樣量少一半多。一份試樣可同時(shí)提供兩種方法檢測(cè)，試樣經(jīng)提取、凈化后，取一份上清液經(jīng)微孔濾膜過(guò)濾后供液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)用；另取一份上清液經(jīng)氮吹后用乙酸乙酯復(fù)溶，過(guò)濾后供氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)用。在能力驗(yàn)證提供樣品量少的情況下，采用GB 23200.113-2018或GB 23200.121-2021方法能夠爭(zhēng)取了更多次試驗(yàn)的機(jī)會(huì)，多次試驗(yàn)提供多組數(shù)據(jù)參考，在發(fā)現(xiàn)問(wèn)題時(shí)可進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，提高結(jié)果準(zhǔn)確性的概率。

5.1.2提取時(shí)勻漿轉(zhuǎn)速、時(shí)間嚴(yán)格控制，轉(zhuǎn)速在0-5s平穩(wěn)升至理想轉(zhuǎn)速15000r/min，并記錄勻漿提取時(shí)間足夠1min。當(dāng)能力驗(yàn)證樣品為速凍干粉時(shí)，嚴(yán)格按照樣品附帶的作業(yè)指導(dǎo)書(shū)進(jìn)行樣品復(fù)溶，如作業(yè)指導(dǎo)書(shū)要求蔬菜凍干粉樣品以5倍蒸餾水復(fù)原，在操作過(guò)程不能隨意改變其稀釋比例，否則可能導(dǎo)致樣品溶解不完全降低提取率，或稀釋體積過(guò)大影響后續(xù)提取濃縮等步驟操作，也有可能因變換了比例而在最終的結(jié)果計(jì)算時(shí)出現(xiàn)差錯(cuò)。

5.1.3供氣相質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)用試液，氮吹時(shí)水浴溫度平穩(wěn)恒定在40℃，溫度過(guò)低會(huì)降低吹干速度，溫度過(guò)高將導(dǎo)致農(nóng)藥損失。肉眼觀察氣體吹出速度流量大小一致，或使用同一個(gè)管位出風(fēng)口依次對(duì)空白、試樣、加標(biāo)試樣進(jìn)行氮吹。氮吹近干點(diǎn)把控準(zhǔn)確，在輕微晃動(dòng)試管時(shí)肉眼觀察試管底部無(wú)明顯大粒液珠，并且濕潤(rùn)而不干。

5.2校準(zhǔn)曲線的制備和運(yùn)用技巧

首先取一份樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)，初步測(cè)定考核樣大致濃度，再根據(jù)初步測(cè)定結(jié)果確定標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度范圍，使待測(cè)物含量落在標(biāo)準(zhǔn)曲線中間濃度范圍為宜。在制作標(biāo)準(zhǔn)工作曲線時(shí)，根據(jù)不同方法和儀器可以制作溶劑標(biāo)準(zhǔn)工作曲線、空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線和基質(zhì)加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)各種方法繪制校準(zhǔn)曲線，不同工作曲線加載計(jì)算試樣濃度比較，提供數(shù)據(jù)參考，最終檢測(cè)結(jié)果一般用基質(zhì)校準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。液質(zhì)聯(lián)用儀可以使用溶劑直接配置標(biāo)準(zhǔn)曲線，初步測(cè)定被測(cè)物的大概濃度范圍，為能力驗(yàn)證爭(zhēng)取更多寶貴時(shí)間。在氣相質(zhì)譜法中基質(zhì)加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線可以有效消除基質(zhì)效應(yīng)的影響和各操作步驟可能存在的干擾。

5.3樣品加標(biāo)回收的質(zhì)量控制措施

對(duì)于農(nóng)藥殘留質(zhì)控加標(biāo)回收試驗(yàn)，同一種農(nóng)藥在各個(gè)濃度的回收率不一樣，不同農(nóng)藥在同一個(gè)濃度的回收率也不一樣。所以，在初次測(cè)定目標(biāo)農(nóng)藥確定毒死蜱的質(zhì)量濃度約是0.16-0.20mg/kg，腐霉利質(zhì)量濃度約是0.85-0.95mg/kg，那么，應(yīng)針對(duì)兩種農(nóng)藥分別做與考核濃度一致的加標(biāo)試驗(yàn)，即在與考核盲樣基質(zhì)一致的空白樣品中毒死蜱質(zhì)控加標(biāo)含量為0.20mg/kg，腐霉利質(zhì)控加標(biāo)含量為0.90mg/kg。一般回收率在80%-120%之間是比較理想的，如果出現(xiàn)回收率偏移嚴(yán)重，則應(yīng)查找原因，從前處理、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制、儀器設(shè)備狀態(tài)等整個(gè)檢測(cè)過(guò)程排除可能出現(xiàn)的問(wèn)題，并進(jìn)行糾正。本次質(zhì)控加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，毒死蜱、腐霉利在不同加標(biāo)濃度時(shí)，用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法分別檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表1。

檢測(cè)過(guò)程質(zhì)量控制措施可信時(shí)，即用空白樣品加標(biāo)的質(zhì)控回收率在符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定范圍內(nèi)，可對(duì)樣品進(jìn)行回收率折算。檢測(cè)結(jié)果最終根據(jù)質(zhì)控回收率的多少?zèng)Q定是否對(duì)考核樣檢測(cè)值進(jìn)行校正。在此，毒死蜱無(wú)論在液質(zhì)聯(lián)用法還是氣質(zhì)聯(lián)用法中回收率都接近100%，可以不進(jìn)行校正，而腐霉利質(zhì)控回收率均在110%以上，則進(jìn)行結(jié)果校正。再結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室日常檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，毒死蜱、腐霉利選擇氣質(zhì)聯(lián)用法并進(jìn)行回收率校正確定最終上報(bào)結(jié)果。

5.4儀器分析譜圖準(zhǔn)確把控

在進(jìn)行能力驗(yàn)證時(shí)應(yīng)提前做好儀器設(shè)備維護(hù)保養(yǎng)，調(diào)整儀器至最佳工作狀態(tài)。液質(zhì)聯(lián)用儀對(duì)管路和色譜柱、離子源窗口等部位清洗干凈，在氣質(zhì)聯(lián)用儀更換襯管、色譜柱等耗材后必須做好老化操作，檢測(cè)前用高濃度目標(biāo)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液持續(xù)進(jìn)樣至儀器達(dá)到飽和，保持儀器穩(wěn)定性，調(diào)整色譜條件、質(zhì)譜條件等使目標(biāo)農(nóng)藥呈現(xiàn)良好峰形。實(shí)驗(yàn)過(guò)程的原始數(shù)據(jù)及儀器檢測(cè)譜圖真實(shí)完整保存，不得擅自更改數(shù)據(jù)改變實(shí)驗(yàn)的真實(shí)性。

6.做好能力驗(yàn)證的幾點(diǎn)建議

一是提高檢測(cè)人員技術(shù)能力，控制人為誤差。檢驗(yàn)人員具有較強(qiáng)的操作技能、較高的專(zhuān)業(yè)知識(shí)水平以及具有豐富的實(shí)操判斷經(jīng)驗(yàn)直接關(guān)系檢測(cè)結(jié)果的可靠性。有時(shí)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)會(huì)指定交代年輕的檢驗(yàn)員參加能力驗(yàn)證，以此考察培養(yǎng)的檢驗(yàn)人員是否達(dá)到較高的專(zhuān)業(yè)技術(shù)能力，此時(shí)應(yīng)配備有經(jīng)驗(yàn)豐富的高水平專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員專(zhuān)門(mén)指導(dǎo)和監(jiān)督其能力驗(yàn)證的整個(gè)過(guò)程，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行評(píng)定，以確保最終上報(bào)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

二是理性選擇檢驗(yàn)方法。當(dāng)所在實(shí)驗(yàn)室擁有幾個(gè)檢驗(yàn)方法資質(zhì)均覆蓋能力驗(yàn)證項(xiàng)目時(shí)，應(yīng)采取最常做最有把握的檢驗(yàn)方法實(shí)施考核工作，而不能在關(guān)鍵時(shí)刻盲目探索，增加了考核通過(guò)的風(fēng)險(xiǎn)。

三是檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的關(guān)鍵作用。進(jìn)行能力驗(yàn)證時(shí)盡量使用新啟用的最新有效標(biāo)準(zhǔn)品物質(zhì)，不建議使用放置過(guò)久的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或開(kāi)啟稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，避免因標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)降解濃度降低從而引起測(cè)量結(jié)果偏高的現(xiàn)象。制作校準(zhǔn)曲線濃度范圍合理，在預(yù)測(cè)樣品大概濃度后，配置標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度范圍應(yīng)盡量使樣品濃度落在標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度的中間范圍。

四是把握儀器設(shè)備狀態(tài)，消除系統(tǒng)誤差。對(duì)儀器設(shè)備的關(guān)注往往很注重大型儀器設(shè)備的檢定校準(zhǔn)和期間核查。儀器的性能穩(wěn)定，持續(xù)處于最佳工作狀態(tài)是直接影響監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和有效性的關(guān)鍵因素。同時(shí)，各種計(jì)量器具的檢定校準(zhǔn)也不可忽視，移液管、移液槍、容量瓶的精準(zhǔn)度同樣密切影響著實(shí)驗(yàn)過(guò)程的準(zhǔn)確性。

五是環(huán)境條件控制。農(nóng)藥殘留檢驗(yàn)中使用的試劑大部分都是有機(jī)溶劑，對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境要求較高，在適宜的溫濕度條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，儀器室溫度控制合適并且穩(wěn)定，以免溫度過(guò)高加快待上機(jī)試液的揮發(fā)，影響準(zhǔn)確度和精密度。

總結(jié)

實(shí)驗(yàn)室參加能力驗(yàn)證項(xiàng)目考核時(shí)，應(yīng)確保人員能力、儀器設(shè)備條件等影響最大的主要因素保持在最佳實(shí)驗(yàn)狀態(tài)。本文以參加能力驗(yàn)證時(shí)在樣品前處理過(guò)程的關(guān)鍵控制點(diǎn)，樣品加標(biāo)回收的質(zhì)量控制措施，校準(zhǔn)曲線的制備和運(yùn)用技巧，儀器分析譜圖準(zhǔn)確把控等方面進(jìn)行經(jīng)驗(yàn)交流與分享，并在人機(jī)料法環(huán)各方面提出應(yīng)注意的幾點(diǎn)建議，為檢測(cè)機(jī)構(gòu)參加能力驗(yàn)證時(shí)提供參考，以提高農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)能力驗(yàn)證通過(guò)率。

作者簡(jiǎn)介：

唐修然（1987-），女，廣西賀州人，本科，工程師；研究方向：產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)及檢測(cè)技術(shù)研發(fā)工作。