李江,趙建廷,呂昌光,金一琦

南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院,江蘇 蘇州 215000

動(dòng)脈硬化閉塞癥是發(fā)病率最高的缺血性疾病之一,近年來其發(fā)病率逐年增加,此疾病最主要為下肢動(dòng)脈硬化閉塞,其中30%發(fā)生于髂動(dòng)脈,70%多見于股動(dòng)脈、腘動(dòng)脈及遠(yuǎn)端動(dòng)脈等[1],在中醫(yī)學(xué)中屬于“脫疽”范疇。動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是引起動(dòng)脈硬化閉塞癥的主要原因[2-3]。由氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)引起的內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙是AS發(fā)生的第一步。ox-LDL可破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞的氧化還原平衡,引起氧化應(yīng)激損傷[4-5]。血府逐瘀湯是清代王清任《醫(yī)林改錯(cuò)》中治療血瘀的一個(gè)經(jīng)典方劑,由桃仁、紅花、生地黃、當(dāng)歸、赤芍、川芎、柴胡、枳殼、牛膝、桔梗、甘草11味中藥組成,方劑中的桃仁、紅花、生地黃、當(dāng)歸、赤芍、川芎6味藥活血化瘀而養(yǎng)血;柴胡、枳殼、甘草行氣和血而舒肝;桔?？梢蚤_肺氣、載藥上行,配合枳殼則升降上焦之氣而寬胸;牛膝通利血脈、引血下行。臨床上發(fā)現(xiàn)此方劑可改善微循環(huán)、擴(kuò)張微血管、增加組織灌注,被廣泛用于包括AS在內(nèi)的多種疾病的治療[6-7]。臨床研究發(fā)現(xiàn),血府逐瘀湯可明顯改善下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥患者的癥狀[8],但是其作用機(jī)制尚未完全闡明。

微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一類長度為22～25個(gè)核苷酸的非編碼RNAs。miRNAs是AS發(fā)生和發(fā)展過程的一類重要的調(diào)控因子[9-11]。最新的研究發(fā)現(xiàn),血府逐瘀湯在顱腦損傷中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用與miRNAs表達(dá)變化有關(guān)[12]。Sun等[13]的研究顯示,miR-532-5p在AS患者血清中的表達(dá)水平比健康人低,且miR-532-5p低表達(dá)在 ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷中發(fā)揮重要作用[14]。故本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)血府逐瘀膠囊對(duì)下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥患者血清中miR-532-5p表達(dá)的影響,并用ox-LDL誘導(dǎo)的人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(human coronary artery endothelial cells,HCAECs)氧化應(yīng)激損傷模型探究血府逐瘀膠囊含藥血清對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的作用并探討其與miR-532-5p的關(guān)系。

1 材料

1.1 臨床資料選擇2021年1月至2022年5月在南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院經(jīng)超聲檢查或血管造影等影像學(xué)檢查確診為下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥并采用保守治療的患者40例,其中男性26例,女性14例,年齡49～73歲,平均年齡61.7歲。所有患者均符合中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn),Fontaine分期為Ⅰ—Ⅲ期。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)具有嚴(yán)重的疾病病史,如血液病、惡性腫瘤、心肌梗死、嚴(yán)重肝腎功能異常、腦出血、自身免疫疾病;(2)精神異常、伴有嚴(yán)重肢體感染、具有傳染性疾病;(3)肢體缺血性疾病,如大動(dòng)脈炎、血栓閉塞性脈管炎;(4)患者依從性差。本研究經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)(批號(hào):2020-024),且所有患者均簽署知情同意書。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與細(xì)胞6周齡SD大鼠由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(滬)2012-0002。大鼠飼養(yǎng)在蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,溫度(22±1) ℃,濕度(60±5)%,12 h/12 h晝夜交替,可自由進(jìn)食飲水。適應(yīng)飼養(yǎng)一周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作均經(jīng)蘇州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)(批號(hào):2021-019)。HCAECs細(xì)胞(美國ATCC公司,貨號(hào):PCS-100-020)。

1.3 藥物與試劑血府逐瘀膠囊(天津宏仁堂藥業(yè)有限公司,批號(hào):Z12020223);內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基(美國Sciencell公司,貨號(hào):1001);胎牛血清(美國Hyclone公司,貨號(hào):SH30396.02);Lipofectamine 3000(美國Invitrogen公司,貨號(hào):L3000008);ox-LDL、RIPA裂解液和BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(北京索萊寶科技有限公司,貨號(hào):IO1300、R0010、PC0020);丙二醛(malondialdehyde,MDA)測(cè)定試劑盒(微板法)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)測(cè)定試劑盒(WST-1 法)(南京建成生物工程研究所,貨號(hào):A003-4-1、A001-3-2);活性氧(reactive oxygen species,ROS)檢測(cè)試劑盒和CCK-8試劑盒(上海碧云天生物技術(shù)有限公司,貨號(hào):S0033S、C0038);TRNzol Universal總RNA提取試劑、miRcute增強(qiáng)型miRNA cDNA第一鏈合成試劑盒、miRcute增強(qiáng)型miRNA熒光定量檢測(cè)試劑盒(SYBR Green)(北京天根生化科技有限公司,貨號(hào):DP424、KR211、FP411);雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒(美國Promega公司,貨號(hào):E1910);肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2(actin-related protein 2,Arp2)兔單克隆抗體和GAPDH兔單克隆抗體(美國Abcam公司,貨號(hào):ab128934、ab181602);Annexin V-APC/PI凋亡試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司,貨號(hào):E-CK-A217)。

1.4 儀器FACSCalibur流式細(xì)胞儀(美國BD公司);7500 Fast RT-PCR儀(美國ABI公司);NanoDrop 2000C超微量分光光度計(jì)和MultiskanTMFC 酶標(biāo)儀(美國Thermo Fisher Scientific公司);Tanon 4600 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)(上海天能科技有限公司)。

2 方法

2.1 治療方法和血清收集將40例患者隨機(jī)分成治療組和對(duì)照組,每組20例。對(duì)照組患者入院后給予常規(guī)治療,治療組患者入院后在給予常規(guī)治療的基礎(chǔ)上口服血府逐瘀膠囊,每日兩次,每次6粒。治療前和服藥4周后分別收集患者空腹靜脈血5 mL,靜置30 min后,3 000 r·min-1離心10 min,收集上清液即為血清樣本。

2.2 血府逐瘀含藥血清制備將大鼠隨機(jī)分成血府逐瘀膠囊組和對(duì)照組,每組5只。血府逐瘀膠囊組大鼠灌胃給予0.48 g·kg-1血府逐瘀膠囊藥液,給藥體積10 mL·kg-1,每天2次[15],對(duì)照組大鼠給予同等劑量的生理鹽水,連續(xù)7 d。末次給藥2 h后腹主動(dòng)脈采血,靜置30 min后,4 ℃,3 000 r·min-1離心10 min,取上清液,56 ℃水浴30 min滅活補(bǔ)體,0.22 μm微膜過濾除菌后,-70 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 細(xì)胞培養(yǎng)和分組將HCAECs培養(yǎng)在含有5%胎牛血清的內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基中,置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(條件設(shè)置為37 ℃,5%CO2)。取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞,胰蛋白酶消化后接種到細(xì)胞培養(yǎng)皿中,過夜培養(yǎng)后,將細(xì)胞進(jìn)行以下分組:對(duì)照組、ox-LDL組(加入100 mg·L-1ox-LDL培養(yǎng)24 h)、血府逐瘀組(用體積分?jǐn)?shù)2.5%血府逐瘀含藥血清培養(yǎng) 48 h 后加入100 mg·L-1ox-LDL培養(yǎng)24 h)、血府逐瘀對(duì)照組(加入等量對(duì)照血清培養(yǎng)48 h后加入100 mg·L-1ox-LDL培養(yǎng)24 h)、血府逐瘀+miR-532-5p抑制劑組(用Lipofectamine 3000將miR-532-5p抑制劑轉(zhuǎn)染至細(xì)胞24 h后加體積分?jǐn)?shù)2.5%血府逐瘀含藥血清培養(yǎng)48 h再用 100 mg·L-1ox-LDL繼續(xù)培養(yǎng)24 h)、血府逐瘀+miR-532-5p抑制劑對(duì)照組(用Lipofectamine 3000將miR-532-5p抑制劑對(duì)照轉(zhuǎn)染至細(xì)胞24 h后加入體積分?jǐn)?shù)2.5%血府逐瘀含藥血清培養(yǎng)48 h再用100 mg·L-1ox-LDL繼續(xù)培養(yǎng)24 h)。

2.4 CCK-8測(cè)定細(xì)胞活力將2×103個(gè)HCAECs接種到96孔板,根據(jù)上述分組進(jìn)行處理后,每孔加入10 μL CCK-8溶液,37 ℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育1 h,使用酶標(biāo)儀在450 nm波長處測(cè)定吸光度。

2.5 ROS、MDA和SOD含量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平根據(jù)DCFH-DA方法使用ROS檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定。將HCAECs接種到6孔板,分為對(duì)照組、ox-LDL組、血府逐瘀組和血府逐瘀對(duì)照組,按2.3項(xiàng)所述方法進(jìn)行處理后,去除細(xì)胞培養(yǎng)基,加入1 mL 10 μmol·L-1DCFH-DA,在37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育20 min,無血清的細(xì)胞培養(yǎng)液清洗細(xì)胞去除未進(jìn)入胞內(nèi)的DCFH-DA。收集細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞密度為1×106mL-1,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)熒光變化情況(488 nm激發(fā)波長,525 nm發(fā)射波長)。對(duì)于胞內(nèi)MDA和SOD含量的檢測(cè):HCAECs分組處理后,棄上清液,細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下后用移液器轉(zhuǎn)移至微量離心管中,按照試劑盒說明書操作,用酶標(biāo)儀分別在530 nm和450 nm波長處測(cè)定吸光度。

2.6 RT-PCR實(shí)驗(yàn)根據(jù)TRNzol Universal總RNA提取試劑說明書操作提取患者血清和HCAECs的總RNA,取1 μg進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄后取1 μL cDNA使用miRNA熒光定量檢測(cè)試劑盒在PCR儀上操作檢測(cè)miR-532-5p的表達(dá)。反應(yīng)程序:95 ℃預(yù)變性15 min,94 ℃變性20 s,60 ℃退火延伸30 s,40個(gè)循環(huán)。用U6做內(nèi)參,按照2-△△Ct計(jì)算miR-532-5p的表達(dá)量。引物序列如下:miR-532-5p上游引物5′-ACACTCCAGCTGGGCATGCCTTGAGTGTAG-3′,下游引物5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′;U6上游引物5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′,下游引物5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。

2.7 Western blot實(shí)驗(yàn)HCAECs細(xì)胞分組處理后用RIPA裂解液裂解,提取總蛋白后,測(cè)定總蛋白濃度。每個(gè)樣本取20 μg進(jìn)行10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離,之后將樣本轉(zhuǎn)移到PVDF膜上,用5%脫脂奶粉封閉2 h,分別加入提前稀釋好的Arp2抗體(11 000)和GAPDH抗體(11 000)在4 ℃過夜孵育。將膜用TBST緩沖液洗滌3次后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗(15 000)孵育1 h。用ECL發(fā)光液對(duì)蛋白顯色,拍照后用Image J軟件分析蛋白條帶的灰度值。以GAPDH作為內(nèi)參蛋白,計(jì)算Arp2蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

2.8 細(xì)胞凋亡檢測(cè)將HCAECs接種到6孔板,分組處理后,收集上清液中懸浮細(xì)胞,用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞后收集細(xì)胞。PBS洗滌上述細(xì)胞后重懸細(xì)胞計(jì)數(shù)。取1×105個(gè)重懸細(xì)胞,300 r·min-1離心5 min,棄上清后用500 μL 1×Annexin V Binding Buffer將細(xì)胞重懸,然后加入5 μL Annexin V-APC試劑和5 μL PI試劑,混勻后室溫避光孵育 15 min,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。

2.9 雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)miR-532-5p與Arp2的結(jié)合能力Starbase軟件預(yù)測(cè)miR-532-5p的靶基因,發(fā)現(xiàn)Arp2是它的一個(gè)潛在靶基因。將Arp2-3′UTR和突變的Arp2-3′UTR插入pmirGLO雙熒光素酶報(bào)告基因載體中構(gòu)建Arp2-Wt和Arp2-Mut質(zhì)粒。將HCAECs接種到24孔板中,進(jìn)行以下分組處理:miR-532-5p組(用Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染miR-532-5p和構(gòu)建的Arp2-Wt或Arp2-Mut質(zhì)粒)和miR-NC組(用Lipofectamine 3000轉(zhuǎn)染miR-532-5p對(duì)照品miR-NC和構(gòu)建的Arp2-Wt或Arp2-Mut質(zhì)粒)。48 h后測(cè)定熒光素酶活性。

3 結(jié)果

3.1 血府逐瘀膠囊上調(diào)下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥患者血清中miR-532-5p的表達(dá)與治療前比較,治療組患者給予血府逐瘀膠囊后血清中miR-532-5p表達(dá)顯著升高(P<0.05);而對(duì)照組患者治療前后miR-532-5p表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后,血府逐瘀膠囊治療組患者血清中miR-532-5p表達(dá)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。見圖1。

注:A:治療組患者治療前后血清miR-532-5p表達(dá)水平比較;B:對(duì)照組患者治療前后血清miR-532-5p表達(dá)水平比較;C:治療后兩組患者血清miR-532-5p表達(dá)水平比較;與治療前比較,*P<0.05;與對(duì)照組比較,#P<0.05

3.2 血府逐瘀含藥血清可抑制ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷與對(duì)照組比較,ox-LDL組HCAECs細(xì)胞活力顯著降低(P<0.05),細(xì)胞凋亡率、ROS和MDA水平顯著增加(P<0.05),SOD水平顯著降低(P<0.05);與ox-LDL組比較,血府逐瘀組細(xì)胞活力顯著升高(P<0.05),細(xì)胞凋亡率、ROS和MDA水平顯著降低(P<0.05),SOD水平顯著升高(P<0.05);與ox-LDL組比較,血府逐瘀對(duì)照組細(xì)胞活力、ROS、MDA和SOD水平以及凋亡率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),即對(duì)照血清對(duì) ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷無影響。見表1,圖2。

表1 血府逐瘀含藥血清對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的影響

圖2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡圖

3.3 血府逐瘀含藥血清對(duì)ox-LDL刺激的內(nèi)皮細(xì)胞中miR-532-5p和Arp2表達(dá)的影響與對(duì)照組比較,ox-LDL組細(xì)胞中miR-532-5p表達(dá)顯著降低(P<0.05),Arp2蛋白表達(dá)顯著增加(P<0.05);與ox-LDL組比較,血府逐瘀組中miR-532-5p表達(dá)顯著增加(P<0.05),Arp2蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05);但是與ox-LDL組比較,血府逐瘀對(duì)照組中miR-532-5p和Arp2表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖3,表2。

表2 血府逐瘀含藥血清對(duì)ox-LDL刺激的內(nèi)皮細(xì)胞中miR-532-5p和Arp2表達(dá)的影響

圖3 各組Arp2蛋白表達(dá)條帶圖

3.4 血府逐瘀含藥血清通過miR-532-5p調(diào)控ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷與血府逐瘀組比較,血府逐瘀+miR-532-5p抑制劑組HCAECs細(xì)胞活力顯著降低(P<0.05),ROS和MDA含量以及凋亡率顯著增加(P<0.05),SOD含量顯著減少(P<0.05);但是與血府逐瘀組比較,血府逐瘀+miR-532-5p抑制劑對(duì)照組細(xì)胞活力、ROS、MDA和SOD含量以及凋亡率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3,圖4。

表3 血府逐瘀含藥血清通過miR-532-5p調(diào)控ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷

圖4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡圖

3.5 miR-532-5p靶向調(diào)控Arp2的表達(dá)Starbase軟件分析發(fā)現(xiàn)Arp2是miR-532-5p的一個(gè)潛在靶基因,兩者的結(jié)合序列見圖5A。雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)兩者的結(jié)合能力,結(jié)果見圖5B,miR-532-5p可減少轉(zhuǎn)染Arp2-Wt質(zhì)粒的HCAECs熒光素酶活性(P<0.05),但不能改變轉(zhuǎn)染Arp2-Mut質(zhì)粒的熒光素酶活性(P>0.05)。miR-532-5p抑制劑可增加Arp2蛋白表達(dá),見圖5C。

注:A:miR-532-5p和Arp2的結(jié)合位點(diǎn)以及Arp2的突變位點(diǎn);B:雙熒光素酶活性檢測(cè);C:Western blot檢測(cè)結(jié)果。與miR-NC組比較,*P<0.05;與miR-532-5p抑制劑對(duì)照組比較,#P<0.05

4 討論

中醫(yī)認(rèn)為下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥主要是由于氣血運(yùn)行受阻,造成氣滯血瘀引起的,臨床上給予活血化瘀藥物可提高治療效果,改善臨床癥狀。血府逐瘀湯具有活血化瘀、通絡(luò)補(bǔ)氣的功效,已被發(fā)現(xiàn)可改善下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥患者的臨床癥狀[8,16]。在ox-LDL等氧化應(yīng)激因子的刺激下,內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生較多的活性分子,如ROS,破壞細(xì)胞的氧化-抗氧化平衡,進(jìn)而引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷誘發(fā)AS形成[17-18]。SOD是一個(gè)重要的抗氧化酶,MDA是脂質(zhì)過氧化的重要標(biāo)志物[19-20]。因此,ROS、MDA和SOD是內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激的重要標(biāo)志物[21]。本研究中,血府逐瘀含藥血清不僅增加了ox-LDL刺激的HCAECs細(xì)胞活力、減少細(xì)胞凋亡,還降低了ROS和MDA水平、增加了SOD含量,這表明血府逐瘀含藥血清可緩解ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。

研究顯示,miR-532-5p在AS患者血清中低表達(dá),在AS中發(fā)揮保護(hù)作用[13-14]。本研究中下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥患者服用血府逐瘀膠囊一個(gè)療程后血清中miR-532-5p表達(dá)上調(diào),這表明血府逐瘀膠囊很可能是通過上調(diào)miR-532-5p的表達(dá)發(fā)揮作用的。Yao等[22]的研究顯示miR-532-5p可抑制ox-LDL誘導(dǎo)的人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。本研究發(fā)現(xiàn)ox-LDL刺激HCAECs降低了細(xì)胞中miR-532-5p表達(dá),而血府逐瘀含藥血清可上調(diào)miR-532-5p表達(dá)。此外,miR-532-5p抑制劑可減弱血府逐瘀含藥血清對(duì)細(xì)胞活力、凋亡和ROS、MDA和SOD含量的影響,這表明血府逐瘀膠囊很可能是通過上調(diào)miR-532-5p的表達(dá)減輕內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷,從而改善下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥患者癥狀的。

miRNAs通過與靶基因mRNA的3′端非翻譯區(qū)特異性結(jié)合,在轉(zhuǎn)錄水平負(fù)調(diào)控相關(guān)基因表達(dá)[23-25]。Arp2/3復(fù)合體在肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架重塑過程中發(fā)揮重要作用[26-27],已發(fā)表的文獻(xiàn)表明抑制Arp2/3復(fù)合體可減弱ox-LDL誘導(dǎo)的HCAECs氧化應(yīng)激損傷[28]。Arp2是Arp2/3復(fù)合體中的一個(gè)重要亞基,Starbase生物信息學(xué)軟件分析顯示Arp2是miR-532-5p的一個(gè)靶基因,本研究使用雙熒光素酶報(bào)告基因分析系統(tǒng)驗(yàn)證了miR-532-5p可與Arp2直接結(jié)合,而且miR-532-5p抑制劑可上調(diào)Arp2蛋白表達(dá),表明Arp2是miR-532-5p的靶基因。本研究還發(fā)現(xiàn),血府逐瘀含藥血清可抑制ox-LDL誘導(dǎo)的HCAECs中Arp2蛋白表達(dá)。這些結(jié)果提示血府逐瘀膠囊在內(nèi)皮細(xì)胞中的作用與miR-532-5p的靶基因Arp2表達(dá)被抑制有關(guān)。

綜上所述,血府逐瘀膠囊可通過上調(diào)miR-532-5p抑制其靶基因Arp2的表達(dá),進(jìn)而抑制ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷,從而緩解下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥患者的癥狀。本研究進(jìn)一步闡明了血府逐瘀膠囊治療下肢動(dòng)脈硬化閉塞癥的分子機(jī)制,為其臨床應(yīng)用提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。