高磊　李慧　洪奔　鄭煥　陶建敏

摘要： 以母本鐘山紅葡萄、父本鐘山紅玉葡萄及其50株雜交F₁代植株為試驗(yàn)材料，通過簡單重復(fù)序列（SSR）分子標(biāo)記技術(shù)分析親本與子代間的親緣關(guān)系并繪制遺傳關(guān)系聚類圖，通過測定雜交F₁代與父母本的果實(shí)基本品質(zhì)及酚類物質(zhì)含量等指標(biāo)，以進(jìn)一步了解鐘山紅玉、鐘山紅及其雜交F₁代的遺傳規(guī)律。結(jié)果表明，通過SSR分子標(biāo)記技術(shù)檢測，發(fā)現(xiàn)含有父母本特征性條帶的雜交F₁代占比不低于86%，雜交F₁代與父母本的遺傳相似系數(shù)為0.857～1.000，果實(shí)基本品質(zhì)性狀呈廣泛分離的現(xiàn)象，符合數(shù)量性狀的遺傳特點(diǎn)。F₁代果皮中的總花色苷含量呈低于雙親遺傳的特點(diǎn)，果肉中總類黃酮含量、原花色素含量呈超高親遺傳的特點(diǎn)，但是果實(shí)顏色的遺傳受到多基因的調(diào)控，還需要進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞： 葡萄；果實(shí)；雜交F₁代；簡單重復(fù)序列（SSR）分子標(biāo)記；遺傳規(guī)律

中圖分類號： S663.103.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A 文章編號： 1000-4440（2023）01-0187-11

SSR identification and genetic tendency analysis of fruit characters of hybrid offspring of Zhongshan Hongyu and Zhongshan Hong

GAO Lei， LI Hui， HONG Ben， ZHENG Huan， TAO Jian-min

（College of Horticulture， Nanjing Agricultural University， Nanjing 210095， China）

Abstract： Taking the female parent Zhongshan Hong， male parent Zhongshan Hongyu and their 50 hybrid F₁generations as experimental materials， the genetic relationship between parents and offspring was analyzed by simple sequence repeat （SSR） molecular marker technology， and the genetic similarity coefficient map was drawn. The genetic law of Zhongshan Hongyu， Zhongshan? Hong and their hybrid offspring was further understood by measuring the basic fruit quality and phenolic content of F₁hybrids and their parents. The detection results obtained by SSR molecular marker technology showed that the proportion of F₁hybrids containing parental characteristic bands exceeded 86%， and the genetic similarity coefficient between F₁hybrids and parents ranged from 0.857 to 1.000. The basic quality indices of fruits were widely separated， which was in line with the genetic characteristics of quantitative traits. The content of total anthocyanins in pericarp of the F₁generation is lower than that of parental inheritance， and the content of total flavonoids and total proanthocyanidins in pulp is ultra-high. However， the inheritance of fruit color is regulated by multiple genes and needs further research.

Key words： grape;fruit；hybrid F₁generation；simple sequence repeat （SSR） molecular markers；genetic law

葡萄在分類上屬于葡萄科（Vitaceae）、葡萄屬（Vitis），在國內(nèi)外廣泛種植且栽培歷史悠久，世界葡萄產(chǎn)量更是逐年升高^[1]。葡萄不僅味道可口，而且營養(yǎng)價(jià)值豐富，可以補(bǔ)充人體所需的多種維生素和礦質(zhì)元素，被稱作“水果之神”^[2-4]。近年來中國的葡萄栽培和育種技術(shù)發(fā)展迅速，栽培面積逐年升高，中國的葡萄產(chǎn)量在2011年已達(dá)到世界最高，栽培面積在2014年達(dá)到世界第2，中國已成為世界上主要的葡萄生產(chǎn)國^[5]。盡管如此，中國葡萄生產(chǎn)仍面臨產(chǎn)品質(zhì)量不高、 生產(chǎn)效率落后于世界先進(jìn)水平、栽培管理模式落后、市場競爭力差等諸多問題，因此提高我國葡萄的栽培育種技術(shù)水平、品種創(chuàng)新能力與產(chǎn)品競爭力是目前的當(dāng)務(wù)之急^[6-7]。

優(yōu)良的葡萄品質(zhì)是提高鮮食葡萄和葡萄酒等產(chǎn)品競爭力的必要條件^[8]，葡萄的品質(zhì)性狀包括果粒大小和質(zhì)量、可溶性固形物含量、可滴定酸含量等基本品質(zhì)和花色苷、類黃酮、原花色素等酚類物質(zhì)含量等^[9-11]，研究葡萄品質(zhì)性狀的遺傳規(guī)律對提高葡萄育種能力和創(chuàng)新力具有重要意義。國內(nèi)外有研究者對葡萄品質(zhì)性狀的遺傳規(guī)律進(jìn)行了相關(guān)研究，如威代爾和霞多麗雜交后代的基本品質(zhì)性狀表現(xiàn)出明顯分離，呈現(xiàn)正態(tài)分布的遺傳規(guī)律，雜交后代果皮、果肉和種子中酚類物質(zhì)含量的變異系數(shù)高，且呈正態(tài)分布，其中果皮中酚類物質(zhì)含量表現(xiàn)出明顯的雜種優(yōu)勢，呈現(xiàn)超越雙親的遺傳趨勢^[12]。李坤^［13］發(fā)現(xiàn)，葡萄果實(shí)中的單寧含量在自交、雜交后代群體中個(gè)體間的差異明顯且變異連續(xù)，表現(xiàn)出一定的趨中傾向。黑比諾和馬瑟蘭雜交后代的果實(shí)性狀均為數(shù)量性狀，呈正態(tài)分布的特點(diǎn)，酚類物質(zhì)在果皮、果肉中的遺傳規(guī)律差異較大，其中果皮中的酚類物質(zhì)表現(xiàn)出明顯的超雙親遺傳的特點(diǎn)^[14]。毛歐雜種的雜交F₁代果皮、果肉中的原花色素含量高于親本平均值，表現(xiàn)出超雙親遺傳的趨勢^[15]?；鹬莺谟耠s交后代的果色、果粒質(zhì)量、果形指數(shù)等基本品質(zhì)性狀在個(gè)體間的差異較大，呈現(xiàn)正態(tài)分布的變化規(guī)律；果實(shí)不含種子，果形、果色等性狀具有明顯的遺傳傾向^[16]。歐亞種品種間雜交與歐美雜交種品種間雜交相比，遺傳效應(yīng)顯著下降，雜交后代的果實(shí)基本品質(zhì)等指標(biāo)表現(xiàn)出明顯的超低親遺傳效應(yīng)^[17]。中國野葡萄與歐洲葡萄品種雜交后代種子中單寧含量呈現(xiàn)正態(tài)分布的遺傳特征，雜交后代種子中單寧含量接近親本平均值，表現(xiàn)出趨雙親的遺傳效應(yīng)，此外中國野葡萄品質(zhì)性狀的遺傳能力強(qiáng)于歐洲葡萄^[18]。山葡萄種內(nèi)和種間雜交后代果實(shí)中的可溶性固形物、可滴定酸含量變異連續(xù)且接近親本平均值，其中可溶性固形物含量表型受到多基因調(diào)控^[19]。此外，葡萄不同親本雜交后代果實(shí)中的可溶性固形物、可滴定酸含量呈現(xiàn)不同的遺傳特點(diǎn)且差異明顯^[20]。本研究通過對鐘山紅、鐘山紅玉及其雜交后代進(jìn)行親緣關(guān)系鑒定并對其果實(shí)基本品質(zhì)性狀、酚類物質(zhì)遺傳規(guī)律進(jìn)行分析，以期為葡萄雜交親本的選擇和新品種選育提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與樣本的采集

試驗(yàn)材料為來源于南京湯山翠谷葡萄種植基地的母本晚熟葡萄鐘山紅、父本兩年生紅肉葡萄鐘山紅玉以及由二者雜交得到的50株雜交F₁代葡萄，在2019年獲得雜交后代的雜交種子并播種，在2020年進(jìn)行定植，雜交植株于2021年開始結(jié)果。栽培模式選擇水平棚架下的避雨栽培，親本的株行距為3.0 m×8.0 m，雜交F₁代的株行距為2.0 m×2.0 m。親本與雜交F₁代采用常規(guī)栽培管理措施，植株長勢接近且生長良好。自6月20日盛花后40 d開始，每隔20 d分別采集親本與雜交F₁代的果實(shí)樣品，取樣時(shí)選取每株20～30粒發(fā)育良好且無病害的葡萄果實(shí)，滿足3次生物學(xué)重復(fù)。將樣品的果皮、果肉分別裝于凍存管中，于-80 ℃保存，以供后續(xù)試驗(yàn)使用。

1.2 測定指標(biāo)與方法

1.2.1 葡萄果實(shí)品質(zhì)與色澤參數(shù) 用電子游標(biāo)卡尺分別測量葡萄親本、雜交F₁代植株單個(gè)果實(shí)的縱徑、橫徑；用電子天平測定5～10個(gè)親本與雜交F₁代的單個(gè)果實(shí)質(zhì)量，剝皮后分別測量果肉、果皮質(zhì)量；榨汁后用pH計(jì)測量果汁pH值；用酸堿滴定法測定每個(gè)果實(shí)中的可滴定酸含量；用PAL-1迷你數(shù)顯折射儀測定每個(gè)果實(shí)的可溶性固形物含量。

選取親本與子代中色澤明顯且均勻的果實(shí)，用清水洗凈并晾干后，用高精度色差儀測定每個(gè)果實(shí)直徑最大部位隨機(jī)3個(gè)點(diǎn)的明暗度（L^*）、紅綠色值（a^*）、黃藍(lán)色值（b^*）、色彩純度（C）、綜合色值（h）等。其中L^*代表果實(shí)亮度，取值范圍是0～100，數(shù)值越大表示果實(shí)亮度越高；a^*的取值范圍是-60～60，代表顏色由綠到紅的轉(zhuǎn)變；b^*的取值范圍也是-60～60，代表顏色由黃到藍(lán)的變化；C=（a^*2+b^*2）^1/2，h=arctan（b^*/a^*），h由a^*、b^*計(jì)算得到。以上數(shù)據(jù)均使用10個(gè)以上隨機(jī)果粒進(jìn)行測量并設(shè)置3次生物學(xué)重復(fù)。

1.2.2 葡萄果皮與果肉的酚類物質(zhì)含量 對采樣的葡萄果實(shí)進(jìn)行果皮與果肉分離，用濾紙吸掉多余的汁液后，分別取3 g果皮、6 g果肉于100 ml棕色容量瓶中，在避光條件下用70%乙醇溶液處理1 d后過濾，即得到酚類物質(zhì)提取液。稱取0.5 g果皮于100 ml棕色容量瓶中，在避光條件下用1%鹽酸-甲醇混合液提取12 h后過濾，即得到總花色苷提取液。分別用福林-肖卡法測定總酚、單寧含量^[21]，用三氯化鋁顯色法測定總類黃酮含量^[22]，用正丁醇鹽酸法測定原花色素含量^[23]，用分光光度法測定果皮總花色苷含量^[24]。

1.2.3 簡單重復(fù)序列（SSR）引物合成與PCR擴(kuò)增 參考季晨飛等^[25]的方法合成24對簡單重復(fù)序列（SSR）引物，用于父母本與雜交F₁代親緣關(guān)系的鑒定。采集親本與50株雜交F₁代實(shí)生苗的幼嫩葉片，用植物DNA提取試劑盒提取DNA，所有操作均按照說明書的步驟進(jìn)行。取2 μl DNA樣品，用1%瓊脂糖凝膠電泳、紫外分光光度計(jì)（Nanodrop ND-1000 SpectropHotometer）對DNA樣品進(jìn)行質(zhì)量濃度檢測。將DNA質(zhì)量濃度稀釋至100 ng/μl，在-80 ℃冰箱中保存。

PCR擴(kuò)增總體積為25 μl，其中含有12.5 μl 2×Rapid Taq Master Mix，各1 μl SSR上游、下游引物，1 μl DNA，9.5 μl ddH₂O。反應(yīng)程序：95 ℃ 3 min；95 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃10 min。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過5%聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行鑒定，在銀染液中染色15 min后在顯色液中浸泡5 min（其間不斷輕輕晃動(dòng)），將顯色好的凝膠用蒸餾水沖洗2次后在膠片燈上拍照記錄。

1.2.4 雜交F₁代葡萄真實(shí)性的鑒定 從24對SSR引物中篩選出在父母本間有明顯差異和特征性條帶的多態(tài)性SSR引物，用于50株雜交F₁代葡萄真實(shí)性鑒定。雜交F₁代的擴(kuò)增結(jié)果中包含父母本差異性條帶的為真雜種，沒有父母本差異性條帶的或只含有母本差異性條帶的可能為假雜種。對于條帶模糊不清或偶然出現(xiàn)新條帶的樣本，需要通過PCR克隆3次來進(jìn)行真實(shí)性驗(yàn)證。

1.2.5 雜交F₁代葡萄遺傳多樣性分析 對親本與雜交F₁代葡萄擴(kuò)增的特征性條帶進(jìn)行分析，對擴(kuò)增清晰且易于辨認(rèn)的特征性條帶進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，在聚丙烯酰胺凝膠相同的移動(dòng)位置上有明顯條帶的記錄為“1”，否則記錄為“0”，建立數(shù)字矩陣。用分子生物學(xué)分析軟件NTSYS-pc2.10e計(jì)算雜交F₁代葡萄的遺傳相似性系數(shù)，并進(jìn)行聚類分析，建立樹形圖。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 統(tǒng)計(jì)親本的中親值（父母本的平均值）、子代平均值、變異系數(shù)（CV）[計(jì)算公式：CV=S/F×100%。式中，S代表親本與雜交后代的標(biāo)準(zhǔn)差，F(xiàn)表示雜交后代各項(xiàng)生理指標(biāo)數(shù)據(jù)的均值]、優(yōu)勢率（H_a）[計(jì)算公式：H_a=（F-MP）/MP×100%。式中，MP代表雙親均值]和組合傳遞力（T_a）[計(jì)算公式：T_a=F/MP×100%]。用GrapH Pad Prism 5.0軟件制作試驗(yàn)數(shù)據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)差、標(biāo)準(zhǔn)曲線，用SPSS 25.0軟件進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 葡萄親本與雜交F₁代在不同發(fā)育時(shí)期果實(shí)品質(zhì)的比較

本試驗(yàn)從鐘山紅玉、鐘山紅和雜交F₁代葡萄盛花后40 d開始測量果實(shí)不同發(fā)育時(shí)期的基本品質(zhì)數(shù)據(jù)。從表1、表2、表3可以看出，父本鐘山紅玉自盛花后40 d開始，單果質(zhì)量、縱橫徑和可溶性固形物含量顯著升高，到盛花后80 d開始趨于穩(wěn)定，隨后開始下降；可滴定酸含量從盛花后40 d開始迅速下降，到盛花后100 d趨于穩(wěn)定。母本鐘山紅和雜交F₁代葡萄自盛花后80 d開始，單果質(zhì)量與縱橫徑整體上明顯增加；可滴定酸含量自盛花后80 d開始下降，到盛花后120 d達(dá)到最低值，其中雜交F₁代的可滴定酸含量與親本相比顯著降低，僅為0.39 g/L；可溶性固形物含量在盛花后100 d趨于穩(wěn)定，在盛花后120 d達(dá)到最大值，鐘山紅、雜交F₁代的可溶性固形物含量分別為19.50 °Bx、19.47 °Bx。

2.2 葡萄親本與雜交F₁代在不同發(fā)育時(shí)期果實(shí)色澤的變化規(guī)律

經(jīng)過田間觀察發(fā)現(xiàn)，父本鐘山紅玉果肉在盛花后5～7 d開始轉(zhuǎn)色，果皮在盛花后35～40 d開始轉(zhuǎn)色，母本鐘山紅、雜交F₁代果皮在盛花后45～50 d開始轉(zhuǎn)色。分析表4、表5和表6可知，隨著果實(shí)發(fā)育的進(jìn)行，果實(shí)顏色逐漸加深，父母本和F₁代的L^*從盛花后40 d開始逐漸上升，到盛花后120 d達(dá)到最大值并趨于穩(wěn)定，其中母本、F₁代的L^*較為接近，父本在盛花后40～60 d的L^*要高于母本、F₁代。父本的a^*、b^*在盛花后40 d達(dá)到最大值，到盛花后80 d開始轉(zhuǎn)為負(fù)值；c^*在盛花后40 d最高，之后開始下降并趨于平穩(wěn)；綜合色值（h）在盛花后60 d顯著下降，之后開始升高，至盛花后120 d達(dá)到最大值。

母本鐘山紅、雜交F₁代的a^*、b^*總體呈波動(dòng)變化的趨勢，h總體呈先下降后升高的趨勢，母本鐘山紅的C自盛花后40 d開始逐漸升高，到盛花后120 d達(dá)到最大值，雜交F₁代的C在盛花后80 d突然下降，之后逐漸回升并趨于穩(wěn)定。

2.3 葡萄親本間多態(tài)性引物的篩選

如圖1所示，從24對葡萄基因組引物中篩選出6對父母本有差異的引物，占比為25%。然后根據(jù)雜交F₁代中有無父本特征性條帶，從這6對引物中再篩選出3對含有父本特征性條帶的SSR引物用于父本鐘山紅玉、母本鐘山紅與雜交F₁代親緣關(guān)系的鑒定。表7列出了3對含有父本特征性條帶的SSR引物序列與篩選結(jié)果。

引物序號標(biāo)注在每對引物對應(yīng)的條帶上方，左側(cè)為父本，右側(cè)為母本；箭頭所指引物為6對父母本有差異的特異性引物。

2.4 鐘山紅玉與鐘山紅雜交F₁代真實(shí)性鑒定

用選出的3對含有父母本特征性條帶的SSR引物對50株鐘山紅玉與鐘山紅雜交的F₁代進(jìn)行檢測，其中引物5的鑒定效率最高，有48株雜交F₁代含有父本特征性條帶，真雜種率達(dá)到96%；用引物11、22進(jìn)行擴(kuò)增的結(jié)果中，含有父本特征性條帶的植株數(shù)分別為46株、43株，真雜種率分別達(dá)到92%、86%。圖2、圖3和圖4分別為3對SSR引物對父母本和部分雜交后代的擴(kuò)增結(jié)果。通過3對引物的相互驗(yàn)證可知，在50株雜交F₁代中，至少有43株得到3對引物的驗(yàn)證。

2.5 雜交后代與親本的聚類分析

綜合上述3對引物對母本鐘山紅、父本鐘山紅玉及其雜交后代的PCR擴(kuò)增結(jié)果，共獲得7個(gè)位點(diǎn)，由此建立數(shù)字矩陣，用分子生物學(xué)分析軟件NTSYSpc 2.20v分析后代與親本間的相似系數(shù)。結(jié)果顯示，母本鐘山紅與父本鐘山紅玉間的相似度較低，遺傳相似系數(shù)僅為0.143。雜交F₁代的遺傳傾向?yàn)?.143～1.00，其中1號植株與47號、48號等植株之間的遺傳相似性最低，為0.143。大部分雜交F₁代植株間的相似系數(shù)為0.857～1.000。母本鐘山紅與2號、4號、47號等雜交F₁代植株間，6號、7號、10號等雜交F₁代植株間以及44號、26號、35號等雜交F₁代植株間的遺傳相似性最高，達(dá)到1.00。

圖5中的非加權(quán)組平均法（UPGMA）聚類分析結(jié)果顯示，在遺傳相似系數(shù)0.33處可將父母本及43株雜交F₁代植株分為2類，在遺傳相似系數(shù)0.857處可進(jìn)一步將其細(xì)分為4個(gè)亞類，其中第ⅰ類與母本鐘山紅聚在一起，共有雜交F₁代植株38株，第ⅱ類有雜交F₁代植株3株，第ⅲ類與父本鐘山紅玉聚在一起，只有雜交F₁代植株1株，第ⅳ類有雜交F₁代植株6株。

2.6 鐘山紅玉與鐘山紅雜交F₁代果實(shí)基本品質(zhì)性狀的遺傳分析

如表8所示，鐘山紅玉與鐘山紅雜交F₁代果實(shí)在成熟時(shí)的皮肉比、固酸比等指標(biāo)的變異系數(shù)較高，在F₁代中出現(xiàn)較廣泛的分離，可溶性固形物含量、果形指數(shù)等指標(biāo)表現(xiàn)出一定的超高親優(yōu)勢，超高親率分別為20.58%、35.26%，皮肉比、可滴定酸含量的雜種優(yōu)勢率為負(fù)值，分別為-5.26%、-41.58%，且超低親率較高，表現(xiàn)出低于雙親的遺傳特點(diǎn)。平均粒質(zhì)量、出汁率等8項(xiàng)指標(biāo)的組合傳遞力為58.42%～108.25%，表現(xiàn)出連續(xù)分布的特點(diǎn)。

由圖6可知，鐘山紅玉與鐘山紅雜交F₁代果實(shí)的基本品質(zhì)指標(biāo)呈現(xiàn)廣泛的分離，符合數(shù)量性狀遺傳特點(diǎn)。其中可滴定酸含量、出汁率、pH值、皮肉比等指標(biāo)的平均值高于親本平均值，而平均單果質(zhì)量、可溶性固形物含量、固酸比等指標(biāo)的平均值低于親本平均值。后代的平均粒質(zhì)量大部分低于雙親，呈現(xiàn)趨小方向分離的特點(diǎn)，雙親間果形指數(shù)、可溶性固形物含量相距較大，后代的相應(yīng)指標(biāo)大多介于雙親之間，呈現(xiàn)明顯的趨雙親遺傳趨勢。

2.7 鐘山紅玉與鐘山紅雜交F₁代果實(shí)酚類物質(zhì)含量的遺傳特點(diǎn)

2.7.1 鐘山紅玉與鐘山紅雜交F₁代果實(shí)的果皮中酚類物質(zhì)含量的遺傳特點(diǎn) 如表9所示，鐘山紅玉與鐘山紅雜交F₁代果實(shí)的果皮中各酚類物質(zhì)含量均表現(xiàn)出數(shù)量性狀遺傳特點(diǎn)，變異系數(shù)為21.79%～31.58%，其中總類黃酮含量變異最為明顯，變異系數(shù)為31.58%，后代個(gè)體間差異較大。雜交F₁代果實(shí)的果皮中5種酚類物質(zhì)優(yōu)勢率均為負(fù)值，總花色苷含量的組合傳遞力最低，為58.42%，超低親率為30.94%～48.15%，表現(xiàn)出明顯低于雙親的遺傳特點(diǎn)。

由圖7可知，雜交F₁代果實(shí)的果皮中所含5種酚類物質(zhì)含量均表現(xiàn)出較廣泛的分離，符合正態(tài)分布的遺傳規(guī)律。其中F₁代果皮中總酚含量的平均值低于親本果皮中總酚含量的平均值，而F₁代果皮中單寧含量、總類黃酮含量、原花色素含量高于親本平均值，表現(xiàn)出一定的超親優(yōu)勢。父母本的總酚含量、總類黃酮含量較為接近，1個(gè)雜交F₁代植株果實(shí)的果皮中總酚含量達(dá)到24.59 mg/g的，顯著高于親本。雜交F₁代中原花色素含量的植株間差異較大，F(xiàn)₁代中含量最低的是0.56 mg/g，而含量最高的則達(dá)到5.89 mg/g，沒有表現(xiàn)出明顯的趨雙親遺傳特點(diǎn)。

2.7.2 葡萄雜交F₁代果實(shí)的果肉中酚類物質(zhì)含量的遺傳變異分析 如表10所示，鐘山紅玉與鐘山紅雜交F₁代果肉中酚類物質(zhì)含量的變異系數(shù)為19.17%～35.92%，其中單寧含量的變異較為明顯，且組合傳遞力達(dá)到142.39%，4種酚類物質(zhì)含量的優(yōu)勢率中除總酚含量優(yōu)勢率是負(fù)值外，其余均大于0，原花色素含量的優(yōu)勢率最高，為40.26%，超高親率達(dá)到59.58%，表現(xiàn)出明顯的超雙親遺傳的特點(diǎn)。

由圖8可知，雜交F₁代果實(shí)的果肉中4種酚類物質(zhì)含量的平均值均低于親本平均值，其中F₁代果肉中單寧含量、總類黃酮含量高于母本鐘山紅的只有5個(gè)，表現(xiàn)出明顯的雜種優(yōu)勢。雙親果實(shí)的果肉中原花色素含量相差較多，在雜交F₁代中呈現(xiàn)較廣泛的分布，并且表現(xiàn)出趨小方向分離的特點(diǎn)。此外與果皮相比，雜交F₁代果實(shí)果肉中的酚類物質(zhì)含量均顯著低于果皮中的相應(yīng)含量，F(xiàn)₁代果肉中總酚含量最高值僅為0.83 mg/g，F(xiàn)₁代果肉中原花色素含量最高值僅為0.039 mg/g。

3 討論

目前，常規(guī)雜交育種、雜種優(yōu)勢育種等育種手段仍然是選育優(yōu)質(zhì)葡萄新品種的主要方法，如通過只含有雌花的山葡萄品種左山二與歐亞種釀酒葡萄小紅玫瑰進(jìn)行品種間雜交可以獲得酸度低、糖度高的高品質(zhì)后代^[26]。以玫瑰香作母本、巨峰作父本雜交獲得的四倍體歐美雜交種葡萄巨玫瑰同時(shí)具有巨峰葡萄的優(yōu)良抗性和玫瑰香的各項(xiàng)優(yōu)良性狀^[27-28]。此外，以四倍體葡萄巨玫瑰作母本、二倍體葡萄玫瑰香作父本，可以培育出胚萌發(fā)率達(dá)到43.74%的三倍體的無核、大粒且有香味的優(yōu)良單株后代^[29]。以玫瑰香作母本、歐亞種葡萄紅地球作父本選育出的中早熟新品種金田玫瑰兼有母本濃郁的玫瑰香味和父本紫紅色的果皮、多汁的果肉，極大地提高了產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)價(jià)值^[30]。

葡萄的果粒大小、質(zhì)量、可溶性固形物含量和可滴定酸含量等基本品質(zhì)的好壞不僅會(huì)影響鮮食葡萄的口感，也決定了葡萄是否具有優(yōu)良的釀酒性能和營養(yǎng)價(jià)值。郭修武等^［31］對5個(gè)葡萄自交組合后代與10個(gè)雜交組合后代的果實(shí)基本品質(zhì)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)單果質(zhì)量、可溶性固形物含量和可滴定酸含量均呈現(xiàn)連續(xù)的正態(tài)分布遺傳規(guī)律，其中單果質(zhì)量與可滴定酸含量呈現(xiàn)低于雙親遺傳的現(xiàn)象，可溶性糖含量表現(xiàn)出明顯的加性效應(yīng)，呈現(xiàn)超越雙親遺傳的效應(yīng)，為親本選擇提供了理論基礎(chǔ)。郭權(quán)等^［32-33］以紅地球、山葡萄品種雙優(yōu)為親本，通過正反交培育雜交后代，結(jié)果顯示，正交組合后代的可溶性固形物含量表現(xiàn)為超親遺傳，平均值高于親本平均值，可滴定酸含量與親本間的差異較小，其均值接近親本平均值；反交組合后代中的可溶性糖含量平均值低于親本平均值，呈低于雙親遺傳的效應(yīng)，可滴定酸含量平均值高于親本平均值，呈超越雙親遺傳的特點(diǎn)。正反交組合后代中均存在一定程度的母性遺傳特點(diǎn)，可為葡萄育種親本的選配提供理論依據(jù)。在本研究中，母本鐘山紅是從魏可實(shí)生系選育而來的雄性不育晚熟新品種，父本鐘山紅玉是兩年生紅肉葡萄，雜交后代的可溶性固形物含量大部分高于親本平均值，表現(xiàn)出很強(qiáng)的超親優(yōu)勢，可滴定酸含量大多數(shù)低于親本平均值，呈低于雙親遺傳的特點(diǎn)，后代的平均粒質(zhì)量大部分低于雙親，呈現(xiàn)趨小方向分離的特點(diǎn)。這與歐美雜交種葡萄品種間雜交、歐美雜交種葡萄與歐亞種葡萄雜交、山葡萄種內(nèi)雜交后代可滴定酸含量平均值高于中親值的結(jié)果不一致^[34]，表明親本組合不同，遺傳性狀會(huì)出現(xiàn)較大差異^[17]。

酚類物質(zhì)含量對葡萄的果實(shí)品質(zhì)、風(fēng)味和色澤具有重要影響，其中花色苷含量是決定果實(shí)顏色的關(guān)鍵因素^[35]。在本研究中，鐘山紅與鐘山紅玉雜交后代果皮中的總花色苷含量大部分低于親本平均值，超低親比例為48.15%，呈低于雙親遺傳的特點(diǎn)，表明果皮中花色苷含量的遺傳不具備雜種優(yōu)勢。此外，雜交后代中的果皮均表現(xiàn)為紅色，而果肉為白色，說明果實(shí)顏色的遺傳可能受到控制果實(shí)顏色有無的主基因和控制果色深淺的多個(gè)基因共同控制，既表現(xiàn)出質(zhì)量性狀遺傳的特點(diǎn)，又存在一定的數(shù)量性狀遺傳規(guī)律^[35-36]。果肉中原花色素含量優(yōu)勢率最高，達(dá)40.26%，超高親率達(dá)到59.58%，表現(xiàn)出明顯的超親優(yōu)勢，單寧含量、總類黃酮含量表現(xiàn)出雜種優(yōu)勢。雙親的原花色素含量相差較多，雜交后代呈現(xiàn)較廣泛的分離，并且表現(xiàn)出趨小方向分離的特點(diǎn)。

通過SSR分子標(biāo)記技術(shù)^［37-40］對母本鐘山紅與父本鐘山紅玉雜交F₁代進(jìn)行雜交純度鑒定，發(fā)現(xiàn)50株雜交F₁代中至少有43株得到3對SSR特異性引物的鑒定，通過對親本和雜交后代果實(shí)基本品質(zhì)和酚類物質(zhì)含量的測定，得出果實(shí)基本品質(zhì)性狀呈現(xiàn)廣泛分離，符合數(shù)量性狀的遺傳特點(diǎn)。果皮中總花色苷含量呈低于雙親遺傳的特點(diǎn)，果肉中總類黃酮、原花色素含量呈超高親遺傳的特點(diǎn)，但果實(shí)顏色的遺傳機(jī)制尚未完全探明，還需要進(jìn)一步的研究。

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（責(zé)任編輯：徐 艷）