倖華珍 李晶 張琦 王濤

摘 要：我國(guó)綜合國(guó)力提升，人民對(duì)果蔬農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量提出了更高的要求，建立簡(jiǎn)單、快速和高效的果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留技術(shù)至關(guān)重要。

關(guān)鍵詞：果蔬農(nóng)產(chǎn)品；農(nóng)藥殘留；快速檢測(cè)技術(shù)

為了滿足不同區(qū)域地區(qū)對(duì)果蔬農(nóng)產(chǎn)品的需求，有些果蔬農(nóng)產(chǎn)品需要遠(yuǎn)距離運(yùn)輸，在運(yùn)輸中為保證果蔬農(nóng)產(chǎn)品的新鮮與品質(zhì)，人們往往會(huì)采用防腐劑和色素等添加，這一定程度上會(huì)導(dǎo)致人體健康遭受威脅，同時(shí)，隨著人民生活水平不斷提升，對(duì)果蔬農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全更加重視，提出更高要求，加強(qiáng)果蔬農(nóng)產(chǎn)品殘留檢測(cè)，明確和建立簡(jiǎn)單、快速和高效果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留技術(shù)至關(guān)重要。

前人研究表明，果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)種類繁多，目前常見(jiàn)的果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)可分為常規(guī)檢測(cè)和快速檢測(cè)兩大類型。果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留常規(guī)檢測(cè)技術(shù)主要包含氣相色譜法、高效液相色譜法等，這類型果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)方法的結(jié)果真實(shí)性、準(zhǔn)確性和靈敏度比較高，但是由于需要進(jìn)行繁瑣的樣品準(zhǔn)備處理，導(dǎo)致檢測(cè)成本高和時(shí)間較長(zhǎng)。同時(shí)由于果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留常規(guī)檢測(cè)技術(shù)操作難度較高，不能滿足人們?nèi)找嬖鲩L(zhǎng)的快速無(wú)損檢測(cè)的實(shí)際需求，不適宜當(dāng)前環(huán)境和市場(chǎng)需求。而隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步與發(fā)展，許多果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)逐漸應(yīng)用到實(shí)際生產(chǎn)中來(lái)，目前常見(jiàn)的果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)主要為免疫分析法、光譜分析法、酶抑制法和生物傳感器等，新型快速果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)技術(shù)的出現(xiàn)使得果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)實(shí)現(xiàn)了質(zhì)的飛躍，提高了果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留安全性、快速性與準(zhǔn)確性，大大節(jié)約了檢測(cè)成本。為此，本研究綜述分析了現(xiàn)存果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)的方法、原理應(yīng)用范圍和不足之處，并對(duì)未來(lái)可能的發(fā)展趨勢(shì)、應(yīng)用前景綜述分析，以期為果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)深入研究提供理論參考依據(jù)。

1 酶抑制快速檢測(cè)技術(shù)法

酶抑制快速檢測(cè)技術(shù)是利用酶的相關(guān)功能基因受到外界某些物質(zhì)的影響，導(dǎo)致對(duì)應(yīng)的酶活性出現(xiàn)下降或者喪失作用的一種檢測(cè)技術(shù)，該技術(shù)與20世紀(jì)60年代開(kāi)始得到應(yīng)用，在20世紀(jì)80年代得到廣泛的應(yīng)用，在各類果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)中該方法較為成熟[1]。該果蔬農(nóng)產(chǎn)品快速檢測(cè)技術(shù)在農(nóng)藥殘留檢測(cè)的原理是利用昆蟲(chóng)毒理學(xué)的原理，利用有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)動(dòng)物體內(nèi)乙酰膽堿酶（AChE）具有抑制作用的方法，即當(dāng)試驗(yàn)樣品中含有有機(jī)磷或者氨基甲酸酯類農(nóng)藥時(shí)，則乙酰膽堿酶活性被抑制，試驗(yàn)樣品中加入的底物就不會(huì)被酶水解，進(jìn)而不產(chǎn)生顯色。但是當(dāng)試驗(yàn)樣品中不含有時(shí)，酶活性則不會(huì)被抑制，試驗(yàn)樣品中加入的底物就會(huì)被酶水解利用，進(jìn)而與顯色劑反應(yīng)出現(xiàn)顯色，就可以通過(guò)目測(cè)顏色的變化或利用分光光度計(jì)測(cè)定對(duì)應(yīng)吸光度值，計(jì)算出酶抑制率，進(jìn)而判斷出樣品中農(nóng)藥殘留的情況[2-3]。目前基于該原理研究開(kāi)發(fā)的快速檢測(cè)卡（顯色紙片法）和儀器測(cè)定法（分光光度計(jì)法）在國(guó)際內(nèi)外得到了廣泛的應(yīng)用。

酶抑制快速檢測(cè)技術(shù)方法雖然可在一定程度上滿足市場(chǎng)所需的快速無(wú)損檢測(cè)的實(shí)際需求，但是前人研究發(fā)現(xiàn)該技術(shù)方法存在檢測(cè)偏差和盲區(qū)，該快速檢測(cè)技術(shù)方法只能對(duì)果蔬農(nóng)產(chǎn)品有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留總量進(jìn)行檢測(cè)，不能準(zhǔn)確識(shí)別農(nóng)藥的具體類型和殘留量，同時(shí)由于酶活性、底物濃度和反應(yīng)時(shí)間等具有特異性，試驗(yàn)結(jié)果容易受帶干擾，其靈敏度和準(zhǔn)確性還有待進(jìn)一步提升，因此該方法主要用于果蔬農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留物普查。在未來(lái)如何改善酶試劑的質(zhì)量是提升酶抑制快速檢測(cè)技術(shù)結(jié)果準(zhǔn)確性的重中之重。

2 免疫分析快速檢測(cè)技術(shù)法

免疫分析法是利用有毒物質(zhì)與標(biāo)記的毒性進(jìn)行結(jié)合抗體監(jiān)測(cè)有毒物質(zhì)的一種方法，由美國(guó)科學(xué)家Berson和Yalow最早提出發(fā)明，而在農(nóng)藥上的免疫分析發(fā)現(xiàn)是在1986年由Centeno提出。免疫分析快速檢測(cè)技術(shù)法的關(guān)鍵核心是抗原和抗體的制備，需要與特定底物進(jìn)行標(biāo)記，依據(jù)標(biāo)記物的不同，可將免疫分析快速檢測(cè)技術(shù)法分為：放射免疫標(biāo)記技術(shù)（RIA）、酶免疫標(biāo)記技術(shù)（ELISA）、磁敏免疫分析（MI）、熒光免疫分析（FIA）、膠體金免疫技術(shù)（CGIA）和化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)（CLIA）。而目前在果蔬農(nóng)產(chǎn)品快速檢測(cè)技術(shù)方法中以酶免疫標(biāo)記技術(shù)（ELISA）最為常用。

酶免疫標(biāo)記技術(shù)法（ELISA）的基本原理是利用酶標(biāo)記抗體或者酶標(biāo)記抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后與的酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，進(jìn)行果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留定量檢測(cè)，其中按照檢測(cè)方法不同可分為直接和間接兩種方法。直接方法是將一定量的農(nóng)藥抗體滴定到微孔板等載體上面，然后利用標(biāo)定的酶農(nóng)藥抗原與待檢測(cè)的農(nóng)藥混合，兩者會(huì)與固定的一定量的農(nóng)藥抗體產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，經(jīng)過(guò)一段的反應(yīng)時(shí)間后，對(duì)微孔板進(jìn)行洗脫，將上面未進(jìn)行反應(yīng)物質(zhì)洗脫掉，并加入反應(yīng)底物和顯色劑，最終將測(cè)定數(shù)值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中來(lái)計(jì)算帶測(cè)定物質(zhì)農(nóng)藥濃度。間接方法是指將一定量的農(nóng)藥-蛋白偶合物之間相互競(jìng)爭(zhēng)，然后與溶液中的一定量抗體結(jié)合，經(jīng)過(guò)一段的反應(yīng)時(shí)間后，將上面未進(jìn)行反應(yīng)物質(zhì)洗脫掉，并加入反應(yīng)底物和顯色劑，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線上的數(shù)值對(duì)待檢物質(zhì)農(nóng)藥濃度進(jìn)行計(jì)算。酶免疫標(biāo)記技術(shù)法的應(yīng)用方法如下表1所示，目前現(xiàn)有的酶免疫標(biāo)記技術(shù)法已經(jīng)克服了傳統(tǒng)的操作繁瑣等方法，纏著高靈敏度、快捷的方向發(fā)展，在果蔬農(nóng)產(chǎn)品快速檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用。但是仍存在一定的局限性，例如農(nóng)藥抗體的制備難度大、開(kāi)發(fā)費(fèi)用較高、不適用于多種農(nóng)藥殘留的聯(lián)合分析等。

3 生物傳感器快速檢測(cè)技術(shù)法

生物傳感器發(fā)的原理是利用生物反應(yīng)或者生物物質(zhì)之間發(fā)生的親和作用，進(jìn)而有選擇性的對(duì)生物試劑的化學(xué)成分、生產(chǎn)過(guò)程等相關(guān)信息的方法。主要控制主體為傳感器，近年來(lái)在醫(yī)學(xué)、生物監(jiān)測(cè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等方面得到廣泛的應(yīng)用。下面對(duì)果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留檢測(cè)常用的生物識(shí)別元件進(jìn)行分類介紹：

3.1 酶?jìng)鞲衅鞣?/p>

酶?jìng)鞲衅鞣煞譃槊敢种菩秃兔杆庑停渲?，酶抑制型傳感器法與酶抑制法相類似，都是利用酶活性與農(nóng)藥之間的相互抑制作用，酶的活性變化與農(nóng)藥濃度密切相關(guān)，常用的測(cè)定方法分別為電化學(xué)法、熒光法、測(cè)溫法等。而酶水解型利用的是酶與底物之間的水解反應(yīng)，通過(guò)傳感器將底物信號(hào)轉(zhuǎn)變成電或者光等信號(hào)，從而檢測(cè)出帶測(cè)定物質(zhì)農(nóng)藥濃度的一種方法。

3.2 免疫傳感器法

該方法與免疫分析快速檢測(cè)技術(shù)法類似，免疫傳感器法則屬于固相免疫分析法，即通過(guò)將農(nóng)藥抗體或者半抗原固定在分析儀等支撐物表面來(lái)檢測(cè)果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留物的方法。而免疫傳感器則是可以通過(guò)換能器將免疫分析結(jié)果進(jìn)行分析，實(shí)現(xiàn)果蔬農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留物的定量測(cè)定。

4 光譜分析快速檢測(cè)技術(shù)法

光譜分析快速檢測(cè)技術(shù)法主要是利用農(nóng)藥分子的光譜特性，同時(shí)結(jié)合化學(xué)計(jì)量方法進(jìn)行農(nóng)藥鑒定。較之前的研究方法相比，光譜分析快速檢測(cè)技術(shù)法不需要進(jìn)行前期的樣品處理和檢測(cè)試劑的配制。常見(jiàn)的光譜分析快速檢測(cè)技術(shù)法主要有可見(jiàn)/近紅外、紅外、拉曼光譜和激光誘導(dǎo)擊穿光譜等方法。但是該方法需要大量的分析和模型構(gòu)建，前期工作可能較為繁瑣。

參考文獻(xiàn)

[1] 李小燕，李敬波，吳瑞茹，等.氣相色譜法同時(shí)測(cè)定普通白菜中10種有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留[J].河南化工，2021，38（1）：52-54.

[2] 趙素娟，包琴，趙麗杰.淺析酶抑制法在農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用及酶源的研究進(jìn)展[J].食品安全導(dǎo)刊，2022（20）：168-171.

[3] 袁哲，李庭鉑.果蔬農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)果菜，2021，41（9）：75-78.