湯慧娟 陳潔 劉景河 謝貽中

痤瘡多發(fā)于顏面部及胸背部,患者多出現(xiàn)粉刺、丘疹、結(jié)節(jié)等臨床癥狀,是皮膚科常見的慢性炎癥性疾病[1,2]。痤瘡發(fā)生風(fēng)險較高,病程較長,極易反復(fù)發(fā)作,其可導(dǎo)致患者皮膚表面殘留色素沉著,嚴(yán)重影響患者美觀程度[3,4]。一項調(diào)查顯示,痤瘡多發(fā)于青少年人群,對其身心健康造成嚴(yán)重威脅,特別是針對重度痤瘡患者,恢復(fù)難度更大,進(jìn)而導(dǎo)致不良影響越深遠(yuǎn)[5]。然而痤瘡的具體發(fā)生機制并未完全揭示,故探究有效的痤瘡早期診斷及治療的方法是提高治療效果的關(guān)鍵。既往報道顯示,炎癥在痤瘡形成過程中占據(jù)關(guān)鍵地位,多種因子共同作用進(jìn)而影響?zhàn)畀彴l(fā)生及進(jìn)展[6]。白介素-17(interleukin-17,IL-17)可激活并募集中性粒細(xì)胞,進(jìn)而誘導(dǎo)炎性因子含量上調(diào),最終導(dǎo)致機體炎性反應(yīng)進(jìn)一步嚴(yán)重[7]。腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)可增強中性粒細(xì)胞吞噬能力,此外亦可啟動機體固有免疫應(yīng)答產(chǎn)生,并釋放大量炎性因子,最終導(dǎo)致痤瘡患者病情嚴(yán)重程度加重[6]。研究顯示,外周血輔助性T細(xì)胞22(T-helper cell 22,Th22)可通過特異性釋放IL-22激活相關(guān)信號途徑參與諸多類型疾病形成及進(jìn)展過程[8]。另有報道顯示,痤瘡患者血清中IL-17、TNF-α、Th22細(xì)胞水平均明顯上調(diào)[3,9]。但筆者發(fā)現(xiàn)關(guān)于IL-17、TNF-α、Th22細(xì)胞水平與痤瘡患者嚴(yán)重程度的相關(guān)性研究較少,因此本研究將對其進(jìn)行分析,報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2020年5月至2022年1月在我院門診進(jìn)行治療的痤瘡患者78例作為觀察組,其中男41例,女37例;平均年齡(24.67±11.40)歲;平均病程(2.42±1.07)年。按Pillsbury 法分級,輕度(Ⅰ級)19例,中度(Ⅱ～Ⅲ級)39例,重度(Ⅳ級)20例。納入同一階段在我院體檢的健康體檢者47例作為對照組,其中男25例,女22例;平均年齡(25.24±12.89)歲。2組性別比、年齡等一般資料相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) (1)均與《中國痤瘡治療指南》中痤瘡診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]一致;(2)無自身免疫性疾病;(3)可定時治療并隨訪;(4)精神、意識均正常;(5)患者或家屬均同意參與本研究并簽訂知情同意書;(6)經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審批通過。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) (1)近3個月內(nèi)應(yīng)用抗生素、免疫抑制劑等藥物治療者;(2)藥物性及遲發(fā)性痤瘡者;(3)妊娠期及哺乳期者;(4)嚴(yán)重器官功能障礙者。

1.4 方法

1.4.1 標(biāo)本采集:2組研究對象均采集清晨空腹肘靜脈血4 ml并放入抗凝管中,靜置4 h后放入離心機(深圳市賽進(jìn)生物公司提供)中以3 000 r/min的速度離心10 min,取上清液置于-80℃超低溫冰箱(上海普和希健康醫(yī)療公司)中等待檢測。

1.4.2 IL-17、TNF-α、IL-22水平檢測: ELISA法:將標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行稀釋并加樣,隨后將其置于室溫下孵育90 min;通過ELISA液沖洗3次,然后加100 μl酶結(jié)合物工作液,并放在室溫下培養(yǎng)30 min;棄酶結(jié)合物工作液并通過ELISA液沖洗,沖洗完成后加90 μl底物溶液,并置于室溫下培養(yǎng)30 min終止。最后于450 nm處檢測2組吸光度值。

1.4.3 Th22細(xì)胞水平檢測: 采用流式細(xì)胞術(shù)的檢測方法,由研究對象肘靜脈血中提取單核細(xì)胞,然后植于培養(yǎng)板,加入抗菌素并于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng);5 h后將培養(yǎng)板取出并收集單核細(xì)胞。向細(xì)胞中加入10 μl抗人CD4單克隆抗體并于室溫下避光反應(yīng)30 min。完成上述操作后加2 ml破膜液,經(jīng)離心機以1 000 r/min的速度離心5 min,棄上清液并加10 μl IL-22單克隆抗體,然后經(jīng)多聚甲醛固定后置于流式細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測。

2 結(jié)果

2.1 2組IL-17、TNF-α、IL-22、Th22細(xì)胞水平比較 相較于對照組,觀察組IL-17、TNF-α、IL-22及Th22細(xì)胞水平均明顯上調(diào)(P<0.05)。見表1。

表1 2組IL-17、TNF-α、IL-22、Th22細(xì)胞水平比較

2.2 不同程度痤瘡患者IL-17、TNF-α、IL-22、Th22細(xì)胞水平比較 相較于輕度組,中、重度組IL-17、TNF-α、IL-22、Th22細(xì)胞水平均明顯上調(diào)(P<0.05);相較于中度組,重度組IL-17、TNF-α、IL-22、Th22細(xì)胞水平均明顯上調(diào)(P<0.05)。見表2。

表2 3組IL-17、TNF-α、IL-22、Th22細(xì)胞水平比較

2.3 IL-17、TNF-α和Th22細(xì)胞水平預(yù)測痤瘡患者嚴(yán)重程度的價值分析 采用ROC曲線分析IL-17、TNF-α、Th22細(xì)胞水平在預(yù)測痤瘡嚴(yán)重程度中的價值,結(jié)果顯示,IL-17、TNF-α、Th22預(yù)測痤瘡嚴(yán)重程度的曲線下面積(AUC)分別為0.736、0.750、0.849,靈敏度分別為94.74%、95.53%、100.00%,特異度分別為51.28%、61.54%、71.79%;三者在預(yù)測痤瘡嚴(yán)重程度中均具有較高價值(95%CI分別為0.604～0.843,0.619～0.855,0.731～0.929)。見表3,圖1。

圖1 痤瘡患者IL-17、TNF-α、Th22細(xì)胞水平預(yù)測痤瘡患者嚴(yán)重程度RUC曲線圖

表3 IL-17、TNF-α、Th22細(xì)胞水平ROC曲線分析結(jié)果

2.4 IL-17、TNF-α、Th22細(xì)胞水平與痤瘡患者嚴(yán)重程度的相關(guān)性 IL-17、TNF-α、Th22細(xì)胞水平與痤瘡患者嚴(yán)重程度均呈正相關(guān)(r=0.544,0.443,0.691,P=0.032,0.040,0.021)。見表4。

表4 IL-17、TNF-α、Th22細(xì)胞水平與痤瘡患者嚴(yán)重程度的相關(guān)性

3 討論

痤瘡是由機體免疫功能紊亂所致,病情較輕的人群不會出現(xiàn)明顯的臨床表現(xiàn),病情嚴(yán)重的人群可導(dǎo)致毛囊皮脂腺持續(xù)炎性反應(yīng),進(jìn)而導(dǎo)致粉刺、膿皰等形成,最終引發(fā)毛孔粗大、瘢痕形成,嚴(yán)重影響美觀[9,11]。痤瘡丙酸桿菌是痤瘡形成的重要因素,研究證實,其可在毛囊和皮脂腺內(nèi)寄生,當(dāng)皮脂腺分泌作用明顯上調(diào)時可導(dǎo)致痤瘡丙酸桿菌繁殖能力提高,可導(dǎo)致毛囊炎性形成,進(jìn)而引發(fā)IL-1、TNF-α等細(xì)胞因子大量釋放,加重炎性反應(yīng)[12]。

IL-17作為一種促炎因子,主要形成于Th17細(xì)胞,在T細(xì)胞引發(fā)的早期炎性反應(yīng)過程中扮演重要角色,其可明顯抑制炎性反應(yīng)組織中的中性粒細(xì)胞凋亡[3,13]。陸威等[14]對早期尋常性痤瘡患者皮損中IL-17表達(dá)情況進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)其表達(dá)明顯上調(diào),且與痤瘡形成及嚴(yán)重程度聯(lián)系緊密。李炳男等[15]通過構(gòu)建痤瘡模型大鼠并對大鼠模型血清中IL-17及IL-23濃度進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)痤瘡大鼠模型血清中IL-17及IL-23濃度均較正常大鼠顯著上調(diào),說明IL-17及IL-23均可作用于痤瘡形成過程,究其原因,是由于IL-17可通過促進(jìn)IL-1等前炎性因子大量釋放進(jìn)而導(dǎo)致IL-23表達(dá)異常上調(diào)所致。TNF-α形成于單核巨噬細(xì)胞,其可誘導(dǎo)炎性細(xì)胞活化進(jìn)而導(dǎo)致大量炎性介質(zhì)分泌,在固有性免疫應(yīng)答反應(yīng)啟動過程中占據(jù)核心地位,其已被證實可導(dǎo)致痤瘡典型性炎性性破壞[6,16]。耿春杰等[17]表明,TNF-α可增強局部炎性反應(yīng)并導(dǎo)致血管破壞,此外亦可參與誘導(dǎo)細(xì)胞增殖及分化,引發(fā)膠質(zhì)細(xì)胞增殖能力明顯升高,毛囊上部角化程度亦隨之增加,此時患者發(fā)生毛囊口角質(zhì)拴塞、粉刺等癥狀,病情進(jìn)一步加劇,最終導(dǎo)致癥狀積分明顯升高,說明隨著TNF-α濃度上調(diào),痤瘡患者病情越嚴(yán)重,癥狀積分亦隨之增加。Th22細(xì)胞是一類CD4+淋巴細(xì)胞亞群,其可通過釋放IL-22進(jìn)而參與誘導(dǎo)炎性發(fā)生[9]。Ivanova等[18]報道顯示,Th22細(xì)胞還可分泌TNF-α及IL-17等細(xì)胞因子,且在自身免疫性疾病等患者體內(nèi)顯著增加,與患者病情嚴(yán)重程度和臨床預(yù)后聯(lián)系緊密。本研究對痤瘡患者血清IL-17、TNF-α、IL-22及Th22細(xì)胞水平進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)觀察組IL-17、TNF-α、IL-22及Th22細(xì)胞水平均較對照組明顯上調(diào)。提示痤瘡形成可能與IL-17、TNF-α、IL-22及Th22細(xì)胞活化密切相關(guān),這與孫海燕等[9]報道結(jié)果一致。這是由于在痤瘡患者外周血中,Th22細(xì)胞可通過特異性釋放IL-22而促進(jìn)IL-17、TNF-α等炎性因子及趨化因子水平上調(diào),引發(fā)炎性細(xì)胞聚集,進(jìn)一步加劇患者炎性反應(yīng)[19]。我們按Pillsbury 法對78例痤瘡患者嚴(yán)重程度進(jìn)行分組,發(fā)現(xiàn)中、重度組IL-17、TNF-α、IL-22、Th22細(xì)胞水平均較輕度組明顯上調(diào);重度組IL-17、TNF-α、IL-22、Th22細(xì)胞水平均較中度組明顯上調(diào)。提示IL-17、TNF-α、IL-22、Th22細(xì)胞水平隨痤瘡患者嚴(yán)重程度增加而上調(diào)。

除此之外,我們通過繪制ROC曲線探究IL-17、TNF-α、Th22細(xì)胞水平在預(yù)測痤瘡嚴(yán)重程度中的價值,發(fā)現(xiàn)IL-17、TNF-α、Th22細(xì)胞預(yù)測痤瘡嚴(yán)重程度的曲線下面積(AUC)分別為0.736、0.750、0.849,靈敏度分別為94.74%、95.53%、100.00%,特異度分別為51.28%、61.54%、71.79%;三種指標(biāo)在預(yù)測痤瘡嚴(yán)重程度方面均具有一定的價值,尤其是Th22細(xì)胞。且Spearsson相關(guān)性分析顯示,IL-17、TNF-α、Th22細(xì)胞水平與痤瘡患者嚴(yán)重程度均呈正相關(guān)(r=0.544,0.443,0.691,P=0.032,0.040,0.021)。對于慢性炎性時期的痤瘡患者,其血清中IL-17、TNF-α及Th22細(xì)胞水平均與痤瘡形成及嚴(yán)重程度密切相關(guān),有望成為臨床治療痤瘡患者的潛在靶點。

綜上所述,痤瘡患者外周血中IL-17、TNF-α、Th22細(xì)胞水平均明顯上調(diào),與病情嚴(yán)重程度相關(guān),隨病情嚴(yán)重程度增加而上調(diào),在預(yù)測痤瘡嚴(yán)重程度方面具有重要價值,可為深入分析痤瘡形成機制及研發(fā)新型治療方法提供新思路。