廖 烘，劉 偉，龍運峰（邵陽學(xué)院附屬第一醫(yī)院兒科，湖南邵陽 417000）

血管瘤是嬰兒時期常見的一種良性血管腫瘤[1]。嬰兒血管瘤始于內(nèi)皮細胞的增生，隨后經(jīng)歷一段時間的增殖期后過渡到退化期[2]。在增殖性生長階段，血管瘤會出現(xiàn)多種臨床癥狀，包括潰瘍、出血、身體功能受損和皮膚表面破裂，退化期階段大多數(shù)血管瘤停止生長并開始縮小，目前的治療方法主要包括藥物治療、激光治療和手術(shù)切除[3]。然而，在臨床上嚴重的血管瘤難以治愈。因此，需要進一步了解血管瘤進展的機制。越來越多的證據(jù)表明，長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，LncRNA）在癌癥進展中具有多種調(diào)節(jié)功能，包括增殖、凋亡和遷移[4]。核富集轉(zhuǎn)錄本1（nuclear enriched abundant transcript 1，NEAT1）是一種致癌LncRNA，已有研究報道，沉默NEAT1可抑制人血管瘤內(nèi)皮細胞HemECs 增殖、遷移與侵襲[5]。但沉默NEAT1 抑制血管瘤進展的分子機制尚不完全明確。LncRNA 作為海綿可通過競爭性結(jié)合miRNA 進而調(diào)節(jié)mRNA 表達，該作用是其發(fā)揮調(diào)控作用的常見方式之一[6]。本研究通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)NEAT1 與微小RNA（micro RNAs，miR）-125b-5p，miR-125b-5p 與胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5（insulin-like growth factor binding protein 5，IGFBP5）存在靶向關(guān)系。相關(guān)研究顯示，miR-125b-5p 在血管瘤組織和細胞中低表達，過表達miR-125b-5p 可抑制HemECs 細胞增殖、促進細胞凋亡[7]；下調(diào)IGFBP5 可抑制血管瘤的進展[8]。而NEAT1 能否通過調(diào)節(jié)miR-125b-5p/IGFBP5 軸影響血管瘤進展尚不清楚。因此，本研究主要探究NEAT1 對血管瘤內(nèi)皮細胞增殖、凋亡、遷移的影響以及其作用機制。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集2016年3月～2019年3月在邵陽學(xué)院附屬第一醫(yī)院接受手術(shù)切除血管瘤的嬰兒血管瘤組織和瘤旁組織，共18 對。標本立即冷凍于-80℃中。所有參與者的法定監(jiān)護人均已簽署知情同意書。人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVES（上海拜力生物公司）；人血管瘤內(nèi)皮細胞HemECs，HDEC（上海澤葉生物公司）。將HUVES，HemECs，HDEC細胞在補充有10g/dl 胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)液中培養(yǎng)。

1.2 試劑與儀器 siRNA NEAT1（si-NEAT1）及其陰性對照（si-NC），miR-125b-5p 抑制物（miR-125b-5p inhibitor）及其陰性對照（inhibitor-NC）（上海美軒生物公司）；CCK-8 試劑盒（深圳市紐邦生物公司，貨號：CK04）；Annexin V-FITC 細胞凋亡試劑盒（溫州科淼生物公司，貨號：KMR0212222）；兔源一抗IGFBP5，增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）（貨號：ab29），B 細胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/lewkmia-2，Bcl-2）（貨號：ab32124），基質(zhì)金屬蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9，MMP-9）（貨號：ab 76003），GAPDH（貨號：ab9485）及辣根過氧化物酶（HRP）標記的羊抗兔二抗（貨號：ab109489）（美國Abcam 公司）。FK-SY96A 多功能酶標儀（山東方科儀器有限公司）；奧林巴斯BX53 光學(xué)顯微鏡[奧林巴斯(中國)有限公司]；Agilent NovoCyte Quanteon 流式細胞儀[安捷倫科技（中國）有限公司]。

1.3 方法

1.3.1 細胞培養(yǎng)及分組：取對數(shù)生長期的HemECs 細胞，分為Ct組、si-NC 組、si-NEAT1 組、si-NEAT1+i nhibitor-NC 組和si-NEAT1+miR-125b-5p inhibitor 組。si-NC 組、si-NEAT1 組、si-NEAT1+inhibitor-NC組和si-NEAT1+miR-125b-5p inhibitor 組分別轉(zhuǎn)染si-NC，si-NEAT1，si-NEAT1 和inhibitor-NC，si-NEAT1和miR-125b-5p inhibitor 于HemECs 細胞中，Ct組為未轉(zhuǎn)染的HemECs 細胞，轉(zhuǎn)染48 h 后進行后續(xù)實驗。

1.3.2 實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）檢測組織和細胞中NEAT1，miR-125b-5p 表達：使用Trizol 試劑提取組織和細胞的總RNA。將1μg RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA 后，使用Power SYBR? Green PCR master mix 在ABI 7500 PCR 系統(tǒng)上分析基因表達。使用2-ΔΔCt方法計算基因的相對表達量。引物序列見表1。

表1 qRT-PCR 引物序列

1.3.3 細胞活力檢測試劑盒（cell counting kit-8，CCK-8）及臺盼藍染色檢測細胞增殖：在96 孔板的每個孔中接種大約1×104個HemEC 細胞。接種48 h 后，每孔加入10 μl CCK-8 溶液，37 °C 培養(yǎng)2 h。通過使用酶標儀測量450 nm處吸光度來確定細胞增殖能力。將接種于96 孔板中的細胞培養(yǎng)2h 后，棄上清、PBS 洗滌、0.4g/dl 臺盼藍溶液染色2 min，染色呈藍色的細胞為死細胞，顯微鏡觀察細胞生長情況。

1.3.4 流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡：收集各組細胞并將細胞濃度調(diào)整為1×106個/ml。取200 μl 細胞懸液重懸于300 μl 結(jié)合緩沖液中，與5μl Annexin V-FITC/PI 輕輕混勻，避光15 min，流式細胞儀觀察細胞凋亡情況。

1.3.5 劃痕試驗檢測細胞遷移：將HemECs 細胞以1×106個/孔接種到6 孔板中，達到100%融合后，使用移液器吸頭對HemECs 細胞單層進行劃痕。用顯微鏡觀察劃痕后0，24 h 的劃痕面積，分別記錄劃痕面積為M0，M24，劃痕愈合率（%）=（1-M24/M0）×100%。

1.3.6 蛋白免疫印跡（Western blot）檢測IGFBP5，PCNA，Bcl-2，MMP-9 蛋白表達：使用RIPA 裂解緩沖液提取組織和細胞的總蛋白。在12g/dl SDSPAGE 上分離約30 μg 蛋白質(zhì)樣品并轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。用5g/dl 脫脂牛奶封閉后，將膜與抗IGFBP5（1∶1 000），PCNA（1∶1 000），Bcl-2（1∶2 000），MMP-9（1∶2 000），GAPDH（1∶2 000）的一抗在4℃孵育過夜。再將膜暴露于HRP 偶聯(lián)的二抗（1∶2 000）2 h。使用ECL 試劑檢測蛋白信號，Image J 軟件分析蛋白灰度值。

1.3.7 雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灒簶?gòu)建NEAT1 野生型質(zhì)粒（NEAT1-WT）和突變型質(zhì)粒（NEAT1-MUT），將NEAT1-WT 和NEAT1-MUT 分別與mimic NC 或miR-125b-5p mimic共轉(zhuǎn)染于HemECs細胞，48 h 后，觀察熒光素酶活性變化。構(gòu)建IGFBP5 野生型質(zhì)粒（IGFBP5-WT）和突變型質(zhì)粒（IGFBP5-MUT），將IGFBP5-WT 和IGFBP5-MUT 分別與mimic NC或miR-125b-5p mimic 共轉(zhuǎn)染于HemECs 細胞，48 h后，監(jiān)測熒光素酶活性變化。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 使用SPSS 19.0 進行統(tǒng)計分析，符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)表示為均值±標準差（±s），獨立樣本t檢驗用于測試兩組之間的差異，單因素方差分析用于評估多組之間的差異，進一步兩組間的比較采用SNK-q檢驗。瘤旁組織及血管瘤組織中的差異比較采用配對t檢驗，P＜ 0.05 為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NEAT1，miR-125b-5p，IGFBP5 蛋白在血管瘤組織和細胞中的表達 見表2。與瘤旁組織比較，血管瘤組織中NEAT1，IGFBP5 蛋白表達水平升高，miR-125b-5p 表達水平降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（均P＜0.05）。與HUVES 細胞比較，HemECs，HDEC 細胞中NEAT1，IGFBP5 蛋白表達升高，miR-125b-5p 表達降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=17.963，17.320，99.204；14.697，20.914，33.680，均P＜0.05）；與HemECs 細胞比較，HDEC細胞中NEAT1，IGFBP5 蛋白表達降低，miR-125b-5p 表達升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=8.795，8.036，14.241，均P＜0.05）；且HemECs 細胞中NEAT1，IGFBP5 蛋白表達量最高，miR-125b-5p 表達量最低，因此，選取HemECs 細胞為研究對象。

表2 NEAT1，miR-125b-5p，IGFBP5 蛋白在組織、細胞中的表達（±s，n=18）

表2 NEAT1，miR-125b-5p，IGFBP5 蛋白在組織、細胞中的表達（±s，n=18）

組織細胞FP瘤旁組織血管瘤組織HUVES 細胞HemECs 細胞HDEC 細胞NEAT11.00±0.002.87±0.2236.062＜0.0011.00±0.002.76±0.241.78±0.13187.909＜0.001 miR-125b-5p1.00±0.000.24±0.02161.220＜0.0011.00±0.000.19±0.020.45±0.041539.300＜0.001 IGFBP5/GAPDH0.27±0.021.45±0.1435.400＜0.0010.24±0.021.31±0.150.78±0.06194.423＜0.001項目tP

2.2 各轉(zhuǎn)染組HemECs 細胞中IGFBP5 蛋白、NEAT1，miR-125b-5p 表達比較 見表3。與si-NC組比較，si-NEAT1 組NEAT1，IGFBP5 蛋白表達降低，miR-125b-5p 表達升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=13.893，10.809，11.549，均P＜0.05）；與si-NEAT1+inhibitor-NC 組比較，si-NEAT1+miR-125b-5p inhibitor 組NEAT1 表達量變化差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.577，P＞0.05），miR-125b-5p 表達降低，IGFBP5 蛋白表達量升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（t=9.218，13.188，均P＜0.05）。

表3 NEAT1，miR-125b-5p，IGFBP5 蛋白在HemECs 細胞中的表達（±s，n=6）

表3 NEAT1，miR-125b-5p，IGFBP5 蛋白在HemECs 細胞中的表達（±s，n=6）

注：與Ct 組比較*t=83.283,14.207,11.690,均P＜0.05；與si-NC 組比較#t=13.893,11.549,10.809,均P＜0.05；與si-NEAT1 組比較&t=8.955,13.145,均P＜0.05；與si-NEAT1+inhibitor-NC 組比較@t=9.218,13.188,均P＜0.05。

項 目Ct 組si-NC 組 si-NEAT1 組 si-NEAT1+inhibitor-NC 組si-NEAT1+miR-125b-5p inhibitor 組FP NEAT11.00±0.00 1.01±0.12 0.32±0.02*#0.34±0.030.33±0.03247.139＜0.001 miR-125b-5p1.00±0.00 1.02±0.10 1.87±0.15*#1.86±0.141.19±0.11&@91.154＜0.001 IGFBP5/GAPDH1.29±0.18 1.31±0.20 0.41±0.04*#0.43±0.030.89±0.08&@71.542＜0.001

2.3 沉默NEAT1 對HemECs 細胞增殖、凋亡的影響 見表4。與si-NC 組比較，si-NEAT1 組A值、細胞生長率降低，細胞凋亡率升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=14.231，58.755，23.201，均P＜0.05）；與si-NEAT1+inhibitor-NC 組比較，si-NEAT1+miR-125b-5p inhibitor 組A值、細胞生長率升高，細胞凋亡率降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=13.830，13.644，9.818，均P＜0.05），

表4 沉默NEAT1 對HemECs 細胞A 值、細胞生長率及凋亡率的影響（±s，n=6）

表4 沉默NEAT1 對HemECs 細胞A 值、細胞生長率及凋亡率的影響（±s，n=6）

注：與Ct 組比較*t=12.066,58.607,23.358,均P＜0.05；與si-NC 組比較#t=14.231,58.755,23.201,均P＜0.05；與si-NEAT1 組比較&t=12.761,14.278,9.365,均P＜0.05；與si-NEAT1+inhibitor-NC 組比較@t=13.830,13.644,9.818,均P＜0.05。

類別Ct 組si-NC 組 si-NEAT1 組 si-NEAT1+inhibitor-NC 組si-NEAT1+miR-125b-5p inhibitor 組FP A 值1.12±0.13 1.13±0.11 0.45±0.04*#0.44±0.030.87±0.07&@96.486＜0.001細胞生長率（%） 99.37±0.28 99.41±0.22 32.28±2.79*#33.45±2.9469.77±5.82&@659.897＜0.001細胞凋亡率（%） 12.25±1.03 12.36±1.07 45.58±3.34*#46.03±3.2530.14±2.27&@289.741＜0.001

2.4 沉默NEAT1 對HemECs 細胞遷移的影響 與si-NC 組比較，si-NEAT1 組（20.33±1.23 vs 49.24±2.43）細胞劃痕愈合率降低（t=26.001，P＜0.05）；與si-NEAT1+inhibitor-NC 組比較，si-NEAT1+miR-125b-5p inhibitor 組（35.58±2.36 vs 21.04±1.21）細胞劃痕愈合率升高（t=13.429，P＜0.05），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.5 沉默NEAT1 對各組HemECs 細胞中增殖、凋亡、遷移相關(guān)蛋白表達的影響 見表5。與si-NC組比較，si-NEAT1 組PCNA，Bcl-2，MMP-9 蛋白表達降低（t=15.309，13.516，21.137，均P＜0.05），與si-NEAT1+inhibitor-NC 組比較，si-NEAT1+miR-125b-5pinhibitor 組PCNA，Bcl-2，MMP-9 蛋白表達升高（t=13.188，11.182，15.010，均P＜0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

表5 沉默NEAT1 對HemECs 細胞中PCNA，Bcl-2，MMP-9 蛋白表達的影響（±s，n=6）

表5 沉默NEAT1 對HemECs 細胞中PCNA，Bcl-2，MMP-9 蛋白表達的影響（±s，n=6）

注：與Ct 組比較*t=16.028,15.141,18.842,均P＜0.05；與si-NC 組比較#t=15.309,13.516,21.137,均P＜0.05；與si-NEAT1 組比較&t=12.324,12.187,15.465,均P＜0.05；與si-NEAT1+inhibitor-NC 組比較@t=13.188,11.182,15.010,均P＜0.05。

類別Ct 組si-NC 組si-NEAT1 組 si-NEAT1+inhibitor-NC 組 si-NEAT1+miR-125b-5p inhibitor 組FP PCNA/GAPDH1.25±0.131.27±0.14 0.36±0.04*#0.35±0.030.81±0.08&@135.344＜0.001 Bcl-2/GAPDH1.38±0.141.39±0.16 0.48±0.04*#0.50±0.050.97±0.09&@104.807＜0.001 MMP-9/GAPDH1.07±0.111.09±0.10 0.21±0.02*#0.22±0.020.55±0.05&@223.252＜0.001

2.6 NEAT1 與miR-125b-5p，miR-125b-5p 與IGFBP5存在靶向調(diào)控關(guān)系 Starbase 網(wǎng)站預(yù)測NEAT1 與miR-125b-5p，miR-125b-5p 與IGFBP5 的結(jié)合位點，見圖1。與mimic NC 和NEAT1-WT 共轉(zhuǎn)染組比較，miR-125b-5p mimic 和NEAT1-WT 共轉(zhuǎn)染組的熒光素酶活性降低（P＜0.05）；與mimic NC 和NEAT1-MUT 共轉(zhuǎn)染組比較，miR-125b-5p mimic 和NEAT1-MUT 共轉(zhuǎn)染組熒光素酶活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與mimic NC 和IGFBP5-WT 共轉(zhuǎn)染組比較，miR-125b-5p mimic 和IGFBP5-WT 共轉(zhuǎn)染組的熒光素酶活性降低（P＜0.05）；與mimic NC 和IGFBP5-MUT 共轉(zhuǎn)染組比較，miR-125b-5p mimic 和IGFBP5-MUT 共轉(zhuǎn)染組熒光素酶活性差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表6。

圖1 Starbase 網(wǎng)站預(yù)測NEAT1 與miR-125b-5p，miR-125b-5p 與IGFBP5 的結(jié)合位點

表6 熒光素酶活性比較（±s，n=6）

表6 熒光素酶活性比較（±s，n=6）

類別mimic NC 組 miR-125b-5p mimic 組tP NEAT1 WT1.08±0.140.28±0.0213.856＜0.001 MUT1.06±0.151.08±0.130.247＜0.001 IGFBP5 WT1.02±0.110.19±0.0118.407＜0.001 MUT 1.04±0.121.03±0.110.150＜0.001

3 討論

作為嬰兒期最常見的血管性腫瘤，血管瘤病變的位置和大小可能對嬰兒視力甚至生命構(gòu)成威脅[9]。目前，如何制定有效的血管瘤治療策略在近年來受到極大關(guān)注，這可能取決于對嬰兒血管瘤發(fā)病機制的充分了解[10]。因此探究嬰兒血管瘤進展的分子機制具有重要意義。

LncRNA 屬于長度超過200 nt 的非編碼RNA家族。雖然缺乏蛋白質(zhì)編碼潛力，但LncRNA 作為基因表達網(wǎng)絡(luò)中的重要調(diào)節(jié)因子，其在細胞增殖、發(fā)育和分化中發(fā)揮重要作用[11]。越來越多的研究表明LncRNA 在調(diào)控腫瘤進展中發(fā)揮重要的作用。NEAT1 作為一種LncRNA，參與癌癥的不同生物學(xué)過程。如敲除NEAT1 后，胃癌細胞增殖和轉(zhuǎn)移受到抑制，而細胞凋亡速度加快[12]；NEAT1 在膠質(zhì)瘤組織和細胞中高表達，敲低NEAT1 可抑制膠質(zhì)瘤進展[13]；NEAT1 的下調(diào)顯著抑制了HemECs 細胞活力和細胞遷移，但增加了凋亡細胞數(shù)量[14]；沉默NEAT1 表達能夠抑制胰腺癌細胞增殖，并誘導(dǎo)細胞凋亡[15]；轉(zhuǎn)染si-NEAT1 可抑制口腔鱗癌細胞增殖，促進細胞凋亡[16]。表明NEAT1 在胃癌、膠質(zhì)瘤、血管瘤、胰腺癌、肝癌等腫瘤中具有促癌的作用。本研究結(jié)果與其是一致的，本研究顯示，NEAT1 在血管瘤組織和細胞中均高表達，且NEAT1 在血管瘤細胞HemECs 中的表達量最高，因此，選擇HemECs 細胞為研究對象。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)沉默NEAT1 可抑制HemECs 細胞增殖、遷移，促進細胞凋亡，表明沉默NEAT1 抑制血管瘤的進展。提示NEAT1 可能成為治療血管瘤的潛在有效靶點。

LncRNA 可通過海綿化miRNA 來發(fā)揮作用。為了進一步探究沉默NEAT1 抑制血管瘤的進展的分子機制，本研究通過starBase 數(shù)據(jù)庫預(yù)測NEAT1可能充當miR-125b-5p 的海綿。miR-125b-5p 作為眾多miRNAs 中的一種，已有研究報道，過表達miR-125b-5p 可抑制非小細胞肺癌細胞增殖和血管生成[17]；上調(diào)miR-125b-5p 抑制了肝癌細胞的生長和轉(zhuǎn)移[18]；上調(diào)miR-125b 的表達可抑制嬰兒血管瘤細胞的生長并促進細胞凋亡[19]；過表達miR-125b-5p 可減弱胃癌細胞惡性表型[20]；下調(diào)miR-125b-5p 可促進宮頸癌的進展[21]。以上研究表明miR-125b-5p 在多種腫瘤中發(fā)揮腫瘤抑制因子的作用。此外，已有研究表明，抑制NEAT1 通過上調(diào)miR-125b-5p 來抑制高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移和血管生成[22]。本研究結(jié)果與其是一致的，本研究顯示，NEAT1 與miR-125b-5p存在靶向關(guān)系，沉默NEAT1 可上調(diào)HemECs 細胞中miR-125b-5p 表達，推測沉默NEAT1 可能通過上調(diào)miR-125b-5p 表達抑制HemECs 細胞增殖、遷移，促進細胞凋亡。為了驗證該推測，本研究在沉默NEAT1 的基礎(chǔ)上再進行miR-125b-5p inhibitor 干預(yù)HemECs 細胞，結(jié)果顯示，miR-125b-5p inhibitor減弱了沉默NEAT1 對HemECs 細胞增殖、遷移的抑制作用，以及細胞凋亡的促進作用。證實了沉默NEAT1 可能通過上調(diào)miR-125b-5p 抑制HemECs 細胞增殖、遷移，促進細胞凋亡。

miRNA 可通過與其靶基因的3’-UTR 結(jié)合來調(diào)控癌癥的進展[23]。為了進一步探究NEAT1/miR-125b-5p 軸抑制血管瘤進展的分子作用機制，本研究通過雙熒光素酶報告基因證實miR-125b-5p 可靶向調(diào)控IGFBP5 表達。IGFBP5 是生長促進肽胰島素超家族的成員，已被證實是最豐富的多肽生長因子。其在腫瘤中的作用已被廣泛研究，如IGFBP5在結(jié)直腸癌組織中高表達，其高表達與血管生成和血管內(nèi)皮生長因子等多種促癌機制有關(guān)[24]；抑制IGFBP5 可抑制膀胱癌轉(zhuǎn)移[25]；IGFBP5 在HemECs細胞中高表達，沉默IGFBP5 可抑制HemECs 細胞增殖、遷移和侵襲[8]。本研究與其是一致的，本研究顯示IGFBP5 在血管瘤組織和HemECs 細胞中高表達，沉默NEAT1 后，miR-125b-5p 表達上調(diào)，IGFBP5 蛋白表達下調(diào)，在沉默NEAT1 的基礎(chǔ)上再加miR-125b-5p inhibitor 干預(yù)HemECs 細胞，結(jié)果顯示，HemECs 細胞中miR-125b-5p 表達降低，IGFBP5 蛋白表達升高，提示沉默NEAT1 可能通過海綿化miR-125b-5p 進而下調(diào)IGFBP5 來抑制HemECs 細胞增殖、遷移，促進細胞凋亡。NEAT1/miR-125b-5p/IGFBP5 是一條介導(dǎo)HemECs 細胞增殖、遷移、凋亡發(fā)生的全新調(diào)控通路，本研究首次闡明了通路中各分子之間的調(diào)控機制。這對于進一步完善血管瘤發(fā)生的分子機制具有重要意義。

綜上所述，沉默NEAT1 可能通過海綿化miR-125b-5p 進而下調(diào)IGFBP5 表達來抑制HemECs 細胞增殖、遷移，促進細胞凋亡。NEAT1 可能成為治療血管瘤的潛在靶點。未進行體內(nèi)動物實驗進行驗證是本研究的不足之一，后期將會進一步深入探究。