黃佐興，倪建宏，劉長彬，，呂占民，4，盧守亮，陳 祥，熬 政

（1.貴州大學(xué)高原山地動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽 550025；2.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第十師畜牧獸醫(yī)工作站；3.新疆農(nóng)墾科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所；4.石河子大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院）

如何快速、準(zhǔn)確、簡便有效的進(jìn)行綿羊早期妊娠診斷，是畜牧工作者和規(guī)模化羊場亟待解決的問題。B型超聲診斷（B超）技術(shù)在上世紀(jì)60年代就已經(jīng)開始應(yīng)用到畜牧獸醫(yī)領(lǐng)域，1976年Lindahl[1]利用B超對(duì)人工授精后33～80 d的母羊進(jìn)行妊娠診斷，診斷準(zhǔn)確率為100%，這是首次將超聲診斷技術(shù)應(yīng)用于綿羊早期妊娠診斷。隨著超聲診斷技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用范圍越來越廣泛，研究者們將綿羊生殖器官疾病診斷、胎兒發(fā)育階段、單雙胎鑒定等進(jìn)行了深入的研究和試驗(yàn)，取得了一定的研究成果[2-4]。2001年張伯忠[5]利用B超妊娠診斷技術(shù)對(duì)配種后15～120 d的綿羊進(jìn)行妊娠診斷，發(fā)現(xiàn)30 d及以上配種日齡的母羊妊娠診斷準(zhǔn)確率高，可達(dá)100%。在診斷過程中可以明顯檢測(cè)到胎體、胎心、尿囊等。人工授精45 d后可明顯觀測(cè)到似“銅錢狀”的胎盤子葉，妊娠診斷準(zhǔn)確率為100%。目前研究者普遍認(rèn)為，綿羊在人工授精后的29～31 d為B超法妊娠診斷的最佳時(shí)間段。本試驗(yàn)用兩種不同的妊娠診斷方法對(duì)配種后30 d的母羊進(jìn)行妊娠診斷，診斷準(zhǔn)確率為100%和93.05%。該研究與試驗(yàn)的目的是探索兼具超早期、準(zhǔn)確率高、簡便經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)的家畜妊娠診斷方法，從而提高家畜繁殖效率[6]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)備及試劑

荷蘭Pie Medical生產(chǎn)的Tringa Linear VET獸用超聲儀（配有多頻率線陣探頭）、早孕試劑盒、20 mL注射器，、帶針采血器、冰塊、保溫箱、離心機(jī)、離心管、75%酒精、蒸餾水、乳膠手套、移液器、1 mL槍頭、EP管。

1.2 試驗(yàn)地點(diǎn)和試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)地點(diǎn)位于新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第十師一八四團(tuán)屯旺畜牧有限公司。試驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)布魯氏桿菌病和結(jié)核病檢測(cè)的100只薩福克母羊，年齡在3～4歲。采用同期發(fā)情處理的方式進(jìn)行處理，使用腹腔鏡進(jìn)行輸精。

1.3 方法

1.3.1 早孕試劑診斷技術(shù)

用采血器進(jìn)行靜脈采血，離心機(jī)1 000轉(zhuǎn)離心5 min，移液器吸取上面的血清，放入EP管內(nèi)，室溫條件下進(jìn)行試劑盒操作。試劑盒在操作前，提前2 h將試劑盒放在室溫下進(jìn)行升溫，使試劑盒溫度與血清溫度一致時(shí)，再進(jìn)行試劑盒妊娠檢測(cè)。放置在室溫下3～5 min，注意觀察反應(yīng)孔內(nèi)顏色變化，顏色變化與陽性對(duì)照相近，就可判定了妊娠，如與陰性對(duì)照相近，則判定為未妊娠。最后與B超診斷的結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，確診母羊是否妊娠，同時(shí)對(duì)兩種妊娠診斷方法的準(zhǔn)確性進(jìn)行比較。

1.3.2 B型超聲診斷技術(shù)

首先將配種后30 d 的羊以自然體位站立姿勢(shì)保定，用消毒液浸潤的B超直腸探頭，將探頭的掃描面朝下進(jìn)入直腸至骨盆入口前后向下呈45°進(jìn)行掃查。在掃查的過程中，需要左右擺動(dòng)探頭位置，以便使探頭與子宮位置貼合，使子宮影像顯示更為清晰可見。診斷過程中以探查到胎囊、胎體、胎心搏動(dòng)或胎盤子葉即可判定為妊娠，否則為未妊娠。

2 結(jié)果與分析

本試驗(yàn)通過同期發(fā)情處理，內(nèi)窺鏡輸精配種的多胎薩?？四秆蚬灿?jì)100只，配種后30 d經(jīng)獸用直腸超聲B超儀診斷妊娠70只，70只母羊全部產(chǎn)羔，共計(jì)產(chǎn)羔156只，產(chǎn)羔率為222.8%，妊娠診斷準(zhǔn)確率為100%。采集全部100只母羊血液，離心，提取血清，采用早孕試劑盒進(jìn)行早期妊娠診斷，與B超妊娠診斷相比試劑盒的妊娠診斷準(zhǔn)確率為93.05%。

3 討論

3.1 B型超聲波診斷技術(shù)應(yīng)用

B型超聲波診斷技術(shù)最早應(yīng)用于人類醫(yī)學(xué)相關(guān)的研究。近代以來，B超技術(shù)已經(jīng)成熟應(yīng)用到人類疾病診斷方面。B超妊娠診斷是一種有效的早期妊娠診斷方法[7-9]。在動(dòng)物繁殖方面通過超聲波妊娠診斷可以準(zhǔn)確、快速、簡捷的對(duì)發(fā)情配種后30 d以上的母羊進(jìn)行科學(xué)判定，可在較短的時(shí)間對(duì)大批母羊進(jìn)行檢查，早期發(fā)現(xiàn)妊娠母羊，及時(shí)將其隔離飼養(yǎng)，避免因相互擠壓等造成流產(chǎn)，并通過調(diào)整飼料來保證妊娠母羊的營養(yǎng)需要和促進(jìn)胎兒的生長發(fā)育；同時(shí)對(duì)未妊娠母羊進(jìn)行發(fā)情處理或及時(shí)淘汰，避免母羊長期處于假妊娠或乏情狀態(tài)，有效提高母羊的繁殖效率，增加養(yǎng)羊業(yè)的經(jīng)濟(jì)收益[10-14]。B超妊娠診斷技術(shù)可有效提高肉羊繁殖效率和生產(chǎn)效益，對(duì)加快肉羊養(yǎng)殖規(guī)?；?、集約化、產(chǎn)業(yè)化發(fā)展具有一定的促進(jìn)意義[15]。

3.2 早期妊娠診斷試劑盒的應(yīng)用

早期妊娠診斷技術(shù)主要包括B超早期妊娠診斷技術(shù)和ELISA早期妊娠試劑盒兩種主要方法。近些年，ELISA因具有靈敏、特異、簡單等特點(diǎn)，在牛羊早孕診斷中廣泛應(yīng)用[16-19]。

目前，商品化PAG-ELISA試劑盒已開發(fā)并推廣應(yīng)用，如愛德士牛懷孕檢測(cè)試劑盒等，可對(duì)人工授精后28 d的母牛進(jìn)行早期妊娠診斷，并獲得較高的診斷準(zhǔn)確率[20-22]。而關(guān)于羊的早孕診斷，鑒于PAG蛋白家族含有一些相似的抗原表位[23]，有人嘗試使用牛PAG-ELISA試劑盒（愛德士）檢測(cè)母羊血清中PAG，并獲得高的妊娠診斷敏感性（93.5%～100%）和特異性（93.7%～98.5%）[24-25]。因此，本實(shí)驗(yàn)中采用了早孕檢測(cè)試劑盒對(duì)進(jìn)行B超后的母羊進(jìn)行了驗(yàn)證，通過比較發(fā)現(xiàn)，與B超妊娠診斷法相比，試劑盒法的妊娠診斷準(zhǔn)確率為93.05%。該法的準(zhǔn)確性已可以在綿羊的妊娠診斷中進(jìn)行應(yīng)用，為綿羊繁育提供了一種新的妊娠診斷方法。