陳樂(lè)雯，何宣宣，賈濤，賈澤峰

變黃黑文衣, 中國(guó)黑文衣屬地衣一新記錄種

陳樂(lè)雯，何宣宣，賈濤，賈澤峰*

(聊城大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山東 聊城 252059)

通過(guò)對(duì)文字衣科黑文衣屬形態(tài)學(xué)、解剖學(xué)、化學(xué)與分子生物學(xué)的研究，發(fā)現(xiàn)中國(guó)新記錄種1種，即變黃黑文衣(Dal-Forno & Eliasaro)，該種主要特征為地衣體殼狀，表面淺黃綠色，無(wú)光澤，光滑；子囊盤(pán)彎曲,多分支，聚生于假子座中；盤(pán)緣黑色，相鄰線盤(pán)之間有小縫隙，盤(pán)面較平坦，黑色，覆有白色粉霜；子囊層無(wú)色透明，側(cè)絲頂端分支；子囊含8個(gè)子囊孢子；子囊孢子褐色，橫隔透鏡型，(4～)6胞室，大小19～25.5m×6～7m，I+紫紅色。該種分布于云南和福建，該研究豐富了對(duì)中國(guó)黑文衣屬物種組成與分布的認(rèn)知。

厚頂盤(pán)目；文字衣科；地衣型真菌；分類(lèi)學(xué)

1882年，Müller Arg.綜合運(yùn)用顯微技術(shù)與化學(xué)分析方法，基于孢子褐色且細(xì)胞橫向排列的特征,以(Ach.) Müll. Arg.作為模式種建立黑文衣屬(Müll. Arg.)。Staiger結(jié)合分子生物學(xué)方法，對(duì)Müller Arg.的分類(lèi)系統(tǒng)進(jìn)行修正，承認(rèn)并重新定義黑文衣屬[1]。

該屬為泛熱帶分布，隸屬于真菌界(Fungi)子囊菌門(mén)(Ascomycota)茶漬綱(Lecanoromycetes)厚頂盤(pán)亞綱(Ostropomycetidae)厚頂盤(pán)目(Ostropales)文字衣科(Graphidaceae)[2]。該屬主要特征為地衣體殼狀，表面蠟質(zhì)或粗糙；子囊盤(pán)伸長(zhǎng)為線狀，彎曲或具有分支，少數(shù)聚生為類(lèi)似子座結(jié)構(gòu)；盤(pán)唇張開(kāi), 大多覆有白色粉霜；盤(pán)被不炭化至輕微炭化；子囊含8個(gè)孢子；子囊孢子褐色，橫隔凸透鏡型或磚壁型；共生藻為橘色藻屬(sp.)[3–4]。

目前世界范圍內(nèi)報(bào)道黑文衣屬約230種，中國(guó)僅報(bào)道25種[5–10]。因此，有必要對(duì)我國(guó)黑文衣屬類(lèi)群進(jìn)行進(jìn)一步研究，為我國(guó)地衣型真菌物種資源開(kāi)發(fā)及利用提供基礎(chǔ)資料。

1 材料和方法

1.1 材料

本研究標(biāo)本采自福建、云南，現(xiàn)館藏于聊城大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院地衣標(biāo)本室(LCUF)。

1.2 表型分析

使用體視顯微鏡OLYMPUS SZX16觀察地衣體外部形態(tài)特征，光學(xué)顯微鏡OLYMPUS BX53觀察解剖特征。通過(guò)滴加10% KOH溶液、NaClO飽和水溶液、P溶液(將對(duì)苯二胺溶于無(wú)水乙醇，配成5%乙醇溶液)、碘液觀察顏色反應(yīng)，薄層層析法(TLC)對(duì)地衣化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行鑒定[11–12]。

1.3 基因型分析

DNA提取、PCR擴(kuò)增、測(cè)序 使用Sigma- Aldrich REDExtract-N-AmpTM植物PCR試劑盒從子囊盤(pán)中提取基因組DNA，并采用引物mtSSU1與mtSSU3R對(duì)線粒體小亞基片段進(jìn)行擴(kuò)增[13]。PCR體系總體積為50L：2×PCR master mix 25L，ddH2O 19L，引物各2L，基因組DNA 2L；擴(kuò)增程序?yàn)椋?5 ℃預(yù)變性5 min；然后94 ℃變性45 s，50 ℃退火1 min，72 ℃延伸90 s，共35個(gè)循環(huán); 最后72 ℃延伸10 min。PCR完成后，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)目的產(chǎn)物，并由鉑尚生物技術(shù)(上海)有限公司測(cè)序。序列信息見(jiàn)表1。

表1 系統(tǒng)發(fā)育分析所用標(biāo)本信息和GenBank登錄號(hào)

*: 新測(cè)序列。下同

*：New sequence. The same below

構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù) 通過(guò)SeqMan對(duì)原始序列進(jìn)行拼接處理，選擇與黑文衣屬親緣關(guān)系較近的灰線衣屬為外類(lèi)群，在NCBI網(wǎng)站上下載所需的23條相關(guān)序列。將上述序列在BioEdit v. 7.0.5中利用最大似然法(Maximum-likelihood, ML)進(jìn)行多序列比對(duì)及優(yōu)化[14–15]，在Cipres Science Gateway (http://www.phylo.org)使用RAxML-HPC BlackBox v. 8.2.12構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)[16–17]，對(duì)各節(jié)點(diǎn)進(jìn)行1 000次重復(fù)以評(píng)價(jià)自展支持值，獲得的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)文件在FigTree v. 1.4.2中查看和編輯(圖1)。

圖1 基于SSU序列構(gòu)建的黑文衣屬系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)

2 結(jié)果和討論

變黃黑文衣 圖2

Dal-Forno & Eliasaro, Mycotaxon 112: 16(2010)

Type: Brazil, Paraná: Pontal do Paraná. Pontal do Sul, 28. II. 2008, M. Dal-Forno 433 (Holotype UPCB).

地衣體殼狀，樹(shù)皮生，表面淺黃綠色，無(wú)光澤，光滑。

子囊盤(pán)彎曲，多分支，長(zhǎng)0.5～1 mm，寬0.4～ 0.5 mm，聚生于假子座中，假子座圓形至不規(guī)則卵圓形；盤(pán)緣黑色，相鄰線盤(pán)之間有小縫隙；盤(pán)唇不明顯，張開(kāi)；盤(pán)面較寬，平坦，黑褐色，覆有白色粉霜；盤(pán)被未炭化，褐色，厚8～18m；囊層被黑色，厚15～20m；子囊層無(wú)色，清晰狀，厚80～90m;囊層基黃色，厚30～38m；側(cè)絲具有橫隔，頂端分支，寬1.0～1.5m；子囊棒狀，含8個(gè)子囊孢子;子囊孢子褐色，卵圓形，橫隔透鏡型，(4～)6胞室,大小19～25.5m×6～7m，I+紫紅色。

化學(xué)反應(yīng)：K+淺黃色，C–，KC+淺黃色，P–；含有斑點(diǎn)酸 (TLC)。

基物：樹(shù)皮。

圖2 Phaeographis flavescens (L.W. Chen FJ211760)。A: 地衣體和子囊器; B: 子囊盤(pán)橫切面; C: 子囊; D: 子囊孢子。標(biāo)尺: A=1.0 mm; B=200 μm; C=20 μm; D=20 μm

研究標(biāo)本：云南：西雙版納，勐?？h，哈尼文化園，海拔1 190 m，2015年12月14日，賈澤峰YN15061 (LCUF)。福建：武夷山，桐木村，三港，海拔720 m，2021年10月22日，賈澤峰FJ211286 (LCUF)；武夷山國(guó)家公園科技樓附近，海拔700 m，2021年10月24日，賈澤峰FJ211741 (LCUF)，陳樂(lè)雯，F(xiàn)J211759、FJ211760、FJ211761、FJ211763、FJ211764、FJ211765、FJ211766 (LCUF)。

世界分布：巴西[18]；中國(guó)福建、云南。

討論：根據(jù)分子數(shù)據(jù)分析，該種與屬其他物種明顯分開(kāi)，且與聚為一獨(dú)立分支，支持值高達(dá)98%，綜合以上特征鑒定為。本研究標(biāo)本與模式標(biāo)本(Brazil)特征基本一致，但假子座顏色相對(duì)更淺，呈白色；另外，本研究只檢測(cè)出斑點(diǎn)酸，而模式標(biāo)本描述中還含有其他微量未知酸。其分類(lèi)特征類(lèi)似于Redinger.，后者子囊盤(pán)灰白色，彎曲，不規(guī)則分支，聚集為星狀，孢子4～6室，但地衣化學(xué)物質(zhì)不同, 含有新三錐酸[19]。該種形態(tài)學(xué)特征與(Nyl.) Müll. Arg.相似，不同之處在于后者子囊盤(pán)呈放射狀或大量不規(guī)則分支，線盤(pán)較細(xì)長(zhǎng), 盤(pán)面在發(fā)育后期常發(fā)生匯合，從而形成較寬的中部區(qū)域；I+紅褐色，含降斑點(diǎn)酸[20–21]。該種與Redinger.也較相似，不同之處在于后者子囊孢子較小，(12～)15～18m[22]。

[1] STAIGER B, KALB K, GRUBE M. Phylogeny and phenotypic variation in the lichen family Graphidaceae (Ostropomycetidae, Asco- mycota) [J]. Mycol Res, 2006, 110(7): 765–772.doi: 10.1016/j.mycres. 2006.05.003.

[2] WIJAYAWARDENE N N, HYDE K D, RAJESHKUMAR K C, et al. Notes for genera: Ascomycota [J]. Fung Diver, 2017, 86: 1–594. doi: 10.1007/s13225-017-0386-0.

[3] STAIGER B. Die flechten familie Graphidaceae studien in richtungeiner natürlicheren gliederung [J]. Bibliotheca Lichenol, 2002, 85: 1–526.

[4] LüCKING R. Foliicolous Lichenized Fungi: Flora Neotropica Monograph 103 [M]. New York: The New York Botanical Garden Press, 2008: 1–867.

[5] WANG X H, SHI G B, JIA Z F., a new species of lichen [J]. Mycosystema, 2013, 32(1): 128–130. [王曉華，師廣波，賈澤峰. 黑文衣屬地衣一新種——福建黑文衣[J]. 菌物學(xué)報(bào)，2013，32(1): 128–130. doi: 10.13346/j.mycosystema.2013.01.016.]

[6] LI J, MIAO X L, JIA Z F. Additional materials for the genusfrom China [J]. J Fungal Res, 2014, 12(2): 79–82.doi: 10. 13341/j.jfr.2014.2008.

[7] JIA Z F, WEI J C. Flora lichenum Sinicorum, Vol. 13 Ostropales (I) Graphidaceae (1) [M]. Beijing: Science Press, 2016: 1–210. [賈澤峰, 魏江春. 中國(guó)地衣志, 第13卷厚頂盤(pán)目(I) 文字衣科(1) [M]．北京: 科學(xué)出版社, 2016: 1–210.]

[8] JIA Z F, LüCKING R. Resolving the genusMüll. Arg. in China [J]. MycoKeys, 2017, 21: 13–32. doi: org/10.3897/mycokeys. 21.11986.

[9] JIA Z F, LüCKING R. Resolving the species of the lichen genusMüll. Arg. in China, with some new combinations [J]. MycoKeys, 2017, 25: 13–29. doi: org/10.3897/mycokeys.25.13154.

[10] WEI J C. An enumeration of lichens in China [M]. Beijing: China Forestry Publishing House, 2020: 1-606.

[11] CULBERSON C F. Improved conditions and new data for identifi- cation of lichen products by standardized thin-layer chromatographic method [J]. J Chromatogr A, 1972, 72(1): 113–125. doi: 10.1016/0021- 9673(72)80013-X.

[12] ORANGE A, JAMES P W, WHITE F J. Microchemical methods for the identification of lichens [J]. British Lichen Soc, London, 2001: 1–101.

[13] ZOLLER S, SCHEIDEGGER C, SPERISEN C. PCR primers for the amplification of mitochondrial small subunit ribosomal DNA of lichen- forming ascomycetes [J]. Lichenologist, 1999, 31(5): 511–516.

[14] THOMPSON J D, HIGGINS D G, GIBSON T J. CLUSTAL W: Improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, position specific gap penalties and weight matrix choice [J]. Nucl Acid Res, 1994, 22(22): 1673–1680. doi: 10. 1093/nar/22.22.4673.

[15] HALL T A. BioEdit: A user-friendly biological sequence alignment editor and analysis program for Windows 95/98/NT [J]. Nucl Acid Sym, 1999, 41(2): 95–98. doi: 10.1021/bk-1999-0734.ch008.

[16] MILLER M A, PFEIFFER W, SCHWARTZ T. Creating the CIPRES Science Gateway for inference of large phylogenetic trees [C]// Proceedings of the Gateway Computing Environments Workshop (GCE), LA: New Orleans, 2010: 1–8.

[17] STAMATAKIS A. RAxML version 8: A tool for phylogenetic analysis and post-analysis of large phylogenies [J]. Bioinformatics, 2014, 30(9): 1312–1313. doi: 10.1093/bioinformatics/btu033.

[18] DAL-FORNO M, ELIASARO S. Two new species of Graphidaceae (lichenized Ascomycota) from Brazil [J]. Mycotaxon, 2010, 112(1): 15–20. doi: 10.5248/112.15.

[19] REDINGER K. Die Graphidineen der ersten Regnell’schen Expedition nach Brasilien 1892–94. Ⅲ.und, nebst einem Nachtrage Zu[J]. Ark. Bot, 1935, 27A (3): 1–103.

[20] BUNGARTZ F, LüCKING R, APTROOT A. The family Graphidaceae (Ostropales, Lecanoromycetes) in the Galapagos Islands [J]. Nova Hed- wig, 2010, 90(1/2): 1–44. doi: 10.1127/0029-5035/2010/0090-0001.

[21] ARCHER A W. The lichen genera,,,,,and(Graphidaceae) in Australia [J]. Telopea, 2004, 10(2): 589–605.

[22] REDINGER K. Die Graphidineen der ersten Regnell’schen Expedition nach Brasilien 1892–94. I.,und[J]. Ark Bot, 1933, 25A(13): 1–20.

, A New Record of the Lichen Genusin China

CHEN Lewen, HE Xuanxuan, JIA Tao, JIA Zefeng*

(College of Life Sciences, Liaocheng University,Liaocheng 252059, Shandong, China)

Based on the methods of morphology, anatomy, chemistry and molecular,Dal-Forno & Eliasaro (Graphidaceae) is recorded as new to China. It is characterized by crustose thallus, surface pale yellowish green, dull, smooth; ascomata flexuose, branched, immersed in pseudostromata; the lirellae have a narrow, brown-black edge, with small lateral cracks; disc flat, black, with white pruina; hymenium colorless, paraphyses with branched tips; ascospores 8 per ascus, brown, with transverse septa, (4–)6 locular, 19–25.5m× 6–7m, I+ wine-red. The species is found in Yunnan and Fujian provinces, and the study enriches our understanding of thecomposition and distribution in China.

Ostropales; Graphidaceae; Lichenized fungi; Taxonomy

10.11926/jtsb.4625

2022–02–24

2022–03–09

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31750001)資助

This work was supported by the National Natural Science Foundation of China (Grant No. 31750001).

陳樂(lè)雯(1997年生)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)榈匾律飳W(xué)，E-mail: 978064405@qq.com

. E-mail: zfjia2008@163.com