談福利 方光遠(yuǎn) 張萍 張智敏 陳俊紅 蔣加進(jìn)

摘? 要：為了更好地預(yù)防和控制仔豬腹瀉大腸桿菌病，通過更有效的措施殺滅仔豬腹瀉大腸桿菌，本試驗(yàn)通過采用不同的物理因素（溫度、pH、滲透壓和培養(yǎng)時(shí)間）、化學(xué)因素（乙醇、甲醛、新潔爾滅和復(fù)合碘）和抗生素（鏈霉素、慶大霉素、頭孢曲松和頭孢噻呋），對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌進(jìn)行生長(zhǎng)影響試驗(yàn)。通過獲得不同外界因素對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)影響的試驗(yàn)數(shù)據(jù)，分析各種外界因素對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響，為有效控制仔豬腹瀉大腸桿菌病提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：仔豬腹瀉大腸桿菌；外界因素；生長(zhǎng)

仔豬腹瀉大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起仔豬發(fā)生腹瀉的一種急性腸道傳染病，常見的有仔豬黃痢、仔豬白痢和斷奶仔豬水腫病[1]。該病在我國(guó)許多地區(qū)的豬場(chǎng)都有發(fā)生，是危害仔豬的重要傳染病之一[2]。據(jù)資料統(tǒng)計(jì)，我國(guó)仔豬死亡率在15％～25％，0～2周齡仔豬的死亡率為26％，2～4周齡仔豬的死亡率為16％，因斷奶引發(fā)腹瀉而導(dǎo)致的死亡數(shù)占總死亡數(shù)的49％，主要是由大腸桿菌導(dǎo)致的[3]。大腸桿菌為革蘭陰性無芽孢的直桿菌，大小? ? ? ? 0.4-0.7 μm×2-3 μm，兩端鈍圓，散在或成對(duì) [4]。

為了更好地預(yù)防和控制仔豬腹瀉大腸桿菌病，通過更有效的措施殺滅仔豬腹瀉大腸桿菌，本試驗(yàn)分別將仔豬腹瀉大腸桿菌在不同物理因素、化學(xué)因素、抗生素條件下進(jìn)行培養(yǎng)，通過生長(zhǎng)情況對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌的生長(zhǎng)特性進(jìn)行研究，了解該菌的抵抗力。

1? 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 細(xì)菌菌種

大腸桿菌分離自南京某豬場(chǎng)20日齡腹瀉仔豬的糞便，凍干保存。取凍干菌種接種到SS瓊脂平板上進(jìn)行培養(yǎng)，挑取典型菌落接種到5 mL無菌營(yíng)養(yǎng)肉湯中，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后待檢測(cè)。

1.1.2 培養(yǎng)基

SS瓊脂培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯由本校獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)室自行配制。

1.1.3 試劑

濃鹽酸、3％新潔爾滅、40％甲醛、無水乙醇、復(fù)合碘（含碘1％）、鏈霉素、慶大霉素、頭孢曲松、頭孢噻呋、氯化鈉等試劑。

1.2 方法

1.2.1 物理因素對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

取5支裝有5 mL滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯的試管，編號(hào)1～5，分別接種10 μL仔豬腹瀉大腸桿菌菌液。然后分別放于溫度為33 ℃、35 ℃、37 ℃、39 ℃、41 ℃的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h后取出，用分光光度計(jì)檢測(cè)上述各試管的透光率并記錄。其他物理因素如pH、滲透壓和培養(yǎng)時(shí)間操作方法與上述溫度操作相同。

1.2.2 化學(xué)因素對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

取7支100 mL的無菌的三角燒瓶，編號(hào)1～7。用滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯在三角燒瓶中依次配制成乙醇濃度為0.001％、0.01％、0.1％、1％、5％、10％、50％的營(yíng)養(yǎng)肉湯。然后分別移取三角燒瓶中5 mL溶液至7支無菌試管中并編號(hào)1～7，分別接種10 μL仔豬腹瀉大腸桿菌菌液，然后將7支試管放于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后取出，用分光光度計(jì)分別檢測(cè)上述各試管的透光率并記錄。其他化學(xué)因素如甲醛、新潔爾滅和復(fù)合碘操作與上述乙醇操作相同。

1.2.3 抗生素對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

取5支100 mL的潔凈滅菌的三角燒瓶，編號(hào)1～5。用滅菌營(yíng)養(yǎng)肉湯在三角燒瓶中依次配制成鏈霉素濃度為0.1 μg/mL、1 μg/mL、10 μg/mL、? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?100 μg/mL、1 000 μg/mL。分別移取三角燒瓶中5 mL溶液至7支無菌試管中并編號(hào)1～5，并各接種10 μL仔豬腹瀉大腸桿菌菌液，然后將5支試管放于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后取出，用分光光度計(jì)檢測(cè)各試管的透光率并記錄。其他抗生素如慶大霉素、頭孢曲松和頭孢噻呋操作與上述鏈霉素操作相同。

2? 結(jié)果與分析

2.1 物理因素對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

2.1.1 溫度對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

通過表1可以看出，在不同溫度下，透光率各不相同，33～37 ℃透光率不斷下降，表明試管內(nèi)大腸桿菌大量生長(zhǎng)繁殖，即33～37 ℃利于大腸桿菌的生長(zhǎng)；37～41 ℃時(shí)，透光率上升，表明大腸桿菌數(shù)量減少，即溫度太高不利于大腸桿菌的生長(zhǎng)。

2.1.2 pH對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

通過表2可以看出，pH 4～5以及pH 9～10時(shí)試管的透光率接近于100％，說明仔豬腹瀉大腸桿菌在強(qiáng)酸、強(qiáng)堿條件下生長(zhǎng)繁殖差，對(duì)強(qiáng)酸、強(qiáng)堿敏感；pH 5～7時(shí)，透光率越來越低，說明該菌生長(zhǎng)繁殖變旺盛，試管內(nèi)大腸桿菌數(shù)量變多；pH 7～9時(shí)，透光率越來越高，說明仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)繁殖能力變?nèi)酢?/p>

2.1.3 滲透壓對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

通過表3可以看出，滲透壓越高，透光率越高，即細(xì)菌數(shù)量越少；滲透壓越低，透光率越低，即細(xì)菌繁殖數(shù)量越大。

2.1.4 培養(yǎng)時(shí)間對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

通過表4可以看出，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，透光率越來越低，且3～6 h變化明顯，說明細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖數(shù)量越來越多。6～24 h變化不明顯。

2.2 化學(xué)因素對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

2.2.1 乙醇對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

通過表5可以看出，乙醇濃度為5％～50％時(shí)，變化不明顯且透光率接近100％，即不利于大腸桿菌生長(zhǎng)；濃度為1％～5％時(shí)透光率變化劇烈；濃度為0.001％～1％時(shí)透光率變化不明顯。

2.2.2 甲醛對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

通過表6可以看出，甲醛濃度為0.01％～1％時(shí)，透光率變化不明顯且較高，即不利于仔豬腹瀉大腸桿菌的生長(zhǎng)；濃度為0.001％～0.01％時(shí)透光率變化趨勢(shì)較大；濃度為0.000 1％～0.001％時(shí)，透光率變化不明顯，且透光率較低，即大腸桿菌生長(zhǎng)旺盛。

2.2.3 新潔爾滅對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

通過表7可以看出，隨著新潔爾滅濃度逐步升高，透光率也逐步升高，即仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)繁殖數(shù)量越來越少。

2.2.4 復(fù)合碘對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

通過表8可以看出，復(fù)合碘濃度為0.1％～0.5％時(shí)，透光率較高，且變化不明顯，即仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)較差；濃度為0.01％～0.1％時(shí)，透光率變化明顯，變化趨勢(shì)大；濃度為0.001％～0.01％時(shí)，透光率變化不明顯，且透光率較低，說明大腸桿菌生長(zhǎng)旺盛。

2.3 抗生素對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

2.3.1 鏈霉素對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

通過表9可以看出，隨著鏈霉素濃度的升高，透光率升高，即大腸桿菌生長(zhǎng)繁殖能力變差。

2.3.2 慶大霉素對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

通過表10可以看出，慶大霉素濃度在10～1 000 μg/mL時(shí)，透光率變化不大， 接近100％；濃度為1～10 μg/mL時(shí)，透光率變化趨勢(shì)大；濃度為0.1～1 μg/mL時(shí)，透光率變化不大，且透光率較低。

2.3.3 頭孢曲松對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

通過表11可以看出，頭孢曲松濃度在30～3 000 μg/mL時(shí)，透光率變化不大，接近100％，說明該濃度的抗生素對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)有抑制作用；濃度為3～30 μg/mL時(shí)，透光率變化趨勢(shì)大；濃度為0.3～3 μg/mL時(shí)，透光率變化不大，且透光率較低。

2.3.4 頭孢噻呋對(duì)仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)的影響

通過表12可以看出，總體上隨著頭孢噻呋濃度的升高，透光率升高，即大腸桿菌生長(zhǎng)繁殖數(shù)量變少。試驗(yàn)結(jié)果表明，頭孢噻呋的濃度為30～3 000 μg/mL時(shí)能對(duì)大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖形成有效抑制，濃度為0.3～3 μg/mL時(shí)也對(duì)大腸桿菌的繁殖起到一定的抑制作用。

3? 討論

3.1 物理因素

本試驗(yàn)結(jié)果表明，仔豬腹瀉大腸桿菌在37 ℃左右生長(zhǎng)最旺盛，溫度過高、過低都不利于生長(zhǎng)。在pH為7時(shí)生長(zhǎng)最旺盛，其他酸堿度下大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖能力都變?nèi)酰瑥?qiáng)酸、強(qiáng)堿條件下不能生長(zhǎng)。黃飛羽[5]等發(fā)現(xiàn)pH對(duì)腸桿菌科的肺炎克雷伯菌的生長(zhǎng)影響較大，且pH為7.2時(shí)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖最旺盛。我們的試驗(yàn)結(jié)果與黃飛羽等的研究結(jié)果一致。王立超[6]等通過研究溫度、光照和pH對(duì)光合細(xì)菌生長(zhǎng)的影響發(fā)現(xiàn)，光合細(xì)菌生長(zhǎng)的最適pH為7.0，這與我們的試驗(yàn)結(jié)果也相符。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著滲透壓增高，仔豬腹瀉大腸桿菌生長(zhǎng)繁殖也呈明顯的下降趨勢(shì)；培養(yǎng)時(shí)間越長(zhǎng)，大腸桿菌繁殖越多，0～6 h時(shí)繁殖速度較快，6 h后生長(zhǎng)繁殖趨勢(shì)降低。因此防控仔豬腹瀉大腸桿菌病時(shí)，可采用高溫、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿殺滅環(huán)境中的致病性仔豬腹瀉大腸桿菌。

3.2 化學(xué)因素

本試驗(yàn)結(jié)果表明，乙醇濃度介于5％～50％時(shí)能有效抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長(zhǎng)，濃度低于1％時(shí)僅能輕微抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖。王慧琴[7]等通過改變物理、化學(xué)因素觀察對(duì)細(xì)菌生長(zhǎng)的影響，發(fā)現(xiàn)乙醇根本不能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，這與我們的研究結(jié)果不同，但她沒有說明乙醇的濃度。本試驗(yàn)結(jié)果表明，甲醛在濃度為0.01％～1％時(shí)能有效抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長(zhǎng)，透光率接近100％；濃度低于0.001％時(shí)僅能輕微抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖。朱國(guó)霞[8]等采用4種殺菌消毒劑來觀察對(duì)硝化細(xì)菌生長(zhǎng)的影響，發(fā)現(xiàn)加入甲醛24 h后對(duì)硝化細(xì)菌具有一定的抑制作用，這與我們的試驗(yàn)結(jié)果一致。本試驗(yàn)結(jié)果表明，復(fù)合碘在濃度為0.5％時(shí)可有效抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長(zhǎng)，李偉英[9]等證明消毒劑氯可有效滅活并抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，這也與我們的試驗(yàn)結(jié)果相符。臨床防控時(shí)可采用濃度為5％～50％的乙醇溶液、0.01％～0.1％的甲醛溶液、0.5％的復(fù)合碘溶液來抑制和殺滅仔豬腹瀉大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖。

3.3 抗生素

本試驗(yàn)結(jié)果表明，鏈霉素在濃度為0.1～? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?1 000 μg/mL時(shí)僅能輕微抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長(zhǎng)。慶大霉素在濃度為10～1 000 μg/mL時(shí)能有效抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖。頭孢曲松在含量為300～3 000 μg/mL時(shí)能有效抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖。頭孢噻呋在濃度為30～3 000 μg/mL時(shí)能有效抑制仔豬腹瀉大腸桿菌的生長(zhǎng)繁殖，濃度為0.3～ 3 μg/mL時(shí)能抑制大部分細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖。本試驗(yàn)結(jié)果表明可采用10～1 000 μg/mL的慶大霉素、300～3 000 μg/mL的頭孢曲松、30～3 000 μg/mL的頭孢噻呋來治療仔豬腹瀉大腸桿菌病，同時(shí)要注意輪換用藥和不要隨便停藥[10]。

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