王麓璐,張學思,潘靜,楊麗平

乳腺癌是全世界女性最常見的惡性疾病,2019年乳腺癌占女性新診斷惡性腫瘤的30%,占女性因癌癥死亡的15%,中國乳腺癌的發(fā)病率和病死率在女性惡性腫瘤中均位居首位[1-2]。盡管目前綜合治療技術(shù)不斷改進,但患者生存狀況仍不理想,其中復發(fā)是影響患者生存的主要原因[3]。鈣黏蛋白S100A10在預測抗腫瘤治療藥物的敏感性及腫瘤復發(fā)轉(zhuǎn)移方面具有重要價值[4]。脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白-4(fatty acid biding protein-4,FABP4)在癌細胞脂質(zhì)反應調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用,FABP4過表達可促使形成富含脂質(zhì)的腫瘤微環(huán)境,導致腫瘤轉(zhuǎn)移[5]。本研究擬檢測乳腺癌患者血清S100A10、FABP4水平,分析其與乳腺癌臨床病理特征及復發(fā)的關(guān)系,旨在為臨床治療和預后分析提供參考,報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2020年2月—2021年2月中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學第一附屬醫(yī)院綜合診療科收治乳腺癌患者121例為乳腺癌組,均為女性,年齡51～72(62.51±8.27)歲;體質(zhì)量指數(shù)22～29(25.85±2.85)kg/m2;病理類型:導管內(nèi)癌70例,浸潤性導管癌46例,其他5例;腫塊直徑1～3(2.21±0.43)cm;分化程度:低度分化55例,中度分化41例,高度分化25例;TNM分期:Ⅰ期30例,Ⅱ期42例,Ⅲ期49例;雌激素受體(ER)陽性41例,孕激素受體(PR)陽性38例,人類表皮生長因子受體2(HER2)陽性35例,Ki-67陽性68例。另選擇同期醫(yī)院健康體檢女性75例為健康對照組,排除任何部位惡性腫瘤、感染、免疫性疾病,年齡52～73(62.47±8.09)歲;體質(zhì)量指數(shù)21～25(23.51±1.38)kg/m2。2組年齡比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),乳腺癌組患者體質(zhì)量指數(shù)高于健康對照組(P<0.05)。本研究已經(jīng)獲得醫(yī)院倫理委員會批準(200124),受試者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 病例選擇標準 (1)納入標準:①病理學確診乳腺癌;②接受根治性手術(shù)聯(lián)合術(shù)后TAC方案化療;③年齡>18歲,女性患者。(2)排除標準:①合并其他部位原發(fā)惡性腫瘤或血液性腫瘤;②乳腺癌晚期,采用保守治療者;③妊娠期或哺乳期患者。

1.3 觀測指標與方法

1.3.1 血清S100A10、FABP4水平檢測:患者入組后治療前及健康對照組體檢當日清晨采集空腹肘靜脈血3 ml,離心留取血清-80℃儲存。采用Varioskan LUX多功能酶標儀(美國賽默飛公司),以酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測血清S100A10、FABP4水平,S100A10試劑盒購自武漢庫薩比奧公司,FABP4試劑盒購自武漢菲恩生物科技有限公司。

1.3.2 隨訪情況:乳腺癌患者均定期門診復查、電話隨訪,隨訪截至2022年7月。記錄隨訪期間腫瘤復發(fā)情況,復發(fā)定義為經(jīng)影像及病理證實的原發(fā)腫瘤部位再次生長出新的腫瘤。

2 結(jié) 果

2.1 2組血清S100A10、FABP4水平比較 乳腺癌組血清S100A10、FABP4水平均高于健康對照組(P<0.01),見表1。

表1 健康對照組與乳腺癌組血清S100A10、FABP4水平比較

2.2 乳腺癌不同臨床病理特征間血清S100A10、FABP4水平比較 TNM Ⅲ期、低度分化、Ki-67陽性乳腺癌患者血清S100A10、FABP4水平高于TNM Ⅰ～Ⅱ期、中高度分化、Ki-67陰性患者(P<0.01),體質(zhì)量指數(shù)≥25 kg/m2患者血清FABP4水平高于體質(zhì)量指數(shù)<25 kg/m2患者(P<0.01)。不同年齡、腫瘤大小、病理類型、ER、PR、HER2乳腺癌患者血清S100A10、FABP4水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見表2。

2.3 乳腺癌無復發(fā)生存曲線 隨訪期間共失訪5例,中位隨訪13(8～29)個月,復發(fā)26例,繪制Kaplan-Meier生存曲線,高水平S100A10患者(≥1.35 μg/L,60例)無復發(fā)生存率為70.00%(42/60),低于低水平S100A10患者(<1.35 μg/L,56例)的85.71%(48/56)(Log-Rankχ2=4.183,P=0.041);高水平FABP4患者(≥28.12 μg/L,59例)無復發(fā)生存率為67.80%(40/59),低于低水平FABP4患者(<28.12 μg/L,57例)的87.72%(50/57)(Log-Rankχ2=6.559,P=0.010),見圖1。

2.4 影響乳腺癌復發(fā)的因素分析 以乳腺癌患者是否復發(fā)為因變量(0=否,1=是),以上述結(jié)果中P<0.05項目為自變量納入多因素Cox比例風險回歸模型(向后逐步法)分析,結(jié)果顯示,TNM分期高、S100A10高、FABP4高是乳腺癌患者復發(fā)的危險因素(P<0.05),見表3。

圖1 不同血清S100A10、FABP4水平乳腺癌患者無復發(fā)生存曲線比較

表2 乳腺癌不同臨床病理特征間血清S100A10、FABP4水平比較

表3 影響乳腺癌患者復發(fā)的多因素Cox比例風險回歸模型分析

3 討 論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤,其形態(tài)、分子表達譜和臨床病程均具有高度異質(zhì)性,年齡、雌激素、家族史、基因突變和不健康的生活方式等是乳腺癌患病的危險因素。乳腺癌往往始于乳腺導管增生,在致癌物暴露、表觀遺傳修飾、癌癥干細胞、巨噬細胞誘變的炎性微環(huán)境等各種致癌因素刺激下發(fā)生癌變,并發(fā)展為轉(zhuǎn)移性癌[6]。盡管近年來早期篩查、手術(shù)、放化療、靶向治療、內(nèi)分泌治療、免疫治療等綜合治療的應用和改進,乳腺癌病死率有所下降,腫瘤負擔有所減輕,但是由于有殘留腫瘤細胞的存在,會導致腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移[7]。復發(fā)是導致乳腺癌患者死亡的主要原因之一,復發(fā)與原發(fā)腫瘤發(fā)生時間差異較大,晚期復發(fā)往往在確診后5年甚至更長時間,目前依靠腫瘤大小、分化程度、淋巴結(jié)或血管侵犯、TNM分期等乳腺癌病理特征還不能完全反映復發(fā)的生物學行為,無法預測復發(fā)的準確時間,因此對臨床治療和預防帶來巨大挑戰(zhàn),需要探尋準確、可靠與復發(fā)相關(guān)的生物學標志物對臨床乳腺癌的管理十分重要[8-9]。

S100A10是S100蛋白家族的成員,膜聯(lián)蛋白2(ANXA2)是 S100A10 的配體,S100A10主要通過與其形成A2 異四聚體(AⅡt),異四聚體復合物在癌細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用,AⅡt是細胞纖溶酶生成的重要調(diào)節(jié)劑,在血液循環(huán)中纖溶酶原以無活性形式存在,S100A10 可通過結(jié)合纖溶酶原將其轉(zhuǎn)化為具有活性作用的纖溶酶,AⅡt異四聚體復合物則抑制S100A10的泛素化和纖溶酶失活;AⅡt衍生纖溶酶觸發(fā)信號分子蛋白激酶C信號分子的磷酸化,導致膜聯(lián)蛋白A2裂解,激活Toll樣受體4和核因子-κB信號,促進白介素-1、白介素-6和腫瘤壞死因子-α等促炎因子釋放,產(chǎn)生促腫瘤微環(huán)境,S100A10還可降低T 細胞的細胞毒性,逃避免疫監(jiān)視間接促進免疫逃逸,繼而參與癌癥發(fā)生和進展過程[10-11]。S100A10還可通過與促凋亡基因Bad相互作用并阻礙其促凋亡活性,促使癌細胞惡性增殖,沉默S100A10則顯著抑制癌細胞增殖、集落形成、細胞遷移和侵襲,增強對卡鉑治療的敏感性[12]。本研究發(fā)現(xiàn),S100A10在乳腺癌發(fā)病機制中可能發(fā)揮促癌基因作用,進一步分析發(fā)現(xiàn)S100A10過表達與乳腺癌患者隨訪期間復發(fā)有關(guān),提示S100A10過表達可促使乳腺癌復發(fā)。研究顯示,S100A10與ANXA2形成分子復合物可促使乳腺癌細胞與微血管內(nèi)皮細胞的黏附,導致癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移[13]。沉默S100A10表達可通過阻止化療誘導的乳腺癌干細胞富集,抑制乳腺癌細胞增殖,降低化療后復發(fā)風險[14]。因此,S100A10過表達可能增強乳腺癌細胞惡性增殖和侵襲行為,導致腫瘤復發(fā)和生存率下降。

FABP4是一種由脂肪組織分泌的激素,廣泛表達于脂肪細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞和微血管內(nèi)皮細胞中,在巨噬細胞中FABP4通過激活核因子κB和c-Jun N-末端激酶通路調(diào)節(jié)炎性反應,在脂肪細胞中FABP4通過與激素敏感脂肪酶和過氧化物酶體增殖物激活受體γ的相互作用促進脂肪分解并抑制脂肪生成,維持脂肪細胞穩(wěn)態(tài)、調(diào)節(jié)脂肪分解和脂肪生成,FABP4還可通過調(diào)控膽固醇運輸,誘導泡沫細胞形成、炎性反應激活和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激,參與糖尿病、哮喘、癌癥和動脈粥樣硬化等多種免疫代謝疾病過程。FABP4在毛細血管、小靜脈內(nèi)特異性表達,通過促使血管內(nèi)皮生長因子信號傳導和細胞增殖促使新生血管形成,增強癌細胞增殖和遷移能力[15-16]?，F(xiàn)有研究顯示,FABP4在結(jié)直腸癌組織中高表達,并通過促進上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化促使癌癥進展,與結(jié)直腸癌的TNM分期、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)[17]。FABP4在肝細胞癌組織中表達下調(diào),FABP4表達缺失則引起癌細胞增殖和侵襲[18]。本研究發(fā)現(xiàn),高水平FABP4與體質(zhì)量指數(shù)增加、 TNM分期增加、低分化及Ki-67陽性表達有關(guān),是乳腺癌復發(fā)的危險因素之一。研究發(fā)現(xiàn),FABP4在腫瘤間質(zhì)中的巨噬細胞中表達并增強原巨噬細胞功能,表現(xiàn)為通過激活核因子κB抑制miR-29b表達,誘導巨噬細胞中白介素-6信號通路激活和白介素-6 的產(chǎn)生,形成促腫瘤微環(huán)境,促使乳腺癌發(fā)生、惡性增殖和進展,而循環(huán)中FABP4與磷脂酰肌醇磷酸相互作用啟動信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子3致癌信號通路激活,增強醛脫氫酶1表達,介導具有干細胞樣表型的乳腺癌細胞擴增,FABP4還可通過結(jié)合游離脂肪酸為腫瘤細胞的快速增殖生長、新生血管形成和轉(zhuǎn)移提供能量[19]。給予外源性FABP4可激活脂肪酸轉(zhuǎn)運蛋白的表達,增加乳腺癌細胞增殖,沉默F(xiàn)ABP4降低其活性則可抑制缺氧時脂滴的形成,降低癌細胞對活性氧誘導鐵死亡的抵抗力,減少癌癥復發(fā)[20-21]。可見FABP4過表達可能促使乳腺癌惡性生物學行為形成,誘導癌癥復發(fā)。

綜上,乳腺癌患者血清中S100A10、FABP4水平顯著增高,高水平S100A10、FABP4與乳腺癌惡性侵襲行為有關(guān),是乳腺癌復發(fā)的危險因素,血清S100A10、FABP4有望作為乳腺癌預后預測的潛在標志物和潛在治療靶點。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

王麓璐:設(shè)計研究方案,實施研究過程,論文撰寫;張學思:提出研究思路,分析試驗數(shù)據(jù);潘靜:數(shù)據(jù)收集,進行文獻調(diào)研與整理;楊麗平:進行統(tǒng)計學分析,論文審核