歐陽運萍，陳濤，李鵬，趙博，楊小軍

急性肺損傷屬于臨床嚴(yán)重呼吸系統(tǒng)疾病之一，具有高發(fā)病率和高死亡率，是臨床許多危重疾病患者發(fā)生急性呼吸衰竭的重要原因［1］。目前，臨床上急性肺損傷的治療手段對于提高患者生存質(zhì)量效果不佳，因此尋求治療急性肺損傷的有效手段具有重要意義。二甲雙胍是臨床廣泛用于治療糖尿病的藥物，其療效及安全性已得到充分證實。研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍在減輕肺損傷方面具有一定作用［2］，包括對脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷［3］。但二甲雙胍對氧化應(yīng)激造成急性肺損傷的作用機制研究較少。既往研究顯示，二甲雙胍與p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38 MAPK）信號通路關(guān)系密切［4］。p38 MAPK是人體關(guān)鍵細(xì)胞內(nèi)信號通路之一，可參與多種呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)生與發(fā)展［5］。近年來有p38 MAPK信號通路與急性肺損傷、慢性阻塞性肺疾病、哮喘等常見呼吸系統(tǒng)疾病相關(guān)的報道［6］。另有研究顯示，p38 MAPK信號通路參與了上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）進程［7］。Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞是氧化損傷的主要靶點，其特點是較難分離獲取且難以在體外傳代［8］。而人肺泡上皮細(xì)胞與Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞的形態(tài)及生化特性相似，因而本實驗選擇人肺泡上皮細(xì)胞作為研究對象，探討二甲雙胍對急性肺損傷細(xì)胞凋亡、遷移和EMT的影響及機制。

1 材料與方法

1.1 實驗時間 本實驗時間為2022年6—11月。

1.2 主要材料、試劑及儀器 人肺泡上皮細(xì)胞（A549細(xì)胞）購自中國科學(xué)院細(xì)胞庫。二甲雙胍、過氧化氫（hydrogen peroxide，H2O2）（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，純度≥98%），p38 MAPK信號通路抑制劑——SB203580、p38 MAPK信號通路激活劑——C16-PAF（上海源葉生物科技有限公司，純度≥99%），胎牛血清（美國Gibco公司），F(xiàn)-12K培養(yǎng)基（含10%胎牛血清、1%青-鏈霉素）、RIPA裂解液、CCK-8試劑盒（日本Dojindo公司），Hoechst 33258染色液（上海愛必信生物科技有限公司），鼠抗人抗體〔E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白、波形蛋白、纖維連接蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）、p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK、β-actin一抗〕、辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗鼠IgG（二抗）（英國Abcam公司），引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。MCO18AIC型CO2培養(yǎng)箱（日本三洋電機公司），MF52-N型倒置熒光顯微鏡（廣州市明美光電技術(shù)有限公司），IMARK型酶標(biāo)儀（美國BIORAD公司），F(xiàn)luorChem HD2型凝膠成像系統(tǒng)（美國Proteinsimple公司）。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng) 取液氮中凍存的A549細(xì)胞進行復(fù)蘇，將其置于F-12K培養(yǎng)基中，在37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁達(dá)80%以上時進行細(xì)胞傳代，取第3代對數(shù)生長期細(xì)胞進行后續(xù)實驗。

1.4 分組及給藥 將A549細(xì)胞分為對照組、H2O2組、2.5 mmol/L二甲雙胍組、5.0 mmol/L二甲雙胍組、10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組，對照組不做任何干預(yù)；H2O2組加入400 μmol/L H2O2作用24 h，以構(gòu)建體外急性肺損傷細(xì)胞模型；2.5 mmol/L二甲雙胍組、5.0 mmol/L二甲雙胍組、10.0 mmol/L二甲雙胍組在H2O2組基礎(chǔ)上分別加入2.5、5.0、10.0 mmol/L二甲雙胍進行干預(yù)；SB203580組在H2O2組基礎(chǔ)上加入10.0 mmol/L SB203580進行干預(yù)，選取細(xì)胞活力最佳時的藥物濃度進行后續(xù)實驗。

將A549細(xì)胞分為對照組、H2O2組、10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組、抑制劑組和激活劑組，對照組、H2O2組、10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組干預(yù)方法同前，抑制劑組和激活劑組在10.0 mmol/L二甲雙胍組基礎(chǔ)上分別加入10 μmol/L SB203580和10 μmol/L C16-PAF。在37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)，每組設(shè)置3個復(fù)孔。

1.5 CCK-8法測定細(xì)胞活力 取對照組、H2O2組、2.5 mmol/L二甲雙胍組、5.0 mmol/L二甲雙胍組、10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組A549細(xì)胞，調(diào)整密度為2×105個/ml，將其接種至96孔板中，每孔加入細(xì)胞懸液100 μl。各組干預(yù)24 h后，加入10 μl CCK-8溶液孵育2 h，使用酶標(biāo)儀測定各組OD值（450 nm處），計算細(xì)胞活力，細(xì)胞活力（%）=（目標(biāo)組OD值-空白組OD值）/空白組OD值×100%。實驗獨立重復(fù)3次。

1.6 Hoechst 33258染色法測定細(xì)胞凋亡率 取對照組、H2O2組、10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組、抑制劑組、激活劑組A549細(xì)胞，用PBS洗滌2次、5 min/次，加入4%多聚甲醛溶液，于4 ℃環(huán)境下固定10 min；用PBS洗滌3次，加入5 mg/L Hoechst 33258染色液染色10 min；用PBS洗滌3次，封固后在倒置熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡情況。細(xì)胞凋亡特征為細(xì)胞核體積濃縮變小，染色不均，濃染且所發(fā)熒光較強，呈亮藍(lán)色。計算細(xì)胞凋亡率，細(xì)胞凋亡率（%）=凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。實驗獨立重復(fù)3次。

1.7 劃痕試驗測定細(xì)胞遷移率 取對照組、H2O2組、10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組、抑制劑組、激活劑組A549細(xì)胞，將細(xì)胞接種于6孔板，密度達(dá)到90%時，采用200 μl移液器槍頭進行劃痕試驗，在37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)24 h。采用倒置熒光顯微鏡拍照記錄0 h和24 h劃痕情況，計算劃痕面積并將其分別記為S0h和S24h，計算細(xì)胞遷移率，細(xì)胞遷移率=（S0h-S24h）/S0h×100%。實驗獨立重復(fù)3次。

1.8 RT-qPCR法測定EMT相關(guān)因子mRNA相對表達(dá)量取對照組、H2O2組、10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組、抑制劑組、激活劑組A549細(xì)胞，采用RNA抽提試劑盒提取細(xì)胞樣本總RNA，采用NanoDrop檢測RNA的濃度及純度，并將其反轉(zhuǎn)錄合成模板鏈cDNA，取2 μl反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進行PCR（引物序列：GAPDH上游引物為5'-TGACTTCAACAGCGACACCCA-3'，下游引物為5'-CACCCTGTTGCTGTAGCCAAA-3'；E-鈣黏蛋白上游引物為5'-CGAGAGCTACACGTTCACGG-3'，下游引物為5'-GGGTGTCGAGGGAAAAATAGG-3'；N-鈣黏蛋白上游引物為5'-A G A G G A A G A C C A G G A C T A T G A C T T G A G-3'，下游引物為5'-TACTGTGGCTCAGCGTGGATAGG-3'；波形蛋白上游引物為5'-GCGTGACGTACGTCAGCAATATGA-3'，下游引物為5'-GTTCCAGGGACTCATTGGTTCCTT-3'；FN上游引物為5'-TGGAGGAAGCCGAGGTTT-3'，下游引物為5'-CAGCGGTTTGCGATGGTA-3'），以GAPDH作為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法計算目的mRNA相對表達(dá)量。實驗獨立重復(fù)3次。

1.9 Western blot法測定EMT相關(guān)因子蛋白及p38 MAPK信號通路相關(guān)蛋白相對表達(dá)量 取對照組、H2O2組、10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組、抑制劑組、激活劑組A549細(xì)胞，提取蛋白并進行定量后上樣，進行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE），轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜，封閉2 h后參照抗體說明書加入按照一定比例稀釋的一抗，4 ℃孵育過夜，次日用TBST洗滌后加入山羊抗鼠IgG二抗，孵育2 h，洗滌3次，最后加入顯影液，使用凝膠成像系統(tǒng)拍照記錄。蛋白灰度值用G表示，計算蛋白相對表達(dá)量，蛋白相對表達(dá)量=G目的蛋白/Gβ-actin。實驗獨立重復(fù)3次。

1.10 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 25.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用Tukey檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)胞活力 干預(yù)24 h后，對照組細(xì)胞活力為（0.967±0.098），H2O2組為（0.423±0.063），2.5 mmol/L二甲雙胍組為（0.500±0.062），5.0 mmol/L二甲雙胍組為（0.746±0.086），10.0 mmol/L二甲雙胍組為（0.826±0.097），SB203580組為（0.856±0.090）。六組細(xì)胞活力比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=19.386，P＜0.001）；其中H2O2組細(xì)胞活力低于對照組，5.0 mmol/L二甲雙胍組、10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組細(xì)胞活力高于H2O2組，10.0 mmol/L二甲雙胍組細(xì)胞活力高于5.0 mmol/L二甲雙胍組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。本研究選取細(xì)胞活力最佳時的藥物濃度（10.0 mmol/L二甲雙胍）進行后續(xù)實驗。

2.2 細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞遷移率 六組細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞遷移率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；其中H2O2組細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞遷移率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞遷移率低于H2O2組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；抑制劑組細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞遷移率低于10.0 mmol/L二甲雙胍組和SB203580組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；激活劑組細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞遷移率高于10.0 mmol/L二甲雙胍組和SB203580組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1、圖1～2。

圖1 六組細(xì)胞凋亡情況（Hoechst 33258染色，×20）Figure 1 Cell apoptosis in six groups

圖2 六組細(xì)胞遷移情況Figure 2 Cell migration of the six groups

表1 六組細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞遷移率比較（±s，%，n=3）Table 1 Comparison of apoptosis rate and cell migration rate among the six groups

表1 六組細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞遷移率比較（±s，%，n=3）Table 1 Comparison of apoptosis rate and cell migration rate among the six groups

注：H2O2=過氧化氫；a表示與對照組比較，P ＜0.05；b表示與H2O2組比較，P＜0.05；c表示與10.0 mmol/L二甲雙胍組比較，P＜0.05；d表示與SB203580組比較，P＜0.05

組別 細(xì)胞凋亡率 細(xì)胞遷移率對照組 5.00±1.00 5.06±0.52 H2O2組 60.00±6.35a 50.36±6.54a 10.0 mmol/L二甲雙胍組 33.67±3.42b 20.83±2.78b SB203580組 33.33±3.51b 20.14±2.23b抑制劑組 9.00±1.73cd 3.22±0.33cd激活劑組 54.33±6.21cd 34.51±4.39cd F值 85.654 76.906 P值 ＜0.001 ＜0.001

2.3 EMT相關(guān)因子mRNA和蛋白相對表達(dá)量 六組E-鈣黏蛋白、N-鈣黏蛋白、波形蛋白、FN mRNA和蛋白相對表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；其中H2O2組E-鈣黏蛋白mRNA和蛋白相對表達(dá)量低于對照組，N-鈣黏蛋白、波形蛋白、FN mRNA和蛋白相對表達(dá)量高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組E-鈣黏蛋白mRNA和蛋白相對表達(dá)量高于H2O2組，N-鈣黏蛋白、波形蛋白、FN mRNA和蛋白相對表達(dá)量低于H2O2組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；抑制劑組E-鈣黏蛋白mRNA和蛋白相對表達(dá)量高于10.0 mmol/L二甲雙胍組和SB203580組，N-鈣黏蛋白、波形蛋白、FN mRNA和蛋白相對表達(dá)量低于10.0 mmol/L二甲雙胍組和SB203580組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；激活劑組E-鈣黏蛋白mRNA和蛋白相對表達(dá)量低于10.0 mmol/L二甲雙胍組和SB203580組，N-鈣黏蛋白、波形蛋白、FN mRNA和蛋白相對表達(dá)量高于10.0 mmol/L二甲雙胍組和SB203580組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表2、圖3。

圖3 六組EMT相關(guān)因子蛋白表達(dá)SDS-PAGE圖Figure 3 SDS-PAGE of protein expression of EMT-related factors in the six groups

表2 六組EMT相關(guān)因子mRNA和蛋白相對表達(dá)量比較（±s，n=3）Table 2 Comparison of mRNA and protein relative expression of EMT-related factors among the six groups

表2 六組EMT相關(guān)因子mRNA和蛋白相對表達(dá)量比較（±s，n=3）Table 2 Comparison of mRNA and protein relative expression of EMT-related factors among the six groups

注：FN=纖維連接蛋白；a表示與對照組比較，P＜0.05；b表示與H2O2組比較，P＜0.05；c表示與10.0 mmol/L二甲雙胍組比較，P＜0.05；d表示與SB203580組比較，P＜0.05

組別E-鈣黏蛋白 N-鈣黏蛋白 波形蛋白 FN mRNA相對表達(dá)量 蛋白相對表達(dá)量 mRNA相對表達(dá)量 蛋白相對表達(dá)量 mRNA相對表達(dá)量 蛋白相對表達(dá)量 mRNA相對表達(dá)量 蛋白相對表達(dá)量對照組 1.01±0.10 0.85±0.09 0.43±0.05 0.39±0.04 0.64±0.07 0.65±0.07 0.57±0.06 0.59±0.06 H2O2組 0.58±0.06a 0.50±0.07a 0.66±0.07a 0.51±0.06a 0.89±0.09a 0.87±0.07a 0.95±0.10a 0.89±0.09a 10.0 mmol/L二甲雙胍組 0.71±0.08b 0.69±0.07b 0.49±0.06b 0.37±0.03b 0.76±0.08b 0.79±0.08b 0.76±0.08b 0.26±0.03b SB203580組 0.71±0.08b 0.63±0.07b 0.49±0.04b 0.23±0.03b 0.75±0.09b 0.73±0.08b 0.76±0.09b 0.26±0.02b抑制劑組 0.91±0.07cd 1.04±0.11cd 0.26±0.02cd 0.20±0.02cd 0.61±0.07cd 0.56±0.06cd 0.56±0.06cd 0.11±0.01cd激活劑組 0.39±0.04cd 0.30±0.04cd 0.60±0.07cd 0.51±0.06cd 0.88±0.09cd 0.89±0.09cd 0.94±0.08cd 0.77±0.08cd F值 27.233 33.247 19.606 28.827 6.058 8.615 13.657 91.938 P值 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 0.005 0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.4 p38 MAPK信號通路相關(guān)蛋白相對表達(dá)量 六組p38 MAPK相對表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。六組磷酸化p38 MAPK相對表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；其中H2O2組磷酸化p38 MAPK相對表達(dá)量高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組磷酸化p38 MAPK相對表達(dá)量低于H2O2組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；抑制劑組磷酸化p38 MAPK相對表達(dá)量低于10.0 mmol/L二甲雙胍組和SB203580組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；激活劑組磷酸化p38 MAPK相對表達(dá)量高于10.0 mmol/L二甲雙胍組和SB203580組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3、圖4。

圖4 六組p38 MAPK信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)SDS-PAGE圖Figure 4 SDS-PAGE of protein expression of p38 MAPK signaling pathway-related in the six groups

表3 六組p38 MAPK信號通路相關(guān)蛋白相對表達(dá)量比較（±s，n=3）Table 3 Comparison of protein relative expression of p38 MAPK signaling pathway-related among the six groups

表3 六組p38 MAPK信號通路相關(guān)蛋白相對表達(dá)量比較（±s，n=3）Table 3 Comparison of protein relative expression of p38 MAPK signaling pathway-related among the six groups

注：p38 MAPK=p38絲裂原活化蛋白激酶；a表示與對照組比較，P＜0.05；b表示與H2O2組比較，P＜0.05；c表示與10.0 mmol/L二甲雙胍組比較，P＜0.05；d表示與SB203580組比較，P＜0.05

組別 p38 MAPK 磷酸化p38 MAPK對照組 0.37±0.04 0.35±0.04 H2O2組 0.38±0.04 0.64±0.07a 10.0 mmol/L二甲雙胍組 0.40±0.05 0.27±0.03b SB203580組 0.40±0.05 0.26±0.03b抑制劑組 0.38±0.04 0.13±0.02cd激活劑組 0.40±0.05 0.49±0.05cd F值 0.259 53.464 P值 0.927 ＜0.001

3 討論

急性肺損傷的發(fā)病機制較為復(fù)雜且尚未完全明確，屬于臨床常見的危重癥。急性肺損傷能夠造成彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫，促使機體出現(xiàn)急性低氧性呼吸功能不全，對患者生命造成嚴(yán)重威脅［9］。目前臨床上仍以機械通氣為基礎(chǔ)對癥治療急性肺損傷，但患者病死率較高［10］。因此，探究能夠有效抑制急性肺損傷發(fā)生及發(fā)展的藥物意義重大。二甲雙胍為雙胍類口服降糖藥，在臨床上已經(jīng)應(yīng)用多年［11］，近年來研究發(fā)現(xiàn)，二甲雙胍除了具有降糖作用外，還能發(fā)揮抗炎作用以及減少氧化應(yīng)激損傷［12］。據(jù)報道，二甲雙胍能夠?qū)?nèi)毒素誘導(dǎo)的急性肺損傷發(fā)揮抗炎作用［13］。盛琦等［14］研究顯示，二甲雙胍對H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷具有保護作用。另有研究表明，二甲雙胍能夠減輕脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷［15］，但二甲雙胍對H2O2誘導(dǎo)的急性肺損傷的作用未見報道。本研究結(jié)果顯示，H2O2組細(xì)胞活力低于對照組，提示H2O2可以誘導(dǎo)A549細(xì)胞氧化損傷，降低細(xì)胞活力。加入二甲雙胍處理后，5.0 mmol/L二甲雙胍組、10.0 mmol/L二甲雙胍組和SB203580組細(xì)胞活力高于H2O2組，說明5.0、10.0 mmol/L二甲雙胍和SB203580可以減輕H2O2誘導(dǎo)的氧化損傷，提高細(xì)胞活力。本研究選取干預(yù)細(xì)胞活力的最佳藥物濃度（10.0 mmol/L二甲雙胍）進行后續(xù)實驗，結(jié)果顯示，H2O2組細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞遷移率高于對照組，說明H2O2可促進人肺泡上皮細(xì)胞凋亡和細(xì)胞遷移；加入10.0 mmol/L二甲雙胍和SB203580后，細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞遷移率降低，說明10.0 mmol/L二甲雙胍和SB203580均可以抑制H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞遷移，這與熊存全等［16］研究報道相符。EMT典型特征是在一系列生物學(xué)過程中獲得具有遷移性與侵襲性間充質(zhì)表型，其進程與細(xì)胞侵襲、遷移能力關(guān)系密切，E-鈣黏蛋白和N-鈣黏蛋白是EMT進程中極為重要的調(diào)控因子［17-18］。本研究結(jié)果顯示，與對照組比較，H2O2組E-鈣黏蛋白mRNA和蛋白相對表達(dá)量降低，N-鈣黏蛋白、波形蛋白、FN mRNA和蛋白相對表達(dá)量升高，10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組E-鈣黏蛋白mRNA和蛋白相對表達(dá)量高于H2O2組，N-鈣黏蛋白、波形蛋白、FN mRNA和蛋白相對表達(dá)量低于H2O2組，提示10.0 mmol/L二甲雙胍和SB203580可抑制H2O2誘導(dǎo)的急性肺損傷EMT。

p38 MAPK信號通路在炎癥和應(yīng)激反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用，其可誘導(dǎo)炎癥及細(xì)胞凋亡［19］。近年來研究表明，p38 MAPK信號通路與急性肺損傷關(guān)系密切［20］。陳昱曉等［21］研究顯示，急性肺損傷小鼠體內(nèi)存在p38 MAPK信號通路相關(guān)蛋白過度激活情況，而阻斷該信號通路則能夠減輕肺損傷。王貴佐等［22］研究顯示，二甲雙胍可對脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷發(fā)揮保護作用。武麗濤等［23］研究表明，二甲雙胍可能通過抑制p38 MAPK信號通路來發(fā)揮抗炎作用。另有研究表明，黃芩苷能夠通過抑制p38 MAPK信號通路而有效減輕脂多糖所致的急性肺損傷［24］。既往關(guān)于二甲雙胍對脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷影響的研究較多，但關(guān)于二甲雙胍在H2O2誘導(dǎo)A549細(xì)胞發(fā)生急性肺損傷過程中對p38 MAPK信號通路的調(diào)控作用未見報道，本研究結(jié)果顯示，H2O2組磷酸化p38 MAPK相對表達(dá)量高于對照組，10.0 mmol/L二甲雙胍組、SB203580組磷酸化p38 MAPK相對表達(dá)量低于H2O2組，提示二甲雙胍和SB203580可能抑制了p38 MAPK信號通路的激活。本研究在10.0 mmol/L二甲雙胍組基礎(chǔ)上分別加入SB203580和C16-PAF發(fā)現(xiàn)，與10.0 mmol/L二甲雙胍組比較，抑制劑組細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞遷移率、N-鈣黏蛋白、波形蛋白、FN mRNA和蛋白相對表達(dá)量、磷酸化p38 MAPK相對表達(dá)量降低，E-鈣黏蛋白mRNA和蛋白相對表達(dá)量升高，激活劑組則與抑制劑組結(jié)果相反，提示二甲雙胍可能通過抑制p38 MAPK信號通路激活而抑制H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡、遷移及EMT。

綜上所述，二甲雙胍可能通過抑制p38 MAPK信號通路激活而抑制H2O2誘導(dǎo)的急性肺損傷人肺泡上皮細(xì)胞凋亡、遷移及EMT。下一步需在動物模型中探究二甲雙胍對H2O2誘導(dǎo)的急性肺損傷的作用機制，為阻斷急性肺損傷的相關(guān)研究提供更為全面的理論參考。

作者貢獻(xiàn)：歐陽運萍進行文章的構(gòu)思與設(shè)計，論文的修訂；陳濤進行研究的實施與可行性分析；李鵬進行資料收集；歐陽運萍、陳濤負(fù)責(zé)論文撰寫；趙博進行統(tǒng)計學(xué)處理；楊小軍進行資料整理，負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校，對文章整體負(fù)責(zé)、監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。