邱雨美,李冰濤,歐陽長生,謝夢蝶,李洪銘,涂 珺,尚廣彬,湯喜蘭,4

研究顯示,2019年全球心血管疾病患病人數(shù)為5.23億例,死亡人數(shù)為1 860萬例[1]。我國心血管疾病現(xiàn)患人數(shù)為3.3億例,因心血管疾病死亡占城鄉(xiāng)居民總死亡原因的首位,受城鎮(zhèn)化進程及人口老齡化加速的影響,我國心血管疾病的患病率及死亡率仍處于上升階段[2]。臨床上多種心血管疾病如高血壓、冠心病及心肌炎等都會引起心臟肥大。心臟肥大早期仍可維持正常的心臟功能,但持續(xù)的心臟肥大會導(dǎo)致心力衰竭、心律失常及猝死等嚴重后果[3]。

西洋參(Panax quinquefolius)為五加科人參屬植物,主產(chǎn)于加拿大安大略和魁北克、美國威斯康辛等地,已在我國吉林和山東等地引種栽培[4]。西洋參味甘、微苦,性涼,入心、肺、腎經(jīng),具有補氣養(yǎng)陰、清熱生津的功效,用于治療氣虛陰虧、虛熱煩倦、咳喘痰血、內(nèi)熱消渴、口燥咽干等癥[5]。西洋參主要含有人參皂苷、多糖、揮發(fā)油、有機酸、甾醇、氨基酸及蛋白質(zhì)類等成分[6],具有保護心臟[7]、抗氧化[8]、抗腫瘤[9]、降血糖[10]及增強免疫力[11]等作用。研究表明,西洋參對于冠狀動脈結(jié)扎、異丙腎上腺素及血管緊張素Ⅱ等多種因素誘導(dǎo)的大鼠心臟肥大、心力衰竭模型具有良好的保護作用[12-14],但西洋參抗心臟肥大的作用機制尚未明確。因此,本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法分析西洋參抗心臟肥大的作用靶點及機制,進一步在大鼠H9c2心肌細胞肥大模型上對作用靶點進行驗證,以期為西洋參用于心血管疾病的防治提供參考。

1 資料與方法

1.1 西洋參活性成分及藥物靶點的篩選 利用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(TCMSP,http://tcmspw.com)收集西洋參的主要化學(xué)成分,以“西洋參”為關(guān)鍵詞,后對其包含的所有化合物根據(jù)吸收、分布、代謝和排泄(ADME)相關(guān)參數(shù)進行潛在活性成分篩選,參數(shù)設(shè)置為:口服生物利用度(OB)≥30%,類藥性(DL)≥0.18。運用中醫(yī)藥百科全書(ETCM,http://ww.tcmip.cn/ETCM/)和查找已發(fā)表的文獻進一步補充西洋參的活性成分。將成分輸入有機小分子生物活性數(shù)據(jù)庫(PubChem,http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov),根據(jù)類藥五原則(Lipinski原則,氫鍵供體數(shù)≤5個、氫鍵受體數(shù)≤10個、相對分子量≤500、脂水分配系數(shù)≤5、化合物中可旋轉(zhuǎn)鍵的數(shù)量不超過10個),選擇符合2項規(guī)則以上的成分,獲取Canonical SMILES號,并通過基于多靶點定量構(gòu)效關(guān)系的靶點預(yù)測平臺數(shù)據(jù)庫(Targetnet,http://targetnet.scbdd.com/)和小分子藥物靶點預(yù)測在線平臺(Swiss Target Prediction,http://www.swisstargetprediction.ch/)以顯著性水平(Prob)>0為原則篩選西洋參的作用靶點;利用蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫Uniprot(https://www.uniprot.org/)查詢每個蛋白靶點對應(yīng)的基因名,確定物種來源為“Human”并建立數(shù)據(jù)庫,用于后續(xù)分析。

1.2 心臟肥大疾病靶點的篩選 通過人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(OMIM,http://www.omim.org)、藥物靶標數(shù)據(jù)庫(TTD,http://bidd.nus.edu.sg/group/cjttd)、基因名片數(shù)據(jù)庫(GeneCards,http://www.genecards.org/),以“cardiomyocyte hypertrophy”為關(guān)鍵詞,收集已知驗證的與心臟肥大相關(guān)的人類基因,刪去重復(fù)項,取并集,獲得心臟肥大相關(guān)靶點。

1.3 西洋參抗心臟肥大潛在靶點的獲取 將西洋參成分靶點與心臟肥大疾病靶點導(dǎo)入Venny 2.1.0(http://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html),提取同時出現(xiàn)在藥物靶點與疾病靶點中的共同靶點,即為西洋參治療心臟肥大的潛在作用靶點。

1.4 西洋參抗心臟肥大潛在靶點相互作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 打開STRING數(shù)據(jù)庫(https://string-db.org/),進入頁面首先選擇“multiple proteins”條目,輸入獲得的交集靶點名稱,物種限定為“Homo sapiens”,最低相互作用閾值設(shè)為中等“Medium confidence(0.400)”,隱藏游離節(jié)點,其余參數(shù)保持默認值進行檢索,下載蛋白-蛋白相互作用(PPI)結(jié)果(tsv格式文件),而后將其導(dǎo)入Cytoscape 3.8.0軟件進行可視化分析,通常根據(jù)度中心性Degree值,計算其平均數(shù),以大于平均數(shù)的靶點在網(wǎng)絡(luò)中為重要靶點,大于平均數(shù)2倍的為關(guān)鍵靶點,獲得西洋參治療心臟肥大的PPI網(wǎng)絡(luò)圖。

1.5 生物信息學(xué)基因本體(GO)功能注釋和京都基因與基因組百科全書(KEGG)通路富集分析 使用注釋、可視化和綜合發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)庫(DAVID,https://david.ncifcrf.gov/home.jsp)對上述篩選得到的重要靶點進行生物功能及分子信號通路的富集分析。其中,從生物過程(biological process,BP)、細胞組分(cell component,CC)和分子功能(molecular function,MF)3個水平進行GO富集分析,選擇BP校正P值最小的前15個條目進行可視化;并使用基迪奧生物信息云平臺(Omicshare在線平臺,https://www.omicshare.com/)將KEGG富集程度較高的前20條通路繪制成氣泡圖。

1.6 體外實驗驗證

1.6.1 細胞株、藥物和試劑 大鼠H9c2細胞株購自協(xié)和醫(yī)科大學(xué)細胞實驗中心;異丙腎上腺素(中國食品藥品檢定研究院,批號:Z21N10X103254,純度≥99.2%);DMEM高糖培養(yǎng)基(美國Gibco公司,批號:8121192);胎牛血清(美國Gemini公司,批號:A15H74K);磷酸鹽緩沖液(PBS)(武漢賽維爾生物科技有限公司,批號:GP21010070226);0.25%胰蛋白酶(美國Gibco公司,批號:2120732);噻唑藍(MTT)試劑(廣州賽國生物科技有限公司,批號:EZ3455C328);DEPC處理水(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司,批號:G430KA5395);RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑及實時熒光定量PCR(qPCR)試劑[Takara寶生物工程(大連)有限公司,批號分別為:AJG1902A、AL12354A、AK81975A]。

1.6.2 儀器 MI52-N倒置顯微鏡(廣州明美光電技術(shù)有限公司),Spectra Max Plus384 全波長酶標儀(美國Molecular Devices公司),TGL20M臺式高速冷凍離心機(鹽城凱特實驗儀器有限公司),CFX96TMReal-Time PCR儀(美國Bio-rad公司)。

1.6.3 細胞培養(yǎng)與細胞活力檢測 將H9c2心肌細胞置于含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中培養(yǎng)。將生長狀態(tài)良好的細胞以每孔5×103個接種于96孔板中,培養(yǎng)24 h后加入不同濃度的西洋參,根據(jù)加入西洋參濃度的不同分為12.5 μg/mL西洋參組、25.0 μg/mL西洋參組、50.0 μg/mL西洋參組、100.0 μg/mL西洋參組、200.0 μg/mL西洋參組,將加入含0.1%二甲基亞砜(DMSO)的培養(yǎng)基作為正常組。藥物作用24 h后進行MTT法檢測,在酶標儀492 nm波長處檢測各孔吸光度(OD),計算細胞增殖抑制率(IC%)=(正常組OD-西洋參各濃度組OD)/正常組OD×100%,觀察西洋參對心肌細胞活力的影響。

1.6.4 心肌細胞表面積檢測 采用異丙腎上腺素10 μmol/L復(fù)制H9c2心肌細胞肥大模型,以心肌細胞表面積增大和心臟肥大相關(guān)胚胎基因心房鈉尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重鏈(β-MHC)、α-骨骼肌肌動蛋白(α-SKA)表達上調(diào)表明模型制作成功。將5×103個處于對數(shù)生長期的心肌細胞接種至35 mm培養(yǎng)皿中,接種24 h后將細胞分為正常組(加入與其他各組等體積的溶媒0.2% DMSO)、模型組(加入異丙腎上腺素10 μmol/L)、西洋參干預(yù)組(預(yù)先1 h加入西洋參100.0 μg/mL,而后加入異丙腎上腺素10 μmol/L)、西洋參單獨組(加入西洋參100.0 μg/mL)。藥物作用24 h后,采用明美顯微數(shù)碼測量分析系統(tǒng)拍照并運用ImageJ軟件測量心肌細胞面積。

1.6.5 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR) 將1×105個心肌細胞接種于35 mm的培養(yǎng)皿中,接種24 h后,實驗分組和加藥同1.6.4。藥物作用24 h后,按照Trizol試劑盒說明書提取總RNA并定量。取1 μg RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進行擴增反應(yīng),擴增條件:95 ℃預(yù)變性30 s,95 ℃變性10 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,共40個循環(huán)。以18S rRNA為內(nèi)參基因,采用10倍稀釋制作內(nèi)參基因和目的基因的標準曲線,稀釋范圍為10-5～1,根據(jù)雙標準曲線法計算心臟肥大相關(guān)胚胎基因ANP、β-MHC、α-SKA及關(guān)鍵靶點基因血管內(nèi)皮生長因子A(VEGFA)、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶1(AKT1)、表皮生長因子受體(EGFR)、腫瘤壞死因子(TNF)、絲裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)的相對表達水平。引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成,引物序列見表1。

表1 qRT-PCR引物序列

2 結(jié) 果

2.1 西洋參潛在活性化合物及其作用靶點 通過TCMSP平臺及ETCM共檢索到西洋參活性成分45個,去除無明確對應(yīng)靶點的化學(xué)成分共獲得有效活性成分42個(見表2),去除重復(fù)項得到西洋參作用靶點共558個。

表2 西洋參活性成分信息

2.2 西洋參治療心臟肥大的潛在作用靶點 經(jīng)過數(shù)據(jù)庫檢索,刪除重復(fù)項靶點獲得心臟肥大疾病靶點809個,通過Venny 2.1.0軟件獲取西洋參和心臟肥大的作用靶點交集,其中共同作用靶點41個,約占集合總數(shù)的3.1%,獲得西洋參和心臟肥大的Venny圖,詳見圖1。

圖1 西洋參活性成分靶點與心臟肥大相關(guān)靶點Venny圖

2.3 西洋參抗心臟肥大潛在靶點相互作用網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 將獲得的交集靶點輸入STRING數(shù)據(jù)庫構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖,并借助Cytoscape 3.8.0進行可視化,刪除游離項(見圖2)。圖中節(jié)點為靶點,邊為靶點之間的聯(lián)系;節(jié)點的顏色及大小反映節(jié)點的Degree值,顏色越深、節(jié)點越大則其Degree值越大,邊的粗細反映連接程度,邊越粗,連接越緊密。在西洋參抗心臟肥大作用PPI網(wǎng)絡(luò)中,有21個靶點的Degree值大于平均值,其中VEGFA(28)、AKT1(26)、EGFR(25)、TNF(25)、MAPK1(24)是Degree值大于平均數(shù)2倍的靶點,為關(guān)鍵靶點,可能在西洋參治療心臟肥大的過程中發(fā)揮重要作用。

2.4 GO功能富集分析與KEGG通路富集分析 利用DAVID在線平臺對PPI網(wǎng)絡(luò)中大于平均Degree值的21個關(guān)鍵靶點進行富集分析。GO分析共獲得247個條目,其中BP分類主要包括一氧化氮合成過程的正調(diào)控(positive regulation of nitric oxide biosynthetic process)、脂多糖介導(dǎo)的信號通路(lipopolysaccharide-mediated signaling pathway)、肽基-絲氨酸磷酸化的正調(diào)控(positive regulation of peptidyl-serine phosphorylation)等193個條目;CC分類主要包括細胞膜質(zhì)(plasma membrane)、細胞表面(cell surface)、蛋白質(zhì)復(fù)合物(protein complex)等26個條目;MF分類主要包括酶結(jié)合(enzyme binding)、一氧化氮合酶調(diào)節(jié)活性(nitric-oxide synthase regulator activity)、支架蛋白結(jié)合(scaffold protein binding)等28個條目。根據(jù)錯誤發(fā)現(xiàn)率(FDR值)由小到大排序,篩選出BP結(jié)果中前15條繪圖(見圖3)。KEGG富集分析共獲得89條信號通路,80條信號通路的閾值P<0.05,選取前20條信號通路,借助Omicshare平臺繪制西洋參作用于心臟肥大的可視化氣泡圖(見圖4)。西洋參抗心臟肥大主要與癌癥蛋白多糖(proteoglycans in cancer)、血管內(nèi)皮生長因子信號通路(VEGF signaling pathway)、缺氧誘導(dǎo)因子-1信號通路(HIF-1 signaling pathway)等有關(guān)。上述結(jié)果提示西洋參主要活性成分的作用靶點涉及的生物學(xué)過程的多樣化,并分布于不同的代謝通路。

圖3 西洋參治療心臟肥大GO生物過程富集分析

圖4 西洋參治療心臟肥大的KEGG富集分析

2.5 細胞實驗驗證

2.5.1 不同濃度西洋參對H9c2心肌細胞活力的影響 12.5 μg/mL西洋參組、25.0 μg/mL西洋參組、50.0 μg/mL西洋參組、100.0μg/mL西洋參組心肌細胞抑制率與正常組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),而200 μg/mL西洋參組與正常組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。故本研究選用100.0 μg/mL的西洋參用于評價對異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌細胞肥大的影響。詳見表3。

表3 不同濃度西洋參對H9c2心肌細胞活力的影響(±s)

2.5.2 西洋參對異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌細胞肥大的影響 與正常組比較,模型組心肌細胞表面積增加,ANP、β-MHC、α-SKA mRNA表達上調(diào),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較,西洋參干預(yù)組心肌細胞表面積降低,ANP、β-MHC、α-SKA mRNA表達均下調(diào),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與正常組比較,西洋參單獨組心肌細胞表面積及ANP、β-MHC、α-SKA mRNA表達,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見圖5、圖6。

與正常組比較,＊ P<0.05;與模型組比較,# P<0.05。圖5 西洋參對異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌細胞表面積的影響(n=6)

與正常組比較,＊ P<0.05;與模型組比較,# P<0.05。圖6 西洋參對異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌細胞肥大基因表達的影響(A為ANP mRNA相對表達量,B為β-MHC mRNA相對表達量,C為α-SKA mRNA相對表達量,n=6)

2.5.3 西洋參對異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌細胞VEGFA、AKT1、EGFR、TNF、MAPK1基因表達的影響 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)富集分析篩選顯示VEGFA、AKT1、EGFR、TNF、MAPK1可能是西洋參干預(yù)心臟肥大的關(guān)鍵靶點。qRT-PCR驗證實驗結(jié)果表明,與正常組比較,模型組心肌細胞VEGFA、AKT1、EGFR、TNF、MAPK1 mRNA表達上調(diào),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),與模型組比較,西洋參干預(yù)組心肌細胞VEGFA、AKT1、EGFR、TNF、MAPK1 mRNA表達下調(diào),差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。詳見圖7、圖8。

與正常組比較,＊P<0.05;與模型組比較,# P<0.05。圖7 西洋參對異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌細胞VEGFA、AKT1、EGFR基因表達的影響(A為VEGFA mRNA相對表達量,B為AKT1 mRNA相對表達量,C為EGFR mRNA相對表達量,n=5)

與正常組比較,＊P<0.05;與模型組比較,# P<0.05。圖8 西洋參對異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌細胞TNF、MAPK1基因表達的影響(A為TNF mRNA相對表達量,B為MAPK1 mRNA相對表達量,n=5)

3 討 論

心臟肥大是心肌組織為適應(yīng)多種病理刺激如血流動力學(xué)超負荷、循環(huán)激素增加等因素而產(chǎn)生的適應(yīng)性反應(yīng),是多種心血管疾病如高血壓、冠心病等的常見并發(fā)癥,其病理改變表現(xiàn)為心肌細胞體積增大、心臟胚胎基因重編程和一些心臟發(fā)育期的轉(zhuǎn)錄因子重新激活、心臟收縮和舒張功能降低、膠原纖維沉積及心臟重構(gòu)等[3,15]。西洋參以其多成分、多靶點、多途徑的優(yōu)勢在心臟肥大等心血管疾病的防治研究和應(yīng)用較為廣泛。西洋參及其活性成分具有抑制心肌細胞凋亡、改善血液循環(huán)、抑制氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)等多方面的作用[16]。研究表明,西洋參提取物可通過阻斷p115Rho鳥嘌呤核苷酸交換因子-Ras同源基因家族成員A/Rho相關(guān)卷曲螺旋蛋白激酶(p115RhoGEF-RhoA/ROCK)依賴的絲裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)激活而抑制瘦素誘導(dǎo)心肌細胞肥大[17],可通過阻斷蛋白激酶A(PKA)激活和環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)磷酸化而減輕異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心臟肥大[13],還可通過調(diào)節(jié)脂肪酸和葡萄糖的氧化緩解血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的心臟肥大[14]。

本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法從TCMSP和ETCM數(shù)據(jù)庫及相關(guān)文獻中共篩選出42種西洋參活性成分,再與OMIM、TTD 以及GeneCards數(shù)據(jù)庫篩選出的心臟肥大相關(guān)靶點進行比對,獲得西洋參抗心臟肥大靶點41個。進一步PPI網(wǎng)絡(luò)分析表明,VEGFA、AKT1、EGFR、TNF和MAPK1可能是西洋參抗心臟肥大的關(guān)鍵靶點。VEGFA是血管生成的關(guān)鍵介質(zhì),其與心臟的關(guān)系是雙向的,一方面,受炎癥、機械應(yīng)力、內(nèi)皮素-1和轉(zhuǎn)化生長因子-β等刺激因素的影響,心肌細胞分泌和釋放VEGFA;另一方面,VEGFA誘導(dǎo)心肌細胞激活,促進心肌組織的血管生成,增強心肌的收縮和存活[18]。研究表明,在異丙腎上腺素或主動脈弓縮窄術(shù)誘導(dǎo)的小鼠心臟肥大模型中,VEGFA表達上調(diào)[19-20]。AKT1為絲/蘇氨酸蛋白激酶,參與調(diào)節(jié)心臟生長、增殖、遷移和代謝,與心臟肥大密切相關(guān)[21]。研究表明,心臟中長期AKT1的激活可降低心肌線粒體的氧化能力而導(dǎo)致心臟肥大[22]。AKT1在血管緊張素Ⅱ灌注誘導(dǎo)的心臟肥大模型和高血壓心肌纖維化模型中均表達上調(diào)[23-24]。EGFR是受體型蛋白酪氨酸激酶,廣泛表達于心臟和血管組織中,EGFR通路參與細胞增殖、分化和周期調(diào)控等生物過程,與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。研究表明,EGFR激活可促進內(nèi)脂素、血管緊張Ⅱ等誘導(dǎo)的心肌肥大[25-26],抑制EGFR活性和EGFR依賴的細胞內(nèi)信號通路可緩解心臟肥大[27-28]。TNF-α介導(dǎo)的核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)激活參與了心臟肥大,人參皂苷Rg1抑制TNF-α/NF-κB信號通路可緩解主動脈弓縮窄術(shù)誘導(dǎo)的大鼠心臟肥大[29]。MAPK1參與多種炎性因子的信號轉(zhuǎn)導(dǎo),調(diào)控細胞增殖、分化和凋亡。研究發(fā)現(xiàn),在主動脈弓縮窄術(shù)或異丙腎上腺素誘導(dǎo)小鼠心臟肥大時,心肌細胞外信號調(diào)節(jié)激酶2(ERK2)蛋白磷酸化水平增加[30]。

為進一步探討西洋參抗心臟肥大的作用機制,本研究對西洋參抗心臟肥大關(guān)鍵靶點進行GO和KEGG富集分析。GO功能富集分析顯示西洋參抗心臟肥大的作用機制涉及CC的細胞膜質(zhì)、細胞表面和蛋白質(zhì)復(fù)合物,BP主要與一氧化氮合成過程的正調(diào)控、脂多糖介導(dǎo)的信號通路以及肽基-絲氨酸磷酸化的正調(diào)控相關(guān),MF主要與酶結(jié)合、一氧化氮合酶調(diào)節(jié)活性以及支架蛋白結(jié)合相關(guān)。KEGG通路富集分析表明,西洋參抗心臟肥大主要與癌癥蛋白多糖、血管內(nèi)皮生長因子信號通路、缺氧誘導(dǎo)因子-1信號通路等有關(guān)。

在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析的基礎(chǔ)上,本研究選擇大鼠H9c2心肌細胞為研究對象,觀察了西洋參抗心肌細胞肥大作用,并對關(guān)鍵靶點VEGFA、AKT1、EGFR、TNF和MAPK1的基因表達進行了驗證。異丙腎上腺素屬于兒茶酚胺類物質(zhì),可興奮心肌細胞的β受體,誘導(dǎo)心肌細胞肥大、心臟胚胎基因重新激活表達[15]。本研究結(jié)果顯示,西洋參100.0 μg/mL可抑制異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌細胞面積增加及心臟胚胎基因ANP、β-MHC與α-SKA mRNA的表達上調(diào)。進一步的qRT-PCR實驗表明,西洋參100 .0μg/mL抑制異丙腎上腺素誘導(dǎo)的VEGFA、AKT1、EGFR、TNF、MAPK1 mRNA表達上調(diào),這與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果相一致。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對西洋參抗心臟肥大的作用靶點及通路進行了分析,而后通過體外實驗驗證了西洋參抗心臟肥大作用,并對其抗心臟肥大的關(guān)鍵靶點進行了驗證和探討,為深入研究西洋參防治心血管疾病的藥理機制和臨床應(yīng)用提供參考。