王菊紅，黎鵬

1.寶雞市婦幼保健院兒童免疫內(nèi)分泌科，陜西 寶雞 721000；2.寶雞市中醫(yī)醫(yī)院兒科，陜西 寶雞 721000

注意缺陷多動障礙(attention deficit hyperactivity disorder，ADHD)是學(xué)齡期兒童表現(xiàn)為注意力不集中、多動和行為沖動的一種精神和神經(jīng)發(fā)育障礙性疾病[1]。ADHD 的發(fā)病原因較為復(fù)雜，主要影響因素是環(huán)境、遺傳等[2]。據(jù)報道，ADHD 在美國兒童中的發(fā)病率為3%～5%，在日本兒童中約占4%[3]；據(jù)李世明等[4]統(tǒng)計ADHD 位居中國兒童精神科和兒童保健科門診病例前三位，發(fā)病率為5.6%。ADHD在學(xué)齡期兒童中會造成上課學(xué)習(xí)不專心、運動不穩(wěn)定、易怒沖動，青少年期直至成年主要表現(xiàn)為注意力不集中，其他癥狀隨著年齡增長而逐漸減弱[5]。目前，臨床上對ADHD 患兒主要使用哌甲酯等藥物治療，但伴隨著煩躁、食欲下降等不良反應(yīng)發(fā)生，對患兒生活產(chǎn)生影響[6]。因此，尋找新的治療靶點對ADHD具有重要的意義。一氧化氮合酶1(nitric oxide synthase 1，NOS1)又稱為神經(jīng)型一氧化氮合酶，是一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)的一種亞型，其主要分布在神經(jīng)元和內(nèi)皮細(xì)胞中，并催化產(chǎn)生一氧化氮，具有調(diào)控神經(jīng)遞質(zhì)傳遞、突觸形成等作用[7]。一氧化氮(nitric oxide，NO)是一種存在于人體細(xì)胞的小分子物質(zhì)，主要產(chǎn)生于腦細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞，具有調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、增強血小板聚合、血管擴(kuò)張等功能[8]。研究發(fā)現(xiàn)，NOS1 異?；罨瘯?dǎo)致NO 過量產(chǎn)生，從而造成下游細(xì)胞凋亡信號被激活，導(dǎo)致腦部神經(jīng)元及部分功能受損[9]。因此，本研究通過檢測ADHD患兒外周血NOS1、NO水平，分析兩者與疾病發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性，以期為臨床防治ADHD提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年4 月至2021 年4 月寶雞市婦幼保健院和寶雞市中醫(yī)醫(yī)院確診為ADHD患兒93 例為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均按照《美國精神障礙診斷手冊》(第5 版)中ADHD診斷標(biāo)準(zhǔn)[10]；(2)初次診斷為ADHD，并未接受治療；(3)患兒臨床資料完整，且家屬知情并自愿參加本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并智力、精神障礙者；(2)合并營養(yǎng)性或消化道、呼吸道疾病者；(3)年齡小于6歲或大于18歲。同期選取在本院體檢的健康兒童122例為對照組。本研究獲得兩家醫(yī)院的倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 一般資料收集 收集兩組受檢兒童的年齡、性別、體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、胎兒宮內(nèi)窘迫、產(chǎn)程延長、兒童孤獨及父母經(jīng)常吵架等情況。

1.2.2 樣本采集及保存 采集ADHD 患兒入院后24 h內(nèi)清晨空腹肘靜脈血5 mL，對照組于體檢當(dāng)天清晨采集空腹肘靜脈血5 mL，收集于EDTA 抗凝管內(nèi)，分離血漿，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 外周血NOS1、NO水平檢測 采用酶標(biāo)分析儀(HBS-1096C，南京德鐵實驗設(shè)備有限公司)檢測NOS1、NO水平，實驗操作均按說明書由專業(yè)技術(shù)人員嚴(yán)格進(jìn)行。人NOS1 酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)試劑盒購于上海澤葉生物科技有限公司，貨號：H-EL-NOS1/nNOS；人NO ELISA 試劑盒購于上海廣銳生物科技有限公司，貨號：20191215。

1.3 分組標(biāo)準(zhǔn) 93 例ADHD 患兒根據(jù)臨床反應(yīng)情況分為注意力缺陷為主型(predominantly inattentive type，PIT)組34 例，多動-沖動為主型(predominantly hyperactivity-impulse type，HIT)組19 例，混合型(combined type，CT)組40例。

1.4 觀察指標(biāo) 比較對照組和研究組受檢者的一般資料及外周血NOS1、NO 水平；比較三種分型ADHD患兒外周血NOS1、NO水平；分析外周血NOS1與NO水平的相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS25.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析全文數(shù)據(jù)。計量資料均呈正態(tài)分布且方差齊，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗；三組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用LSD-t 檢驗；計數(shù)資料兩組間比較采用χ2檢驗；采用Pearson 相關(guān)性分析ADHD 患兒外周血NOS1 水平與NO水平的相關(guān)性；采用多因素Logistic回歸分析ADHD發(fā)生的影響因素。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組和對照組受檢者的一般資料比較 研究組患兒的胎兒宮內(nèi)窘迫、產(chǎn)程延長、兒童孤獨、父母經(jīng)常吵架比例明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；而兩組受檢者的年齡、男/女比例、BMI 比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

表1 研究組和對照組受檢者的一般資料比較[±s，例(%)]Table 1 Comparison on the general data of subjects between the study group and the control group[±s,n(%)]

表1 研究組和對照組受檢者的一般資料比較[±s，例(%)]Table 1 Comparison on the general data of subjects between the study group and the control group[±s,n(%)]

臨床指標(biāo)年齡(歲)男/女BMI(kg/m2)胎兒宮內(nèi)窘迫(是/否)產(chǎn)程延長(是/否)兒童孤獨(是/否)父母經(jīng)常吵架(是/否)對照組(n=122)8.95±2.72 67(54.92)/55(45.08)19.12±3.67 10(8.20)/112(91.80)8(6.56)/114(93.44)5(4.10)/117(95.90)12(9.84)/110(90.16)研究組(n=93)9.04±2.94 50(53.76)/43(46.24)18.93±3.81 44(47.31)/49(52.69)30(32.26)/63(67.74)24(25.81)/69(74.19)20(21.51)/73(78.49)t/χ2值0.232 0.028 0.370 42.929 23.956 21.311 5.672 P值0.817 0.866 0.712 0.000 0.000 0.000 0.017

2.2 研究組和對照組受檢者的外周血NOS1、NO水平比較 研究組患兒的外周血NOS1、NO水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

表2 研究組和對照組受檢者的外周血NOS1、NO水平比較(±s)Table 2 Comparison on the peripheral blood NOS1 and NO levels of subjects between the control group and the study group(±s)

表2 研究組和對照組受檢者的外周血NOS1、NO水平比較(±s)Table 2 Comparison on the peripheral blood NOS1 and NO levels of subjects between the control group and the study group(±s)

組別研究組對照組t值P值例數(shù)93 122 NOS1(μmol/L)40.23±6.54 25.34±5.82 17.613 0.001 NO(U/mL)44.51±13.43 32.87±10.34 7.181 0.001

2.3 三種分型ADHD 患兒外周血NOS1、NO 水平比較 CT 組和HIT 組ADHD患兒的外周血NOS1、NO 水平明顯高于PIT 組，CT 組ADHD 患兒的外周血NOS1、NO 水平明顯高于HIT 組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表3。

表3 三種分型ADHD患兒外周血NOS1、NO水平比較(±s)Table 3 Comparison on NOS1 and NO levels in peripheral blood among children with ADHD of three types(±s)

表3 三種分型ADHD患兒外周血NOS1、NO水平比較(±s)Table 3 Comparison on NOS1 and NO levels in peripheral blood among children with ADHD of three types(±s)

注：與PIT組比較，aP＜0.05；與HIT組比較，bP＜0.05。Note: Compared with PIT group,aP＜0.05; Compared with HIT group,bP＜0.05.

組別PIT組HIT組CT組F值P值例數(shù)34 19 40 NOS1(μmol/L)30.23±6.12 36.42±6.52a 44.19±7.03ab 41.344 0.001 NO(U/mL)35.48±10.96 42.31±12.04a 49.84±12.39ab 13.625 0.001

2.4 ADHD患兒外周血NOS1與NO水平的相關(guān)性 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，ADHD患兒外周血NOS1水平與NO水平呈正相關(guān)(r=0.399，P=0.000)，見圖1。

圖1 ADHD患兒外周血NOS1與NO水平相關(guān)性分析的散點圖Figure 1 Scatter chart of correlation analysis of NOS1 and NO levels in peripheral blood of children with ADHD

2.5 影響ADHD 發(fā)生的危險因素 以是否發(fā)生ADHD為因變量(未發(fā)生=0、發(fā)生=1)，將賦值后的自變量胎兒宮內(nèi)窘迫、產(chǎn)程延長、兒童孤獨、父母經(jīng)常吵架、NOS1、NO 納入多因素Logistic 回歸分析模型，結(jié)果顯示胎兒宮內(nèi)窘迫、產(chǎn)程延長、兒童孤獨、父母經(jīng)常吵架、NOS1、NO 是影響ADHD 發(fā)生的危險因素(P＜0.05)，見表4。

表4 影響ADHD發(fā)生的多因素Logistic回歸分析Table 4 Multivariate Logistic regression analysis of the factors affecting the occurrence of ADHD

3 討論

ADHD 又稱腦功能輕微失調(diào)綜合征或兒童多動癥，主要特征表現(xiàn)為多動、注意缺陷、沖動等[11]。近年來，ADHD的患病率逐年增加。目前對于ADHD的具體發(fā)病機(jī)制尚不太明確，一般研究認(rèn)為其與心理、社會、生物等多種因素密切相關(guān)[12]。據(jù)影像學(xué)技術(shù)顯示，ADHD患兒的小腦體積和前額皮層呈現(xiàn)縮小狀態(tài)，且活動能力明顯減弱。研究發(fā)現(xiàn)，ADHD患兒去甲腎上腺素和多巴胺等一些神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)異常，基因也會影響ADHD的發(fā)生率[13]。據(jù)報道，全球ADHD的兒童患病率為8%～12%，半數(shù)以上的ADHD患兒疾病癥狀會持續(xù)到成年[14]。該病不僅影響學(xué)齡期兒童的智力發(fā)展，而且對成年甚至終身的社會生活活動產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。因此，對ADHD進(jìn)行早期診斷和及時治療對兒童有關(guān)鍵性的影響。

ADHD的致病病理主要是腦功能障礙或神經(jīng)發(fā)育異常，NOS1 和NO 分布于神經(jīng)元及腦細(xì)胞中，因此對中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程具有重要調(diào)控作用。NOS在體內(nèi)主要分為三種亞型，NOS1、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶和內(nèi)皮型一氧化氮合酶，其中NOS1廣泛存在于大腦的海馬、前額葉、皮質(zhì)、下丘腦等部位[15]。王淑靜等[16]在動物試驗中發(fā)現(xiàn)，NOS1在患有局灶性腦缺血的大鼠體內(nèi)含量升高，原因在于局灶性腦缺血造成大鼠前額葉皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)元損傷，導(dǎo)致機(jī)體應(yīng)激水平提高。本研究中，研究組患兒外周血NOS1水平明顯高于對照組，其中CT組和HIT組患兒外周血NOS1水平明顯高于PIT組，CT組患兒外周血NOS1水平明顯高于HIT組，提示NOS1可能與ADHD疾病的發(fā)生發(fā)展有相關(guān)性，推測，高水平NOS1 可能通過觸發(fā)有關(guān)信號通路，進(jìn)而繼發(fā)機(jī)體應(yīng)激水平，從而在ADHD 發(fā)病過程中發(fā)揮促進(jìn)作用，但其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究證實。

NO 在神經(jīng)元中擔(dān)任信使和遞質(zhì)樣的角色，具有調(diào)節(jié)腦血流量、保護(hù)神經(jīng)元、擴(kuò)張血管、抑制血小板聚集的功能[17]。研究發(fā)現(xiàn)，可通過NOS 間接反映NO 在組織細(xì)胞中的分布。然而，當(dāng)NO 表達(dá)過量時，會導(dǎo)致大量羥基及二氧化氮自由基被激活，進(jìn)而引發(fā)蛋白質(zhì)、核酸等受損，同時對神經(jīng)元產(chǎn)生毒性[18]。李浩源等[19]研究得出，血清NO 水平表達(dá)異常可對動脈血壓產(chǎn)生影響，繼而增加腦出血的風(fēng)險。張彥博等[20]在輕度胃腸炎伴嬰幼兒良性驚厥患兒中發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致患兒發(fā)生驚厥的原因可能在于血清NO水平及NOS活力的升高。何桂媛等[21]論述miR-146在支氣管哮喘過程中的作用得出，miR-146 基因可調(diào)控誘導(dǎo)型NOS1，導(dǎo)致其表達(dá)下調(diào)，NO產(chǎn)量隨之下降。本研究顯示，研究組患兒外周血NO水平明顯高于對照組，CT 組和HIT組患兒外周血NO 水平明顯高于PIT 組，CT 組患兒外周血NO 水平明顯高于HIT 組，提示外周血NO 可能與ADHD的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，究其原因，NO水平升高可能通過影響神經(jīng)系統(tǒng)進(jìn)而參與ADHD病情發(fā)展過程，但有待進(jìn)一步證實NO以何種形式發(fā)揮作用。

本研究中ADHD 患兒外周血NOS1 與NO 水平呈正相關(guān)，提示NOS1 可能與NO相互作用，進(jìn)而共同影響ADHD 病理過程，但相互作用機(jī)制有待深入探討。本研究發(fā)現(xiàn)，胎兒宮內(nèi)窘迫、產(chǎn)程延長、兒童孤獨、父母經(jīng)常吵架、NOS1、NO 是影響ADHD 發(fā)生的危險因素，提示胎兒宮內(nèi)窘迫、產(chǎn)程延長、兒童孤獨、父母經(jīng)常吵架的發(fā)生，外周血NOS1、NO 水平升高均可能會增加ADHD 的發(fā)生風(fēng)險。張平等[22]在對ADHD 相關(guān)危險因素探討中發(fā)現(xiàn)，胎兒宮內(nèi)窘迫、產(chǎn)程延長、父母管教環(huán)境及家庭關(guān)系是否和睦是影響ADHD 發(fā)生的危險因素。本研究中ADHD 發(fā)生的影響因素與張平等[22]研究結(jié)果部分一致。因此，及時關(guān)注產(chǎn)婦狀況、注重兒童生長環(huán)境，并監(jiān)控外周血NOS1、NO 水平有利于判定是否發(fā)生ADHD。

綜上所述，ADHD 患兒外周血NOS1、NO 水平表達(dá)上調(diào)，兩者可能相互影響，從而協(xié)同影響ADHD 發(fā)生及病情發(fā)展過程，檢測外周血NOS1、NO 水平有助于臨床及時預(yù)測發(fā)生ADHD的兒童，以便采取措施干預(yù)。但NOS1、NO影響ADHD患兒的具體機(jī)制尚未探究清楚，后期將增加樣本量進(jìn)行多方面探討。