摘要：目的 分析牙周炎宿主CD25⁺B細(xì)胞中IL-10、IL-35及TGF-β的表達(dá)特點(diǎn)，評(píng)價(jià)TLR4/9的表達(dá)活化對(duì)上述過(guò)程的影響。方法 SD大鼠隨機(jī)分為健康組、早期牙周炎組、晚期牙周炎組，采用結(jié)扎法建立牙周炎模型。檢測(cè)各組動(dòng)物牙齦及外周血CD25⁺B細(xì)胞內(nèi)IL-10、IL-35和TGF-β mRNA的表達(dá)水平，牙齦CD25⁺B細(xì)胞內(nèi)TLR 2/4/7/9、MyD88、TRAF6的表達(dá)活化水平。建立細(xì)胞培養(yǎng)體系，分析TLRs/MyD88信號(hào)對(duì)CD25⁺B細(xì)胞表達(dá)分泌IL-10、IL-35和TGF-β的影響。結(jié)果 早期牙周炎組牙齦CD25⁺B細(xì)胞內(nèi)IL-10、TGF-β mRNA表達(dá)水平高于健康組（Plt;0.05）。晚期牙周炎組牙齦CD25⁺B細(xì)胞內(nèi)IL-10、IL-35及TGF-β mRNA表達(dá)水平高于健康組（Plt;0.05），外周血CD25⁺B細(xì)胞內(nèi)IL-10 mRNA高于健康組（Plt;0.05），余差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。相比健康組，晚期牙周炎組牙齦CD25⁺B細(xì)胞內(nèi)TLR4/9及MyD88的表達(dá)磷酸化水平均升高（Plt;0.01）。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，TLR4激動(dòng)劑上調(diào)IL-10、IL-35、TGF-β mRNA表達(dá)及IL-10的濃度（Plt;0.05），TLR9激動(dòng)劑上調(diào)IL-10、TGF-β mRNA表達(dá)及IL-10的濃度（Plt;0.05），TLR4/TLR9激動(dòng)劑聯(lián)合應(yīng)用上調(diào)所有檢測(cè)指標(biāo)的表達(dá)及濃度（Plt;0.05），MyD88拮抗抑制上述過(guò)程（Plt;0.05）。結(jié)論 牙周炎晚期，牙齦CD25⁺B細(xì)胞表達(dá)IL-10、IL-35和TGF-β水平升高，這一過(guò)程可能受TLR4/9-MyD88信號(hào)調(diào)控。

關(guān)鍵詞：Toll樣受體；牙周炎；CD25⁺B細(xì)胞；MyD88；免疫調(diào)節(jié)

中圖分類號(hào)：R781.4

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

DOI：10.7652/jdyxb202306008

The effects and mechanisms of Toll like receptors 4/9 mediating IL-10， IL-35 and

TGF-β expressions by CD25⁺B cells from periodontitis individuals

HAN Yakun， YU Chengcheng， YU Yan

（Affiliated Hospital of Jilin Medical University， Jilin 132013， China）

ABSTRACT： Objective To analyze the expressions of IL-10， IL-35 and TGF-β in CD25⁺B cells from periodontitis individuals， and then establish how the activation of TLR4/9 affects the above processes. Methods SD rats were randomly divided into healthy group， primary periodontitis groups and severe periodontitis group; experimental models were performed by ligation. Expression of IL-10， IL-35 and TGF-β mRNA in CD25⁺B cells from gingiva and peripheral blood， expression and activation of TLR 2/4/7/9， MyD88， TRAF6 in gingival CD25⁺B cells were detected. The effect of TLRs/MyD88 on IL-10， IL-35 and TGF-β expressions and production were evaluated by cell culture experiments. Results CD25⁺B cells from gingiva of primary periodontitis individuals showed improved expression of IL-10 and TGF-β mRNA compared with the healthy ones （P＜0.05）; cells from peripheral blood did not present the same tendency. CD25⁺B cells from gingiva of severe periodontitis individuals showed improved expression of IL-10， IL-35 and TGF-β mRNA compared with the healthy ones （P＜0.05）， cells from peripheral blood showed higher IL-10 mRNA level than the healthy ones （P＜0.05）. Compared with healthy individuals， the expression and phosphorylation of TLR4/9 and MyD88 in CD25⁺B cells from gingiva of severe periodontitis individuals were increased （P＜0.01）. In cell culture experiments， TLR4 agonist promoted IL-10， IL-35 and TGF-β mRNA expression and IL-10 secretion （Plt;0.05）; TLR9 agonist improved IL-10 and TGF-β mRNA expression and IL-10 secretion （Plt;0.05）. The combined use of TLR4/9 agonist could increase the expression and secretion of all the detected indexes （Plt;0.05）; MyD88 antagonism decrease the above effects （Plt;0.05）. Conclusion The expressions of IL-10， IL-35 and TGF-β in gingiva CD25⁺B cells increase during periodontitis，which may be regulated by TLR4 /9-MyD88 pathway.

KEY WORDS： Toll like receptors （TLRs）， periodontits; CD25⁺B cell; MyD88; immuno-regulation

牙周炎是局部致病菌與宿主免疫系統(tǒng)平衡共濟(jì)失調(diào)導(dǎo)致的局部炎癥反應(yīng)^[1]。牙周炎可累及牙骨質(zhì)、牙周膜、牙槽骨及牙齦組織等牙周支持組織，臨床表現(xiàn)為牙齦炎、牙齒松動(dòng)、牙槽骨吸收和牙周袋形成。若炎癥不能得到有效控制，牙周組織的進(jìn)行性破壞可導(dǎo)致牙體缺失、牙列缺損。除影響發(fā)音、進(jìn)食及美觀外，牙周炎還被證實(shí)是多種系統(tǒng)性疾病如糖尿病、骨質(zhì)疏松、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等的共刺激因素^[2]。作為世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的口腔疾病之一，牙周炎受到了越來(lái)越多的關(guān)注。

在牙周炎發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中，B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫發(fā)揮了重要的作用。除表達(dá)抗體外，越來(lái)越多的研究表明，B細(xì)胞具有顯著的免疫調(diào)節(jié)功能，這部分亞群被稱為調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（regulatory B cells，Bregs）^[3]。然而，由于缺乏具體的、可識(shí)別的和統(tǒng)一的表面標(biāo)記，Bregs仍有待于深入、精確的研究。CD25可表達(dá)于T細(xì)胞、自然殺傷（NK）細(xì)胞和B細(xì)胞表面^[4]。雖未完全明確，但學(xué)者推測(cè)CD25可能影響淋巴細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能^[5]。當(dāng)CD25在CD4⁺T細(xì)胞表面表達(dá)后，Th0即轉(zhuǎn)化細(xì)胞為T(mén)regs，抑制牙周炎癥反應(yīng)并參與保護(hù)牙周組織^[6]。與之相似，CD25⁺B細(xì)胞作為一種免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，可分泌IL-10、TGF-β等抑炎因子參與免疫調(diào)節(jié)，這一機(jī)制被證實(shí)在風(fēng)濕病等疾病中發(fā)揮相應(yīng)作用^[7]。牙齦中的IL-10不僅直接抑制破骨細(xì)胞的分化，也可通過(guò)與其受體IL-10α作用調(diào)控Th17細(xì)胞的免疫啟動(dòng)。與之相似，TGF-β也可通過(guò)與IL-6協(xié)同作用激活Smad信號(hào)進(jìn)而參與調(diào)節(jié)Th17/Treg的分化。此外，IL-35也被證實(shí)可調(diào)節(jié)Th1/Th2分化及功能，這一機(jī)制可在牙周炎或相關(guān)疾病中發(fā)揮作用。然而，有關(guān)CD25⁺B細(xì)胞在牙周炎中的作用及其可能的調(diào)控機(jī)制尚未明確。鑒于上述事實(shí)，本課題組推測(cè)CD25⁺B細(xì)胞是牙周炎牙周病變中IL-10、IL-35及TGF-β的來(lái)源之一。同時(shí)，基于Toll樣受體（Toll like receptors， TLRs）在B細(xì)胞活化增殖及免疫應(yīng)答中的作用，本課題組亦推測(cè)TLRs可能參與了牙周組織內(nèi)CD25⁺B細(xì)胞的動(dòng)態(tài)變化及功能轉(zhuǎn)換的調(diào)控過(guò)程。

本研究擬通過(guò)建立牙周炎動(dòng)物模型及細(xì)胞培養(yǎng)等手段，探討牙周炎局部組織及外周血中CD25⁺B細(xì)胞表達(dá)相關(guān)免疫調(diào)節(jié)因子變化特點(diǎn)。為了深入揭示其機(jī)制，本課題組進(jìn)一步分析了TLRs在牙周炎宿主CD25⁺B細(xì)胞中的表達(dá)及其對(duì)上述過(guò)程的影響，以期闡明CD25⁺B細(xì)胞與牙周炎發(fā)生發(fā)展的內(nèi)在聯(lián)系，為后續(xù)研究及相關(guān)疾病的探索提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組與處理

雄性SD大鼠（約8周齡，體質(zhì)量200～250 g）為研究樣本。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為健康組（healthy groups）、早期牙周炎組（primary periodontitis）、晚期牙周炎組（severe periodontitis），每組10只。采用絲線結(jié)扎法（3-0絲線結(jié)扎實(shí)驗(yàn)動(dòng)物右上頜第一磨牙）建立實(shí)驗(yàn)性牙周炎動(dòng)物模型。模型動(dòng)物飼養(yǎng)條件：①正常飲食；②溫度（20±2）℃；濕度（55±5）%；光照12 h/d，6∶00-18∶00。動(dòng)物飼養(yǎng)方式參考《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》及《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可管理辦法》。健康組動(dòng)物常規(guī)飼養(yǎng)，早期牙周炎動(dòng)物于研究開(kāi)始后2周建模，晚期牙周炎組動(dòng)物于研究開(kāi)始后即刻建模。研究開(kāi)始4周后處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，取其牙齦及外周血。將所得組織制成單細(xì)胞懸液，采用密度梯度離心法獲取總淋巴細(xì)胞，采用流式細(xì)胞術(shù)分選各細(xì)胞懸液內(nèi)的CD25⁺B細(xì)胞。

1.2 主要試劑及儀器

RPMI 1640培養(yǎng)基（美國(guó)賽默飛公司），PBS緩沖溶液（中國(guó)索萊寶公司），青鏈霉素雙抗（中國(guó)索萊寶公司），real time PCR試劑盒（美國(guó)普洛麥格公司），淋巴細(xì)胞分離液（中國(guó)云克隆公司），PCR儀（美國(guó)ABI公司），恒溫CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)Labconco公司），酶標(biāo)儀（德國(guó)珀金埃爾默公司）。

1.3 CD25細(xì)胞表達(dá)IL-10、IL-35、TGF-β及TLRs相關(guān)信號(hào)的檢測(cè)分析

取健康組、早期牙周炎組、晚期牙周炎組動(dòng)物牙齦及外周血CD25⁺B細(xì)胞樣本，裂解細(xì)胞并提取總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄法制備cDNA，以real time PCR評(píng)價(jià)細(xì)胞內(nèi)IL-10、IL-35及TGF-β mRNA的表達(dá)水平。取健康組樣本表達(dá)水平=1，采用2^-ΔΔct法分析各組表達(dá)差異。

取健康組及晚期牙周炎組動(dòng)物牙齦CD25⁺B細(xì)胞樣本，裂解細(xì)胞并提取總蛋白及總RNA，采用逆轉(zhuǎn)錄法制備cDNA。采用real time PCR評(píng)價(jià)細(xì)胞內(nèi)TLR2/4/7/9的表達(dá)水平。采用Western blotting分析各樣本細(xì)胞內(nèi)TLR2/4/7/9的蛋白表達(dá)情況，并分析下游信號(hào)MyD88及TRAF6的表達(dá)及磷酸化水平。取健康組樣本表達(dá)水平=1，計(jì)算相對(duì)表達(dá)情況。

1.4 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

取健康動(dòng)物（納入標(biāo)準(zhǔn)同1.1項(xiàng)），按1.1項(xiàng)中方法分離純化脾臟CD25⁺B細(xì)胞。分別采用TLRs激動(dòng)劑（依1.3項(xiàng)中結(jié)果選擇）對(duì)健康動(dòng)物源性CD25⁺B細(xì)胞進(jìn)行刺激，并選擇性使用MyD88拮抗劑，設(shè)立對(duì)照組。培養(yǎng)1周后分離細(xì)胞及培養(yǎng)基。采用real time PCR法分析細(xì)胞內(nèi)IL-10、IL-35及TGF-β mRNA的表達(dá)水平，采用ELISA法評(píng)價(jià)培養(yǎng)基中IL-10、IL-35及TGF-β的濃度。對(duì)比分析結(jié)果并進(jìn)一步明確TLRs/MyD88對(duì)CD25⁺B細(xì)胞表達(dá)上述因子的調(diào)控作用。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 20.0軟件對(duì)結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組細(xì)胞樣本IL-10、IL-35及TGF-β mRNA指標(biāo)，TLR2/4/7/9及下游信號(hào)MyD88、TRAF6表達(dá)及磷酸化水平，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果均呈正態(tài)分布，結(jié)果以（±s）形式表達(dá)。組間比較采用單因素方差分析，采用LSD-t檢驗(yàn)比較兩組間差異.以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD25⁺B細(xì)胞內(nèi)IL-10、IL-35及TGF-β mRNA的表達(dá)情況

相比于健康組樣本，牙周炎動(dòng)物牙齦CD25⁺細(xì)胞內(nèi)IL-10、IL-35、TGF-β mRNA表達(dá)升高。早期牙周炎組牙齦CD25⁺細(xì)胞內(nèi)IL-10、TGF-β mRNA的表達(dá)水平高于健康組（P＜0.05），但I(xiàn)L-35差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P gt;0.05）。晚期牙周炎組牙齦CD25⁺細(xì)胞內(nèi)IL-10、IL-35、TGF-β mRNA的表達(dá)水平均高于健康組（P＜0.01）。在外周血中，早期牙周炎組外周血中CD25⁺B細(xì)胞內(nèi)上述細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平與健康組無(wú)異（Pgt;0.05）。晚期牙周炎組外周血CD25⁺ B細(xì)胞表達(dá)IL-10 mRNA表達(dá)水平高于健康組（P＜0.05），余差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。結(jié)果詳見(jiàn)表1。

2.2 CD25⁺B細(xì)胞內(nèi)TLR2/4/7/9的表達(dá)及MyD88及下游信號(hào)活化分析

依據(jù)2.1項(xiàng)的結(jié)果，本研究選取了變化最明顯的晚期牙周炎組牙齦CD25⁺B細(xì)胞為研究對(duì)象，比較分析其內(nèi)TLR2/4/7/9的表達(dá)及MyD88及下游信號(hào)活化情況，以期探索TLRs/MyD88信號(hào)與上述細(xì)胞因子表達(dá)間的關(guān)系。Real time PCR結(jié)果顯示，相較于健康組，晚期牙周炎組牙齦CD25⁺B細(xì)胞內(nèi)TLR2、TLR4、TLR7、TLR9 mRNA的表達(dá)水平均升高（P＜0.05），變化量TLR7＜TLR2＜TLR9＜TLR4。在Western blotting檢測(cè)中，牙周炎動(dòng)物牙齦CD25⁺B細(xì)胞內(nèi)TLR2、TLR4、TLR9蛋白水平高于健康組細(xì)胞（P＜0.05），但TLR7未體現(xiàn)出統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Pgt;0.05）。結(jié)果見(jiàn)表2。

本研究進(jìn)一步分析了TLRs相關(guān)下游信號(hào)的MyD88及TRAF6的表達(dá)及磷酸化水平，結(jié)果見(jiàn)表3。與健康組相比，晚期牙周炎組牙齦CD25⁺B細(xì)胞內(nèi)MyD88及TRAF6的表達(dá)及磷酸化水平均有升高（P＜0.05）。

2.3 CD25⁺ B細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

依據(jù)2.2項(xiàng)的結(jié)果，本課題組選取TLR4/9作為效能指標(biāo)，分別采用牙齦卟啉單胞菌脂多糖（Pg-LPS，TLR4激動(dòng)劑）、未甲基化寡聚脫氧核苷酸（CpG ODN，TLR9激動(dòng)劑）對(duì)健康動(dòng)物源性CD25⁺B細(xì)胞進(jìn)行刺激，并選擇性使用MyD88拮抗劑，檢測(cè)并比較不同培養(yǎng)環(huán)境下目標(biāo)細(xì)胞表達(dá)IL-10、IL-35及TGF-β的差異，結(jié)果見(jiàn)表4。在Pg-LPS培養(yǎng)體系下，目標(biāo)細(xì)胞內(nèi)IL-10、IL-35及TGF-β mRNA表達(dá)水平均有升高（P＜0.05），但培養(yǎng)基中僅可檢測(cè)到IL-10濃度升高（P＜0.05）。在CpG ODN培養(yǎng)體系下，目標(biāo)細(xì)胞內(nèi)IL-10、TGF-β mRNA表達(dá)水平均有升高（P＜0.05），但培養(yǎng)基中僅表現(xiàn)為IL-10濃度升高（P＜0.05）。在Pg-LPS + CpG ODN雙因素培養(yǎng)體系下，目標(biāo)細(xì)胞內(nèi)IL-10、IL-35及TGF-β mRNA的表達(dá)水平及培養(yǎng)基中濃度均上升（P＜0.05）。若在上述培養(yǎng)體系中加入MyD88拮抗劑，則目標(biāo)細(xì)胞IL-10、IL-35及TGF-β的基因表達(dá)及蛋白分泌水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Pgt;0.05）。結(jié)果詳見(jiàn)表4。

3 討論

牙周炎免疫主要為B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫。在這一過(guò)程中，B細(xì)胞可分泌不同種類的抗體以中和牙周致病菌。隨著研究的深入，學(xué)者們逐漸揭示了B細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能，這不僅豐富了對(duì)B細(xì)胞的認(rèn)識(shí)，也加深了對(duì)牙周炎病理機(jī)制的理解。B細(xì)胞可分泌多種白細(xì)胞介素如IL-1、IL-6及IL-12等，這些因子通過(guò)多種途徑促進(jìn)牙周局部的炎癥反應(yīng)。不僅如此，B細(xì)胞還可表達(dá)RANKL等因子，促進(jìn)破骨細(xì)胞的分化，這些結(jié)論進(jìn)一步明確了B細(xì)胞的促炎效應(yīng)。然而，近來(lái)有報(bào)導(dǎo)明確B細(xì)胞也可分泌IL-10、TGF-β等多種抑炎因子抑制局部炎癥反應(yīng)^[8]。這些表達(dá)抑炎因子、具有免疫調(diào)節(jié)功能的B細(xì)胞被統(tǒng)稱為Bregs。與Tregs相似，Bregs的主要作用即為控制局部炎癥反應(yīng)。由于缺乏統(tǒng)一的標(biāo)記性表型，Bregs的研究起步及研究深度均遠(yuǎn)不及Tregs。本研究選取了CD25⁺B細(xì)胞作為研究對(duì)象，進(jìn)行了動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)明在活動(dòng)性牙周炎期間CD25⁺B細(xì)胞亞群免疫調(diào)節(jié)功能的變化及機(jī)制。

在本研究中，牙周炎動(dòng)物的CD25⁺B細(xì)胞分泌的IL-10、IL-35和TGF-β明顯增加，這在一定程度上有利于牙周炎免疫調(diào)節(jié)。IL-35可由Tregs或Bregs表達(dá)，通過(guò)與其受體IL35R結(jié)合激活靶細(xì)胞中的STAT途徑發(fā)揮作用^[9]。研究發(fā)現(xiàn)，IL-35可有效抑制Th2細(xì)胞的極化及其IL-4、IL-5及IL-13等因子的表達(dá)^[10]。這一效應(yīng)可在一定程度上緩解哮喘。除Th2外，IL-35還可通過(guò)與IL-12受體結(jié)合、降低IL-23/IL-27比例來(lái)抑制Th1與Th17細(xì)胞的分化與功能^[11]。除T細(xì)胞外，IL-35亦可調(diào)節(jié)B細(xì)胞功能。使用IL-35刺激B細(xì)胞，可導(dǎo)致其表達(dá)IL-10水平顯著上升，這一機(jī)制在B10細(xì)胞的成熟中不可或缺。約20%的B10可分泌IL-35，這種正反饋調(diào)節(jié)使得B細(xì)胞在炎癥過(guò)程中不斷發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，在控制炎癥反應(yīng)的同時(shí)保護(hù)局部組織^[12]。與IL-35相似，IL-10也是一種多效的強(qiáng)力抑炎因子，它可直接抑制破骨細(xì)胞的分化^[13]。同時(shí)，IL-10可與其受體IL-10α結(jié)合并誘導(dǎo)下游STAT3信號(hào)發(fā)生變化，這一過(guò)程在Th17細(xì)胞的免疫啟動(dòng)中尤為重要^[14]。

在本研究中，伴隨牙周炎時(shí)CD25⁺B細(xì)胞表達(dá)抑炎因子的增多，多種TLRs的基因、蛋白表達(dá)水平也同步升高，這其中以TLR4、TLR9顯著。雖然牙周炎TLRs活化的機(jī)制多種多樣，但不可忽視的是，牙周致病菌在其中發(fā)揮重要作用。作為PRRs的一種，TLRs可識(shí)別牙周致病菌的多種特異性抗原，特別是LPS^[15]。LPS是多種牙周致病菌的主要識(shí)別抗原。研究發(fā)現(xiàn)，使用牙齦卟啉單胞菌建立牙周炎動(dòng)物模型，宿主牙齦內(nèi)的TLR2和TLR4表達(dá)水平顯著升高^[16]。不僅是TLR4，本研究中，TLR9在目標(biāo)細(xì)胞上也有較為明顯的表達(dá)水平和磷酸化升高。采用激動(dòng)劑活化TLR9，可誘導(dǎo)B細(xì)胞的CD25表達(dá)并促進(jìn)多種抑制性細(xì)胞因子的表達(dá)。在體內(nèi)，TLR9的激活更多依賴CpG ODN的作用。與TLR4不同，TLR9的下游信號(hào)主要為MAPK及干擾素受體因子（interferon regulatory factors，IRF）^[17]。研究發(fā)現(xiàn)，牙周炎患者的TLR9基因呈現(xiàn)出典型的單核苷酸多態(tài)性（single-nucleotide polymorphisms，SNPs）差異性表達(dá)，表明TLR9與牙周炎的發(fā)生存在內(nèi)部聯(lián)系^[18]。同時(shí)，在牙周致病菌的DNA中也檢測(cè)出了TLR9配體相關(guān)表達(dá)，這進(jìn)一步驗(yàn)證了TLR9與牙周炎的關(guān)系^[19]。在牙周炎時(shí)，TLR9不僅影響受體細(xì)胞的活化及功能，同時(shí)也影響其他TLRs的效能。研究發(fā)現(xiàn)，將宿主的TLR9敲除雖不影響TLR4的表達(dá)，但卻可降低TLR4/MyD88信號(hào)介導(dǎo)受體細(xì)胞表達(dá)IL-6的能力^[20]。本研究采用激活劑同時(shí)活化TLR4及TLR9，B細(xì)胞表達(dá)CD25及相關(guān)細(xì)胞因子的顯著高于單獨(dú)活化TLR4或TLR9。這也證實(shí)了二者在炎癥反應(yīng)時(shí)協(xié)同作用的潛能。

綜上，宿主CD25⁺B細(xì)胞通過(guò)提高抑炎因子表達(dá)水平參與牙周炎免疫調(diào)節(jié)，保護(hù)牙周組織的完整性。在這一過(guò)程中，TLR/MyD88信號(hào)通路發(fā)揮了重要作用。隨著研究的進(jìn)一步深入，CD25⁺B細(xì)胞對(duì)牙周炎的調(diào)節(jié)效應(yīng)也將進(jìn)一步明確，在深入揭示牙周炎病理機(jī)制的同時(shí)為臨床醫(yī)療提供幫助。

參考文獻(xiàn)：

[1] SLOTS J. Periodontitis： Facts， fallacies and the future[J].Periodontol 2000， 2017， 75（1）：7-23.

[2] FISCHER R G， LIRA J R， RETAMAL-VALDES B， et al. Periodontal disease and its impact on general health in Latin America. Section V： Treatment of periodontitis[J].Braz Oral Res， 2020， 34（supp11）：e026.

[3] ROSSER E C， MAURI C.Regulatory B cells： Origin， phenotype， and function[J]. Immunity， 2015， 42（4）：607-612.

[4] ABBAS A K， TROTTA E， R SIMEONOV D， et al. Revisiting IL-2： Biology and therapeutic prospects[J].Sci Immunol， 2018， 3（25）：eaat1482.

[5] SPOLSKI R， LI P， LEONARD W J. Biology and regulation of IL-2： from molecular mechanisms to human therapy[J]. Nat Rev Immunol， 2018， 18（10）：648-659.

[6] WANG Y X， GU Z W， CAO Z W. Difference between CD25（+）Tregs and Helios（+）Tregs in a murine model of allergic rhinitis[J]. Braz J Otorhinolaryngol， 2020， S1808-8694（20）：30001-X.

[7] KAKU H， HOLODICK N E， TUMANG J R， et al. CD25⁺ B-1a cells express aicda[J].Front Immunol， 2017， 8：672.

[8] MATSUSHITA T. Regulatory and effector B cells： Friends or foes[J]. J Dermatol Sci， 2019， 93（1）：2-7.

[9] CAI Z， ZHANG S，WU P， et al. A novel potential target of IL-35-regulated JAK/STAT signaling pathway in lupus nephritis[J]. Clin Transl Med， 2021， 11（2）：e309.

[10] ITO T， TANAKA T， NAKAMARU K， et al. Interleukin-35 promotes the differentiation of regulatory T cells and suppresses Th2 response in IgG4-related type 1 autoimmune pancreatitis[J]. J Gastroenterol， 2020， 55（8）：789-799.

[11] XIE F， HU Q， CAI Q， et al. IL-35 inhibited Th17 response in children with allergic rhinitis[J]. ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec， 2020， 82（1）：47-52.

[12] TEDDER T F， LEONARD W J. Autoimmunity： Regulatory B cells — IL-35 and IL-21 regulate the regulators[J]. Nat Rev Rheumatol， 2014， 10（8）：452-453.

[13]" MIELLE J， AUDO R， HAHNE M， et al. IL-10 Producing B cells ability to induce regulatory T cells is maintained in rheumatoid arthritis[J]. Front Immunol， 2018， 9：961.

[14]" HAN F， GUO H，WANG L， et al. TSLP produced by aspergillus fumigatus-stimulated DCs promotes a Th17 response through the JAK/STAT signaling pathway in fungal keratitis[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci， 2020， 61（14）：24.

[15] XIONG M G， XU Z S， LI Y H， et al. RNF152 positively regulates TLR/IL-1R signaling by enhancing MyD88 oligomerization[J]. EMBO Rep， 2020， 21（3）：e48860.

[16] NICHOLS F C， CLARK R B， LIU Y， et al. Glycine lipids of porphyromonas gingivalis are agonists for Toll-like receptor 2[J]. Infect Immun， 2020， 88（4）：e00877-19.

[17] HAYASHI K， TAURA M， IWASAKI A. The interaction between IKKalpha and LC3 promotes type I interferon production through the TLR9-containing LAPosome[J]. Sci Signal， 2018， 11（528）：eaan4144.

[18] CIRELLI T， NEPOMUCENO R， ORRICO S R P， et al. Validation in a Brazilian population of gene markers of periodontitis previously investigated by GWAS and bioinformatic studies[J]. J Periodontol， 2021，92（5）：689-703.

[19] NARAYAN I， GOWDA T M， MEHTA D S， et al. Estimation of Toll-like receptor 9 in gingival tissues of patients with chronic periodontitis with or without hyperlipidemia and its association with the presence of Porphyromonas gingivalis[J]. J Indian Soc Periodontol， 2018， 22（4）：298-303.

[20] CANT R， DALGLEISH A G， ALLEN R L. Naltrexone inhibits IL-6 and TNFalpha production in human immune cell subsets following stimulation with ligands for intracellular Toll-like receptors[J]. Front Immunol， 2017， 8：809.

（編輯 卓選鵬）