孔雨晨 梁方檳 王曉丹 黃鵬 張苗苗 洪美玲 史海濤 丁利

摘要：為了探究全球氣候變化背景下淡水和沿岸土壤鹽化對(duì)龜類生存造成的威脅和挑戰(zhàn)，了解鹽度變化對(duì)龜類早期生活史的影響，以紅耳龜（Trachemys scripta elegans）為研究對(duì)象，設(shè)置淡水對(duì)照組（CK）、0.5鹽度組（S0.5）、2.5鹽度組（S2.5）和5鹽度組（S5），分析鹽度變化對(duì)其受精卵孵化、稚龜表型及行為特征的影響。結(jié)果顯示，隨著基質(zhì)中鹽度的升高，CK、S0.5、S2.5、S5組紅耳龜稚龜孵化率（80.00%、83.33%、60.00%、43.33%）基本呈下降趨勢(shì)，孵化時(shí)間（51、52、54、53 d）略有增加，稚龜在30 d時(shí)的存活率（95.83%、95.83%、94.44%、81.80%）逐漸下降，并導(dǎo)致孵出個(gè)體的畸形率增加，且以龜甲畸形占比最高（S5組為100%）。高鹽度（S5）基質(zhì)中孵出的稚龜，其體重極顯著低于對(duì)照組（P<0.01），背、腹甲的長(zhǎng)度和寬度也顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。稚龜?shù)倪\(yùn)動(dòng)速度及耐力受到顯著抑制，翻身速度變慢，攝食能力顯著降低（P<0.05）。研究表明，紅耳龜作為一種耐受性較強(qiáng)的淡水龜代表，上升的環(huán)境鹽度可直接影響其受精卵的孵化率、初生幼體的存活率及適合度，對(duì)紅耳龜卵孵化和稚龜行為具有顯著的負(fù)面效應(yīng)。由此推斷淡水咸化對(duì)其他淡水龜類的影響可能更為嚴(yán)重。

關(guān)鍵詞：紅耳龜；鹽度；孵化；形態(tài)表型；行為特征

中圖分類號(hào)：Q142 ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A ? ? ? ?文章編號(hào)：1674-3075（2023）02-0128-08

淡水咸化是一個(gè)復(fù)雜的動(dòng)態(tài)過(guò)程，受氣候變暖、海平面上升、地質(zhì)以及人類活動(dòng)如農(nóng)業(yè)灌溉、工業(yè)生產(chǎn)、自然資源利用等諸多因素影響，內(nèi)陸淡水和沿海等處的鹽濃度正在持續(xù)增加（Ven?ncio et al，2019）。在全球氣候變暖的過(guò)程中，海洋變暖引起的熱膨脹以及冰蓋融化的加速，導(dǎo)致海平面加速上升（Frederikse et al，2020）。聯(lián)合國(guó)政府間氣候變化專門(mén)委員（IPCC）預(yù)測(cè)，至2100年，全球海平面將上升1.0～1.1 m （Levermann et al，2013），由此導(dǎo)致海（咸）水入侵加劇，全球50多個(gè)國(guó)家和地區(qū)均發(fā)現(xiàn)了海（咸）水入侵現(xiàn)象（Williams，2001）。

河岸、海岸是陸地和水生生態(tài)系統(tǒng)的交錯(cuò)地帶，受徑流、潮流、鹽水入侵等共同影響，在水體鹽度上升的同時(shí)，河岸帶基質(zhì)、土壤中的鹽度也必然升高，且存在積累效應(yīng)，環(huán)境鹽度的升高對(duì)生物可產(chǎn)生嚴(yán)重的負(fù)面效應(yīng)，并影響其生存、繁殖等（Ca?edo-Argüelles et al，2016）。與恐龍同時(shí)代的龜類是生態(tài)系統(tǒng)重要的組成部分，在目前已知的約360種現(xiàn)存龜類中，大部分龜類是半水生或水生淡水龜，其中約240種沿著海岸線或河口延伸帶分布。在全球升溫的大環(huán)境下，許多現(xiàn)存的沿海分布龜類物種（約占90%）在某種程度上受到淡水生境鹽水入侵的影響（Agha et al，2018）；淡水鹽化環(huán)境中動(dòng)物生態(tài)位、種群、生理調(diào)控等方面的研究也得到重視（Ven?ncio et al，2019）。

目前，關(guān)于鹽度對(duì)水生動(dòng)物生命早期的影響研究主要集中在受精卵孵化、胚胎發(fā)育等方面。例如，奧尼羅非魚(yú)（Oreochromis niloticus × O.areus）受精卵隨著鹽度的增加，其孵化周期逐漸增加，當(dāng)胚胎破膜并發(fā)育一段時(shí)間后，鹽度越高、畸形率越高、死亡個(gè)體越多（強(qiáng)俊等，2009）。淡水龜類多沿河岸筑巢產(chǎn)卵，故隨著沿岸基質(zhì)中鹽度的增加，其孵化、幼體發(fā)育及行為等或?qū)⑹艿接绊?。紅耳龜（Trachemys scripta elegans）廣泛分布于世界各地淡水水域中，具有較強(qiáng)的代表性，被廣泛應(yīng)用于科研，如溫度決定性別機(jī)制、胚胎發(fā)育、生態(tài)環(huán)境的影響作用等（Koshiba-Takeuchi et al，2009;Weber et al，2020; Ding et al，2021）。本次實(shí)驗(yàn)選取紅耳龜作為研究對(duì)象，探究鹽度對(duì)紅耳龜卵孵化及稚龜行為的影響，以期揭示淡水咸化對(duì)全球淡水龜類繁殖和稚龜行為的影響。

1 ? 材料與方法

1.1 ? 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)用紅耳龜受精卵購(gòu)于?？谑续櫷旝M養(yǎng)殖場(chǎng)，所有龜卵均在產(chǎn)下后24 h內(nèi)收集。各組間卵重均值為（10.27±0.134）g，無(wú)顯著性差異（P>0.05，n=30）。龜卵從養(yǎng)殖場(chǎng)帶回實(shí)驗(yàn)室，靜置12 h后進(jìn)行形態(tài)學(xué)指標(biāo)測(cè)定。隨機(jī)各選取30枚受精卵半埋于不同鹽度的孵化基質(zhì)中（由干蛭石分別與不同鹽度的水和淡水以質(zhì)量比1：1 配合而成，濕度為-220 kPa）。利用HEM-3D模型預(yù)測(cè)的鹽度變化，當(dāng)海平面上升0.5 m和1.0 m時(shí)，平均鹽度增加分別為2和4（Rice et al，2012）。本實(shí)驗(yàn)將鹽度設(shè)定為低、中、高3個(gè)濃度組，即鹽度0.5、2.5、5（分別以S0.5、S2.5、S5表示），同時(shí)設(shè)置淡水對(duì)照組（CK），每組設(shè)置3個(gè)平行。將受精卵白斑面朝上，置于孵卵盒（32.5 cm×22.3 cm×10.0 cm）內(nèi)，放置于智能恒溫恒濕孵化箱內(nèi)，根據(jù)紅耳龜正常孵化條件，將溫度設(shè)定為29℃。每天查看一次蛭石濕度和鹽度并進(jìn)行調(diào)節(jié)，待稚龜出殼后開(kāi)展相關(guān)形態(tài)學(xué)及行為學(xué)實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 ? 孵化率、存活率及畸形率統(tǒng)計(jì) ? 臨近稚龜破殼，每日定時(shí)查看龜卵孵化情況，及時(shí)將剛破殼的稚龜進(jìn)行編號(hào)、拍照。稚龜自行破殼后，記錄其畸形情況，并記錄孵出30 d時(shí)稚龜?shù)拇婊盥省?/p>

1.2.2 ? 初生幼體形態(tài)指標(biāo)測(cè)量 ? 稚龜?shù)男螒B(tài)學(xué)指標(biāo)均使用精密電子天平（[±]0.1 mg）和電子游標(biāo)卡尺（[±]0.01 cm）進(jìn)行測(cè)量。在稚龜孵出的第1、3、7 天進(jìn)行卵黃囊直徑測(cè)量，稚龜孵出的第1、3、7、14、30 天進(jìn)行背甲長(zhǎng)、背甲寬、腹甲長(zhǎng)、腹甲寬及體重的測(cè)量。第1天和第3天的稚龜用軟毛刷輕輕刷去卵黃囊表面的蛭石，測(cè)量其卵黃囊直徑，測(cè)定完畢后放置于原孵化對(duì)應(yīng)鹽度的蛭石中。第7天稚龜卵黃囊基本吸收，測(cè)量其卵黃囊直徑（腹甲中間縫隙的寬度）后，將卵黃囊完全吸收的稚龜放入相對(duì)應(yīng)的鹽度水中。

1.2.3 ? 稚龜?shù)男袨閷W(xué)觀察 ? （1）稚龜翻身能力比較。取孵出7 d的稚龜，置于裝置盒（44.2 cm×37.5 cm×7.4 cm）中，并將其放至有透明玻璃板的29℃恒溫箱內(nèi)。測(cè)量之前，先將龜放入恒溫箱中適應(yīng)10 min，將需要測(cè)定的龜一次性放入盒中并開(kāi)始攝像，依次將龜翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái)后，人迅速離開(kāi)，每隔3～4 min隔著門(mén)上玻璃觀察其是否全都翻身成功。實(shí)驗(yàn)設(shè)置最長(zhǎng)翻身時(shí)間為10 min。10 min中內(nèi)如若有龜未翻身成功，終止實(shí)驗(yàn)。每只稚龜重復(fù)測(cè)量3次。

（2）稚龜攝食能力比較。紅耳龜稚龜?shù)穆腰S可維持機(jī)體約1個(gè)月的能量供應(yīng)（盛成等，2017），故本研究于稚龜?shù)?8天時(shí)開(kāi)始第1次喂食。各組中分別按照每只稚龜3粒飼料投喂足量的龜鱉養(yǎng)殖專用飼料（主要成分為魚(yú)粉、蝦粉等），2～3 h后將水中剩余飼料全部撈出，統(tǒng)計(jì)各組的進(jìn)食數(shù)量，計(jì)算出攝食率。

（3）稚龜運(yùn)動(dòng)能力比較。對(duì)孵出30 d的稚龜進(jìn)行運(yùn)動(dòng)能力測(cè)定。測(cè)定前，在其孵出第28天時(shí)飽食投喂1次。實(shí)驗(yàn)跑道為長(zhǎng)方形水槽（120 cm×40 cm×28 cm），水位5 cm，確保高于龜背甲；跑道底部放一卷尺作為距離參照物，并模擬外界環(huán)境鋪設(shè)一薄層細(xì)沙。在距離稚龜1～2 cm處用毛筆或小木棍使水產(chǎn)生波動(dòng)，當(dāng)稚龜在水槽內(nèi)游一個(gè)來(lái)回后，結(jié)束實(shí)驗(yàn)。若稚龜長(zhǎng)時(shí)間（>5 min）不動(dòng)，則放棄實(shí)驗(yàn)。通過(guò)回放錄像記錄其疾跑速度（稚龜泳過(guò)25 cm的最大速度）、停頓次數(shù)（次/min）和最大持續(xù)運(yùn)動(dòng)距離（耿軍，2017）。

1.3 ? 數(shù)據(jù)處理

本實(shí)驗(yàn)所有數(shù)據(jù)均使用Office 2010整理。行為實(shí)驗(yàn)錄像通過(guò)視頻播放軟件（ACG player）處理，數(shù)據(jù)所用時(shí)間精度為0.1 s。所得數(shù)據(jù)采用（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）表示，使用SPSS 20進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。對(duì)稚龜?shù)男螒B(tài)學(xué)指標(biāo)和運(yùn)動(dòng)能力指標(biāo)進(jìn)行單因素ANOVA LSD和Duncan分析，并進(jìn)行雙變量Pearson相關(guān)性分析，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 ? 結(jié)果

2.1 ? 鹽度對(duì)孵化率和孵化時(shí)間的影響

隨著環(huán)境中鹽度的升高，CK、S0.5、S2.5、S5紅耳龜稚龜孵化率（80.00%、83.33%、60.00%、43.33%）基本呈下降趨勢(shì)（圖1-A），尤其是S5鹽度組的孵化率顯著降低（P<0.05）；此外，隨著鹽度的進(jìn)一步增加，孵化時(shí)間（51、52、54、53 d）略有增加，鹽度進(jìn)一步升高，孵化時(shí)間稍有縮短，但與對(duì)照組差異并不顯著（圖1-B）。

2.2 ? 環(huán)境鹽度對(duì)稚龜存活率的影響

CK、S0.5、S2.5、S5組稚龜在30 d時(shí)的存活率為95.83%、95.83%、94.44%、81.80%。由此可見(jiàn)孵化基質(zhì)鹽度及水體鹽度增加了孵出龜?shù)乃劳雎剩▓D2）。

2.3 環(huán)境鹽度對(duì)稚龜?shù)挠绊?/p>

2.3.1 ? 稚龜形態(tài)表型 ? 鹽度導(dǎo)致稚龜形態(tài)發(fā)育異常，主要表現(xiàn)在背腹甲畸形、眼球及尾部未發(fā)育或發(fā)育不完整等（圖3）。

隨著孵化基質(zhì)中的鹽度增加，孵出的稚龜形態(tài)異常個(gè)體呈上升趨勢(shì)，尤其是S5組，異常個(gè)體達(dá)到了60%（圖4-A）。在各形態(tài)表型中，以龜甲的畸形率最高，其中S5組龜甲的畸形率高達(dá)100%（圖4-B）。

2.3.2 ? 稚龜體指標(biāo) ? S5組中孵出的稚龜在1、3、7、14、30 d時(shí)體重極顯著低于對(duì)照組（P<0.01），與環(huán)境中鹽度大小呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05）；稚龜腹甲長(zhǎng)、背甲長(zhǎng)、背甲寬在孵出后1、3、7、14 d時(shí)顯著低于對(duì)照組（P<0.05），但S0.5和S2.5組中孵出的稚龜體重、背腹甲指標(biāo)等與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P>0.05）；稚龜卵黃囊直徑各組間差異不顯著（表1，圖5）。

2.4 ? 稚龜行為學(xué)觀察

2.4.1 ? 翻身能力 ? 稚龜孵出7 d時(shí)，其翻身速度與環(huán)境鹽度呈負(fù)相關(guān)（圖6）。對(duì)照組稚龜翻身所需平均時(shí)間為71.63 s，較低鹽度組稚龜翻身所需時(shí)間雖稍短，但與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）；而S5組稚龜翻身所需時(shí)間較對(duì)照組長(zhǎng)，平均為82.5 s。

2.4.2 ? 攝食能力 ? 隨著環(huán)境鹽度的升高，稚龜?shù)臄z食率逐漸降低（圖7），尤其是高鹽度組（S5）稚龜?shù)臄z食率只有47.69%，與對(duì)照組相比差異顯著 （P<0.05）。

2.4.3 ? 運(yùn)動(dòng)能力 ?在孵出30 d時(shí)，稚龜?shù)募才芩俣燃白畲蟪掷m(xù)運(yùn)動(dòng)距離與鹽度呈顯著負(fù)相關(guān)（P<0.05）。S0.5和S2.5組的稚龜疾跑速度雖有所下降，但與對(duì)照組（7.34±0.72）cm/s相比，差異并不顯著（P>0.05），S5組的稚龜疾跑速度明顯降低（圖8-A），下降約40%，且與對(duì)照組有顯著差異（P<0.05）；此外，S5組稚龜運(yùn)動(dòng)時(shí)的最大持續(xù)距離顯著縮短（圖8-B），由對(duì)照組的58.17 cm縮短至39.09 cm。

3 ? 討論

全球氣候變化背景下，淡水咸化對(duì)淡水生物的影響越來(lái)越受到保護(hù)生物學(xué)家的關(guān)注，尤其是對(duì)淡水生物早期生活史階段的影響日益受到重視（Ven?ncio et al，2019）。如高鹽導(dǎo)致了中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）卵中水分流失、卵體積減少，從而抑制胚胎發(fā)育（Wang et al，2019）；鹽度降低了帕達(dá)絢鯰（Ompok pabda）孵化率，幼體的發(fā)育速率下降等（Alam et al，2020）。作為生態(tài)系統(tǒng)中重要的組成部分，淡水龜類的生存和繁殖等也面臨著嚴(yán)重威脅和挑戰(zhàn)。

3.1 ? 鹽度顯著影響龜卵孵化及稚龜形態(tài)表型

本研究發(fā)現(xiàn)，孵化基質(zhì)中一定范圍的鹽度對(duì)紅耳龜受精卵的孵化率、稚龜存活率和畸形率均產(chǎn)生較大影響，S5組中龜卵的孵化率僅為33.3%，而畸形率高達(dá)60%，由此推測(cè)較低的孵化率將顯著影響淡水龜類種群的數(shù)量；同時(shí)，鹽度對(duì)稚龜出生時(shí)體重影響較大，S5鹽度組的稚龜體重極顯著低于對(duì)照組（P<0.01），說(shuō)明孵化環(huán)境中的鹽度可能導(dǎo)致受精卵脫水，盡管孵出了幼體，但稚龜?shù)恼w形態(tài)指標(biāo)明顯弱于淡水對(duì)照組，其后續(xù)生存可能會(huì)受到一定影響?；吻闆r直接影響其適合度，如高鹽度下棘頰雀鯛（Premnas biaculeatus）胚胎出現(xiàn)了畸形，并導(dǎo)致其死亡率增加（王珊珊，2015）。本研究發(fā)現(xiàn)，鹽度環(huán)境中稚龜形態(tài)表型出現(xiàn)異常，畸形率升高，其中龜甲、尾部、四肢等呈現(xiàn)異常發(fā)育，這些異常表型對(duì)于稚龜生存將產(chǎn)生深遠(yuǎn)影響。龜甲起著pH值緩沖和水、脂肪或廢物儲(chǔ)存庫(kù)的作用，對(duì)于龜類的物理保護(hù)具有環(huán)境適應(yīng)性價(jià)值（Gilbert et al，2001）。龜甲缺損可使其物理屏障功能減退，龜甲凹陷或凸起可能會(huì)影響其運(yùn)動(dòng)能力，龜甲畸形也可能干擾其交配；尾部不能彎曲也會(huì)影響其運(yùn)動(dòng)能力。由此推測(cè)，隨著環(huán)境鹽度的升高，淡水龜類子代將受到顯著影響，如子代數(shù)量減少、存活率及適合度下降等。

3.2 ? 鹽度顯著影響初生幼體的環(huán)境適合度

進(jìn)化生態(tài)學(xué)中常用綜合適合度來(lái)反映自然種群的適應(yīng)性和變異性，不同物種的綜合適合度指標(biāo)有所不同，對(duì)于淡水龜類來(lái)說(shuō)，翻身行為、運(yùn)動(dòng)行為和攝食行為是反映其適合度的常用指標(biāo)（耿軍，2017）。翻身行為是當(dāng)龜類個(gè)體腹甲朝上后恢復(fù)至背甲朝上的反應(yīng)，該行為是反映幼龜生存很重要的性能表現(xiàn)特征，其能力大小反映了初生幼體在孵化基質(zhì)中能否迅速恢復(fù)自身最佳的姿勢(shì)，以降低被捕食的風(fēng)險(xiǎn)（Delmas et al，2007）。對(duì)于剛從巢穴中孵化的幼體來(lái)說(shuō)，其在岸邊所面臨的天敵更為廣泛，較強(qiáng)的翻身能力可使其以最快的速度調(diào)整到運(yùn)動(dòng)和逃跑狀態(tài)。高鹽度環(huán)境（S5）孵出的稚龜在7 d時(shí)，其翻身能力下降，說(shuō)明鹽度可能增加了新生稚龜被捕食的風(fēng)險(xiǎn)。運(yùn)動(dòng)能力對(duì)爬行動(dòng)物逃避天敵、提高覓食成功率具有重要的作用，因而與其適應(yīng)性有密切的關(guān)系（潘志崇等，2003）；即便某些表型性狀和生存之間的關(guān)系仍然難以確定，但運(yùn)動(dòng)能力在一定程度上反映了個(gè)體的適合度，野外環(huán)境下運(yùn)動(dòng)能力較強(qiáng)的稚龜，更容易躲避天敵并存活下來(lái)（耿軍， 2017）。研究發(fā)現(xiàn)，體重會(huì)影響稚龜?shù)倪\(yùn)動(dòng)能力，較重新生幼體的運(yùn)動(dòng)能力顯著高于低體重個(gè)體（杜衛(wèi)國(guó)和鄭榮泉， 2004）。本研究中，鹽度較高基質(zhì)中孵化出的稚龜，在30 d時(shí)，其運(yùn)動(dòng)速度及耐力均受到顯著抑制（P<0.05），這可能與龜在高鹽環(huán)境中由于失水而導(dǎo)致的體重降低有關(guān)。

3.3 ? 稚龜應(yīng)對(duì)環(huán)境鹽度的行為策略

在環(huán)境應(yīng)激源的作用下，動(dòng)物會(huì)對(duì)自身行為作出功能性調(diào)整，以適應(yīng)環(huán)境的變化（溫安祥和周定剛，2009）。稚龜在鹽度環(huán)境中運(yùn)動(dòng)力減弱，作為應(yīng)對(duì)高滲環(huán)境的一種選擇性策略，稚龜可能通過(guò)減少運(yùn)動(dòng)來(lái)避免能量的不必要消耗，進(jìn)而將更多能量用于維持體內(nèi)滲透壓的平衡。動(dòng)物為了維持生命，必須從周圍環(huán)境中不斷攝取食物，但在鹽度環(huán)境中，機(jī)體為了避免攝入過(guò)多的鹽分，可能通過(guò)減少攝食以降低其攝入（Agha et al，2018）。研究發(fā)現(xiàn)，稚龜在高鹽度環(huán)境中攝食量顯著下降，與淡水組相比差異顯著，進(jìn)一步印證了該推斷。但淡水生物生活在鹽度環(huán)境中，為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定所進(jìn)行的滲透壓調(diào)節(jié)過(guò)程中，需要消耗大量能量（舒超華等，2012）。在鹽度環(huán)境中龜類攝食量減少，勢(shì)必會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)缺少；若長(zhǎng)期生活在鹽度環(huán)境中，機(jī)體能量供應(yīng)將嚴(yán)重不足。

3.4 ? 淡水咸化對(duì)水生生態(tài)系統(tǒng)的影響

IPCC報(bào)告指出，許多陸地、淡水和海洋物種已經(jīng)因氣候變化改變了其生活習(xí)性，以應(yīng)對(duì)正在進(jìn)行的氣候變化（IPCC，2021）。雖然有些物種因氣候變化而滅絕，但在過(guò)去的數(shù)百萬(wàn)年里，由于人為干擾導(dǎo)致全球自然氣候變化，加速了生態(tài)系統(tǒng)的重大變化和物種滅絕（Frederikse et al，2020）。淡水生物對(duì)水體鹽度升高較為敏感，即使稍微增加也會(huì)對(duì)生物群落造成很大影響（Ca?edo-Argüelles et al，2016）。水體鹽化將直接導(dǎo)致非耐鹽動(dòng)物逐漸消失，自然選擇出耐鹽的物種（Agha et al，2018）；但這種負(fù)效應(yīng)通過(guò)食物鏈和食物網(wǎng)擴(kuò)散并放大，最終導(dǎo)致生物多樣性喪失，生態(tài)平衡遭到破壞（趙開(kāi)拓，2017）。本研究所在對(duì)龜類進(jìn)行長(zhǎng)達(dá)10多年的研究中發(fā)現(xiàn)，紅耳龜在奪食能力、生態(tài)幅寬度、耐受應(yīng)激環(huán)境等方面要強(qiáng)于其他淡水龜類，是一種耐受性較強(qiáng)的淡水龜（馬凱等，2013；趙龍輝等，2013；裘正元等，2015）；此外，紅耳龜成體和亞成體可通過(guò)生理調(diào)控耐受一定范圍的鹽度（Ding et al，2019;Hong et al，2019;Ding et al，2021）。盡管如此，研究依然發(fā)現(xiàn)紅耳龜?shù)脑缙谏钍冯A段對(duì)鹽度耐受力極低，其孵化及幼體的行為受到了嚴(yán)重影響，由此不難推斷，淡水咸化對(duì)其他淡水龜類的影響或許更為嚴(yán)重。因此，加強(qiáng)淡水咸化對(duì)淡水生物影響的研究，將有助于了解全球氣候變化下淡水生態(tài)系統(tǒng)所面臨的威脅，為生物保護(hù)提供理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

杜衛(wèi)國(guó)，鄭榮泉，2004. 不同孵化濕度下的烏龜卵孵化成功率及新生幼體特征[J]. 動(dòng)物學(xué)報(bào)， 50（1）：133-136.

耿軍，2017. 不同溫度效應(yīng)下紅耳龜與烏龜幼體表型、生理與功能的比較[M]. 杭州：杭州師范大學(xué).

馬凱，李闖，史海濤，等，2013. 海南萬(wàn)泉河瓊海段外來(lái)物種紅耳龜與本地種中華條頸龜家域的比較研究[J]. 動(dòng)物學(xué)雜志， 48（3）：331-337.

潘志崇，張永普，計(jì)翔，2003. 中華花龜幼體熱耐受性、體溫晝夜變化和運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)的熱依賴性[J]. 動(dòng)物學(xué)報(bào)， 49（1）：45-52.

強(qiáng)俊，王輝，李瑞偉，2009. 鹽度對(duì)奧尼羅非魚(yú)受精卵孵化和仔魚(yú)活力的影響[J]. 水產(chǎn)科學(xué)， 28（6）：329-332.

裘正元，洪美玲，張豪，等，2015. 急性亞硝酸鹽脅迫對(duì)紅耳龜和中華條頸龜幼體抗氧化能力的比較研究[J]. 生態(tài)科學(xué)， 34（4）：99-104.

盛成，洪美玲，史海濤，2017. 紅耳龜與中華條頸龜初生幼體剩余卵黃、表型特征及運(yùn)動(dòng)能力的比較研究[J]. 動(dòng)物學(xué)雜志， 52（1）：57-63.

舒超華，張珂，洪美玲，等，2012. 鹽度脅迫對(duì)紅耳龜生長(zhǎng)與血液生化指標(biāo)的影響[J]. 四川動(dòng)物， 31（6）：912-916.

王珊珊，2015. 環(huán)境因子對(duì)棘頰雀鯛的產(chǎn)卵及胚胎發(fā)育的影響[M]. 舟山：浙江海洋學(xué)院.

溫安祥，周定剛，2009. 應(yīng)激對(duì)龜鱉類動(dòng)物的影響[J]. 經(jīng)濟(jì)動(dòng)物學(xué)報(bào)， 13（2）：108-114，120.

趙開(kāi)拓，2017. 水體鹽化對(duì)淡水藻類生理特性的影響及取水規(guī)避藻類技術(shù)研究[M]. 西安：西安建筑科技大學(xué).

趙龍輝，李杰，魏朝軍，等，2013. 紅耳龜與中華條頸龜爭(zhēng)搶食物能力的對(duì)比研究[J]. 四川動(dòng)物， 32（6）：873-878.

Agha M， Ennen J R， Bower D S， et al， 2018. Salinity tolerances and use of saline environments by freshwater turtles： implications of sea level rise[J]. Biological Reviews， 93：1634-1648.

Alam M R， Sharmin S， Islam S M， et al， 2020. Salinity intrusion affects early development of freshwater aquaculture species pabda， Ompok pabda[J]. Aquaculture Reports， 18：100476.

Ca?edo-Argüelles M， Hawkins C P， Kefford B J， et al， 2016. Saving freshwater from salts[J]. Science， 351：914-916.

Delmas V， Baudry E， Girondot M， et al， 2007. The righting response as a fitness index in freshwater turtles[J]. Biological Journal of the Linnean Society， 91：99-109.

Ding L， Li W H， Li N， et al， 2019. Antioxidant responses to salinity stress in an invasive species， the red-eared slider （Trachemys scripta elegans） and involvement of a TOR-Nrf2 signaling pathway[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part C： Toxicology & Pharmacology， 219：59-67.

Ding L， Li W H， Liang L Y， et al， 2021. Modulation of the intestinal barrier adaptive functions in red-eared slider （Trachemys scripta elegans） invading brackish waters[J]. Science of The Total Environment， 751：141744.

Frederikse T， Landerer F， Caron L， et al， 2020. The causes of sea-level rise since 1900[J]. Nature， 584：393-397.

Gilbert S F， Loredo G A， Brukman A， et al， 2001. Morphogenesis of the turtle shell： the development of a novel structure in tetrapod evolution[J]. Evolution & development， 3：47-58.

Hong M L， Li N， Li J Y， et al， 2019. Adenosine monophosphate-activated protein kinase signaling regulates lipid metabolism in response to salinity stress in the red-eared slider turtle Trachemys scripta elegans[J]. Frontiers in Physiology， 10：962.

IPCC. Climate Change 2021： The Physical Science Basis. Contribution of Working Group I to the Sixth Assessment Report of the Intergovernmental Panel on Climate Change[R]. Cambridge University Press.

Koshiba-Takeuchi K， Mori A D， Kaynak B L， et al， 2009. Reptilian heart development and the molecular basis of cardiac chamber evolution[J]. Nature， 461：95-98.

Levermann A， Clark P U， Marzeion B， et al， 2013. The multimillennial sea-level commitment of global warming[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences， 110：13745-13750.

Rice K C， Hong B， Shen J， 2012. Assessment of salinity intrusion in the James and Chickahominy Rivers as a result of simulated sea-level rise in Chesapeake Bay， East Coast， USA[J]. Journal of Environmental Management， 111：61-69.

Ven?ncio C， Castro B B， Ribeiro R， et al， 2019. Sensitivity of freshwater species under single and multigenerational exposure to seawater intrusion[J]. Philosophical Transactions of the Royal Society B， 374：20180252.

Wang R F， Huang X R， Wang H H， et al， 2019. Effects of salinity on embryonic and larval development of Chinese mitten crab Eriocheir sinensis （Decapoda： Brachyura） and salinity-induced physiological changes[J]. Journal of Oceanology and Limnology， 37：1777-1788.

Weber C， Zhou Y J， Lee J G， et al， 2020. Temperature-dependent sex determination is mediated by pSTAT3 repression of Kdm6b[J]. Science， 368：303-306.

Williams W， 2001. Anthropogenic salinisation of inland waters[C]//Saline lakes. Springer： 329-337.

（責(zé)任編輯 ? 萬(wàn)月華）

Effects of Salinity on Hatching Rate， Morphological Phenotype and

Fitness of Juvenile Trachemys scripta elegans

KONG Yu‐chen， LIANG Fang‐bin， WANG Xiao‐dan， HUANG Peng，

ZHANG Miao‐miao， HONG Mei‐ling， SHI Hai‐tao， DING Li

（Key Laboratory of Tropical Island Ecology， Ministry of Education，

Hainan key Laboratory of Tropical Animal and Plant Ecology， College of Life Sciences，

Hainan Normal University， Haikou ? 571158， P.R. China）

Abstract： Freshwater turtles are an important part of freshwater ecosystems. Global climate change， salinization of freshwater and coastal soil will pose a serious threat and challenge the survival of turtles. However， little is known about the effects of salinity on the early life stage of freshwater turtles. In this research， we studied red-eared turtles （Trachemys scripta elegans）， and explored the effects of salinity on hatching rate， morphological phenotype， and fitness of juvenile T. scripta. elegans， aiming to reveal the effect of freshwater salinization on the reproduction and behavior of juvenile turtles around the world. Three salinity concentration groups （S0.5， S2.5， S5） and a control group （freshwater group， CK） were set in this study， with each trial in triplicate. For the treatments， CK， S0.5， S2.5， S5， the respective hatching rates were 80.00%， 83.33%， 60.00% and 43.33%， and the respective hatching times was 51， 52， 54 and 53 d. As salinity increased， the hatching rate tended to decrease while the hatching time increased. The survival rates of T. scripta elegans decreased gradually and， on day 30， the survival rates for treatments CK， S0.5， S2.5 and S5 were， respectively， 95.83%， 95.83%， 94.44% and 81.80%. The deformity rate of juvenile turtles increased with salinity and， among malformed individuals， carapace deformities accounted for the highest proportion （100% in the S5 treatment group）. In addition， the body weight of turtles in group S5 was significantly lower than that in group CK （P<0.01）， as were the length and width of carapace and plastron （P<0.05）. Further， the sprint speed and maximum duration distance of the turtles on day 30 in group S5 were significantly lower than in group CK. The time to turning over increased， and feeding significantly decreased in the high salinity S5 group. Although the red-eared turtle is a highly tolerant freshwater species， the hatching rate， fitness and survival rate all decreased significantly under saline conditions， and it can be inferred that the effects of freshwater salinization will be more serious on less tolerant freshwater turtles.

Key words： Trachemys scripta elegans; salinity; hatching; morphological phenotypes; fitness characteristics