趙娜　常劍波　陶江平　孫行

摘要：利用野外和人工繁殖中華鱘（Acipenser sinensis）均有的產(chǎn)卵洄游入海特性，通過在長(zhǎng)江口水域捕獲滯留的中華鱘幼魚并區(qū)分人工繁殖放流個(gè)體和野外個(gè)體，可以評(píng)估其人工繁殖放流個(gè)體占比情況?；诿系聽栠z傳模式，在應(yīng)用前期開發(fā)中華鱘特異性四倍體微衛(wèi)星標(biāo)記的基礎(chǔ)上，構(gòu)建了基于四倍體微衛(wèi)星位點(diǎn)遺傳模式的親子鑒定方法，并用全同胞家系、半同胞家系和非親緣關(guān)系群體樣本驗(yàn)證方法的有效性，將此方法用于1999年度中華鱘人工繁殖效果評(píng)估案例中，計(jì)算人工繁殖個(gè)體在長(zhǎng)江口中華鱘幼鱘群體中的比例。結(jié)果顯示，3個(gè)全同胞家系個(gè)體間的平均遺傳距離分別為0.43、0.44和0.44，半同胞家系的遺傳距離居中（0.57），長(zhǎng)江口中華鱘幼鱘群體間的平均遺傳距離為0.74。人工繁殖效果評(píng)估顯示，在2000年度長(zhǎng)江口幼魚群體中，人工繁殖個(gè)體的比例較低（0～3.8%）。研究表明，當(dāng)年度中華鱘補(bǔ)充群體主要來源于自然繁殖，需要繼續(xù)加大對(duì)中華鱘野生群體的保護(hù)力度，增加人工繁殖群體的放流規(guī)模。

關(guān)鍵詞： 中華鱘；親子鑒定；人工繁殖；自然群體；微衛(wèi)星DNA

中圖分類號(hào)：Q503? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? ? ? 文章編號(hào)：1674-3075（2023）05-0092-08

中華鱘屬于大型溯河產(chǎn)卵洄游魚類，其生活史復(fù)雜（Wu，1963；Ke & Tian，1988；Chang & Cao，1999）；對(duì)長(zhǎng)江群體而言，其生活史大多在中國(guó)黃海和東海大陸架海域度過（Wu，1963；Zhang，1988）。每年春夏季，即將成熟的繁殖群體進(jìn)入長(zhǎng)江口并溯河而上，在長(zhǎng)江度過14～17個(gè)月，繁殖后返回大海（Zhang，1988；危起偉，2003；Zhuang et al，2009）。秋季在葛洲壩壩下江段自然繁殖的中華鱘受精卵，在產(chǎn)卵場(chǎng)孵化后隨水流向長(zhǎng)江下游漂移（莊平，1999；Zhuang et al，2002）；幼鱘一般于次年4月中旬到達(dá)或接近長(zhǎng)江口滸浦江段，5月中下旬開始出現(xiàn)在長(zhǎng)江口（危起偉，2003）。

1981年實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)江截流的葛洲壩一期工程阻斷了中華鱘繁殖洄游通道，隨后天然種群數(shù)量急劇減少，1983年長(zhǎng)江中華鱘人工繁殖放流工作開展。危起偉（2003）采用微型線碼標(biāo)志（Coded Wire Tag，CWT）和外掛銀制標(biāo)志牌的方法研究幼鱘遷移路線，發(fā)現(xiàn)人工放流的中華鱘2月齡幼鱘具有與自然種群相似的洄游特性，最早在第二年3月到達(dá)長(zhǎng)江口。由于野外和人工繁殖中華鱘幼鱘有這種相似的歸海洄游特性，在長(zhǎng)江口捕獲的滯留幼鱘中，包含了野外和人工繁殖放流個(gè)體，因此為評(píng)價(jià)人工繁殖放流個(gè)體占比提供了途徑。前期已有學(xué)者分別應(yīng)用熒光染色、微衛(wèi)星和人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)結(jié)合以及CWT方法進(jìn)行人工繁殖放流效果評(píng)估（常劍波，1999；Zhu et al，2002；危起偉，2003）。水工程生態(tài)研究所實(shí)驗(yàn)室通過多年研究，積累了大量自行開發(fā)的中華鱘特異性微衛(wèi)星DNA標(biāo)記（Zhu et al，2005），并對(duì)其多倍體模式進(jìn)行了深入分析（Zhao et al，2015）。本研究擬采用四倍體遺傳模式的中華鱘特異性微衛(wèi)星標(biāo)記，構(gòu)建其在親子關(guān)系判別中的統(tǒng)計(jì)分析方法，并應(yīng)用本方法鑒定和區(qū)分長(zhǎng)江口幼鱘自然繁殖放流個(gè)體，評(píng)估當(dāng)年度長(zhǎng)江口中華鱘人工繁殖放流個(gè)體占比。

1? ?材料和方法

1.1? ?材料選取

1.1.1? ?人工繁殖家系樣本? ?本研究中的樣本來自水利部中國(guó)科學(xué)院水工程生態(tài)研究所樣本庫(kù)。為檢驗(yàn)本研究統(tǒng)計(jì)方法的準(zhǔn)確性，將2001年長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所通過人工催產(chǎn)方法獲得的3個(gè)人工繁殖家系作為檢驗(yàn)樣本，其中A和B是同父異母的半同胞家系（表1）。研究中分別用Af、Bf和Cf代表3個(gè)家系的母本，ABm代表A、B家系的同一父本，Cm為C家系父本。家系子代個(gè)體分別用A1～A27，B1～B26和C1～C43編號(hào)。親本取鰭條或肌肉樣本保存在無水乙醇中。子代樣本用70%乙醇溶液浸泡，置于4℃冰箱中備用。

1.1.2? ?人工繁殖和放流親本? ?1999年度中華鱘人工繁殖放流工作由葛洲壩中華鱘研究所和長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所共同承擔(dān)。當(dāng)年一對(duì)親本1999-YL-103（♂）×1999-YR-402（♀）配對(duì)繁殖成功；1999年12月28日，中華鱘研究所成功放流這對(duì)親本繁殖的子代30 000尾。

1.1.3? ?長(zhǎng)江口幼鱘群體樣本? ?2000年5-7月，在長(zhǎng)江口崇明島東旺沙和團(tuán)結(jié)沙地區(qū)，通過插網(wǎng)方式和收集漁民誤捕共采集到幼鱘90尾，以Juv表示幼鱘個(gè)體。每尾幼鱘剪取2～4 cm2的尾鰭或胸鰭作為樣本，浸泡于無水乙醇中保存，活體重新放回長(zhǎng)江口，已死亡的個(gè)體用乙醇浸泡后帶回實(shí)驗(yàn)室保存。樣本編號(hào)為Juv01～Juv90。

1.2? ?微衛(wèi)星引物來源

水工程生態(tài)研究所實(shí)驗(yàn)室自行開發(fā)的中華鱘微衛(wèi)星特異性引物As-073、As-074和As-102擴(kuò)增圖譜清晰、穩(wěn)定，并具有較強(qiáng)的個(gè)體識(shí)別能力（Zhao et al，2005；2015）。微衛(wèi)星位點(diǎn)特征（Zhu et al，2005）見表2。

1.3? ?PCR方法

使用DNeasy 組織試劑盒 （Qiagen，Valencia，CA，USA） 提取DNA樣本。PCR 10 μL反應(yīng)體系包括正反向引物各1 μM，dNTP 0.2 mM，0.4 U Taq DNA聚合酶和10～15 ng模板DNA。反應(yīng)條件如下：94℃預(yù)變性5 min，45個(gè)循環(huán)，包括94℃變性40 s，56℃或58℃退火40 s，72℃延伸50 s；72℃最后延伸10 min。以H2O為模板設(shè)置PCR陰性對(duì)照。采樣陰性對(duì)照和PCR陰性對(duì)照，擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。擴(kuò)增產(chǎn)物上樣于10%聚丙烯酰胺凝膠（19：1），于200 V電壓下電泳3.5 h，溴化乙錠染色20 min，用Gene Genius凝膠成像系統(tǒng)（SynGene，英國(guó)）掃描記錄。通過GeneTool凝膠分析軟件（SynGene）比對(duì)pBR322 DNA/Msp Ⅰ Markers并確定片段大小。根據(jù)微衛(wèi)星片段長(zhǎng)度進(jìn)行基因分型。

1.4? ?數(shù)據(jù)分析

研究中應(yīng)用的微衛(wèi)星位點(diǎn)均在中華鱘上呈現(xiàn)四倍體孟德爾遺傳模式（Zhao & Chang，2006；Zhao et al，2015），即每個(gè)親本在1個(gè)位點(diǎn)上攜帶4個(gè)等位基因，形成配子時(shí)，都會(huì)有任意2個(gè)等位基因隨機(jī)組合并遺傳給子代（圖1）。因此，可以通過計(jì)算長(zhǎng)江口子代個(gè)體與葛洲壩放流親本之間的遺傳距離來判斷是否存在親子關(guān)系，從而評(píng)估人工繁殖放流個(gè)體占比。

首先，明確所有研究個(gè)體的基因型。如在1個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)檢測(cè)到6個(gè)等位基因，分別是220 bp（等位基因1）、224 bp（等位基因2）、228 bp（等位基因3）、232 bp（等位基因4）、236 bp（等位基因5）、240 bp（等位基因6）長(zhǎng)度的片段，可以用片段長(zhǎng)度（220/224/232/240）表示1個(gè)個(gè)體的基因型，也可以用基因編號(hào)（1/2/4/6）表示，本研究采用基因編號(hào)型。如同二倍體中的純合子，四倍體中也有攜帶相同等位基因的情況出現(xiàn)，稱之為“劑量”，可以通過測(cè)序圖譜的峰值或者電泳凝膠的亮度判斷（如圖2中個(gè)體4和個(gè)體5）。在這種情況下，用（1/1/2/3）表示基因型。如果有無效等位基因的存在，可能會(huì)出現(xiàn)（1/2/3）情況。

第二步，根據(jù)Lynch（1990）公式計(jì)算個(gè)體之間的遺傳距離：

Dxy = 1- [2NxyNx+Ny]? ?①

式中：Dxy表示個(gè)體x和個(gè)體y之間的遺傳距離；Nxy表示個(gè)體x和y在一個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)上共有的等位基因數(shù)目；Nx和Ny分別表示個(gè)體x、y在這個(gè)位點(diǎn)上所擁有的所有等位基因數(shù)目。本研究中使用的3個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)是四倍體位點(diǎn)，因此N應(yīng)該是4。在雙親基因型完全相同的情況下，子代與親本的遺傳距離可能是0（D = 1- [2×44+4] ）。在沒有無效等位基因和雙親不共享任一等位基因的情況下，子代與親本的遺傳距離應(yīng)該是0.5（D = 1- [2×24+4]）。但也存在1個(gè)無效等位基因的情況下，N會(huì)是3（更多無效等位基因的情況不考慮）。因此，若子代與成體存在親子關(guān)系，則至少會(huì)共有1個(gè)（有無效等位基因存在）或2個(gè)（正常情況）等位基因，其遺傳距離可能會(huì)是0.714 （D = 1- [2×13+4]）或者0.429 （D = 1- [2×23+4]）。所以，只有當(dāng)子代個(gè)體同繁殖父本、母本之間距離都在這個(gè)范圍內(nèi)時(shí)，才可以判定其是真實(shí)子代。

為檢驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性，首先用引物As-073對(duì)3個(gè)家系樣本進(jìn)行驗(yàn)證；另外，分析全同胞、半同胞和無親緣關(guān)系3種情況下個(gè)體之間的遺傳距離；最后，分析長(zhǎng)江口幼鱘和葛洲壩放流親本之間的遺傳距離，判斷是否存在親子關(guān)系，評(píng)估人工繁殖的子代在長(zhǎng)江口幼鱘群體中的占比。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?已知親緣關(guān)系的家系子代與親本的遺傳距離

在As-073位點(diǎn)上3個(gè)已知親緣關(guān)系的家系中個(gè)體之間的遺傳距離見表3。家系A(chǔ)中，絕大多數(shù)子代個(gè)體與親本的遺傳距離是0.5，由于父本和母本的基因型分別為2/3/11/11 和2/5/6/8，共享一個(gè)等位基因2，因此有部分子代與親本的遺傳距離是0.25。在家系B中，同樣是雙親（2/3/11/11 ×1/2/10/12）共享等位基因2，因此也有部分子代與親本的遺傳距離表現(xiàn)為0.25。在家系C中，雙親的基因型分別為2/3/5/9 和4/4/7/8，不共享任何等位基因，子代個(gè)體從雙親中遺傳任意2個(gè)等位基因的組合；在這些組合中，沒有等位基因相同的可能性，因此所有子代都一致性地表現(xiàn)出與親本的遺傳距離為0.5；子代C16和C41個(gè)體DNA樣品提取不成功，因此沒有獲得遺傳學(xué)數(shù)據(jù)；除5個(gè)個(gè)體（C9、C12、C20、C36和C42）與C家系雙親遺傳距離為0.5外，同時(shí)與A家系親本之間的遺傳距離也為0.5，這是因?yàn)榧蚁礎(chǔ)雙親的基因型為2/3/11/11和2/5/6/8，家系C雙親的基因型為2/3/5/9和4/4/7/8，2個(gè)家系的雙親之間共有等位基因2、3、5、8；以家系C9子代為例，具有基因型2/3/4/8，那么其與Af、ABm、Cm和Cf任一親本都共有2個(gè)等位基因，因此遺傳距離均為0.5。

在As-073位點(diǎn)上，3個(gè)家系的遺傳圖譜沒有揭示無效等位基因的存在。因此，如果疑似親本是真實(shí)的，子代與疑似雙親之間的遺傳距離都應(yīng)在0～0.5，單是與一方親本的遺傳距離不在這個(gè)范圍內(nèi)都將被排除。照此標(biāo)準(zhǔn)判斷，A家系的27個(gè)子代都準(zhǔn)確地定位于雙親Af×ABm中，準(zhǔn)確率為100%；B家系的26個(gè)子代也全部歸屬于雙親Bf×ABm中；C家系43個(gè)子代中的38個(gè)個(gè)體判斷為親本Cm×Cf 的后代，準(zhǔn)確率為88.4%。對(duì)于其余5個(gè)個(gè)體（C9、C12、C20、C36、C42），若要正確判斷是雙親Cm×Cf 的后代，還是雙親Af×ABm的后代，需要使用更多的微衛(wèi)星位點(diǎn)。

2.2? ?不同親緣關(guān)系的個(gè)體間遺傳距離

全同胞家系、半同胞家系以及無親緣關(guān)系的個(gè)體間遺傳距離分布見圖3。其中，A、B、C為3個(gè)全同胞家系，其內(nèi)部同胞個(gè)體間平均距離分別為0.43、0.44、0.44，平均值為0.437；A和B是同父異母的半同胞家系，個(gè)體間平均距離為0.57；A和C家系個(gè)體間平均距離為0.73，B和C家系間平均距離為0.83；長(zhǎng)江口隨機(jī)采樣的中華鱘幼鱘個(gè)體間平均距離為0.74。

2.3? ?長(zhǎng)江口幼鱘群體人工繁殖放流個(gè)體占比

2000年長(zhǎng)江口采集的90尾幼鱘中，只有52尾在As-073、As-074和As-102全部3個(gè)位點(diǎn)得到清晰并可準(zhǔn)確計(jì)帶的指紋圖譜，因此只對(duì)這些幼鱘的遺傳學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。2000年長(zhǎng)江口捕獲的幼鱘個(gè)體與1999年參與人工繁殖放流親本之間的遺傳距離見表4。1999年成功參與人工繁殖的一對(duì)親鱘用♀、♂表示?！庠贏s-073和As-074位點(diǎn)上都只擴(kuò)增出3個(gè)亮度相同的條帶，因此存在1個(gè)無效等位基因；在隨后的距離分析中，疑似子代與♀、♂之間遺傳距離在0～0.714都應(yīng)該判斷為其子代個(gè)體。

單個(gè)位點(diǎn)的分析結(jié)果顯示，在As-073位點(diǎn)上，有13個(gè)個(gè)體與♀、♂遺傳距離在0～0.714，疑似子代比例為25%；As-074位點(diǎn)上，62%的個(gè)體為疑似子代；As-102位點(diǎn)上，疑似子代的比例最小，僅21%。

2個(gè)位點(diǎn)的聯(lián)合使用結(jié)果顯示，As-073/As-074組合排他能力最弱，判斷8個(gè)個(gè)體為疑似子代，比例為15.4%；As-073/As-102組合的排他能力最強(qiáng)，判斷2個(gè)為疑似子代，比例為3.8%；As-074/As-102組合的排他能力居中，判斷疑似子代為6個(gè)，比例為11.5%。

3個(gè)位點(diǎn)聯(lián)合使用后，只有Juv40個(gè)體與♀、♂遺傳距離滿足判別條件，因此在52個(gè)長(zhǎng)江口幼鱘中，只有1尾被判斷為人工繁殖放流的子代個(gè)體，僅為1.9%。隨著更多微衛(wèi)星位點(diǎn)的使用，Juv 40個(gè)體與♀、♂之間的親子關(guān)系也可能會(huì)被排除，因此2000年捕獲的長(zhǎng)江口幼鱘群體屬人工繁殖放流的個(gè)體僅占0～1.9%。

3? ? 討論

3.1? ?微衛(wèi)星標(biāo)記用于親子分析的技術(shù)缺陷

微衛(wèi)星標(biāo)記由于高度多態(tài)性，在親子鑒定中有很強(qiáng)的個(gè)體識(shí)別能力 （Hansen et al，2001;Wilson & Ferguson，2002;Baumsteiger et al，2008）；但標(biāo)記本身也存在技術(shù)缺陷 （Van Oosterhout et al，2004），如無效等位基因、連鎖不平衡、突變或者計(jì)帶錯(cuò)誤等原因，都會(huì)造成子代基因型與真實(shí)親本不相符，從而降低親子鑒定的準(zhǔn)確性 （Wilson & Ferguson，2002; Neff et al，2000a; 2000b; Gold et al，2011）。無效等位基因的存在可以導(dǎo)致哈迪-溫伯格平衡偏離，因此可以通過群體研究檢測(cè)出無效等位基因存在與否。在親子分析中，位點(diǎn)物理連鎖或者連鎖不平衡所造成的結(jié)果不同 （Waples，2006; Waples & Do，2010）。在使用存在連鎖不平衡的2個(gè)位點(diǎn)時(shí)，由于位點(diǎn)之間存在的非隨機(jī)聯(lián)合，減少了有效的變化水平，因此降低了標(biāo)記的排除能力和親子鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。然而，在實(shí)際研究中，由于應(yīng)用的標(biāo)記位點(diǎn)較少，多數(shù)研究者都假設(shè)這些位點(diǎn)不存在物理連鎖或連鎖不平衡；另外，由于對(duì)基因突變機(jī)制的認(rèn)識(shí)不足，識(shí)別突變問題最好的途徑是比較親本和子代的遺傳圖譜 （Neff et al，2000a; 2000b）。

3.2? ?實(shí)際應(yīng)用中微衛(wèi)星標(biāo)記的選擇

本研究中，位點(diǎn)As-102具有最高的個(gè)體識(shí)別能力（排除能力強(qiáng)），As-073居中，As-074的識(shí)別能力最小。親子鑒定的準(zhǔn)確性依賴于使用的統(tǒng)計(jì)方法，同時(shí)也受到標(biāo)記本身的影響。使用的多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)目越多，鑒定結(jié)果越接近真實(shí)情況。但在實(shí)際應(yīng)用中，考慮實(shí)驗(yàn)成本和實(shí)驗(yàn)時(shí)間等因素（Jone & Ardren，2003），使用高效標(biāo)記位點(diǎn)可以達(dá)到事半功倍的效果。如使用排他能力最強(qiáng)的As-073/As-102組合，排除了52個(gè)子代中的50個(gè)個(gè)體；使用排他能力最弱的As-073/As-074組合，只能排除44個(gè)個(gè)體。因此，檢驗(yàn)微衛(wèi)星位點(diǎn)的個(gè)體識(shí)別能力也是親子鑒定實(shí)踐中的重要一環(huán)。

3.3? ?平均遺傳距離揭示的親緣關(guān)系

四倍體生物微衛(wèi)星位點(diǎn)遺傳模式復(fù)雜 （Jones & Ardren，2003;Jones et al，2010），特別是當(dāng)雙親之間共享等位基因或者存在無效等位基因時(shí)，同胞個(gè)體之間的遺傳距離變化很大。通過計(jì)算兩兩個(gè)體之間的平均遺傳距離，可以粗略揭示其親緣關(guān)系。本次研究中，家系A(chǔ)、B、C盡管樣本量有差異，但3個(gè)全同胞家系的平均遺傳距離很接近（0.43、0.44、0.44）；A和C家系的親本共享4個(gè)等位基因，因此個(gè)體之間的平均遺傳距離要小于不共享任一等位基因的B和C家系（0.73<0.83）。A和B家系屬于半同胞家系，因此遺傳距離居中（0.57），這也從側(cè)面驗(yàn)證了本研究數(shù)據(jù)處理方法的可行性；此分析方法可用于魚類人工增殖放流效果評(píng)價(jià)、魚類個(gè)體間親緣關(guān)系判別、集群魚類的分布與擴(kuò)散模式分析以及魚類養(yǎng)殖中的遺傳學(xué)管理等 （Berejikian et al，2001; Hansen et al，2001; Blouin，2003; Suski et al，2003; Hessenauer et al，2012; Hessenauer et al，2014）。

3.4? ?當(dāng)年度長(zhǎng)江口人工繁殖放流個(gè)體占比

危起偉（2003）采用CWT和外掛銀制標(biāo)志牌的方法對(duì)人工放流的部分幼鱘進(jìn)行標(biāo)記放流和回捕試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)人工放流對(duì)長(zhǎng)江口幼鱘的補(bǔ)充作用不明顯，連續(xù)4年（1998-2002）各標(biāo)志放流約2萬尾對(duì)長(zhǎng)江口幼鱘群體的貢獻(xiàn)率為0～0.45%；常劍波（1999）根據(jù)熒光標(biāo)記放流，估算1996-1999年全長(zhǎng)8～10 cm人工放流個(gè)體占長(zhǎng)江口幼鱘的數(shù)量分別為1.71%、1.89% 和3.03%；Zhu等（2002）應(yīng)用中華鱘微衛(wèi)星數(shù)據(jù)按照二倍體顯性標(biāo)記（只記錄圖譜條帶有無，不考慮劑量）的分析方法評(píng)價(jià)人工繁殖放流效果，發(fā)現(xiàn)1999年度放流的中華鱘人工繁殖個(gè)體在長(zhǎng)江口幼鱘群體中占5%～10%，2000年度人工放流個(gè)體占13.3%。本研究結(jié)果評(píng)估1999年度中華鱘人工繁殖放流個(gè)體對(duì)長(zhǎng)江口中華鱘幼魚群體的貢獻(xiàn)率為0～1.9%。以上結(jié)果均表明，各研究年度內(nèi)中華鱘補(bǔ)充群體主要來源于自然繁殖，珍稀特有物種的恢復(fù)十分艱難，需要繼續(xù)加大對(duì)中華鱘野生群體的保護(hù)力度，增加人工繁殖群體的放流規(guī)模。

參考文獻(xiàn)

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（責(zé)任編輯? ?萬月華）

Parentage Identification and Case Analysis of Chinese Sturgeon

（Acipenser sinensis） Populations Based on Microsatellite Markers

ZHAO Na1， CHANG Jian‐bo2， TAO Jiang‐ping1， SUN Hang1

（1. Key Laboratory of Ecological Impacts of Hydraulic-Projects and Restoration of Aquatic Ecosystem

of Ministry of Water Resources， Institute of Hydroecology， Ministry of Water Resources and

Chinese Academy of Sciences， Wuhan? ?430079， P.R. China;

2. State Key Laboratory of Water Resources and Hydropower Engineering Science，

Wuhan University，Wuhan? ?430072， P.R. China）

Abstract：Artificially propagated juvenile Chinese sturgeons have the same migration pattern of arriving at the estuary of the Yangtze River. This provides a way to evaluate the effect of artificial breeding and release of Chinese sturgeon by distinguishing between artificially bred and wild individuals collected in the estuary of Yangtze River. Based on Mendelian inheritance and previously developed tetraploid microsatellite markers for Chinese sturgeon， a paternity test method using a tetraploid microsatellite locus inheritance model was constructed and verified with specimens of full-sibling families， half-sibling families and unrelated populations. This method was then applied to determine the percentage of released artificial individuals among the wild Chinese sturgeons in 90 samples collected in the Yangtze River estuary from May to July of 2000. The results were used to evaluate the effectiveness of the artificial bred Chinese sturgeon released on December 28， 1999. The average genetic distance of the three full-sib families calculated by the paternity testing was 0.43， 0.44 and 0.44. The genetic distance of the half-sib family was 0.57. The distance among the juveniles collected in the estuary was 0.74 and the proportion of artificially propagated individuals among juveniles collected in 2000 was in the range of 0-3.8%. Most of the juveniles in the estuary were therefore from natural reproduction. It is necessary to continue to strengthen the protection of the wild population of Chinese sturgeon and increase the scale of the release of artificial breeding population.

Key words：Acipenser sinensis; paternity testing; artificial breeding; natural population; microsatellite DNA

收稿日期：2020-06-08? ? ? 修回日期：2023-06-12

基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（2015CB150701）。

作者簡(jiǎn)介：趙娜，1978年，女，博士，研究員，主要從事分子生態(tài)學(xué)研究。E-mail：zhaona@mail.ihe.ac.cn