雒 芳 崔立軍 宋衛(wèi)軍 盧獻(xiàn)禮 張瑞莉 徐 鵬 許輝

[1 中儲(chǔ)糧(四川)質(zhì)檢中心有限公司云南分公司 650000](2 中央儲(chǔ)備糧昆明直屬庫(kù)有限公司 650604)(3 中央儲(chǔ)備糧曲靖直屬庫(kù)有限公司 655099)

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展,人民生活水平的提升,食品安全問(wèn)題越來(lái)越受到人們的關(guān)注。液相色譜檢測(cè)技術(shù)的出現(xiàn)為食品安全檢測(cè)工作提供了高效的技術(shù)保障,不斷總結(jié)并提高食品安全檢驗(yàn)技術(shù)水平,獲取最真實(shí)、可靠的檢測(cè)數(shù)據(jù),亦顯得尤為重要。

試驗(yàn)使用高效液相色譜儀,檢測(cè)玉米中黃曲霉毒素B1含量,選擇不同進(jìn)樣體積進(jìn)樣檢測(cè),分析比較檢測(cè)結(jié)果的差異,以期為日常檢測(cè)過(guò)程中更有效、靈活地運(yùn)用高效液相色譜檢測(cè)技術(shù)提供一些技術(shù)參考。

1 試驗(yàn)材料和方法

1.1 試驗(yàn)樣品

隨機(jī)扦取20份玉米樣本,扦樣混勻后,每份玉米試驗(yàn)樣品質(zhì)量≥1 kg。去除雜質(zhì)后,使用高速磨粉機(jī)粉碎,使其粒徑可通過(guò)0.5 mm～1.0 mm孔徑試驗(yàn)篩。采用可旋轉(zhuǎn)式的電動(dòng)混勻機(jī)充分混勻30 min。將混勻的1 kg粉質(zhì)樣品平鋪放置在分析盤上,用小勺“多點(diǎn)”取樣,合并、縮分至200 g,再次充分混勻后作為最終的試檢樣品備用。

1.2 試驗(yàn)設(shè)備、器材及試劑

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)備、器材 1260-Ⅱ型高效液相色譜儀(配熒光檢測(cè)器、光化學(xué)衍生器)、電子天平(感量0.01 g)、分樣器、3610高速磨粉機(jī)、樣品混勻機(jī)、THZ-100恒溫旋轉(zhuǎn)式搖床、HC-3018高速離心機(jī)、分析盤(尺寸30 cm×40 cm)。

1.2.2 試驗(yàn)試劑 甲醇(分析純/色譜純)、氯化鈉(分析純)、高純水(一級(jí)水,過(guò)0.22 μm微孔徑水相濾膜)、黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度101 μg/mL、不確定度3%)、黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(濃度分別為5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、40 ng/mL、50 ng/mL)、黃曲霉毒素B1免疫親和柱。

1.3 試驗(yàn)方法

GB 5491-1985《糧食、油料檢驗(yàn) 扦樣、分樣法》;GB 5009.22-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定》第三法 高效液相色譜——柱后衍生法。

2 樣品檢測(cè)

2.1 樣品提取

稱取25 g±0.01 g試驗(yàn)樣品,加入5 g氯化鈉與125 mL提取液(70%甲醇-水溶液,分析純)至具塞三角瓶中,搖床(26℃,230 r/min)振蕩20 min,收集提取液至50 mL離心管中,高速離心(轉(zhuǎn)速8000 rpm)5 min至澄清,取10 mL澄清提取液加20 mL高純水(一級(jí)水)稀釋,再用玻璃纖維濾紙過(guò)濾,收集濾液為上樣液。

2.2 樣品凈化

一次性注射器筒下連接黃曲霉毒素B1免疫親和柱,置于氣控操作架上固定,取15 mL上樣液于注射器筒中,調(diào)節(jié)氣控開(kāi)關(guān),使液體以1～2滴/s的速度通過(guò)免疫親和柱,待液體排干后,用10 mL高純水(一級(jí)水)淋洗免疫親和柱2次,流速2～3滴/s,直至空氣完全通過(guò)免疫親和柱。準(zhǔn)確加入1.0 mL甲醇(色譜純)至免疫親和柱中,流速1滴/s,淋洗并收集1.0 mL全部樣品洗脫液。

為消除上機(jī)檢測(cè)時(shí)的溶劑效應(yīng),需將收集的甲醇洗脫液用高純水進(jìn)行稀釋,使其基質(zhì)更接近流動(dòng)相,檢測(cè)樣品出峰峰形更好,結(jié)果準(zhǔn)確度更高。稀釋方法:準(zhǔn)確移取2.2中收集的甲醇洗脫液500 μL至2 mL離心管,再加入500 μL高純水(一級(jí)水,過(guò)0.22 μm微孔徑水相濾膜)稀釋,振蕩使其充分混勻,混勻后的稀釋液過(guò)0.22 μm微孔濾器,過(guò)濾并轉(zhuǎn)移至2 mL玻璃樣品瓶中,用于高效液相色譜儀檢測(cè)分析。

2.3 儀器條件

色譜柱:C18柱,填料粒徑4 μm,柱內(nèi)徑4.6 mm×柱長(zhǎng)150 mm;流動(dòng)相:甲醇(色譜純)/高純水(一級(jí)水,過(guò)0.22 μm微孔徑水相濾膜)(V/V,40∶60);流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣體積:50 μL(GB 5009.22-2016第三法)、20 μL、10 μL;柱溫:35℃;檢測(cè)器:熒光檢測(cè)器;柱后光化學(xué)衍生器;檢測(cè)波長(zhǎng):激發(fā)波長(zhǎng)360 nm;發(fā)射波長(zhǎng)440 nm。

3 檢測(cè)結(jié)果與分析

對(duì)20份已凈化、收集的玉米黃曲霉毒素B1待檢樣本,使用高效液相色譜儀檢測(cè)黃曲霉毒素B1含量,每份檢測(cè)樣本上機(jī)檢測(cè)3次,進(jìn)樣量分別為50 μL(GB 5009.22-2016第三法)、20 μL和10 μL,分別同時(shí)建立標(biāo)準(zhǔn)系列,進(jìn)樣體積與待測(cè)樣本檢測(cè)進(jìn)樣體積保持一致,檢測(cè)結(jié)果詳見(jiàn)表1。

對(duì)3種進(jìn)樣體積得到的檢測(cè)值進(jìn)行比較(以GB 5009.22-2016第三法規(guī)定的進(jìn)樣量50μL測(cè)定結(jié)果作為參考),運(yùn)用公式:

精確度(%)=[進(jìn)樣體積(20 μL/10 μL)檢測(cè)值÷進(jìn)樣體積50 μL檢測(cè)值]×100%

經(jīng)計(jì)算,進(jìn)樣量為20 μL、10 μL的檢測(cè)結(jié)果,其精確度平均值分別99.9%、97.6%。

4 結(jié)論

從20份待測(cè)樣本的檢測(cè)結(jié)果值分析,在消除溶劑效應(yīng)后,選擇進(jìn)樣體積50 μL(GB 5009.22-2016第三法)、20 μL和10 μL的測(cè)定值均比較接近,精確度也較高。因此,在使用高效液相色譜儀檢測(cè)黃曲霉毒素B1時(shí),檢測(cè)進(jìn)樣體積選擇50 μL、20 μL和10 μL都是可行的。一般試驗(yàn)過(guò)程中,若儀器設(shè)備老舊,性能較差,靈敏度不高時(shí),可選擇較大的如50 μL進(jìn)樣體積進(jìn)行檢測(cè)。若儀器設(shè)備較新,性能好,靈敏度較高,能很好地滿足微量檢測(cè)要求的,可選擇較小的如20 μL或10 μL進(jìn)樣體積進(jìn)行檢測(cè)。在此需強(qiáng)調(diào)一點(diǎn),不論選擇50 μL、20 μL或10 μL的進(jìn)樣體積,建立標(biāo)準(zhǔn)系列的進(jìn)樣體積與待測(cè)樣本檢測(cè)進(jìn)樣體積一定是一致的。