摘 要 應(yīng)用QuEChERS前處理方法，以植物源性食品（蔬菜、水果、食用菌）為樣品，經(jīng)乙腈提取、鹽析離心后取上清液，用乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA）分散固相萃取凈化、離心后溶劑交換制成待測液，用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測，外標(biāo)法定量。在經(jīng)過儀器條件和樣品前處理優(yōu)化后，乙基多殺菌素在0.005～0.200 mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）均滿足0.999。在3個水平濃度下，平均回收率為87.2%～98.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%～8.9%。表明應(yīng)用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）測定植物源性食品中乙基多殺菌素殘留量的分析方法簡單易行、回收率和重復(fù)性良好，可滿足植物源性食品中乙基多殺菌素殘留監(jiān)測。

關(guān)鍵詞 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法；植物源性食品；乙基多殺菌素；殘留量

中圖分類號：O657.7+2；TQ453 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2023.19.037

乙基多殺菌素可以有效防治鱗翅目幼蟲、薊馬、潛葉蠅、小菜蛾、甜菜夜蛾、豆莢螟等農(nóng)業(yè)害蟲，并具有廣譜、高效、低毒等特點(diǎn)[1-3]。乙基多殺菌素產(chǎn)品自2009年4月首次在我國農(nóng)藥登記以來，廣泛應(yīng)用于植物源性食品中[4-8]，隨之帶來了乙基多殺菌素植物源性食品中殘留的問題[9-11]。因此，關(guān)于乙基多殺菌素在各類植物源性食品中的安全評價受到越來越多的關(guān)注?！妒称钒踩珖覙?biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763）是根據(jù)我國農(nóng)藥殘留試驗(yàn)及監(jiān)測數(shù)據(jù)、居民膳食消費(fèi)數(shù)據(jù)、農(nóng)藥毒理學(xué)數(shù)據(jù)等，經(jīng)過科學(xué)風(fēng)險評估后制定的，是開展農(nóng)藥安全性評價和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管的技術(shù)判定依據(jù)，也是食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)的重要組成部分和保障食品安全、保護(hù)公眾身體健康的重要措施?，F(xiàn)行有效GB 2763—2021與首次發(fā)布的GB 2763—2012相比，對食品中乙基多殺菌素最大殘留限量由1個類別3個品種增加到8個類別48個品種，最大殘留限量范圍從（0.1～0.5）mg·kg-1到（0.01～10）mg·kg-1。由此可見，我國對部分品種的乙基多殺菌素最大殘留限量要求越來越嚴(yán)，因而建立測定植物源性食品中乙基多殺菌素殘留量的分析方法具有重要意義。

乙基多殺菌素農(nóng)藥殘留量的檢測分析方法主要有液相色譜法（liquid chromatography，LC）[12-15]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）[16-23]，但目前樣品基質(zhì)主要圍繞土壤、藥材植物（黨參、枸杞）、谷物（水稻）和動物源性產(chǎn)品（牛奶、雞肉、豬脂肪）等開展研究，對植物源性產(chǎn)品基質(zhì)中乙基多殺菌素農(nóng)藥殘留量檢測分析的研究目前鮮見報道。QuEChERS預(yù)處理方法具有快速、簡單、廉價、有效、可靠和安全等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用在植物源性產(chǎn)品農(nóng)藥殘留量的檢測分析[24-28]。應(yīng)用QuEChERS方法建立高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（HPLC-MS/MS）檢測植物源性食品（蔬菜、水果、食用菌）中乙基多殺菌素殘留的分析方法，可以為植物源性食品中乙基多殺菌素殘留監(jiān)測和風(fēng)險評估提供技術(shù)支撐。

1" 材料與方法

1.1" 儀器與材料

1.1.1" 儀器設(shè)備與試劑

XEVOTQ-S高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Waters公司）、Practum2102電子天平（德國Sartorius公司）、XH-B型旋渦混合器（江蘇康健醫(yī)療用品有限公司）和3-18K高速離心機(jī)（德國SIGMA公司）。

乙基多殺菌素標(biāo)準(zhǔn)品（純度88.84%，德國Dr. Ehrenstorfer GmbH生產(chǎn)）、乙腈（色譜純，德國Merck公司生產(chǎn)）、甲醇（色譜純，德國Merck公司生產(chǎn)）、氯化鈉（分析純，廣東光華科技股份有限公司生產(chǎn)）、乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（primary secondary amine，PSA）（美國Agilent公司生產(chǎn)）、陶瓷均質(zhì)子（美國Agilent公司生產(chǎn)）和微孔濾膜（美國Agilent公司生產(chǎn)）。

1.1.2" 試驗(yàn)材料

依據(jù)《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》（GB 2763-2021）對乙基多殺菌素的食品種類范圍，以及農(nóng)業(yè)部公告2386號《農(nóng)藥殘留檢測方法國家標(biāo)準(zhǔn)編制指南》[29]對植物源性食品中農(nóng)藥殘留檢測方法制定過程中基質(zhì)材料選擇要求，結(jié)合截至2023年2月28日中國農(nóng)藥信息網(wǎng)農(nóng)藥登記數(shù)據(jù)，目前我國有效期登記共有3個乙基多殺菌素產(chǎn)品，其中蔬菜作物有豇豆、黃瓜、玉米、甘藍(lán)、茄子，水果作物有西瓜、葡萄、楊梅樹、芒果。因此，選用蔬菜樣品基質(zhì)為甘藍(lán)、茄子，水果樣品基質(zhì)為葡萄，食用菌樣品基質(zhì)為香菇。

1.2" 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1" 樣品前處理

稱取10.00 g植物源性食品（蔬菜、水果、食用菌）試樣于50 mL塑料離心管中，加入20.0 mL乙腈及1顆陶瓷均質(zhì)子，劇烈震蕩1 min，加入5 g氯化鈉，劇烈震蕩1 min后，4 200 r·min-1離心5 min，移取3 mL提取液于15 mL離心管中，加入150 mg PSA，渦旋1 min后，4 200 r·min-1離心5 min，準(zhǔn)確移取2 mL上清液于玻璃離心管中，在40 ℃水浴下氮?dú)饩徛抵两?，加?.00 mL甲醇-水（體積比1∶1）溶液，旋渦混合1 min溶解殘留物，過微孔濾膜，制成上機(jī)待測液。

1.2.2" 乙基多殺菌素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的配制

準(zhǔn)確稱取10.0 mg乙基多殺菌素標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶劑溶解并定容至10.00 mL，配制成1 000 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，避光-18 ℃以下條件保存。

吸取2.00 mL的1 000 mg·L-1的乙基多殺菌素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液于容量瓶中用乙腈定容至100.00 mL，配制成20.0 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，避光-18 ℃以下條件保存。

1.2.3" 儀器條件

1）色譜條件。流動相A為鹽溶液（5 mmol·L-1乙酸銨+0.05%甲酸溶液），流動相B為甲醇，色譜柱ACQUITY UPLC BEH-C18（1.7 μm 2.1 × 50 mm），柱溫45 ℃，進(jìn)樣量1 μL，流速0.250 mL·min-1，流動相梯度0～1 min，B 10%；2～3 min，B 25%；5～6.5 min，B 45%～60%；7.5～8.5 min，B 60%～75%；9～10 min，B 90%～95%；11～12 min，B 95%；12～14 min，B 10%。

2）質(zhì)譜條件。電離模式ESI+，毛細(xì)管電壓3.0 kV，干燥氣溫度450 ℃，干燥氣流速900 L·h-1，錐孔氣流速150 L·h-1，霧化壓力7 Bar，碰撞氣流速0.15 mL·min-1。

2" 結(jié)果與分析

2.1" 儀器條件的優(yōu)化

2.1.1" 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

根據(jù)乙基多殺菌素的分子結(jié)構(gòu)特性，采用正離子模式掃描，由于乙基多殺菌素有乙基多殺菌素-J和乙基多殺菌素-L兩種本體[30-31]，需分別優(yōu)化其質(zhì)譜參數(shù)。分別手動找到目標(biāo)化合物的母離子后，運(yùn)用儀器自帶的Interllistart功能優(yōu)化其離子對最佳的碰撞能量。乙基多殺菌素2種本體的質(zhì)譜參數(shù)如表1所示。

2.1.2" 色譜條件的優(yōu)化

常用的流動相溶劑有乙腈和甲醇，由于乙腈和甲醇都是易揮發(fā)的有機(jī)溶劑，且乙腈的毒性較大，基于對檢測人員健康考慮，試驗(yàn)選擇甲醇-水，甲醇-0.05%甲酸水溶液，甲醇-鹽溶液（5 mmol·L-1乙酸銨 + 0.05%甲酸溶液）3種溶液作為流動相體系進(jìn)行測定。結(jié)果表明甲醇-鹽溶液（5 mmol·L-1乙酸銨 + 0.05%甲酸溶液）為流動相時，乙基多殺菌素響應(yīng)值較好。經(jīng)優(yōu)化流動相梯度得到保留時間適中、峰型良好的色譜圖。因此，HPLC-MS/MS法選擇甲醇-鹽溶液（5 mmol·L-1乙酸銨 + 0.05%甲酸溶液）為流動相。

2.2" 樣品前處理的優(yōu)化

基于QuEChERS方法，結(jié)合乙基多殺菌素的特性、植物源性食品基質(zhì)背景特點(diǎn)和對環(huán)境友好等因素，對樣品前處理進(jìn)行優(yōu)化。乙基多殺菌素對酸和堿不敏感，故無需使用緩沖體系。乙腈和甲醇對乙基多殺菌素均有足夠的溶解性，而乙腈的毒性比甲醇的大，基于對環(huán)境友好的考慮，復(fù)溶溶劑選擇甲醇-水（1∶1）。蔬菜、水果和食用菌的主要干擾物質(zhì)是色素、糖類和有機(jī)酸等物質(zhì)，而乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠（PSA）有去除色素、糖類、有機(jī)酸等極性物質(zhì)的作用。試驗(yàn)提取包選擇4 g無水硫酸鎂 + 1 g氯化鈉、5 g氯化鈉。凈化包選擇100 mg PSA、150 mg PSA、200 mg PSA。結(jié)果表明2種提取包都能有效去除樣品中的水分，考慮到加入無水硫酸鎂時會迅速結(jié)塊，對后續(xù)的振蕩混勻帶來一定的阻力，因而考慮選擇5 g氯化鈉作為提取包。100 mg PSA凈化后的試樣顏色較另外兩個含量稍微深一些，用200 mg PSA凈化后的試樣乙基多殺菌素-L回收率在70%～80%，用150 mg PSA凈化后的試樣乙基多殺菌素-J和乙基多殺菌素-L回收率均可達(dá)到80%。因此，HPLC-MS/MS法選擇5 g氯化鈉和150 mg PSA。

2.3" 減小基質(zhì)效應(yīng)的影響

通常采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀的ESI源進(jìn)行檢測時一般會存在基質(zhì)效應(yīng)。為了結(jié)果的準(zhǔn)確性，減小基質(zhì)效應(yīng)的影響，試驗(yàn)采用基質(zhì)標(biāo)定量，即用不含乙基多殺菌素的空白樣品提取液作為標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋溶劑。

2.4" 線性關(guān)系和定量限

取上述配制的20.0 mg·L-1的乙基多殺菌素標(biāo)準(zhǔn)儲備液，不含乙基多殺菌素的空白樣品提取液為溶劑分別配制成0.005、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200 mg·L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在儀器條件優(yōu)化好的設(shè)備上機(jī)測定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度（X，mg·L-1）為橫坐標(biāo)，響應(yīng)值峰面積Y為縱坐標(biāo)作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線及相關(guān)系數(shù)如表2所示。根據(jù)歐盟殘留監(jiān)控指南的規(guī)定，當(dāng)化合物某一濃度的信噪比＞10時，即可作為定量限。

2.5" 回收率和精密度

采用在不含乙基多殺菌素的空白樣品中加標(biāo)的方法，測定回收率來驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確率。選擇3個水平濃度，每個水平濃度重復(fù)進(jìn)行6次平行實(shí)驗(yàn)，得到的添加回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差如表3所示。數(shù)據(jù)表明，方法的回收率范圍為87.2%～98.8%，方法的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.9%～8.9%，能夠滿足日常檢測需求。

3" 小結(jié)

建立以高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定植物源性食品（蔬菜、水果、食用菌）中乙基多殺菌素殘留量的分析方法，驗(yàn)證該分析方法的靈敏度、回收率和重復(fù)性等技術(shù)參數(shù)。結(jié)果表明，該方法精密度和準(zhǔn)確性良好，可以達(dá)到乙基多殺菌素定性和定量的分析要求，適用于植物源性食品中乙基多殺菌素殘留的實(shí)際監(jiān)測，具有較好的應(yīng)用價值。

參考文獻(xiàn)：

[1] JING D P， GUO J F， JIANG Y Y， et al. Initial detections and spread of invasive spodoptera frugiperda in China and comparisons with other noctuid larvae in cornfields using molecular techniques[J]. Insect science， 2020， 27（4）： 780-790.

[2] Gutierrez Moreno Rebeca， Mota Sanchez David， Blanco Carlos A， et al. Field-evolved resistance of the fall armyworm （Lepidoptera： Noctuidae） to synthetic insecticides in Puerto Rico and Mexico [J]. Journal of Economic Entomology， 2019， 112（2）： 792-802.

[3]" 楊鳳麗，宓盛，馬海榮.乙基多殺菌素等10種藥劑對草地貪夜蛾的防效[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，61（11）：2295-2297.

[4] 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所.中國農(nóng)藥信息網(wǎng)行業(yè)數(shù)據(jù)[EB/OL].（2018-4-18）[2023-2-14]. http：//www.chinapesticide.org.cn/zwb/dataCenter？hash=reg-info.

[5]" 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部.第八屆全國農(nóng)藥登記評審委員會第十次全體會議紀(jì)要[EB/OL].（2012-02-02）[2023-2-14]. http：//www.moa.gov.cn/govpublic/ZZYGLS/201202/t20120202_2473770.htm.

[6]" 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部.中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第319號[EB/OL].（2020-07-27）[2023-2-10]. http：//www.moa.gov.cn/nybgb/2020/202008/202010/t20201015_6354268.htm.

[7]" 華乃震.綠色環(huán)保生物殺蟲劑多殺霉素和乙基多殺菌素的述評[J].農(nóng)藥，2015，54（1）：1-5，13.

[8]" 馬麗，董現(xiàn)義，劉剛.乙基多殺菌素在我國蔬菜作物上的登記、應(yīng)用及發(fā)展建議[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，61（10）： 2085-2087.

[9]" 趙瑤瑤，秦旭，秦冬梅，等.XDE-175及其代謝物在甘藍(lán)和土壤中的殘留動態(tài)研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報，2009，28（5）：1032-1036.

[10] 夏西亞，付步禮，李強(qiáng)，等.乙基多殺菌素在香蕉果實(shí)、花瓣和土壤中的殘留及消解動態(tài)分析[J].熱帶作物學(xué)報，2017，38（7）：1331-1336.

[11] 王天玉，林媚，姚周麟，等.乙基多殺菌素在楊梅果實(shí)和土壤中的殘留消解特征及其安全性評價[J].浙江大學(xué)學(xué)報（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），2021，47（1）： 43-51.

[12] Malhat F M. Simultaneous determination of spinetoram residues in tomato by high performance liquid chromatography combined with QuEChERS method[J]. Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology， 2013， 90（2）： 222-226.

[13] 楊寶萍，韋紅慧，韋元杰，等.乙基多殺菌素的液相色譜分析[J].世界農(nóng)藥，2021，43（11）：40-44.

[14] 王天玉，林媚，平新亮，等.果園土壤中乙基多殺菌素的高效液相色譜分析方法[J].農(nóng)藥，2019，58（3）： 196-198.

[15] 吳瓊，李建國，呂岱竹，等.超高效液相色譜法測定土壤中多殺菌素和乙基多殺菌素的殘留[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2015，17（1）：111-114.

[16] 馬磊，李壯，王猛強(qiáng)，等.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定動物源性食品中乙基多殺菌素殘留[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，2021，12（20）：7920-7925.

[17] 李剛，秦樊鑫，張盈，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速檢測洛黨參中乙基多殺菌素殘留[J].分析測試學(xué)報，2018，37（7）：834-838.

[18] 傅強(qiáng)，黃穎婕，付啟明，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同時檢測水稻樣品中乙基多殺菌素及其代謝物殘留[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2017，19（5）： 631-637.

[19] 牛艷，楊靜，冶海雄，等.枸杞中乙基多殺菌素及其代謝物的檢測方法[J].農(nóng)藥，2019，58（11）：828-830.

[20] 王宇，張慧，韓偉，等.液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定食品中的乙基多殺菌素殘留量[J].中國口岸科學(xué)技術(shù)，2020（10）：26-34.

[21] TANG H X， MA L， HUANG J Q， et al. Residue behavior and dietary risk assessment of six pesticides in pak choi using QuEChERS method coupled with UPLC-MS/MS[J]. Ecotoxicol Environ Saf， 2021，213（15）：1-8.

[22] LIU X， Abd El Aty A M， Park J Y， et al. Determination of spinetoram in leafy vegetable crops using liquid chromatography and confirmation via tandem mass spectrometry[J]. Biomedical Chromatography， 2011，25（10）：1099-1106.

[23] Ki Hun Park， Jeong Heui Choi， A M Abd El-Aty， et al. Determination of spinetoram and its metabolites in amaranth and parsley using QuEChERS-based extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Food Chem，2012，134（4）： 2552-2559.

[24] 王慎苓，于麗，李安榮，等.QuEChERS方法在果蔬農(nóng)藥多殘留檢測中的應(yīng)用[J].食品與藥品，2019，21（3）：231-234.

[25] 白小東，程超.淺析QuEChERS方法結(jié)合色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)在果蔬農(nóng)藥殘留檢測中的優(yōu)勢[J].食品安全導(dǎo)刊，2021（7）：40-41.

[26] 李俊超，秦學(xué)磊，吳圣江，等. QuEChERS前處理方法在食品檢測中的應(yīng)用進(jìn)展[J].食品研究與開發(fā)，2021，42（24）：206-212.

[27] 程曉宏，楊清華，楊娟，等.QuEChERS技術(shù)在食品安全中的應(yīng)用進(jìn)展[J].食品工業(yè)，2022，43（2）：264-269.

[28] 曾霞，于雅匯，王鳥，等.QuEChERS前處理技術(shù)在農(nóng)藥多殘留檢測中的研究進(jìn)展[J].當(dāng)代化工研究，2022（6）：33-35.

[29] 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部.中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告2386號[EB/OL].（2016-04-11）[2023-2-14]. http：//www.moa.gov.cn/govpublic/ZZYGLS/201604/t20160413_5093548.htm.

[30] 張逍遙，郭超，劉艷麗，等.生物農(nóng)藥多殺菌素及其結(jié)構(gòu)類似物的研究進(jìn)展[J].糧油食品科技，2020，28（6）： 209-217.

[31] 李妲，汪清民，黃潤秋.多殺菌素的研究進(jìn)展[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2003，5（2）：1-12.