張小敏 魏長(zhǎng)娜 袁軍

近年來，隨著“二孩”“三孩”生育政策的相繼實(shí)施，瘢痕子宮、高齡妊娠產(chǎn)婦增加，在剖宮產(chǎn)術(shù)中占比較高，而其妊娠帶來的并發(fā)癥也多，甚至是致命的。其中，高齡和瘢痕是影響子宮收縮的關(guān)鍵因素，適當(dāng)使用縮宮素可以預(yù)防剖宮產(chǎn)術(shù)中子宮收縮乏力，縮宮素受體（oxytocin receptor，OTR）和平滑肌動(dòng)蛋白（smooth muscle actin，SMA）是參與產(chǎn)婦子宮肌層收縮的重要因子。關(guān)于OTR 和SMA 在子宮肌層和瘢痕組織中的表達(dá)情況報(bào)道較少，本研究擬通過免疫組化法檢測(cè)子宮瘢痕和高齡患者OTR 和SMA 的表達(dá)水平，為臨床治療子宮收縮乏力患者提供參考。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取嘉興市婦幼保健院2020年1月至2021年12月剖宮產(chǎn)手術(shù)患者標(biāo)本60 例，其中非高齡（＜35 周歲）初產(chǎn)婦子宮肌層組織20 例（非高齡組），高齡（≥35 歲）初產(chǎn)婦子宮肌層組織20 例（高齡組），經(jīng)產(chǎn)婦子宮瘢痕組織20 例（瘢痕組，其中非高齡和高齡各10 例，經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)證實(shí)年齡對(duì)瘢痕組織OTR 和SMA表達(dá)影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，故瘢痕組不再細(xì)分組）。

1.2 標(biāo)本收集 標(biāo)本均在使用縮宮素前切取，其中非高齡組及高齡組初產(chǎn)婦子宮肌層組織選取剖宮產(chǎn)子宮切口上緣肌層組織，子宮瘢痕組織選取經(jīng)產(chǎn)婦原剖宮產(chǎn)瘢痕增生明顯處。收集到的組織樣本固定在10%中性甲醛溶液中。

1.3 標(biāo)本檢測(cè) 3 組組織樣本常規(guī)石蠟包埋，切片厚度均為3 μm，每個(gè)蠟塊切片3 張，其中1 張用于常規(guī)HE 染色，顯微鏡下觀察；另2 張進(jìn)行免疫組化染色。免疫組化染色制片參照Dako 試劑盒（購(gòu)自Dako 公司，批號(hào)：41386027）方法進(jìn)行，使用全自動(dòng)免疫組化染色儀染色，一抗OTR 抗體購(gòu)自Proteintech 公司，SMA 抗體購(gòu)自Abcam 公司，二抗試劑盒購(gòu)自Dako 公司。

1.4 結(jié)果判讀 免疫組化染色結(jié)果由2 位有經(jīng)驗(yàn)的高年資病理科醫(yī)師獨(dú)立觀察，每張切片隨機(jī)選取10 個(gè)高倍視野，根據(jù)細(xì)胞的染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行綜合評(píng)分[1]。染色強(qiáng)度評(píng)分：無染色為0 分；淺棕色為1分；棕色無背景著色或深棕色伴有背景著色為2 分；深棕色不伴背景著色為3 分。陽性細(xì)胞數(shù)評(píng)分：無染色細(xì)胞得0 分；染色細(xì)胞數(shù)≤25%得1 分；25%＜染色細(xì)胞數(shù)≤50%得2 分；染色細(xì)胞數(shù)＞50%得3 分。兩者相乘即為最終評(píng)分，＜3 分為陰性，≥3 分為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用配對(duì)t 檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 確切概率法。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3 組產(chǎn)婦一般情況分析 比較3 組產(chǎn)婦，除年齡外，其他一般情況比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 3 組產(chǎn)婦一般情況比較

2.2 3 組組織樣本OTR和SMA的表達(dá)情況 OTR在平滑肌細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，SMA在細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)。綜合評(píng)分結(jié)果顯示，3 組標(biāo)本均有OTR 表達(dá)，但非高齡組顏色較高齡組和瘢痕組較要深，呈棕黃色或棕褐色，染色強(qiáng)度大，陽性細(xì)胞數(shù)量多。非高齡組全部樣本OTR均檢測(cè)到陽性表達(dá)，高于高齡組（70.0%）和瘢痕組（50.0%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但高齡組和瘢痕組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。3 組標(biāo)本SMA 均有表達(dá)，非高齡組和高齡組陽性表達(dá)率分別為100.0%和95.0%，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但兩組均高于瘢痕組（60.0%），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表2。

表2 3 組組織樣本中OTR 和SMA 表達(dá)的比較[例（%）]

2.3 3 組組織樣本病理檢查結(jié)果比較 非高齡組子宮肌層結(jié)構(gòu)清楚，肌間膠原罕見，見圖1A，平滑肌細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核有呈棕黃色的OTR表達(dá)，見圖1B，平滑肌細(xì)胞的胞質(zhì)有呈棕黃色的SMA表達(dá)，但胞核無表達(dá)，見圖1C。相比非高齡組，高齡組子宮肌層量減少，見圖2A，平滑肌細(xì)胞的胞質(zhì)及胞核中OTR表達(dá)減少，見圖2B，平滑肌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)SMA 表達(dá)減少，見圖2C。瘢痕組的子宮肌層被增生的膠原纖維替代，僅殘留少量肌層結(jié)構(gòu)，見圖3A，殘余的平滑肌細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核中可見棕黃色OTR表達(dá)，見圖3B，殘余的平滑肌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見少量SMA 表達(dá)，見圖3C。

圖1 非高齡組病理檢查結(jié)果（A：HE 染色，×50；B：OTR 免疫組化染色；C：SMA 免疫組化染色；×200）

圖2 高齡組病理檢查結(jié)果（A：HE 染色，×50，箭頭示肌層組織相對(duì)疏松；B：OTR 免疫組化染色；C：SMA 免疫組化染色；×200）

圖3 瘢痕組病理檢查結(jié)果（A：HE 染色，×50，箭頭示膠原纖維增生；B：OTR 免疫組化染色；C：SMA 免疫組化染色；×200）

3 討論

OTR 是G 蛋白偶聯(lián)受體（G protein coupled receptor，GPCR）超家族成員之一，由388 個(gè)氨基酸組成，分子量約為42 kb[2]?？s宮素是預(yù)防和治療子宮收縮乏力性產(chǎn)后出血的常規(guī)藥物，通過與子宮OTR 結(jié)合發(fā)揮作用[3]。在子宮收縮的過程中，縮宮素與OTR 的相互關(guān)系決定了子宮活動(dòng)的總體平衡，OTR 數(shù)目減少會(huì)引起子宮收縮下降，導(dǎo)致產(chǎn)后出血增多[4-5]。為減少產(chǎn)后出血，需較多的縮宮素來增強(qiáng)宮縮。即子宮對(duì)縮宮素的敏感程度與OTR 的數(shù)量密切相關(guān)[6]。對(duì)預(yù)防第一次剖宮產(chǎn)因素[7]、第二產(chǎn)程延長(zhǎng)的相關(guān)因素[8]以及剖宮產(chǎn)圍生期并發(fā)癥產(chǎn)生因素[9]的研究發(fā)現(xiàn)，不同個(gè)體對(duì)縮宮素的響應(yīng)不同，臨床處理剖宮產(chǎn)時(shí)面臨極大挑戰(zhàn)。

人類子宮肌層、子宮內(nèi)膜和卵巢的OTR 由4.4 kb的mRNA 編碼。有研究證實(shí)，子宮中的OTR 存在于平滑肌細(xì)胞中[10]，可能在分娩期間支持子宮收縮中起重要作用。子宮肌層對(duì)縮宮素的敏感性似乎與OTR 的誘導(dǎo)有關(guān)，女性妊娠13～17 周時(shí)，子宮OTR 相比非妊娠時(shí)增加了約6 倍，妊娠32 周時(shí)子宮肌層OTR 的mRNA 水平是非妊娠子宮的100 倍，至分娩時(shí)進(jìn)一步增加，達(dá)到300 倍[11-12]。

本研究3 組標(biāo)本中OTR 均有陽性表達(dá)，但陽性表達(dá)率不同，其中高齡組和瘢痕組表達(dá)率低于非高齡組。瘢痕組OTR 陽性表達(dá)率偏低可能與瘢痕組織中肌層組織被膠原組織破壞有關(guān)。高齡組陽性率偏低，可能是因?yàn)楦啐g組子宮肌層OTR 表達(dá)下降，子宮肌層對(duì)縮宮素敏感程度下降所致，這與Patel 等[13]研究結(jié)果一致，相比低齡小鼠，高齡小鼠子宮肌層OTR 和連接蛋白-43 mRNA 表達(dá)下降；可見隨著年齡增大，子宮肌層功能出現(xiàn)下降趨勢(shì)。

肌動(dòng)蛋白是平滑肌細(xì)胞收縮域和細(xì)胞骨架域的主要成分[14]。SMA 是參與子宮肌細(xì)胞收縮的重要組成部分，實(shí)時(shí)熒光定量PCR和免疫組化染色均顯示在子宮收縮時(shí)，子宮肌層SMA表達(dá)上調(diào)，同時(shí)伴隨著子宮肌層OTR mRNA 表達(dá)上調(diào)[15-16]。在縮宮素和循環(huán)應(yīng)力作用下，SMA 表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)，進(jìn)一步支持鄰近組織功能，促使每個(gè)單獨(dú)的基質(zhì)細(xì)胞都可以穩(wěn)定收縮[17]。

本研究顯示，SMA 在3組標(biāo)本的平滑肌細(xì)胞質(zhì)中均有表達(dá)，高齡組和非高齡組間SMA 表達(dá)陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Sweeney 等[18]研究了年齡對(duì)子宮肌細(xì)胞數(shù)量和細(xì)胞核容積的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高齡對(duì)子宮平滑肌細(xì)胞數(shù)量無影響，對(duì)子宮肌細(xì)胞SMA表達(dá)無影響，與本研究結(jié)果一致。瘢痕組SMA陽性率低于非高齡組和高齡組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，原因可能是瘢痕修復(fù)過程中，膠原組織替代肌纖維組織進(jìn)行瘢痕修復(fù)，造成平滑肌細(xì)胞減少，從而導(dǎo)致SMA 的陽性率降低。既往研究發(fā)現(xiàn)，子宮瘢痕組織纖維排列紊亂，部分子宮肌層被膠原纖維破壞，肌層結(jié)構(gòu)僅部分殘留[19]。Wu等[20]測(cè)定了SMA和Ⅰ型膠原，發(fā)現(xiàn)瘢痕子宮產(chǎn)婦的平滑肌體積密度比低于非瘢痕子宮產(chǎn)婦，與本研究結(jié)果一致?？梢娖蕦m產(chǎn)術(shù)后瘢痕組織形成可能從組織結(jié)構(gòu)上影響了子宮肌層肌動(dòng)蛋白的整體功能。

綜上所述，高齡組和瘢痕組OTR表達(dá)水平低于非高齡組，瘢痕組SMA表達(dá)水平低于非高齡組和高齡組；子宮瘢痕和高齡對(duì)OTR和SMA表達(dá)有影響，高齡因素只導(dǎo)致子宮肌層OTR表達(dá)下降，但不影響SMA的表達(dá)；瘢痕因素導(dǎo)致OTR和SMA的表達(dá)均下降，是產(chǎn)婦肌層收縮功能減退的主要原因，如何減少瘢痕因素對(duì)產(chǎn)婦子宮肌層收縮功能的潛在影響值得更進(jìn)一步研究。