◎包東東，余 琪，田 鋒，譚慧林

（阿克蘇地區(qū)食品安全檢測(cè)中心，新疆 阿克蘇 843000）

毒死蜱是乙酰膽堿酯酶抑制劑，屬于有機(jī)磷[1]類(lèi)中毒殺蟲(chóng)劑，其具有胃毒、觸殺、熏蒸三重作用，與常規(guī)農(nóng)藥相比毒性較低，是替代高毒有機(jī)磷農(nóng)藥的首選藥劑，被大量用于植物病蟲(chóng)防治。由于大量的使用，毒死蜱及其代謝產(chǎn)物已造成了廣泛的環(huán)境污染和食物殘留[2]，其毒性作用對(duì)人類(lèi)具有潛在的健康風(fēng)險(xiǎn)[3]。實(shí)驗(yàn)室常用色譜及色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)毒死蜱殘留量進(jìn)行檢測(cè)[4-6]，這些方法準(zhǔn)確度高，但操作煩瑣，用時(shí)較長(zhǎng)。隨著近幾年快檢技術(shù)的快速發(fā)展，快速檢測(cè)試劑盒已被廣泛使用，但其對(duì)樣品檢測(cè)的適應(yīng)性還需進(jìn)一步評(píng)估。本研究參考行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)為參比方法，隨機(jī)選擇3 家快檢試劑盒，根據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》，對(duì)不同來(lái)源的檢測(cè)試劑盒在檢測(cè)蘋(píng)果中毒死蜱殘留的適應(yīng)性進(jìn)行了系統(tǒng)性評(píng)估，為毒死蜱殘留的快速檢測(cè)提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

使用來(lái)自阿克蘇市的蘋(píng)果為本實(shí)驗(yàn)的原材料。毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，乙腈、甲醇，丙酮，毒死蜱快檢試劑盒均采用競(jìng)爭(zhēng)法免疫膠體金檢測(cè)技術(shù)，本研究中將3種不同廠家試劑盒分別標(biāo)記為試劑盒1、試劑盒2、試劑盒3。

1.2 儀器與設(shè)備

本實(shí)驗(yàn)所用儀器包括高速勻漿機(jī)，Agilent 7890B氣相色譜儀，氮吹儀，渦旋儀。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

稱(chēng)取2.5 kg 蘋(píng)果樣品，切至塊狀，充分混勻后粉碎，分裝后-20 ℃下冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 氣相色譜

（1）樣品處理：依據(jù)《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》（NY/T 761—2008）第一部分所述方法處理樣品，配備火焰光度檢測(cè)器的氣相色譜儀檢測(cè)樣品中毒死蜱的含量。

（2）色譜條件：DB-1701 毛細(xì)柱；檢測(cè)器溫度為250 ℃；進(jìn)樣口溫度為220 ℃；保持柱溫150 ℃下2 min 后以8 ℃·min-1的速度升溫至250 ℃后保持12 min；以1.0 μL 為進(jìn)樣量。

1.3.3 快速檢測(cè)試劑盒

根據(jù)試劑盒的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

（1）試劑盒1：待測(cè)蘋(píng)果取皮約1 g 于樣品杯中，加入2 mL 毒死蜱稀釋液，手搖混勻，靜止提取5 min，樣品杯內(nèi)混合液體即為待測(cè)液。進(jìn)行檢測(cè)前需要對(duì)待測(cè)液進(jìn)行相對(duì)應(yīng)的稀釋。樣品準(zhǔn)備完畢后取出試劑盒中檢測(cè)卡并水平放置，取80 μL 上述樣品杯內(nèi)待測(cè)液的稀釋液，緩慢將液體滴入試劑盒1 中的檢測(cè)卡加樣孔中，反應(yīng)5～6 min 后，根據(jù)檢測(cè)卡所顯示顏色判定檢測(cè)結(jié)果。

（2）試劑盒2。洗凈蘋(píng)果，剪待測(cè)樣品至1 cm2左右碎片，充分混勻，稱(chēng)取2.5 g 碎片，加入5 mL 提取液，翻轉(zhuǎn)振蕩搖勻50 次以上，也可采用超聲3 min的方法進(jìn)行混勻，之后即得待測(cè)液。取出試劑盒2 中檢測(cè)卡，并放置至室溫后開(kāi)始檢測(cè)。取出紅色微孔，加入100 μL 待測(cè)液，吹打混勻靜置3 min，取出檢測(cè)卡，將檢測(cè)卡平放，將微孔待測(cè)液滴加到檢測(cè)卡加樣孔中，反應(yīng)5～8 min 后觀察結(jié)果，其余時(shí)間判讀無(wú)效。

（3）試劑盒3。稱(chēng)取蘋(píng)果表皮約1 g，置于 5 mL離心管中，并向其中加入1 mL 稀釋液，充分震蕩混勻2 min，所得液體即為待測(cè)液。待試劑盒3 中檢測(cè)卡恢復(fù)至室溫后開(kāi)始檢測(cè)。向金標(biāo)微孔中滴入4 滴所制待測(cè)液，2 min 后震動(dòng)以使上述待測(cè)液混合均勻；取出檢測(cè)卡平放，將微孔待測(cè)液全部滴加到檢測(cè)卡加樣孔中，8～10 min 觀察結(jié)果，其余時(shí)間判讀無(wú)效。

取毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)并配制終濃度為0、0.05、0.08、0.10 和0.20 mg·kg-1的毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)品，使用上述3種試劑盒對(duì)加標(biāo)樣品進(jìn)行檢測(cè)，分析檢測(cè)結(jié)果與實(shí)際濃度。

1.4 數(shù)據(jù)分析

依據(jù)《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》，分別計(jì)算3 種試劑盒檢測(cè)毒死蜱的特異性、靈敏度、假陽(yáng)性率、假陰性率、顯著性差異和相對(duì)準(zhǔn)確度等參數(shù)，使用spss 軟件整理分析實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 檢測(cè)蘋(píng)果中的毒死蜱農(nóng)藥殘留

對(duì)阿克蘇地區(qū)蘋(píng)果樣品進(jìn)行毒死蜱殘留的測(cè)定，3 種試劑盒的檢測(cè)結(jié)果均顯示未檢出，說(shuō)明本研究所用蘋(píng)果樣品中沒(méi)有毒死蜱殘留，詳見(jiàn)表1。

表1 蘋(píng)果中毒死蜱農(nóng)藥殘留行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和試劑盒檢測(cè)結(jié)果表

2.2 快檢試劑盒檢測(cè)結(jié)果評(píng)估

2.2.1 試劑盒1 檢測(cè)結(jié)果

以5 份相同的蘋(píng)果樣品為基質(zhì)，分別添加毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液使其終濃度為0、0.05、0.08、0.10 和0.20 mg·kg-1，每個(gè)濃度重復(fù)10 次。檢驗(yàn)結(jié)果及顯色情況如表2。該試劑盒使用說(shuō)書(shū)中顯示該試劑盒檢出限為0.10 mg·kg-1，故本實(shí)驗(yàn)中，若出現(xiàn)顯色反應(yīng)即為樣品中毒死蜱含量≥0.10 mg·kg-1，未出現(xiàn)顯色反應(yīng)則認(rèn)為其中毒死蜱含量＜0.10 mg·kg-1。對(duì)表2 結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果顯示試劑盒1 的特異性、靈敏度、假陽(yáng)性率、假陰性率、顯著性差異和相對(duì)準(zhǔn)確度分別為66.67%、100%、33.3%、0、8.1，80%。

表2 試劑盒1 對(duì)毒死蜱加標(biāo)后檢測(cè)顯色統(tǒng)計(jì)表

2.2.2 試劑盒2 檢測(cè)結(jié)果

向5 份相同蘋(píng)果樣品中添加毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液，使其最終濃度為0、0.10、0.25、0.5 和1.00 mg·kg-1，每個(gè)濃度重復(fù)10 次。檢驗(yàn)結(jié)果及顯色情況如表3所示。試劑盒2 使用說(shuō)書(shū)顯示該試劑盒的檢出限為0.50 mg·kg-1，故本研究結(jié)果分析中，出現(xiàn)顯色反應(yīng)的即認(rèn)為樣品中毒死蜱含量≥0.50 mg·kg-1，未出現(xiàn)顯色反應(yīng)的樣品中毒死蜱含量＜0.50 mg·kg-1。對(duì)顯色結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，試劑盒2 的假陽(yáng)性率、假陰性率、靈敏度、特異性、顯著性差異和相對(duì)準(zhǔn)確度分別為66.67%、0、100%、33.33%、18.05、60%。在毒死蜱最終添加濃度為0.10 mg·kg-1時(shí)試劑盒2 即可顯色，與說(shuō)明書(shū)所標(biāo)稱(chēng)的檢測(cè)限為0.5 mg·kg-1不符，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與其說(shuō)明書(shū)中所標(biāo)示的檢出限差距較大。

表3 試劑盒2 對(duì)蘋(píng)果中毒死蜱加標(biāo)檢測(cè)顯色統(tǒng)計(jì)表

2.2.3 試劑盒3

向5 份蘋(píng)果樣品基質(zhì)中添加毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液并使其終濃度為0、0.05、0.10、0.20 及1.00 mg·kg-1，每個(gè)濃度重復(fù)10 次。檢驗(yàn)結(jié)果及顯色情況如表4。根據(jù)此試劑盒使用說(shuō)明書(shū)，此試劑盒的檢出限為0.10 mg·kg-1，即陽(yáng)性樣品中毒死蜱含量＞0.10 mg·kg-1，陰性樣品中毒死蜱含量則＜0.10 mg·kg-1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在同一濃度毒死蜱條件下，10 次重復(fù)檢測(cè)中既有陽(yáng)性結(jié)果，又有陰性結(jié)果，說(shuō)明快檢試劑盒顯色非常不穩(wěn)定。結(jié)果顯示，此試劑盒的假陽(yáng)性率和假陰性率分別為0 和36.67%、靈敏度為63.3%、特異性為100%、顯著性差異為9.09，相對(duì)準(zhǔn)確度為78%。

表4 試劑盒3 對(duì)蘋(píng)果中毒死蜱加標(biāo)檢測(cè)顯色統(tǒng)計(jì)表

3 結(jié)果與討論

通過(guò)采用不同毒死蜱快檢試劑盒對(duì)阿克蘇蘋(píng)果樣品進(jìn)行檢測(cè)，并依據(jù)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果顯示毒死蜱顯色反應(yīng)均為陰性。向同樣蘋(píng)果樣品中添加不同濃度毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)溶液，并根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)中所標(biāo)示的檢出限辨別樣品中毒死蜱含量，檢測(cè)結(jié)果采用《食品快速檢測(cè)方法評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》所述方法進(jìn)行分析，對(duì)3 中毒死蜱快檢試劑盒檢測(cè)效果進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果顯示，試劑盒1 假陰性率較高，試劑盒2 假陰陽(yáng)率較高，試劑盒3 假陽(yáng)性率、假陰性率都比較高。需要建立與完善商品快檢試劑盒的評(píng)價(jià)體系，進(jìn)一步規(guī)范快速檢測(cè)技術(shù)的科學(xué)發(fā)展。

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)蘋(píng)果中毒死蜱的最大限量為1 mg·kg-1，本次試驗(yàn)所選的3 種試劑盒的檢出限均低于該限量值，因此3 種試劑盒均能滿足蘋(píng)果樣品中毒死蜱殘留量快速篩查工作需求。