贠萍(新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第八師生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)站，新疆 石河子 832000)

0 引言

五日生化需氧量表示水體有機(jī)物和無(wú)機(jī)物在生物氧化作用下，所消耗溶解氧的量，是監(jiān)測(cè)水質(zhì)重要指標(biāo)之一。稀釋與接種法是測(cè)定五日生化需氧量具有準(zhǔn)確性高的特點(diǎn)，但實(shí)際樣品分析工作中情況復(fù)雜，本文根據(jù)實(shí)際工作中的常見(jiàn)問(wèn)題進(jìn)行實(shí)驗(yàn)測(cè)定分析。

1 原理

生化需氧量是指一定時(shí)間和條件下，分別注滿水樣的培養(yǎng)瓶置于(20±1 ℃)恒溫恒濕生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)5 d±4 h，分別測(cè)定水樣中溶解氧的濃度，由兩者的溶解氧的濃度差值計(jì)算每升水樣消耗溶解氧的質(zhì)量，即BOD5值表示[1]。

2 研究方法

2.1 試劑材料

(1)主要試劑。硫酸錳溶液、堿性碘化鉀溶液、1%淀粉溶液、磷酸鹽緩沖溶液、硫酸鎂溶液、氯化鈣溶液、三氯化鐵溶液、0.0125 mol/L硫代硫酸鈉溶液。

(2)主要儀器設(shè)備。HWS-150恒溫恒濕培養(yǎng)箱、10 L稀釋瓶、250 mL培養(yǎng)瓶、50 mL酸式滴定管、100 mL量筒。

(3)實(shí)驗(yàn)方法。稀釋與接種法：用充氧棒通過(guò)不少于8 h對(duì)稀釋水進(jìn)行空氣曝氣，使水中溶解氧接近于飽和狀態(tài)，置于20 ℃恒溫恒濕培養(yǎng)箱數(shù)小時(shí)，使水中DO(溶解氧)達(dá)8 mg/L左右，稀釋水pH值為7.2，生化需氧量的值小于0.2 mg/L，24 h之內(nèi)使用。

(4)采樣方法。采樣時(shí)不可攪動(dòng)水底沉積物。采樣器、靜置容器和樣品瓶用水樣蕩洗2～3次；采集的水樣倒入靜置容器中，自然靜置30 min，使用虹吸裝置取上怒發(fā)沖冠不含沉降性固體水樣，移入樣品瓶時(shí)，虹吸裝置進(jìn)水尖嘴應(yīng)保持插到水樣表層50 mm以下位置。采集時(shí)應(yīng)注滿樣品瓶，使用標(biāo)準(zhǔn)分析方法規(guī)定的專用保存容器。

3 測(cè)定水中五日生化需氧量影響因素

(1)采集水樣和保存水樣對(duì)測(cè)定結(jié)果影響。采集量不小于1 000 mL采樣瓶中并放置于在0～4 ℃的采集樣品箱中避光運(yùn)輸并使標(biāo)簽完好保存，于24 h內(nèi)盡快分析。在現(xiàn)場(chǎng)以高純水代替水樣作BOD5全程序空白試驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果低于國(guó)標(biāo)法規(guī)定的空白值0.2 mg/L，否則必須要查找原因[2]。

(2) pH值對(duì)測(cè)定結(jié)果影響。

pH值對(duì)結(jié)果的影響。若pH值低于6.5，生成微淡黃色的透明四價(jià)錳氫氧化物滴定的溶解氧濃度偏低不到1.0 mg/L；若pH值高于7.5，反應(yīng)向反方向進(jìn)行，不產(chǎn)生顯色反應(yīng)，溶液變?yōu)闇啙釣闊o(wú)色而無(wú)法滴定，溶解氧濃度值為零。對(duì)同一水樣，改變其pH值，加入1.0 mL硫酸錳溶液，2.0 mL堿性碘化鉀溶液，待棕色沉淀物降至瓶?jī)?nèi)一半時(shí)，再加入2.0 mL硫酸，放置暗處5 min后測(cè)定其濃度值，經(jīng)過(guò)多次實(shí)驗(yàn)表明pH值為2.0～6.0時(shí)溶解氧濃度為0.1～5.0 mg/L；pH值為6.0～7.0時(shí)溶解氧濃度為5.9～7.0 mg/L；pH值為8.0以上時(shí)，溶解氧出現(xiàn)無(wú)色渾濁，濃度值為0.0 mg/L；即：pH值＜6.5溶解氧濃度偏低，pH值＞7.5溶解氧濃度為零，pH值在6.5～7.5左右時(shí)滴定濃度值最準(zhǔn)確。

由于水體中的微生物大多適合在偏中性和弱堿性環(huán)境中生存，稀釋水中加了磷酸鹽緩沖液后，對(duì)于酸性或堿性的廢水起不到充分中和作用，應(yīng)先用pH試紙對(duì)廢水進(jìn)行pH值范圍的測(cè)試，再用氫氧化鈉或鹽酸調(diào)至pH值近于7；若水樣酸度或堿度偏高，用高濃度的堿或酸液進(jìn)行中和，在操作過(guò)程沿瓶壁緩慢加入高濃度的堿或酸液不要帶入氣泡，避免對(duì)樣品測(cè)定結(jié)果影響必須在滴定分析樣品之前將樣品pH值調(diào)至7[3]。

(3)溶解氧濃度對(duì)測(cè)定結(jié)果影響。溶解氧濃度與水溫成反比，水溫高溶解氧濃度低；水溫低溶解氧濃度高。為此嚴(yán)格控制樣品的溶解氧濃度，當(dāng)溶解氧濃度低于2 mg/L時(shí)不能給微生物提供充足的溶解氧，用稀釋與接種方法提高水中的溶解氧濃度。

(4)水溫對(duì)測(cè)定結(jié)果影響。水溫溫度變化可直接影響測(cè)定結(jié)果。采集水溫較低的水域、富營(yíng)養(yǎng)化湖泊或含有過(guò)飽和溶解氧的樣品應(yīng)將樣品升溫到20 ℃左右，在不滿瓶的情況下充分振搖，并開(kāi)塞放氣，趕出過(guò)飽和溶解氧；若采集水溫較高水域或廢水總排污出口的樣品，使冷卻至20 ℃左右，充分振搖，與空氣中氧分壓接近平衡。分析樣品的水溫控制在20 ℃左右對(duì)測(cè)定結(jié)果影響最小。

(5)培養(yǎng)時(shí)間對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。在測(cè)定地表水生化需氧量(BOD5)分析中，培養(yǎng)時(shí)間對(duì)測(cè)定結(jié)果影響較大。以取樣量為420 mL水樣緩慢傾入體積為1 000 mL的量筒中，用稀釋水定容至700 mL地表水分析為例，用0.0125 mg/L濃度的硫代硫酸鈉濃度滴定BOD5值、DO值與空白濃度值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：滴定當(dāng)天地表水空白值與樣品的溶解氧值分別為7.00 mg/L和6.00 mg/L，當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間＜5 d-4 h時(shí)，空白溶解氧值為0.8 mg/L與樣品溶解氧值為5.1 mg/L，BOD5濃度值為1.4 mg/L，溶液顯色不完全，BOD5濃度、DO濃度會(huì)隨著培養(yǎng)時(shí)間增大而減?。慌囵B(yǎng)時(shí)間為5 d±4 h時(shí)空白溶解氧值為0.10～0.20 mg/L與樣品溶解氧值為3.95 mg/L，BOD5濃度值3.3 mg/L,溶液顯色穩(wěn)定，BOD5濃度值DO濃度值準(zhǔn)確；培養(yǎng)時(shí)間＞5 d+4 h時(shí)空白溶解氧值為1.0 mg/L與樣品溶解氧值為5.1 mg/L，BOD5濃度值為1.5 mg/L，BOD5濃度值DO濃度值也會(huì)隨時(shí)間減小，培養(yǎng)時(shí)間在5 d±4 h范圍間最適宜[3]。

(6)恒溫恒濕培養(yǎng)箱溫度對(duì)測(cè)定濃度的影響。測(cè)定生化需氧量過(guò)程中，恒溫恒濕箱培養(yǎng)的溫度每相差1 ℃會(huì)則會(huì)引起5%的誤差，使微生物的活性提高，嚴(yán)格控制水樣樣品溫度在20±1 ℃，確保結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度。當(dāng)溫度為＜20-1 ℃時(shí)，五天前DO濃度為7.00 mg/L，五天后DO濃度為7.10 mg/L，消耗溶解氧濃度值偏高，BOD5濃度值為負(fù)數(shù)，結(jié)果不合格；當(dāng)溫度為20±1 ℃時(shí)，五天前DO濃度為7.00 mg/L，五天后DO濃度為6.90 mg/L，BOD5濃度為0.10 mg/L，消耗溶解氧較完全，稀釋水空白BOD5濃度值＜0.2 mg/L結(jié)果合格；溫度＞20+1 ℃時(shí)，五天前DO濃度為7.05 mg/L，五天后DO濃度為5.30 mg/L，BOD5濃度為1.75 mg/L，消耗溶解氧濃度略低，未滿足稀釋水空白BOD5濃度值＜0.2 mg/L標(biāo)準(zhǔn)要求，結(jié)果不合格；因此控制培養(yǎng)溫度20±1 ℃為宜。

(7)影響空白值的因素。影響空白值的試劑主要為硫酸錳、配制硫酸錳，要選擇溶于水不溶物含量＜0.005，重金屬＜0.002，鎳＜0.02的試劑，否則易出現(xiàn)渾濁，空白值偏高；空白值還與磷酸鹽緩沖液，硫酸鎂，氯化鐵及放置時(shí)間有關(guān)，放置時(shí)間為30 d，否則會(huì)使空白值偏高且不穩(wěn)定，隨放置時(shí)間延長(zhǎng)，影響測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性。在4 ℃冰箱中冷藏，放置可達(dá)半年而空白值無(wú)明顯增大。

(8)實(shí)驗(yàn)用水的影響。實(shí)驗(yàn)用水為導(dǎo)入新鮮蒸餾水和純水機(jī)制備的超純水作為稀釋水，曝氣大于5 h,瓶口蓋以兩層干凈的紗布，使水中的溶解氧接近飽和，水中溶解氧含量達(dá)到8 mg/L，通過(guò)分析的實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水和超純水BOD5空白濃度值分別為0.15～0.18 mg/L之間，溶解氧濃度值小于0.2 mg/L；稀釋接種法用蒸餾水或純水代替空白樣品，BOD5空白濃度值分別為1.0～1.5 mg/L之間，溶解氧濃度值小于1.5 mg/L，即：蒸餾水和超純水的實(shí)驗(yàn)用水為合格并滿足實(shí)驗(yàn)用水要求。若溶解氧測(cè)定結(jié)果超過(guò)1.5 mg/L，應(yīng)檢查污染來(lái)源。

(9)稀釋與接種液和非稀釋與接種液對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。配制過(guò)程中的玻璃器皿要清洗干凈，用分析純以上化學(xué)試劑、配好的稀釋水與接種液在24 h之內(nèi)使用。來(lái)源不同接種液會(huì)對(duì)空白值產(chǎn)生影響，以采集城市城鎮(zhèn)污水處理廠出口生活廢水作為接種液和不用接種液的分析空白濃度值為例：城市城鎮(zhèn)污水處理廠出口以生活污水作為接種液，五天前測(cè)定DO濃度值分別為7.65～7.70 mg/L,五天后測(cè)定DO濃度值分別為6.60～6.40 mg/L，實(shí)際DO濃度值分別為1.1～1.2 mg/L，即：BOD5空白值小于1.5 mg/L，有利于微生繁殖生長(zhǎng)；選擇酸性或堿性高溫工業(yè)廢水的接種液含有有機(jī)物重金屬及氧化還原物等物質(zhì)及微生物，五天前測(cè)定DO濃度值分別為7.70 mg/L，五天后測(cè)定DO濃度值分別為6.10～6.00 mg/L，實(shí)際DO濃度值分別為1.6～1.7 mg/L,經(jīng)過(guò)五天培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)造成實(shí)際濃度結(jié)果偏差較大，使BOD5空白值高于1.5 mg/L，不合格。表明以城市城鎮(zhèn)污水處理廠出口生活廢水作為接種液的BOD5空白值準(zhǔn)確性高。

(10)稀釋倍數(shù)對(duì)測(cè)定結(jié)果精密度和準(zhǔn)確度的影響。編號(hào)為200255的BOD5環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度為74.7±4.9 mg/L來(lái)確定稀釋倍數(shù)。根據(jù)用已知樣品的BOD5真值與已知樣品BOD5中的測(cè)出CODcr值及(BOD5/CODcr)的比值R估計(jì)BOD5的期望值來(lái)確定樣品的稀釋倍數(shù)，并分別配成低37.5±2.4 mg/L、中74.7±4.9 mg/L、高143.9±9.8 mg/L三種不同濃度來(lái)確定稀釋倍數(shù)，分別為10倍、20倍、50倍，低濃度測(cè)定結(jié)果分別為38.8 mg/L、36.4 mg/L、37.1 mg/L、38.1 mg/L、39.0 mg/L、36.2 mg/L，平均值37.6 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差1.21 mg/L；中濃度測(cè)定結(jié)果分別為78.4 mg/L、72.2 mg/L、70.6 mg/L、77.6 mg/L、73.6 mg/L、74.0 mg/L，平均值74.4 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差3.04 mg/L；高濃度測(cè)定結(jié)果分別為140.2 mg/L、142.2 mg/L、141.3 mg/L、146.7 mg/L、145.8 mg/L、149.2 mg/L，平均值144.2 mg/L，標(biāo)準(zhǔn)偏差3.53 mg/L；測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD分別為3.2%、4.1%、2.4%[1]，說(shuō)明上述稀釋倍數(shù)的方法準(zhǔn)確度和精密度良好。

4 解決常見(jiàn)干擾及消除方法

(3)放置樣品的貯存時(shí)間對(duì)測(cè)定結(jié)果影響。放置不同類型樣品的貯存時(shí)間對(duì)測(cè)定結(jié)果BOD5濃度值有影響?，F(xiàn)以采集有機(jī)廢水(石河子污水處理廠總排口)和無(wú)機(jī)廢水(以硫酸、純堿為主生產(chǎn)的典型化工廠的總排口廢水)樣品分別放置4個(gè)時(shí)間段各3個(gè)樣品為例。有機(jī)廢水放置6 h時(shí) BOD5測(cè)定結(jié)果濃度3.00 mg/L、2.95 mg/L、2.00 mg/L；24 h時(shí) BOD5測(cè)定結(jié)果濃度3.00 mg/L、3.22 mg/L、2.35 mg/L；濃度值相對(duì)穩(wěn)定沒(méi)有太大變化，36 h時(shí) BOD5測(cè)定結(jié)果濃度3.10 mg/L、3.30 mg/L、2.55 mg/L；48 h時(shí) BOD5測(cè)定結(jié)果濃度7.70 mg/L、6.80 mg/L、6.90 mg/L；4天內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)分別為55.6%、44.9%、67.0%。無(wú)機(jī)廢水放置6 h時(shí) BOD5測(cè)定結(jié)果濃度2.05 mg/L、3.10 mg/L、1.22 mg/L；24 h時(shí) BOD5測(cè)定結(jié)果濃度2.10 mg/L、3.15 mg/L、1.25 mg/L；濃度值相對(duì)穩(wěn)定沒(méi)有太大變化，36 h時(shí) BOD5測(cè)定結(jié)果濃度2.15 mg/L、3.20 mg/L、1.29 mg/L；48 h時(shí) BOD5測(cè)定結(jié)果濃度2.20 mg/L、3.30 mg/L、1.30 mg/L；四天內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD%)分別為3.0%、2.7%、2.9%。結(jié)果表明：有機(jī)廢水放置時(shí)間大于24 h樣品濃度偏高，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差過(guò)高；含量較少地表水放置培養(yǎng)時(shí)間小于6～48 h樣品濃度相對(duì)穩(wěn)定沒(méi)有太大變化，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差偏低，濃度值準(zhǔn)確。樣品中的有機(jī)物與空氣接觸后受貯存放置時(shí)間影響，已不是原樣品，BOD5濃度值變化較大，重新選擇分析。有機(jī)廢水樣品采集后應(yīng)盡可能快在6 h內(nèi)進(jìn)行分析，在任何情況下，貯存放置時(shí)間不應(yīng)超過(guò)24 h。有機(jī)廢水放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)使樣品中的微生物發(fā)生氧化反應(yīng)從而影響測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性。無(wú)機(jī)廢水貯存放置的時(shí)間，對(duì)BOD5測(cè)定結(jié)果濃度值影響不大[4]。

5 結(jié)語(yǔ)

(1)五日生化需氧量是水質(zhì)有機(jī)污染常用的重要指標(biāo)參數(shù)。用稀釋與接種法測(cè)定水和廢水五日生化需氧量的影響因素進(jìn)行系統(tǒng)探討和討論，對(duì)樣品濃度值及空白值的影響因素的解決、干擾及消除方法等問(wèn)題進(jìn)行探索。(2)研究了生化需氧量測(cè)定過(guò)程中常見(jiàn)的干擾及消除方法，并提出建議。(3)通過(guò)國(guó)家環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)樣品及廢水樣品分析驗(yàn)證得出國(guó)標(biāo)HJ 505—2009五日生化需氧量測(cè)定中樣品的pH值、培養(yǎng)溫度20±1 ℃、培養(yǎng)時(shí)間5 d±4 h、貯存放置時(shí)間、選用經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)合格后儀器設(shè)備、分析純以上試劑、樣品預(yù)處理及根據(jù)BOD5/CODcr的比值R估計(jì)BOD5的期望值確定樣品的稀釋倍數(shù)等因素對(duì)測(cè)定樣品及環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)樣品的BOD5，分析要求滿足這些因素條件并保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和精密性。

HJ 505—2009稀釋與接種法測(cè)定生化需氧量時(shí)常見(jiàn)干攏有樣品的氧化物質(zhì)，水樣呈酸堿性等有毒物質(zhì)同，常見(jiàn)消除干擾消除方法如下：

(1)稀釋法。對(duì)清潔的地表水在生化需氧量測(cè)定，一般采用疊氮化鈉，碘量法消除干擾。

(2)接種法。對(duì)不含或少含微生物廢水，將水樣pH值調(diào)至6.5～7.5之間，一般生活污水中微生物降解有機(jī)物和劇毒物質(zhì)將馴化后的微生物引入水樣中，將水樣樣品pH值調(diào)至中性，溫度調(diào)至20 ℃左右進(jìn)行以城市城鎮(zhèn)污水處理廠出口生活廢水作為接種液接種，接種法幾乎可消除所有常見(jiàn)干擾，建議使用該方法。