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        心腦血管疾病患者載脂蛋白基因多態(tài)性與血脂、載脂蛋白水平的相關(guān)性研究*

        2023-03-21 09:22:30孔倩倩余漢忠
        黑龍江醫(yī)藥 2023年4期
        關(guān)鍵詞:載脂蛋白心腦血管多態(tài)性

        孔倩倩,王 麗,余漢忠,蔡 遷

        1.中國礦業(yè)大學(xué),江蘇 徐州 221000;2.徐州市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,江蘇 徐州 221000;3.徐州市婦幼保健院,江蘇 徐州 221000

        心腦血管疾病(CVD)是心血管疾病和腦血管疾病的統(tǒng)稱,具有發(fā)病率高、死亡率高、致殘率高等特點(diǎn)[1-2],嚴(yán)重威脅人類生命健康。CVD的致病因素非常多,近年來的研究表明遺傳因素尤其是影響血脂代謝的基因[3],與其發(fā)病密切相關(guān)。其中載脂蛋白E(ApoE) 基因可與脂質(zhì)及其受體,低密度脂蛋白(LDL)、極低密度脂蛋白(VLDL)及LDL相關(guān)蛋白結(jié)合,作為配體參與受體介導(dǎo)的載脂蛋白清除過程,是目前發(fā)現(xiàn)對血脂水平影響較大的基因[4-5]。為進(jìn)一步證實(shí)載脂蛋白E(ApoE)基因多態(tài)性和心腦血管疾病的關(guān)系,本研究收集樣本醫(yī)院就診的CVD患者,檢測其ApoE基因多態(tài)性、血脂水平,分析ApoE基因多態(tài)性在CVD發(fā)生發(fā)展中的作用,并分析其可能機(jī)制,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

        1 資料與方法

        1.1 一般資料

        選取2017年9月—2019年8月徐州市第一人民醫(yī)院就診的500 例CVD 患者為實(shí)驗(yàn)組,男性270 例,女性230例,平均年齡67.77 歲,其中198 名患者診斷為冠心病,162名患者診斷為腦梗死,140例診斷為高血壓病。所有患者均排除腫瘤、服用他汀類藥物等影響因素。選取106例健康體檢者為對照組,其中男性66 例,女性40 例, 平均年齡65.29 歲,兩組受試者年齡和性別等一般資料具有可比性(P>0.05)。

        1.2 儀器與試劑

        (1)試劑:血液基因組DNA 提取試劑盒(離心柱型),購自TIANGEN 北京生物科技有限公司;人類ApoE基因檢測試劑盒購自武漢友芝友生物科技有限公司。(2)儀器:全自動熒光檢測PCR擴(kuò)增儀購自杭州博日科技有限公司、全自動生化分析儀(AU5821)購自德國貝克曼庫爾特公司。

        1.3 方法

        (1)ApoE 基因多態(tài)性檢測:采集全血1 mL 于依地酸鈉鈣(EDTA)抗凝管,按照DNA 提取試劑盒(DP318)說明書提取全血DNA,并以此為模板,采用PCR熒光探針法進(jìn)行熒光定量PCR 擴(kuò)增,按照說明書進(jìn)行ApoE 基因型判讀。并按照ApoE 基因型分為三組:E2 基因型組(E2/E2、E2/E3),E3基因型組(E2/E4、E3/E3),E4基因型組(E3/E4、E4/E4)。(2)血脂及載脂蛋白檢測:所有患者在采集血樣前3 d 禁食高脂肪食物,并至少空腹12 h 以上,采集晨起空腹血樣4 mL 于促凝管,4 000 rpm/min 離心10 min 分離血清,血清甘油三酯(TG),血清總膽固醇(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、LDL、載脂蛋白A(APoA)、載脂蛋白B(APoB)、脫脂轉(zhuǎn)化酶(Lpa)、ApoE等指標(biāo)均采用全自動生化分析儀檢測(貝克曼庫爾特AU5821)。

        1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

        采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用例數(shù)和百分比(%)表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組受試者ApoE等位基因頻率分布情況

        對CVD 患者和健康體檢者采用熒光定量PCR 的方法進(jìn)行ApoE 基因型檢測,發(fā)現(xiàn)CVD 患者E3 基因型頻率最高,占73.30%,與健康體檢者相比,其E4 基因頻率較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表1。

        表1 兩組受試者ApoE等位基因頻率分布情況 例(%)

        2.2 不同ApoE等位基因之間血脂及載脂蛋白水平情況

        將入組患者按照ApoE 基因型分為三組:E2 基因型組(E2/E2、E2/E3),E3基因型組(E2/E4、E3/E3),E4基因型組(E3/E4、E4/E4),比較各組血脂(血清TC、TG、HDL、LDL)以及載脂蛋白(APoA、APoB、Lpa、ApoE)水平,發(fā)現(xiàn)三組間TC、LDL、APoB、Lpa、ApoE水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。將各組進(jìn)行兩兩比較,發(fā)現(xiàn)與E2組相比較,E3組E4組TC、LDL、APoB、Lpa水平明顯升高,ApoE 水平明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),E3 組APoA 水平明顯降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),E4組與E4組血清血脂及載脂蛋白,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見表2。

        表2 不同ApoE等位基因之間血脂及載脂蛋白水平情況(±s) 分

        表2 不同ApoE等位基因之間血脂及載脂蛋白水平情況(±s) 分

        a表示與E4組比較,P<0.05,b表示與E3組比較,P<0.05。

        組別E2 E3 E4 t值P值TC 4.27±1.34ab 4.62±1.20 4.75±1.13 12.58<0.05 TG 1.53±1.75 1.53±1.35 1.81±1.85 1.95 0.38 HDL 1.25±0.37 1.19±0.31 1.20±0.33 2.15 0.34 LDL 2.10±0.77ab 2.55±0.87 2.63±0.81 24.27<0.05 APoA 1.14±0.34a 1.07±0.31 1.07±0.35 5.06 0.08 APoB 0.79±0.23ab 0.97±0.27 0.99±0.26 35.84<0.05 Lpa 217.11±250.31ab 254.84±239.35 297.64±294.83 8.28 0.02 ApoE 44.15±10.22ab 34.28±10.89 33.58±12.14 57.12<0.05

        2.3 不同心腦血管疾病與ApoE基因頻率及血脂水平情況

        將入組患者按照疾病類型進(jìn)行分組,對其ApoE 基因頻率、血脂以及載脂蛋白水平進(jìn)行比較,各組間ApoE 基因頻率、血脂、載脂蛋白水平,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見表3、表4。

        表3 不同心腦血管疾病與ApoE基因頻率

        表4 不同病例組患者血脂水平

        3 討論

        CVD是嚴(yán)重威脅當(dāng)今人類生命健康的疾病之一,21世紀(jì)初期CVD 死亡數(shù)已占發(fā)達(dá)國家死亡總數(shù)的50%、發(fā)展中國家死亡總數(shù)的25%,成為世界大多數(shù)國家第一、二位死亡原因[6]。大量研究表明,血脂異常是CVD的重要致病因素之一,TC水平的升高、TG水平升高以及LDLc是CVD的重要危險(xiǎn)因素[7]。ApoE 是影響血漿脂蛋白的主要成分,可與脂質(zhì)及受體結(jié)合,作為配體參與受體介導(dǎo)的載脂蛋白清除過程,在血脂水平調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮重要作用。

        ApoE具有顯著遺傳多態(tài)性,根據(jù)第112和158位殘基的不同,分為E2、E3、E4基因型,現(xiàn)普遍認(rèn)為,ApoE基因多態(tài)性可影響脂質(zhì)代謝,并最終導(dǎo)致心腦血管疾病CVD的發(fā)生,研究高血脂癥患者ApoE 基因、表型頻率,對于CVD 的預(yù)防具有重要的意義。本研究對500 例CVD 患者ApoE 基因型進(jìn)行檢測,ApoE E3/E3 基因型比率最高,高達(dá)50.80%,E3 基因型頻率最高,占73.30%,這與之前的報(bào)道相一致[8],此外與健康體檢者相比,心腦血管疾病患者E4基因頻率較高,表明E4基因可能對心腦血管疾病有促進(jìn)作用。為進(jìn)一步分析ApoE 基因型對CVD 患者血脂的影響,將患者按照ApoE 基因型分組,研究發(fā)現(xiàn)E2 組比較,E3組E4組TC、LDL水平明顯升高,這可能與ApoE不同異構(gòu)體與LDL 受體結(jié)合能力不同相關(guān),由于E4 等位基因的存在能提高ApoE 與LDL 受體親和力,從而調(diào)節(jié)血脂代謝,加速CM 和VLDL 的代謝,降低LDL-C 受體數(shù)量,減少體內(nèi)LDL、LDL-C 分解代謝,從而導(dǎo)致E4 患者LDL水平升高,而TC基本取決于LDL-C水平,使得E4組患者表現(xiàn)為較高的LDL、TC 水平。所以血清ApoA 可以反映HDL 水平,與HDLC 水平呈明顯正相關(guān),而APoB 水平與LDL呈正相關(guān),因此E4組患者還表現(xiàn)為ApoA、ApoB水平明顯升高。此外,本次研究還發(fā)現(xiàn),血清ApoE 水平表現(xiàn)為E2>E3>E4,具有一定的相關(guān)性,然而是否由于ApoE基因多態(tài)性導(dǎo)致血清ApoE 水平血清差異。目前,該方面研究較少,其機(jī)制還尚不清楚,有待進(jìn)一步研究。為進(jìn)一步研究ApoE 在不同心血管疾病中是否具有相同的作用,本研究將患者按照疾病類型進(jìn)行分組比較血脂以及ApoE基因頻率,發(fā)現(xiàn)均無明顯差異,說明ApoE 在冠心病、腦梗、高血壓等常見慢性心血管疾病中都具有促進(jìn)疾病發(fā)生發(fā)展的作用。

        綜上所述,E4 基因可升高LDL、TC 水平,促進(jìn)心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展,ApoE基因型與ApoE水平有一定相關(guān)性,但是由于本研究中樣本數(shù)不夠大,E2 組、E4 組樣本較少,如果能增大樣本數(shù),采用大數(shù)據(jù)分析結(jié)果,將更能有效地分析ApoE 基因多態(tài)性在心腦血管疾病中發(fā)揮的作用,以及造成血清ApoE水平差異性的機(jī)制研究。

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