張傳津 牛華星 魏茂蓮

(山東省飼料獸藥質量檢驗中心，山東 濟南 250010)

喉氣管炎(Laryngotracheitis，LT)是雞的一種病毒性呼吸道傳染病，喉氣管炎病毒(LTV)屬于皰疹病毒科的α皰疹病毒亞科，雞是LTV的自然宿主，可引起雞死亡和產蛋下降，感染LTV后一般在6～12d出現臨床癥狀，在氣管內人工感染的潛伏期較短，一般為2～4d，典型的癥狀為流涕和濕性啰音，后出現氣喘咳嗽，此病嚴重流行的特征是明顯的呼吸困難并咳出血樣黏液，本病嚴重流行的發(fā)病率在90%～100%，死亡率在5%～70%，平均為10%～20%。溫和型的癥狀包括病雞消瘦、產蛋下降、流淚、結膜炎、眶下竇腫脹、持續(xù)性流涕和出血性結膜炎等。目前沒有LTV傳播給人或者其它哺乳動物的證據。該病主要通過呼吸道及眼傳染，也可經消化道傳染。本病自然感染潛伏期為6～12d，感染后排毒期為6～8d，少部分康復雞可以長期帶毒，排毒期可以長達2a。雞傳染性喉氣管炎主要呈地方性流行，同群傳播較快，群間傳播較慢[1,2]。病變損傷可以出現在感染雞的結膜和整個呼吸道，但最常見于喉頭和氣管。喉頭和氣管的變化輕微時僅存在過量的黏液，嚴重時則有出血或者白喉樣病變。溫和型的LT損傷輕微，僅包括結膜炎、竇炎、黏膜性氣管炎。嚴重感染時，初期為黏液性炎癥，隨后出現變性、壞死和出血。常出現白喉型病變，可以看到黏液團延伸于整個氣管。一些病例出血嚴重進入氣管內形成血塊，或者血液中混合黏膜及壞死的組織。炎癥可以向下擴散到肺臟和氣囊。在溫和型的LT中，大體病變可能僅是結膜上皮和眶下竇水腫、充血。LTV感染雞只后，病毒在咽喉和氣管的上皮細胞及其他的表膜黏液如結膜、呼吸竇、氣囊和肺臟中復制。LTV對這些組織通常是細胞裂解性的，尤其是氣管，導致上皮細胞的嚴重損傷和出血。臨床上，LTV持續(xù)存在的一個主要特征是呼吸道潛伏感染。目前還沒有有效的藥物來減輕病變和減緩發(fā)病癥狀。疫苗接種是使易感雞群產生保護的最好方法。但目前使用的弱毒疫苗可引起一系列副反應，如由免疫雞傳遞給非免疫雞、產生潛伏帶毒雞，或者由于體外病毒的傳代導致毒力增強[1,2]。對于雞傳染性喉氣管炎，西醫(yī)常采用的治療方法為抗病毒藥結合抗生素，目的在于緩解癥狀、降低死淘率。但是，該方法弊端明顯，不僅會對雞的肝臟及腎臟造成損傷，影響雞的生長發(fā)育和產蛋率的恢復，而且易產生耐藥性，難以避免藥殘等問題。研究證明，許多中藥具有抗病毒和增強免疫的作用，且應用安全。

中獸醫(yī)學認為，雞傳染性喉氣管炎屬于典型的溫病范疇，溫熱相輔相成，病位在肺，證見痰飲咳喘。李景峰等[3]根據中醫(yī)溫病學辨證論治的原則，研制防治雞傳染性喉氣管炎的純中藥散劑，主要由梔子、連翹、菊花、蟾酥、杏仁、冰片、牛黃、麻黃、黃芪、黨參、杏仁等組方而成，對患有傳染性喉氣管炎的病雞用此方進行防治試驗，試驗分別設置了預防組和治療組，結果顯示，預防用藥組發(fā)病率為6%，空白對照組為78%，自然感染組的治愈率達98%以上，療效顯著；楊俊琦[4]選用黃芪、大青葉、連翹、桂枝、板藍根等中藥自組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號中藥配方，以觀察3組配方對人工感染雞傳染性喉氣管炎(ILT)的治療效果，用藥5～7d后，發(fā)現Ⅰ號方劑的治療效果較顯著，存活率為96%，不僅改善傳染性喉氣管炎的臨床癥狀，同時還具有增重效果。東彥新等[5]研發(fā)了2種治療雞傳染性喉氣管炎的中藥復方散劑配方，對人工感染雞傳染性喉氣管炎的治療試驗結果表明，用藥組的臨床癥狀及病理剖檢結果均明顯好于攻毒對照組，其中方Ⅱ的治療效果優(yōu)于方Ⅰ。陳慶勛等[6]根據雞傳染性喉氣管炎的發(fā)病特點，研發(fā)2組治療雞傳染性喉氣管炎純中藥配方，用藥途經分別為內服與噴灑咽喉，人工攻毒出現癥狀后開始用藥，結果顯示，采用內服與噴灑咽喉相結合的用藥方法效果顯著，發(fā)病雞存活率明顯高于其它對照組。杜云良等[7]研發(fā)的復方中藥散劑，對人工感雜雞傳染性喉氣管炎的產蛋期蛋雞進行防治試驗，分別采用直接拌料和開水沖泡后的藥液混飲給藥，結果發(fā)現，沖泡給藥組的治療效果優(yōu)于直接拌料組，且不影響產蛋率。

從中獸醫(yī)辨證論治學說而言，雞傳染性喉氣管炎屬于典型的溫熱病范疇，治療應以祛除熱邪，清肺利咽，化痰止咳平喘為原則。對于本病的防治，我國學者雖進行大量研究，也證實了中藥在治療雞傳染性喉氣管炎中的確切療效，但是這些研究成果只停留在中藥散劑及單獨的煎湯使用，與集約化的養(yǎng)殖現狀不匹配。目前《中國獸藥典》等法定標準收載的喉炎凈散、清肺散、定喘散等對治療ILT有一定的療效。然而，這些傳統中藥散劑只能混飼給藥，不適合目前集約化養(yǎng)殖企業(yè)用藥。銀黃二陳合劑是純中藥復方新制劑，由多味藥物提取、濃縮而成的口服溶液劑，具有清熱燥濕、化痰止咳、理氣和中之功效。本產品通過優(yōu)化中藥材提取工藝、濃縮工藝、成型工藝等技術環(huán)節(jié)，中藥有效成分轉移率提高10%～30%，從而也提高了藥效、生物利用度和臨床疾病治愈率。通過銀黃二陳合劑對確診為傳染性喉氣管炎的自然感染雞群的防治試驗，驗證銀黃二陳合劑對雞傳染性喉氣管炎病毒等引起的溫熱咳嗽證候的治療效果。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗藥物

銀黃二陳合劑，批號20210701，山東迅達康獸藥有限公司生產。對照藥物，桑仁清肺口服液，批號20210201，山東華爾康獸藥有限公司生產。

1.1.2 試驗動物

山東濰坊某養(yǎng)殖場中自然發(fā)病的60日齡海藍褐蛋雞。

1.1.3 主要儀器設備

PCR儀(AB2700)，美國應用生物系統中國公司；凝膠成像分析儀(WD-9413A)，北京六一儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 試驗病例診斷和納入標準

經查閱國內外文獻，根據其臨床發(fā)病特點及分子學診斷方法，自行制訂本試驗病例診斷標準為具有ILT典型臨床癥狀(張口呼吸，呼吸羅音，甩鼻，鼻部有分泌物，眼瞼腫脹)和特征性剖檢病變(喉頭和氣管粘膜腫脹、出血、有分泌物)，且喉拭子PCR檢測ILTV為陽性的病例，診斷為ILT病例[1-3]。

1.2.2 受試雞群的確定

2020年12月，山東省濰坊某蛋雞場的2000余只同批次海藍褐蛋雞，在60日齡左右陸續(xù)發(fā)病。臨床表現為整體采食和飲水減少，病雞精神萎靡，羽毛松亂，雞冠發(fā)紺。分泌物堵塞鼻孔，流鼻液，甩鼻，眼瞼腫脹結膜充血，睜眼困難，眼角堆積分泌物，有的有泡沫。呼吸有濕性羅音，伸頸張口呼吸，氣喘伴咳嗽。死亡率達到13%。剖檢病死雞，病變主要在喉頭和氣管，有白喉樣病變，黏液團覆蓋整個氣管，有的氣管內形成血塊，并混合粘膜及壞死組織；肺臟有瘀血、出血。雞舍內多點采集病雞喉拭子，經PCR檢測ILTV均為陽性。病雞氣管病變見圖1，PCR檢測結果見圖2。

根據本試驗病例診斷標準，判定該雞場所感染疾病為雞傳染性喉氣管炎，患雞數量較多，故將其選為受試雞群。根據本試驗病例納入標準，在確診雞群中選擇出600只患雞進行銀黃二陳合劑的擴大臨床試驗，確保所選患雞的品種、飼養(yǎng)管理、試驗前使用的飼料疫苗獸藥完全相同，發(fā)病情況相似。

圖1 試驗雞場ILV病雞氣管內壁出血

注：泳道M為Marker；泳道1～5為發(fā)病雞喉拭子擴增產物(643bp)。

1.2.3 動物分組與處理

試驗用雞在另一經過消毒處理的雞舍中由專人隔離飼養(yǎng)。隨機分為2個組，銀黃二陳合劑組和桑仁清肺口服液組，每組300只。根據實驗性臨床試驗結果，銀黃二陳合劑組按2.0mL·L-1劑量在飲水中添加銀黃二陳合劑，全天自由飲用，桑仁清肺口服液組按1.5mL·L-1劑量在飲水中添加桑仁清肺口服液，試驗開始后2組不再使用任何其他藥物。2組雞同時投藥，連續(xù)用藥5d，用藥結束后觀察5d。試驗期間分別記錄2組的病程發(fā)展及死亡情況，試驗結束后統計2組的治療有效率、治愈率和死亡率。

1.2.4 療效評價標準

1.2.4.1 死亡率

試驗期間出現ILT典型臨床癥狀并死亡，且剖檢具有典型的ILT病變特征，判定為感染傳染性喉氣管炎死亡雞。死亡率計算公式：

死亡率=死亡雞數/試驗雞數

1.2.4.2 有效率

觀察期結束后，精神、采食、飲水及糞便情況明顯好轉，臨床癥狀明顯減輕者判為有效；有效雞數占每組試驗雞數的百分率為有效率。

1.2.4.3 治愈率

觀察期結束后，其精神狀態(tài)、食欲、呼吸等恢復正常，臨床癥狀完全消失者均屬治愈。治愈率計算公式：

治愈率=癥狀消失雞數/發(fā)病雞數

1.3 數據統計分析

應用SPSS 17.0 統計軟件對試驗數據進行分析。

2 結果分析

2.1 銀黃二陳合劑對自然感染ILT病雞臨床癥狀的影響

用藥3d后，2組試驗雞群精神狀態(tài)逐漸好轉，打蔫、精神沉郁的雞只明顯減少，攝食和飲水逐漸恢復。用藥5d后，銀黃二陳合劑組的大部分雞鼻部分泌物消失，呼吸姿勢正常，極少發(fā)出呼吸啰音，桑仁清肺口服液組鼻部分泌物癥狀略重。

2.2 銀黃二陳合劑對自然感染ILT死亡情況的影響

經用藥治療后兩組的死亡情況均有所減輕。第5天銀黃二陳合劑組停止死亡，桑仁清肺口服液組直至試驗結束前仍有個別死亡。至試驗結束時，銀黃二陳合劑組和桑仁清肺口服液組的死亡率分別為5.7%和6.7%，2組間比較差異不顯著(P>0.05)。試驗期間2組的死亡情況見表1。

表1 試驗期間各組雞死亡情況(n=300)

2.3 銀黃二陳合劑對自然感染ILT的治療效果

銀黃二陳合劑組和桑仁清肺口服液組的治療有效率(即存活率)接近，治愈率分別為80.3%和73.7%，2組間比較差異不顯著(P>0.05)。2組的治療效果見表2。

表2 銀黃二陳合劑對自然感染ILT的治療效果(n=300)

3 討論

溫熱類溫病是中醫(yī)臨床常見的一類疾病，屬外感熱病范疇。相當于現代醫(yī)學中各種急性傳染病、感染性疾病及許多發(fā)熱性疾病。邪擾、陰傷、氣耗、血瘀是溫病的4個基本病理變化，且貫穿于病程始終，而在瘟熱類溫病中外邪侵擾往往占有主導的地位[8]。雞傳染性喉氣管炎可引起病雞氣管分泌物增多、氣喘咳嗽、呼吸困難、呼吸道充血淤血，從中獸醫(yī)辨證論治學說而言，雞傳染性喉氣管炎是由瘟疫之毒犯肺引起的一種肺熱痰火之癥。疫毒犯肺，肺失宣降，導致水道失調，水濕內阻，治療應以祛除熱邪，清肺利咽，化痰止咳平喘為原則。

銀黃二陳合劑組方來源于治療濕痰咳嗽的經典方劑“二陳湯”(宋代《太平惠民和劑局方》)，經加味改良而得，由黃芩、金銀花、姜半夏、陳皮、茯苓和甘草6味組成?！岸悳庇砂胂摹㈤偌t、茯苓、甘草4味藥組成，針對雞傳染性喉氣管炎肺熱痰火主癥，篩選添加黃芩、金銀花經典藥對，其中，黃芩清肺熱燥痰濕，瀉火解毒[9-11]，金銀花清熱宣肺，解毒瀉火[12-15]，共為君藥，方中陳皮、半夏也是臨床經典藥對，半夏、陳皮皆以陳久者良，而無過燥之弊，故方名“二陳”。半夏辛溫燥烈，擅長燥濕化痰，降逆止嘔；陳皮辛苦而溫，長于理氣健脾，燥濕化痰。二者合用，半夏得陳皮之助，則氣順而痰自消，化痰濕之力尤勝，陳皮得半夏之輔，則痰除而氣自下，理氣和胃之功更著。二者相使相助，共奏燥濕化痰、健脾和胃、理氣止嘔之功，共為臣藥，佐以茯苓健脾滲濕，滲濕以助化痰之力，健脾以杜生痰之源。甘草藥之國老，清熱解毒，潤肺止咳，調和諸藥性，以為佐使。諸藥相合，共奏清熱解毒、燥濕化痰，理氣和中之效。

綜上所述，本產品由多味藥物提取、濃縮而成，所用中藥來源廣泛，價格低廉。該藥既有清熱解毒、燥濕化痰、理氣和中的作用，又可降低病雞病毒載量，從而達到標本兼治的效果，故可用于雞傳染性喉氣管炎病毒等引起的溫熱咳嗽證候。

本試驗開始后停用了除試驗設計用藥外的所有其他藥物，隨用藥時間延長，2組雞群癥狀明顯減輕，死亡率均呈下降趨勢。銀黃二陳合劑組在連續(xù)用藥4d后死亡情況得到控制，而桑仁清肺口服液組直至試驗結束前仍有個別死亡。試驗結束時，銀黃二陳合劑組和桑仁清肺口服液組的有效率分別為94.3%和93.0%，治愈率分別為80.3%和73.7%，證實銀黃二陳合劑可以有效治療雞傳染性喉氣管炎。

4 結論

該治療試驗表明，服用推薦劑量的銀黃二陳合劑對自然感染的雞傳染性喉氣管炎有明顯的治療作用。推薦用法用量：2.0mL·L-1混飲，連用5d。